远志总皂苷干预β-淀粉样蛋白致伤神经干细胞Caspase-3及Par-4的表达

背景：远志总皂苷具有良好的神经保护作用。目的：分析远志总皂苷对β-淀粉样蛋白致伤海马神经干细胞的保护作用及机制。方法：自昆明小鼠海马分离培养神经干细胞,取第3代神经干细胞,用含不同质量浓度远志总皂苷与β-淀粉样蛋白致伤体外培养的神经干细胞共孵育。结果：应用免疫组织化学法检测Caspase-3阳性神经干细胞,与对照组相比,远志总皂苷组Caspase-3阳性细胞率及Par-4的表达明显降低,差异具有显著性意义（P〈0.05）。提示远志总皂苷能够降低β-淀粉样蛋白致伤神经干细胞中Caspase-3及Par-4的表达。     

β-淀粉样蛋白25～35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中tau蛋白磷酸化水平的影响

背景:通过调节神经干细胞分化过程中的tau 蛋白磷酸化水平可提高神经干细胞移植治疗阿尔茨海默病的效果.目的:观察β-淀粉样蛋白25～35 和人参皂苷Rb1 对神经干细胞分化过程中tau 蛋白磷酸化水平的影响.方法:分离、培养新生大鼠海马神经干细胞,诱导第3 代神经干细胞分化1 周后,分别采用免疫荧光细胞化学和Western-blot检测Tau[pS396]、Tau[pS262]及GSK-3β[pTyr279,216]表达情况.结果与结论:正常神经干细胞分化过程中有Tau[pS396]和Tau[pS262]的表达,β-淀粉样蛋白25～35 可以使Tau[pS396]、Tau[pS262]和GSK-3β[pT279/216]表达上调,而人参皂苷Rb1 可以逆转β-淀粉样蛋白25～35 的作用.提示β-淀粉样蛋白25～35 和人参皂苷Rb1 通过调节GSK-3β的活性对tau 蛋白的磷酸化水平产生调控作用.     

β-淀粉样蛋白25～35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中tau蛋白磷酸化水平的影响

背景：通过调节神经干细胞分化过程中的tau蛋白磷酸化水平可提高神经干细胞移植治疗阿尔茨海默病的效果。目的：观察β-淀粉样蛋白25～35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中tau蛋白磷酸化水平的影响。方法：分离、培养新生大鼠海马神经干细胞,诱导第3代神经干细胞分化1周后,分别采用免疫荧光细胞化学和Western-blot检测Tau[pS396]、Tau[pS262]及GSK-3β[pTyr279,216]表达情况。结果与结论：正常神经干细胞分化过程中有Tau[pS396]和Tau[pS262]的表达,β-淀粉样蛋白25～35可以使Tau[pS396]、Tau[pS262]和GSK-3β[pT279/216]表达上调,而人参皂苷Rb1可以逆转β-淀粉样蛋白25～35的作用。提示β-淀粉样蛋白25～35和人参皂苷Rb1通过调节GSK-3β的活性对tau蛋白的磷酸化水平产生调控作用。     

脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞移植痴呆大鼠大脑皮质及海马tau蛋白、β-淀粉样蛋白及神经元超微结构的变化

背景:课题组前期的研究表明,重组脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞脑内移植可以改善阿尔茨海默病鼠的认知功能.目的:观察脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间充质干细胞移植对阿尔茨海默病鼠大脑皮质及海马tau蛋白磷酸化、β-淀粉样蛋白及海马CA1区神经元超微结构的影响.方法:采用侧脑室立体定向注射β-淀粉样肽建立阿尔茨海默病动物模型,取单纯或经脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞移植,1个月后采用Western bloting 方法检测大脑皮质及海马组织总tau蛋白及磷酸化的tau蛋白表达,以ELISA方法检测β-淀粉样蛋白40,β-淀粉样蛋白42含量,同时透射电镜观察海马CA1区神经元超微结构的变化.结果与结论:①脑源性神经营养因子修饰的骨髓间质干细胞能够降低大脑皮质及海马组织总tau蛋白及磷酸化的tau蛋白表达,降低大脑皮质及海马β-淀粉样蛋白40和β-淀粉样蛋白42表达.②模型组大鼠海马CA1区神经元出现粗面内质网扩张、膜断裂,线粒体数目减少、线粒体肿胀、核膜不清等改变,脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞对上述改变有减轻作用,较骨髓间质干细胞未修饰组明显.     

