苦参碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的实验研究

目的研究不同浓度的苦参碱对人肝癌SMMC-7721细胞诱导凋亡的作用。方法将不同浓度的苦参碱作用于培养的SMMC-7721肝癌细胞,通过四氮噻唑蓝(MTT)比色法检测各浓度的药物对细胞的抑制增殖作用;光学显微镜、荧光显微镜下形态学观察;DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪(FCM)研究分析其对肝癌细胞的诱导凋亡作用。结果浓度为2.01,4.02,6.04和8.05mmol·L-1苦参碱对SMMC-7721肝癌细胞都有不同程度的抑制增殖作用,抑制增殖作用随药物浓度的增加及作用时间的延长而加强(P<0.001)。光学显微镜、荧光显微镜下观察,发现细胞凋亡现象;DNA琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯形条带;流式细胞仪(FCM)检测分析出现凋亡亚二倍体峰。结论苦参碱对肝癌细胞具有诱导凋亡作用,诱导作用具有明显的量效和时效关系。     

丁酸钠诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡作用的评价

通过观察丁酸钠 (Na B)对人肝癌 SMMC-772 1细胞抑制增殖和诱导凋亡作用 ,初步确定丁酸钠对体外培养人肝癌SMMC-772 1细胞的最适作用浓度。将丁酸钠以不同终浓度、不同时间作用于人肝癌 SMMC-772 1细胞 ,用华罗庚优选法确定实验浓度 ,采用 MTT比色法、倒置显微镜观察细胞增殖抑制 ;采用流式细胞术分析细胞凋亡率和细胞周期 ;电镜观察超微结构确定细胞凋亡情况。结果显示 ,丁酸钠对人肝癌 SMMC-772 1细胞生长的抑制呈剂量依赖和时间依赖 ,透射电镜观察到细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂以及凋亡小体形成等凋亡特征的形态学改变。高浓度 (≥ 4mmol/L)时 ,细胞在 12 h迅速出现坏死 ,电镜下观察 ,正常细胞膜结构消失 ,线粒体肿胀、破裂。流式细胞术分析细胞阻滞于细胞周期的 G0 /G1期 ,S期比例明显减少 ,细胞增殖指数明显下降     

富硒蚕蛹氨基酸诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的研究

目的　研究富硒蚕蛹氨基酸对人肝癌细胞SMMC 772 1的作用。方法　以人肝癌细胞SMMC 772 1为模型 ,采用原子荧光分光光度计测定蚕蛹硒含量 ,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长及活力 ,用倒置荧光显微镜观察细胞形态学变化 ,流式细胞仪研究细胞的凋亡及细胞周期变化。结果　①陕西紫阳县蚕蛹中硒的含量为普通蚕蛹硒含量的 2 15倍 ,②富硒蚕蛹氨基酸在 0 5、1 5和 2 5 μmol·L-1硒浓度下能显著性抑制肝癌细胞生长 ,并具有浓度和时间依赖性。亚硒酸钠对细胞生长的抑制作用不如富硒蚕蛹氨基酸。相反 ,普通蚕蛹氨基酸促进细胞的生长。③富硒蚕蛹氨基酸作用于细胞后 ,倒置荧光显微镜观察到细胞形态学变化及细胞存活率降低。④流式细胞仪检测到 0 5、1 5和2 5 μmol·L-1富硒蚕蛹氨基酸所致细胞凋亡及细胞周期的变化 ,该氨基酸能阻滞SMMC 772 1的细胞周期于G2 /M期 ,使G2 /M期细胞比例增加 ,而G0 /G1期细胞比例下降。结论　富硒蚕蛹氨基酸能诱导SMMC 772 1细胞的凋亡 ,其抗癌机制可能与其改变细胞周期进而诱导细胞凋亡相关联。     

10-羟基喜树碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的探讨

目的：为筛选新的凋亡诱导剂，并对其机制进行研究。方法：用10－羟基喜树碱（10－hydroxycamp-tothecin,10-HCPT）以不同终浓度（0－150μm），不同作用时间（0－24h)诱导体外培养的SMMC－7721人肝癌细胞，按设计时间（24－140h）收集悬浮细胞，贴壁细胞和对照组进行各组间凋亡率，残存率、克服形成率观察。结果：当10－HCPT终浓度＞2．0μm时，部分细胞出现典型凋亡特征，随浓度及作用时间增加，凋亡率也随之升高，残存率下降，克隆形成率明显下，当10＝HCPT浓度＞50μm时，大量凋亡细胞中出现坏死，结论：10－HCPT能诱导SMMC－7721细胞凋亡，其效果与剂量和时间密切相关。     

