海洋单细胞海藻体外对人脑胶质瘤干细胞生物学活性的影响

背景：海藻具有广阔的药理活性前景,加强其研究对有目的进行应用开发有重要的指导意义。目的：观察海洋单细胞海藻在体外对人脑胶质瘤干细胞生物学活性的影响。方法：以酶消化法培养人脑胶质瘤干细胞,流式细胞分选出CD133阳性细胞,细胞传代获得第3代细胞。流式细胞仪检测海洋单细胞海藻作用前后细胞CD133表达变化,免疫组织化学检测贴壁细胞巢蛋白及胶质纤维酸性蛋白的表达。实验组分别加入不同质量浓度的海洋单细胞海藻,阴性对照加不含药的PBS,将稀释成4,6,8,10g/L的海洋单细胞海藻加入细胞培养液中并作用24,48,72h,流式细胞仪检测胶质瘤干细胞生长周期,应用酶标仪检测细胞生长抑制情况。结果与结论：随着浓度和时间的增加,与对照组相比倒置显微镜下可见实验组胶质瘤干细胞不易聚团成球,出现贴壁分化,并逐渐明显;加药后胶质瘤干细胞CD133表达量明显减少;出现的贴壁细胞免疫组织化学染色巢蛋白及胶质纤维酸性蛋白表达阳性;流式细胞仪检测显示,停滞在S、G2/M期细胞数增加,而G0/G1期细胞数减少;随着浓度和时间的增加,胶质瘤干细胞增殖明显抑制,与对照组相比差异有显著性意义（P〈0.05～0.01）。提示海洋单细胞海藻能够抑制人脑胶质瘤干细胞的增殖,并促进其分化,且作用具有浓度和时间依赖性。     

无血清培养基体外分离培养人胶质瘤干细胞与鉴定

背景:最近有研究者采用神经干细胞的无血清培养基从脑肿瘤组织中培养出肿瘤干细胞.目的:探讨利用无血清培养基从原发胶质母细胞瘤组织中分离培养胶质瘤千细胞的可行性.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-08在山东省青岛市脑科研究所完成.材料:胶质瘤组织来自青岛大学医学院附属医院神经外科手术切除标本,DMEM/F12培养基、B27为GIBCO公司产品,碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子Peprotech公司产品.方法:无菌条件下取肿瘤深部无坏死囊变、来电凝组织,剪切消化成单细胞悬液后,加入含碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、B27添加剂的无血清DMEM/F12培养基,体外分离培养获得胶质瘤干细胞.待培养孔中细胞团数量增多、培养液刚刚变色时,吸取含有细胞团的培养液进行传代.取第3代胶质瘤十细胞,加入巢蛋白和CD133抗体行免疫荧光检测;加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM/F12培养基诱导5 d,行胶质纤维酸性蛋白免疫荧光染色观察分化情况.主要观察指标:原代与传代培养的胶质瘤干细胞形态及生长情况,胶质瘤干细胞巢蛋白、CD133的表达及其分化.结果:原代培养7-10 d可形成大小不一的细胞团,球形或近似球形,呈悬浮或半悬浮状态牛长.细胞形态均,折光性好:传代24 h后次代细胞团形成,细胞的大小,形态与原代无明显差别,连续传代5次后细胞团增殖活跃.第3代胶质瘤干细胞呈巢蛋白和CD133阳性表达,加入胎牛血清后细胞球贴壁分化,呈胶质纤维酸性蛋白阳性.结论:人脑胶质瘤组织中存在胶质瘤下细胞,在体外无血清条件下可保持未分化的悬浮状态;加入血清后贴壁分化呈胶质瘤细胞样或神经元样,符合于细胞的自我繁殖和多向分化特征.     