人参皂苷Rb1对β-淀粉样蛋白25-35诱导神经干细胞分化过程中Tau蛋白过度磷酸化的影响

背景：前期研究发现,人参皂苷Rb1和β-淀粉样蛋白25-35可调节神经干细胞分化过程中Tau蛋白的磷酸化水平。蛋白磷酸酯酶2A与Tau蛋白过度磷酸化密切相关。目的：观察β-淀粉样蛋白25-35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中Tau蛋白磷酸化水平和蛋白磷酸酯酶2A活性的影响。方法：分离、培养新生大鼠海马神经干细胞,诱导第3代神经干细胞分化1周后分组：①空白组：不加其他处理因素继续培养36h。②β-淀粉样蛋白组：培养24h后,加入β-淀粉样蛋白25-35继续培养12h。③预处理组：先加入人参皂苷Rb1预处理24h,再加入β-淀粉样蛋白25-35继续培养12h。分别采用免疫荧光细胞化学法和western-blot法检测各组细胞Tau[pS396]、Tau[pS262]表达以及蛋白磷酸酯酶2A活性。结果与结论：正常神经干细胞分化过程中有Tau[pS396]和Tau[pS262]的表达;β-淀粉样蛋白组细胞的Tau[pS396]和Tau[pS262]表达上调,蛋白磷酸酯酶2A活性无明显变化;预处理组Tau[pS396]和Tau[pS262]表达下调且蛋白磷酸酯酶2A活性显著增强。提示正常神经干细胞分化过程中Tau蛋白表达一定程度的磷酸化水平,人参皂苷Rb1可通过提高蛋白磷酸酯酶2A活性来减轻β-淀粉样蛋白25-35诱导的神经干细胞分化过程中Tau蛋白过度磷酸化。     

远志皂苷元对新生大鼠海马神经干细胞分化的影响

目的观察远志皂苷元对体外培养的胎鼠海马神经干细胞(NSCs)增殖分化的影响。方法利用无血清DMEM/F12 体外培养技术从新生Wistar 大鼠大脑海马中培养NSCs,添加不同浓度(0、1、2、4 μg/ml)远志皂苷元。应用免疫荧光技术对NSCs及其分化后的细胞进行鉴定。结果培养的NSCs能够表达Nestin,并具有分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞的能力。在同一接种密度条件下,远志皂苷元干预组的Nestin 阳性细胞数较对照组减少(P<0.05),神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数较对照组增加(P<0.05)。结论远志皂苷元能促进新生大鼠大脑海马NSCs的分化。     

远志总皂苷对神经干细胞向神经元分化的影响

目的:观察远志总皂苷对神经干细胞(NSCs)向神经元分化的影响.方法:分离、培养并鉴定新生大鼠海马区NSCs,分别添加终浓度5 μg/mL、20 μg/mL及100 μg/mL的远志总皂苷进行诱导1 d或3 d.免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)阳性细胞.结果:原代与传代培养的细胞均可持续分裂增殖形成悬浮...     