玉米须多糖诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的:观察不同浓度的玉米须多糖(stigma maydis polysaccharide SMPS)对肝癌SMMC-7721细胞作用的影响.方法:将玉米须多糖以不同浓度和时间作用于肝癌SMMC-7721细胞,采用 MTT比色法观察细胞毒性;应用HE染色法观察凋亡细胞的形态;原位末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡率.结果:玉米须多糖以剂量依赖和时间依赖的方式抑制SMMC-7721细胞的生长.HE染色观察到凋亡细胞的形态学改变.结论:玉米须多糖抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导细胞凋亡.为临床治疗肝癌提供理论依据.     

表阿霉素诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的 进一步探讨表阿霉素治疗原发性肝癌的作用机理。方法 应用DNA电泳、电镜、流式细胞仪分析技术，观察表阿霉素诱导人肝癌SMMC－7721细胞凋亡模式。结果 0.1μg/ml表阿霉素作用细胞12、24、36、48小时及0.1、1.0、10.0、100μg/ml表阿霉素作用细胞24小时均可出现细胞凋亡现象，其诱导凋亡效率与剂量、时间呈正相关。结论 表阿霉素可诱导人肝癌SMMC－7721细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

蟾酥注射液诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的观察蟾酥注射液对人肝癌细胞凋亡的诱导作用。方法选择不同浓度蟾酥注射液分别与人肝癌BEL-7404细胞共同孵育24、48h,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期变化：琼脂糖凝胶电泳测定DNA Ladder；均与空白组做对照。结果流式细胞仪检测可见,各实验组细胞_1G、S期下降,G_2/M期升高,产生凋亡峰(sub-G_1期)；孵育48h,可见DNA Ladder出现。结论蟾酥注射液可以诱导人肝癌细胞BEL-7404凋亡。     

没食子酸诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡机制的探讨

目的探讨没食子酸(gallic acid,GA)抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,揭示其促凋亡的相关分子机制。方法体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,MTT法观察细胞在GA作用24、48、72 h后的增殖情况;用倒置显微镜观察细胞形态学的变化;透视电镜观察细胞内部结构变化;Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡;采用RT-PCR技术研究p53 mRNA的变化;应用Western blot法检测p53蛋白水平的表达。探讨GA对人肝癌细胞SMMC-7721的诱导凋亡作用及机制。结果剂量为6.25⁵0μmol·L-1GA作用SMMC-7721细胞48 h有明显的增殖抑制活性,引起核固缩、凝聚、碎裂,诱导细胞凋亡,并呈剂量依赖性;RT-PCR和Western blot结果显示,GA能升高p53 mRNA水平和p53蛋白表达。结论 GA可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,诱导凋亡,可能与其上调肿瘤相关抑癌基因p53有关。     

葡萄籽提取物原花青素诱导胃癌细胞脱落凋亡

目的　研究葡萄籽提取物原花青素诱导胃癌细胞脱落凋亡的作用。方法　采用细胞形态学观察、Annxin V和PI细胞染色实验和流式细胞仪检测方法观察原花青素对悬浮培养的胃癌细胞生长状态和细胞周期的影响以及诱导脱落凋亡的作用。结果　 0 1mmol·L-1原花青素可抑制抗脱落凋亡的胃癌细胞聚集成团 ,0 5mmol·L-1原花青素可阻滞悬浮培养的不同胃癌细胞于不同的细胞周期 ,并诱导胃癌细胞发生脱落凋亡。结论　原花青素可诱导胃癌细胞发生脱落凋亡     

酒精诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡的作用研究

目的 体外观察不同浓度的酒精对肝癌细胞BEL-7402诱导凋亡的作用,为寻求肝癌的治疗提供新思路.方法 不同浓度的酒精与肝癌细胞BEL-7402通过体外培养,MTT法检测细胞增殖的变化;Hoechst 33258/PI 荧光双染色观察细胞形态学变化;蛋白质免疫印迹(Western blotting)半定量分析Caspase-3和p53和Bax的表达变化.结果 药物浓度在100～300 mmol/L的范围显著抑制肝癌细胞增殖,且抑制率随浓度和时间呈依耐性,Caspase-3,Bax和p53的蛋白表达量明显增加.药物浓度在100～300 mmol/L作用48 h,肝癌细胞皱缩,呈现凋亡各期改变,细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05).结论 不同浓度的酒精对肝癌细胞BEL-7402有诱导凋亡的作用,其抑制作用呈浓度和时间依赖性.     