人脐带沃顿胶间充质干细胞与脑肿瘤干细胞的共培养

背景:人脐带沃顿胶间充质干细胞满足了国际细胞治疗协会规定的间充质干细胞的特点,能够向骨、软骨、脂肪、肌肉、神经细胞诱导分化并支持其他干细胞的扩增,对免疫系统有良好的耐受性,对肿瘤有定向迁徙性.目的:观察人脐带沃顿胶间充质干细胞与脑肿瘤干细胞体外共培养后,脑肿瘤干细胞的生物学变化.方法:以原位法培养人脐带沃顿胶间充质干细胞,以酶消化法培养人脑肿瘤组织脑肿瘤干细胞,以细胞传代法获取第3代细胞.应用不添加任何生长因子的无血清培养基将两种细胞在24孔板中进行直接共培养.第3,7天应用流式细胞术检测细胞CD133表达;应用免疫荧光法检测贴壁细胞巢蛋白和胶质纤维酸性蛋白表达;将第3天离心所得的共培养上清液重悬第3代脑肿瘤干细胞并与正常培养悬浮的第3代脑肿瘤干细胞置入96孔板中,应用酶标仪检测两组细胞生长曲线的差异.结果与结论:两种细胞共培养后在倒置显微镜下可见脑肿瘤干细胞球随着培养时间的增加出现分解、贴壁、分化现象;贴壁的脑肿瘤干细胞免疫荧光染色胶质纤维酸性蛋白和巢蛋白均阳性.恶性程度高的脑肿瘤组织培养的脑肿瘤干细胞表达CD133量越高,而与沃顿胶间充质干细胞共培养后随着时间的变化均出现CD133表达量降低.共培养3 d的上清液培养的脑肿瘤干细胞与正常培养基培养的脑肿瘤干细胞相比,增殖明显受到抑制.结果显示沃顿胶间充质干细胞与脑肿瘤干细胞体外共培养后可限制脑肿瘤干细胞表面标记物CD133的阳性率以及细胞增殖能力并促使其分化.     

胶质瘤细胞系SHG44中肿瘤干细胞存在的可能性

目的:探讨人类胶质瘤细胞系SHG44中干细胞存在的可能性。方法:应用N2无血清培养基进行培养,碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子刺激细胞扩增,观察其增殖生长情况;应用免疫组织化学染色对培养的细胞及其分化的细胞进行鉴定。结果:胶质瘤细胞系SHG44在无血清的培养条件下细胞的形态发生改变,部分细胞聚集成类似神经干细胞的神经球,呈悬浮状态生长。免疫组织化学检查,细胞表达巢蛋白、波形蛋白和CD117这三种神经干细胞的标志物;分化后部分细胞表达神经元的标志物βⅢ型管蛋白、NF200、NSE和TrkC;大部分细胞表达星形胶质细胞的标志物胶质纤维酸性蛋白。结论:体外培养条件下,细胞表达神经干细胞的标志物,分化后同时表达神经元和星形胶质细胞表型,具有干细胞的性质。     

Hes-1在人脑胶质瘤干细胞分化过程中的动态表达及意义

目的研究在体外培养的人脑胶质瘤干细胞诱导分化过程中Hes-1蛋白表达的动态变化。方法对体外培养的人脑胶质瘤干细胞进行诱导分化,于未分化、分化第3、7d收集标本,行Hes-1蛋白免疫荧光染色后流式细胞术检测标本中阳性细胞比例;Hes-1分别与CD133、GFAP、MAP2、MBP蛋白双标免疫荧光染色后,激光共聚焦显微镜下观察Hes-1蛋白表达强度及细胞类型的变化。结果随着人脑胶质瘤干细胞的分化,Hes-1蛋白阳性细胞比例由未分化至分化第3d、第7d有明显下降（P〈0.01）;Hes-1蛋白在CD133、MAP2、GFAP和MBP阳性细胞均可表达,但在较幼稚的细胞中表达较强,随着细胞分化成熟,其表达明显减弱,分化第7d时大部分分化成熟的肿瘤细胞（MAP2、GFAP和MBP阳性细胞）中表达极弱或不表达。结论随着人脑胶质瘤干细胞的分化,Hes-1蛋白表达的阳性细胞比例和强度均明显下降,提示Hes-1表达的动态变化可能与调控人脑胶质瘤干细胞的分化过程有关。     