人参总皂苷在神经干细胞移植治疗帕金森病模型小鼠中的作用

目的:将人参总皂苷或人参总皂苷与白细胞介素1联合处理的神经干细胞移植到帕金森病模型小鼠纹状体内,观察人参总皂苷在移植治疗帕金森病模型小鼠中的作用。方法:实验于2004-09/2005-07在重庆医科大学基础医学研究所重庆市生物化学与分子药理重点实验室完成。①从7～12周龄流产胚胎脑中分离皮质细胞,体外培养,纯化,分别用鼠抗人nestin抗体行免疫细胞化学染色,鉴定神经干细胞,并用4,6-二乙酰基-2苯基吲哚标记细胞。②人参总皂苷与人神经干细胞的体外培养,实验分组:神经干细胞组,常规培养神经干细胞;人参总皂苷组,常规培养体系中加入人参总皂苷(终浓度200mg/L);人参总皂苷 白细胞介素1组,在人参总皂苷组培养体系中加入白细胞介素1(终浓度200ng/L),均培养3d,待移植用。③健康清洁级小鼠20只,腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四羟吡啶(30mg/kg),建立帕金森病小鼠模型。记录小鼠震颤麻痹评分,自发活动和记忆功能,对模型进行评价。④将经人参总皂苷处理的神经干细胞,按所分实验组注入帕金森病小鼠纹状体内,同时设立磷酸盐缓冲液组(注入同体积磷酸盐缓冲液),移植后60d观测模型鼠行为学改变情况;荧光显微镜下观察移植的神经干细胞在帕金森病模型鼠脑内分布和迁移;酪氨酸羟化酶免疫组织化学染色,对移植的神经干细胞在脑内分化为多巴胺能神经元样细胞进行检测。结果:①从流产人胚胎脑组织中分离、纯化的神经干细胞细胞,经3代以上的传代纯化培养,神经球nestin呈阳性表达,所有神经干细胞细胞核标记上蓝色荧光,标记率达100%。②20只小鼠均建模成功。③神经干细胞组、人参总皂苷组、人参总皂苷 白细胞介素1组神经干细胞移植后帕金森病小鼠5min自发活动的次数均多于对照组(52.0±1.6,81.0±2.8,98.0±3.7,P<0.05或0.01)。④震颤麻痹评分(每组对照均为2分1只,3分4只),磷酸盐缓冲液组2分1只,3分4只;神经干细胞组2分3只,3分2只;人参总皂苷组2分4只,3分1只;人参总皂苷 白细胞介素1组1分2只,2分2只,3分1只。⑤移植的神经干细胞在帕金森病模型鼠脑内分布和迁移以及分化多巴胺能神经元样细胞的检测显示,人参总皂苷 白细胞介素1组优于人参总皂苷组,人参总皂苷组优于神经干细胞组,磷酸盐缓冲液组无作用。结论:人参总皂苷在神经干细胞移植治疗帕金森病中发挥促进作用。     

淀粉样β蛋白1-40对胚胎大鼠皮质神经前体细胞毒性损伤的c-Jun氨基端激酶信号转导的影响

背景：淀粉样β蛋白是阿尔茨海默病致病关键因素之一。近来的研究证明在成人中枢神经系统内存在能不断自我更新、多向分化潜能、终身神经修复的神经干细胞。但是在阿尔茨海默病脑内却未见到这些神经前体细胞的起到有效作用，其机制尚未清楚。淀粉样β蛋白1-40是否通过c-Jun氨基端激酶信号转导通路对胚胎大鼠皮质神经前体细胞造成神经毒性损害尚不清楚。 目的：体外实验淀粉样β蛋白1-40对胚胎中皮质神经前体细胞毒性作用中c-Jun氨基端激酶信号转导通路的可能作用机制，探讨c-Jun氨基端激酶抑制剂SP600125对淀粉样β蛋白1-40致胚胎中皮质神经前体细胞神经毒性作用的保护作用。 设计：以细胞为观察对象，随机对照实验。 单位：中国医科大学附属第一医院神经内科。 材料：实验于2005-05／10在中国医科大学中心实验室完成。选用10只孕14 d Wistar大鼠，取其胚胎以备实验。方法：取Wistar大鼠胚胎脑皮质组织神经前体细胞，体外培养、传代、鉴定。将生长状态良好的胚胎大鼠皮质神经前体细胞随机分为4组：淀粉样β蛋白1-40组（每孔加入10nmol／L β淀粉样蛋白1-40）；SP600125＋淀粉样β蛋白1-40组（每孔先加入10μmol／LSP600125培养30min后再加入10nmol／L淀粉样β蛋白1-40）；SP600125组（每孔加入10μmol／LSP600125培养）；生理盐水组（每孔加入等体积的生理盐水），每组分别培养0，2，4，6，12，24h，每个时间点设8个孔。采用α甲基偶氮唑蓝法测定细胞生存率。流式细胞分析术检测细胞凋亡率。免疫印迹法检测c-Jun氨基端激酶，p-c-Jun氨基端激酶，c-Jun，p-c-Jun表达。计量资料差异比较采用t检验。 主要观察指标：①Wistar大鼠胚胎皮质神经前体细胞细胞生存率。②胚胎中皮质神经前体细胞细胞凋亡率。③胚胎中皮质神经前体细胞c-Jun氨基端激酶，P-c-Jun氨基端激酶，c-Jun，p-c-Jun表达结果。 结果：①淀粉样β蛋白1-40组和SP600125＋淀粉样β蛋白1-40组细胞生存率随培养时间延长而下降，4h时下降最明显；培养0，2，4，6，12,24h时淀粉样β蛋白1-40组明显低于其他3组（P〈0.01），SP600125＋淀粉样β蛋白1-40组培养2，4，6，12，24h明显低于SP600125组和生理盐水组（P〈0．01）。SP600125组细胞生存率无时间依赖性，与生理盐水组相比，差异不明显（P〉0．05）。②淀粉样β蛋白1-40组和SP600125＋淀粉样β蛋白140组细胞凋亡率随培养时间延长而上升，4h时上升最明显；培养0，2，4，6，12，24h时淀粉样B蛋白1-40组明显高于其他3组（P〈0．01）SP600125＋淀粉样β蛋白1-40组培养2，4，6，12，24h明显高于SP600125组和生理盐水组（P〈0．01）。SP600125组细胞生存率无时间依赖性，与生理盐水组相比，差异不明显（P〉0．05）。③淀粉样β蛋白组：c-Jun氨基端激酶和c-Jun在培养0，2，4，6，12，24h均有表达，但无变化；p-c-Jun氨基端激酶和p-c-Jun在淀粉样β蛋白1-40作用0h时即有表达，逐渐增高，4h时达高峰，以后逐渐减少。 结论：淀粉样B蛋白1-40能明显抑制胚胎中皮质神经前体细胞细胞活性，降低细胞生存率，导致细胞凋亡，c-Jun氨基端激酶信号转导通路参与了此过程，这可能是阿尔茨海默病不能启动自我救活机制原因之一；使用SP600125，可抑制c-Jun氨基端激酶和c-Jun激活，明显减轻淀粉样β蛋白1-40对胚胎中皮质神经前体细胞的神经毒性作用。     