透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响

目的观察透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响,进一步探讨透骨草提取物对SMMC-7721细胞增殖抑制的分子机制。方法MTr法检测透骨草提取物对SMMC-7721细胞增殖的影响,免疫组化方法检测SMMC-7721细胞β-catenin和cyclinD1蛋白的表达。结果6．25—100μg／ml透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞增殖抑制率与对照组相比显著增加（P〈0．05）,而且随透骨草浓度的增加,抑制率逐渐增加。透骨草提取物对SMMC-7721细胞的半数抑制浓度（IC50）为40．91ug/ml。40．91μg／m1透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞β—catenin和cyclinD1的表达明显低于对照组（P〈0．05）。结论透骨草提取物对SMMC-7721细胞的增殖有抑制作用,其机制可能与下调β-catenin和cyclinD1的蛋白表达有关。     

短发夹RNA沉默YAP表达对肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的本实验通过短发夹RNA(shRNA)抑制Yes相关蛋白(YAP)基因的表达,并观察其对肝癌细胞SMMC-7721的增殖、凋亡和周期影响。方法以人YAP mRNA编码区中的4条序列作为RNA干扰靶点,分别构建4个真核表达载体质粒YAP-shRNA-1、YAP-shRNA-2、YAP-shRNA-3、YAP-shRNA-4,用阳离子聚合物转染法瞬时转染,筛选出2个干扰效果较好的质粒,将它们瞬时转染肝癌细胞SMMC-7721,应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白印迹法检测SMMC-7721细胞中YAP在mRNA和蛋白水平表达的变化。噻唑蓝(MTT)法检测转染后细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡和周期的变化。结果转染后293T细胞中shRNA-YAP-2组与shRNA-YAP-4组YAP mRNA表达明显降低,在SMMC-7721中shRNA-YAP-2组与shRNAYAP-4组的YAP mRNA及蛋白表达水平分别为(0.871±0.081,0.106±0.013)和(1.010±0.097,0.192±0.013),与未转染组(2.399±0.148,0.372±0.007)比较差异有统计学意义(P<0.01)。MTT显示,shRNA-YAP-2、shRNA-YAP-4组细胞生长明显抑制,但未出现阻滞;流式细胞仪分析显示,shRNA-YAP-2组和shRNA-YAP-4组细胞凋亡率分别为(12.0±0.81)%和(5.03±1.01)%,明显高于空质粒组的(2.89±0.08)%(P<0.01)。细胞被阻滞在G2期,G0/G1期出现DNA亚二倍体峰。结论运用shRNA干扰技术,可以有效地干扰肝癌SMMC-7721细胞YAP的表达并能降低YAP的生成,抑制SMMC-7721细胞的增殖和促进细胞的凋亡。     

左氧氟喹诺酮查尔酮类衍生物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡和自噬的影响

目的 研究左氧氟喹诺酮查尔酮类衍生物6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1,8-(3,1-氧丙基)-3-[2-(4-甲氧苯甲酰基)-乙烯-1-基]-喹啉-4-(1H)-酮(HGQ5)对人肝癌细胞凋亡和自噬的诱导作用.方法 采用MTT法检测SMMC-7721细胞的增殖,TUNEL法测定细胞的凋亡率,采用自噬抑制剂氯喹处理细胞来验证HGQ5对细胞增殖和凋亡的影响;用Western blot法检测细胞自噬标志性蛋白LC3B的表达.结果 HGQ5对SMMC-7721细胞的增殖具显著抑制作用,24、48 h的IC50分别为5.0、4.8 μmol· L-;各给药组细胞经HGQ5作用24 h后,细胞凋亡率显著高于对照组的;HGQ5导致细胞中LC3B-Ⅱ的表达量增加,6～24 h达到最高,之后明显下降;氯喹可增强低剂量HGQ5(0.3～ 2.5 μmol·L-)对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,但降低高剂量HGQ5(5～ 10 μmol·L-1)对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用.结论 HGQ5能够显著诱导SMMC-7721细胞的凋亡和自噬,低剂量HGQ5作用于SMMC-7721细胞时,自噬对细胞具有保护作用;高浓度HGQ5作用时,自噬作用则降低了细胞增殖率,促进了细胞凋亡.     