H2O2对PC12细胞par-4和caspase-3基因表达的影响

目的探讨H2O2对PC12细胞par-4和caspase-3基因表达的影响,为阿尔茨海默病神经元凋亡发生的机制提供实验依据.方法用不同剂量H2O2(0～400 nmol/L)处理PC12细胞8 h,或终浓度200 nmol/L H2O2处理PC12细胞不同时间(0-8 h),采用RT-PCR检测par-4,caspase-3 mRNA表达变化,Western blot检测Par-4蛋白表达和Caspase-3P20活性片段的变化,用比色法检测Caspase-3相对活性.结果随H2O2浓度从100～400 nmol/L增加,par-4,caspase-3mRNA表达和Par-4蛋白表达水平及Caspase-3 P20活性片段逐渐增加;200 nmol/LH2O2作用PC12细胞0～8 h,par-4 mRNA表达和Par-4蛋白表达,在2～8 h随时间延长表达增加;caspase-3 mRNA表达和Caspase-3 P20活性片段,在4～8 h随时间延长而增加;随H2O2浓度从50～400 nmol/L增加,Caspase-3相对活性增加(x2=4.8,P＜0.05),在400 nmol/LH2O2时Caspase-3相对活性达最大值.结论随着H2O2剂量依赖性的增加和同一剂量下H2O2处理PC12细胞时间增加par-4,caspase-3基因mRNA的表达,Par-4蛋白的表达,Cas-pase-3 P20活性片段,Caspase-3活性均有所增加.     

沉默Par-4基因表达可抑制肺泡上皮细胞凋亡

目的 研究促凋亡基因Par-4沉默对氧化应激导致的肺泡上皮细胞凋亡的影响.方法 培养人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549细胞.利用过氧化氢诱导细胞凋亡.利用小RNA干扰(siRNA)技术,靶向诱导Par-4基因沉默.设立正常对照组(常规培养细胞)、过氧化氢组(1.0 mmol/L过氧化氢处理细胞)、过氧化氢+Par-4-siRNA组(1.0 mmol/L过氧化氢和Par-4-siRNA转染的细胞).设非抑制序列转染的对照组.流式细胞术测定各组细胞凋亡百分率.Western blot检测促凋亡基因Smac蛋白表达量.凝胶迁移率改变试验测定转录因子E2F1的DNA结合力.比色法检测Caspase-3酶活性.实验结果采用单因素方差分析(F检验和g检验).结果 过氧化氢+Par-4-siRNA组细胞凋亡百分率(29.7±2.3)%显著低于过氧化氢组(54.2±4.1)%,q=8.91,P＜0.01.Par-4-siRNA的转染显著抑制过氧化氢诱导的肺泡上皮细胞中Smac蛋白表达、E2F1DNA结合力和caspase-3活性上调.结论 采用siRNA诱导Par-4基因沉默,可减少氧化应激导致的肺泡上皮细胞凋亡.其分子机制可能和抑制Smac蛋白表达、抑制E2F1 DNA结合力和抑制caspase-3活性有关.

Abstract：

Objective To investigate the effects of Par-4 gene silence on hydrogen peroxide-induced apoptosis in alveolar epithelial cells. Method The alveolar epithelial cells A549 were cultured and exposed to hydrogen peroxide. The siRNA sequences targeted Par-4 gene was chemically synthesized and transfected to A549 cells with or without the exposure of hydrogen peroxide. The cells were divided into normal control groups, hydrogen peroxide-treated group(The cells were treated with 0. 1 mmol/L hydrogen peroxide), hydrogen peroxide and Par-4-siRNA-treated group(The cells were treated with 0. 1 mmol/L hydrogen peroxide after transfection of Par-4-siRNA), Non-specific DNA sequence transfection control group. The apoptosis of A549 cells was quantified by flow cytometry. The expression of Smac protein was detected by Western blot.Electrophoretic mobility shift assay was applied for evaluating the change of E2F1 DNA binding activity. Relative activity of Caspase-3 was detected by clolorimetric assay. Results The percent of apoptotic cells in hydrogen peroxide and Par-4-siRNA-treated group was (29.7 ± 2.3) %, which was significantly lower than that of hydrogen peroxide-treated group [(54.2 ± 4.1)%, q= 8.91, P ＜ 0.01)]. Par-4 siRNA could significantly suppress the increase of Smac protein, E2F1 DNA binding activity and caspase-3 activity induced by hydrogen peroxide in A549 cells. Conclusions Par-4 gene silence induced by siRNA might inhibit the apoptosis of alveolar epithelial cells, which might be resulted from suppression of the up-regulation of Smac gene expression, E2F1 DNA binding activity and caspase-3 activity.     

脑出血模型大鼠针刺穴位后其血清对脑源性神经干细胞膜相关蛋白Numb表达的影响

[目的]探讨脑出血模型大鼠针刺穴位后其血清对脑源性神经干细胞膜相关蛋白Numb表达的影响.[方法]将实验大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、模型针刺血清组,制备针刺血清培养神经干细胞,并采用免疫细胞化学染色法检测神经干细胞膜相关蛋白Numb的表达情况.[结果]正常对照组、模型对照组和模型针刺血清组神经干细胞都可见到Numb蛋白的表达.模型对照组Numb蛋白表达明显下调,与正常对照组比较,差异有显著性(P＜0.01);模型针刺血清组Numb蛋白表达明显上调,与模型对照组比较,差异有显著性(P＜0.01);与正常对照组比较无显著性差异(P＞0.05).[结论]针刺血清能上调脑源性神经干细胞膜相关蛋白Numb的表达,加速神经干细胞的分化,促进脑损伤组织的修复.     

淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡与奥氮平的保护作用

背景:在阿尔茨海默病中起着重要作用的淀粉样β蛋白能够诱导细胞凋亡。目的:探讨奥氮平对淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡的机制及其保护作用。单位:解放军总医院南楼神经科。设计:随机设计。材料:实验于2002-05/2003-03在加拿大萨斯卡彻温大学医学院神经精神研究所完成。方法:P12细胞在RPMI1640培养液中培养。在96孔板每孔中接种100μL细胞悬液,在胶原被覆的25cm2培养瓶中接种5mL细胞悬液,培养24h后,分别加50μmol/L、100μmol/L奥氮平培养24h,再加不同浓度的淀粉样β蛋白25～35(0.01μmol/L、2μmol/L、20μmol/L)培养24h。将收获好的96孔板以淀粉样β蛋白25～35诱导PC12细胞凋亡,采用MTT比色分析测定细胞存活率。收获25cm2培养瓶中的PC12细胞,应用Westernblot检测奥氮平对PC12细胞Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响。主要观察指标:细胞存活率的测定,PC12细胞中Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达水平。结果:①细胞存活率比较:淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞的细胞活性从75%降低到35%;50μmol/L、100μmol/L奥氮平预处理组PC12细胞的活性明显提高。②奥氮平对淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡中Bax表达的影响:0.01μmol/L,2μmol/L,20μmol/L淀粉样β蛋白25～35处理的PC12细胞Bax的表达增加,50μmol/L奥氮平预处理使淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞Bax的表达减低。③奥氮平对Aβ25～35诱导的PC12细胞凋亡中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响:0.001μmol/L、0.01μmol/L淀粉样β蛋白处理的PC12无变化,50μmol/L奥氮平预处理对PC12细胞表达亦无影响;2μmol/L、20μmol/L淀粉样β蛋白25～35处理的PC12细胞表达增高,50μmol/L奥氮平预处理能抑制其表达升高。结论:①淀粉样β蛋白25～35能够诱发与细胞凋亡密切相关的Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在培养的PC12细胞中高表达。②奥氮平具有降低其表达,提高PC12细胞存活的保护作用。     

沂蒙山区3年32例阿尔茨海默病患者淀粉样β蛋白及其前体基因表达量的相关性分析

背景:淀粉样β蛋白沉积是引致阿尔茨海默病的重要原因,淀粉样β蛋白前体基因过度表达或某部分发生突变,可能与阿尔茨海默病的发生有关。目的:观察沂蒙山区阿尔茨海默病与淀粉样β蛋白及其前体基因的关系。设计:病例-对照分析。单位:临沂市人民医院神经内科。对象:选择临沂医专附属临沂市人民医院神经内科2001-01/2003-12住院阿尔茨海默病患者32例,以性别、年龄相当的非颅脑损伤的外科手术老年人30例为对照组(简易精神状态量表评分>27分)。方法:应用ELISA法检测脑脊液淀粉样β蛋白水平,应用荧光定量聚合酶链反应技术检测淀粉样β蛋白前体基因表达量。结果:62例全部进入结果分析。①阿尔茨海默病组脑脊液淀粉样β蛋白水平明显高于对照组[(13.63±9.34),(6.75±5.37)μg/L,t=3.354,P<0.01]。②阿尔茨海默病组脑脊液淀粉样β蛋白前体表达量明显高于对照组[(1624±298),(1275±269)拷贝/μL,t=4.42,P<0.01]。③阿尔茨海默病组淀粉样β蛋白水平与淀粉样β蛋白前体基因表达量呈正相关(r=0.44,P<0.01)。结论:沂蒙山区阿尔茨海默病患者脑脊液中淀粉样β蛋白及其前体基因表达增高,且淀粉样β蛋白水平越高,其前体基因表达越高,痴呆程度越重。提示阿尔茨海默病与淀粉样β蛋白、淀粉样β蛋白前体密切相关。但淀粉样β蛋白前体表达量在阿尔茨海默病诊断中不具特异性。     

羊膜脱细胞基质对脐血间质干细胞突触蛋白表达的影响

背景:天然细胞外基质对成体干细胞神经发育的影响,是目前的研究热点,国内外研究多侧重于神经标志物表达的研究,针对突触发育的研究较少。目的:观察羊膜脱细胞基质对脐血间质干细胞突触素表达的影响。方法:实验组将第 3 代人脐血间质干细胞接种在包被膜样基质盖玻片的 24 孔板中,以接种时开始计时,细胞以基础培养基培养 4 d。对照组无膜样基质,余同实验组。苏木精-伊红染色观察细胞形态变化,免疫组化 SP 法检测接种第 2、4 天细胞突触素相关蛋白表达,RT-PCR 法检测接种前和接种后第 2、4 天细胞突触素相关蛋白Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ基因转录水平的表达。结果与结论:对照组呈成纤维细胞形态,实验组细胞突起延伸,相互连接;第 2、4 天实验组突触素相关蛋白表达均明显高于对照组,差异有显著性意义(P < 0.01);接种前及对照组第 2、4 天细胞突触素相关蛋白Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ基因转录水平无表达,实验组第 2,4 天细胞突触素相关蛋白Ⅱ基因转录水平低表达,突触素相关蛋白Ⅲ弱表达,突触素相关蛋白Ⅰ不表达。结果提示羊膜脱细胞基质可以促使人脐血间质干细胞突起的产生、延伸并部分相互连接,表达突触素相关蛋白,为脐血间质干细胞神经分化提供了有利的条件。     