Reactive oxygen species accumulation contributes to gambogic acid-induced apoptosis in human hepatoma SMMC-7721 cells

It is reported that gambogic acid (GA), the main active compound of gamboge which is a dry resin extracted from Garcinia hanburyi tree, has potent antitumor activity both in vivo and in vitro. Activation of mitochondrial apoptotic pathway in cancer cells is one effective therapy for cancer treatment. In the present study, we focus on the effect of GA on induction of reactive oxygen species (ROS) accumulation and triggering the mitochondrial signaling pathway in human hepatoma SMMC-7721 cells. The results indicated that GA induced ROS accumulation and collapse of mitochondrial membrane potential in SMMC-7721 cells in a concentration-dependent manner and subsequently induced that release of Cytochrome c and apoptosis-inducing factor from mitochondria to cytosol, which inhibited ATP generation and induced apoptosis in the cells. Moreover, GA elevated the phosphorylation of c-Jun-N-terminal protein kinase (JNK) and p38, which was the downstream effect of ROS accumulation. Furthermore, N-acetylcysteine, a ROS production inhibitor, partly reversed the activation of JNK and p38 and the induction of apoptosis in GA-treated cells. Collectively, our study demonstrated that accumulation of ROS played an important role in GA-induced mitochondrial signaling pathway, which provided further theoretical support for the application of GA as a promising anticancer agent.     

联用莪术油和丝裂霉素对肝肿瘤细胞株SMMC-7721的作用研究

目的探讨复方莪术油微球对肝癌细胞株的抑制作用及其作用机制。方法采用莪术油和丝裂霉素微球制备方法联用莪术油和丝裂霉素;采用MTT法检测莪术油和丝裂霉素单用和联用对肝癌细胞株SMMC-7721生长的抑制作用,并用流式细胞仪检测两药单用和联用对肝癌细胞增殖周期和凋亡的影响。结果MTT结果表明,单用和联用莪术油和丝裂霉素均可抑制肝癌细胞株SMMC-7721的生长,但联用莪术油和丝裂霉素采用减半剂量抑瘤率仍明显高于单用莪术油和丝裂霉素;流式细胞仪检测结果表明,莪术油和丝裂霉素合用可增强对肿瘤细胞增殖的抑制和促进凋亡的发生,较单用莪术油和丝裂霉素有增效作用。结论联用莪术油和丝裂霉素对肝癌细胞株SMMC-7721的生长抑制有增效作用,而诱导凋亡和阻滞细胞周期可能是其增效的重要机制。     

Reactive oxygen species production and Bax/Bcl-2 regulation in honokiol-induced apoptosis in human hepatocellular carcinoma SMMC-7721 cells

We investigated possible mechanism(s) where honokiol induces apoptosis in human hepatocellular carcinoma SMMC-7721 cells. MTT assay showed that honokiol has strong inhibition on SMMC-7721 cells in a dose-dependent manner. SMMC-7721 cells after honokiol treatment display morphological characteristics such as cell shrinkage, detachment from the culture plate, formation of apoptotic bodies, change to a round shape, and marked nuclear condensation and fragmentation after 32258 staining. Cell apoptosis was measured by Annexin-V/PI staining and alternatively, by the subG0/G1 percentage of the cell cycle analysis followed by FACS. An obvious loss of ΔΨ(m) and a quick burst of ROS was detected when honokiol reached 4μg/ml, which was coincident with the high apoptosis percentage in our previous research. Up-regulation of Bax and down-regulation of Bcl-2 were observed, suggesting that honokiol-induced apoptosis was associated with reactive oxygen species (ROS) production and an increase of Bax/Bcl-2 ratios.     

葫芦素B对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨葫芦素B对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响及其作用的分子机制。方法体外培养BGC-823细胞,MTT法观察葫芦素B对细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用分光光度法检测Caspase-3、Caspase-9的活性,采用Western blot方法检测葫芦素B对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果葫芦素B对BGC-823细胞的增殖有抑制作用,且此作用呈剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测结果显示,葫芦素B诱导BGC-823细胞凋亡,呈剂量依赖性。葫芦素B处理后Caspase-3、Caspase-9活性升高,细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,促凋亡蛋白Bak的表达增加。结论葫芦素B可以抑制人胃癌BGC-823细胞的增殖并诱导细胞凋亡。     

水溶性壳聚糖对肝癌细胞生长抑制的实验研究

目的 观察壳聚糖对肝癌细胞SMMC7721的生长抑制作用.方法 采用MTT法研究了不同浓度水溶性壳聚糖对肝癌细胞株SMMC7721的生长抑制作用.结果 水溶性壳聚糖可抑制肝癌细胞的生长,在一定范围内(50～400mg/L)呈剂量依赖关系.结论 水溶性壳聚糖对肝癌细胞的生长有抑制,并且呈剂量依赖关系.