β-微管蛋白-Ⅲ在脊髓神经干细胞向神经元定向分化早期的动态变化研究

目的研究脊髓神经干细胞定向分化为神经元过程中细胞骨架蛋白——β-微管蛋白-Ⅲ（β-tubulin-Ⅲ）的表达及意义。方法采用细胞培养技术、免疫细胞化学（SABC）技术鉴定培养细胞,免疫荧光技术观察β-微管蛋白-Ⅲ在脊髓神经干细胞定向分化为神经元过程中的分布情况;采用Western blotting检测β-微管蛋白-Ⅲ在神经干细胞分化过程中的变化。结果分化第1天,β-微管蛋白-Ⅲ表达较弱;随着细胞的发育,分化第4天时β-微管蛋白-Ⅲ表达增强,其阳性反应物分布于核周,并伸出突起;β-微管蛋白-Ⅲ的含量也随着细胞的生长而增多;然而分化第7天时,β-微管蛋白-Ⅲ表达减少。结论在脊髓神经干细胞定向分化为神经元过程中,细胞骨架蛋白——β-微管蛋白-Ⅲ影响和促进细胞的分化。     

牡蛎提取物在高温诱导皮质神经干细胞凋亡中的保护作用

背景:课题组前期研究表明,牡蛎提取物对高温所致神经管畸形中的凋亡细胞有一定的保护用用,该提取物对体外培养的神经干细胞的凋亡是否也有保护作用,尚未见报道目的:观察牡蛎提取液在高温所致神经干细胞凋亡中的保护作用.方法:取孕13 d小鼠胚胎大脑皮质细胞培养,采用免疫荧光法检测巢蛋白的表达以鉴定神经干细胞,将培养3代的神经干细胞随机分为4组:高温对照组和牡蛎保护Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(分别加入质量浓度2.5,5,10 g/L的牡蛎提取液),同时设立培养液对照组(其中无细胞)、培养液+牡蛎提取液对照组(其中无细胞),各牡蛎保护组及对照组均经过39℃高温处理.锥虫蓝染色法检测神经干细胞存活率;MTT法检测神经干细胞的增殖活性;蛋白质印迹方法检测神经干细胞凋亡相关蛋门p53的表达.结果与结论:牡蛎保护Ⅱ、Ⅲ组中细胞的存活率及MTT值明显高于高温对照组(P<0 05);而p53的表达则明显低于高温对照组.提示牡蛎提取液对高温所致神经干细胞的凋亡具有一定的保护作用,这种作用有浓度依赖性.     

磁刺激对大鼠神经干细胞CDK5基因表达的影响

目的：研究脉冲磁刺激对离体神经干细胞内CDK5蛋白和基因表达的影响。方法：神经干细胞克隆在体外培养传代后，置于0．5Hz，1．44T的磁刺激，每天1次，30个脉冲；作用3d后诱导分化，用CDK5的特异性引物对诱导分化后0、48和72h的神经干细胞进行RT—PCR分析，并用Western—Blot法检测神经干细胞中CDK5蛋白的表达。结果：通过RT-PCR可见，对照组CDK5在分化前已有表达，随着分化的进展，CDK5的表达逐渐增强，至48h达高峰，然后逐渐减低；磁刺激组与对照组呈现相同的趋势，但在不同时间点CDK5的表达均高于对照组。Western-Blot显示神经干细胞中CDK5蛋白的表达与RT-PCR的结果一致。结论：0．5Hz，1．44T磁刺激能够促进神经干细胞分化时CDK5基因和蛋白表达，这可能是磁刺激促进神经干细胞向神经元方向分化的机制之一。