雷帕霉素对胶质瘤干细胞的特异性凋亡作用

目的探索磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂雷帕霉素对胶质瘤干细胞的特异性凋亡作用。方法应用磁式分选系统将胶质瘤细胞分为CD133+和CD133-细胞。应用MTT法检测雷帕霉素对两种胶质瘤细胞的生长抑制作用。Annex-in V-FITC和碘化丙锭(PI)双染检测细胞凋亡。流式细胞仪检测细胞周期。Western blot检测PI3K蛋白表达。结果雷帕霉素以浓度依赖方式抑制胶质瘤细胞的生长,且对CD133+细胞的生长抑制作用显著强于CD133-细胞。比起CD133-细胞,雷帕霉素对CD133+细胞具有更强的凋亡作用。结论雷帕霉素对胶质瘤干细胞具有特异性的抗肿瘤效应,可能与胶质瘤干细胞具有较强的PI3K活性有关。     

人脑胶质瘤干细胞增殖和分化过程中NOTCH-1信号通路的调控

背景:研究发现NOTCH-1信号通路在神经干细胞或种经前体细胞的自我更新、增殖及分化中起重要作用.目的:探讨NOTCH-1信号通路在人脑胶质瘤干细胞增殖和分化过程中的调控作用.设计、时间及地点:开放性实验,于2005-01/2007 03在解放军第三军医大学新桥医院完成.材料:人脑胶质瘤组织、正常成人脑组织由解放军第三军医大学新桥医院神经外科提供.U251胶质瘤细胞株由解放军第三军医大学新桥医院神经外科吕胜青副教授惠赠:CHG-5胶质瘤细胞株由解放军第三军医大学西南医院病理研究所卞修武教授、姚晓红博士惠赠.方法:取人脑胶质瘤组织、正常成人脑组织、U251及CHG-5胶质瘤细胞株,采用免疫磁珠法分选获得CD133+脑胶质瘤干细胞,加入DMEM/F12无血清培养基进行增殖培养,形成细胞克隆后,加入含体积分数为10%胎牛血清的培养液,2 h后行抗CD133和抗巢蛋白免疫荧光双标染色.主要观察指标:人脑胶质瘤十细胞的生长和鉴定,采用WST-8法、免疫组化实验、流式细胞仪、免疫荧光双标实验检测NOTCH-1信号通路蛋白的表达.结果:在无血清培养基中,细胞呈悬浮生长,培养24～48 h可见单个细胞开始分裂生长,形成肿瘤球,将肿瘤球转入含胎牛血清的培养基后,4 h周边细胞伸出突起并逐渐分化,24 h后肿瘤球迁移出的细胞增多,形成单细胞层.肿瘤球能同时表达干细胞标志物CDl33和巢蛋白,CD133脑胶质瘤干细胞核浆比例达2/3～3/4,突起少,胞浆中线粒体等细胞器较少,核糖体丰富,未见胶质丝等分化结构,符合干细胞超微结构特点.NOTCH-1蛋白在人脑胶质瘤组织中的表达明显强于正常成人脑组织(P＜0.01),在CDl33+U251及CHG-5胶质瘤细胞中有很强的表达,在GFAP+和MAP2+U251及CHG+5胶质瘤细胞中的表达强弱不等,在MBP+U251及CHG-5胶质瘤细胞中早弱表达或不表达.在脑胶质瘤干细胞增殖过程中能检测到较强的NOTCH-1信号通路关键基因NOTCH-1,CBF-1,HES-1 mRNA及NO和TChH-1,HES-1蛋白表达;而在细胞分化时NOTCH-1信号通路关键基因NOTCH-1,CBF-1,HES-1 mRNA和HES-1蛋白表达逐渐减弱.结论:NOTCH-1信号通路的关键蛋白分子NOTCH-1在人脑胶质瘤组织和胶质瘤细胞株中均有表达,而在正常成人脑组织中仅微弱表达.NOTCH-1信号通路关键基因NOTCH-1和HES-1的表达强弱可能参与了胶质瘤干细胞增殖和分化的调控.     

星形胶质细胞瘤干细胞的体外分离、培养与鉴定

背景:肿瘤干细胞理论认为肿瘤中存在一小部分具有无限增殖潜能和自我更新能力,能够分化为成熟细胞表型的干细胞样细胞,对肿瘤发生、增殖、侵袭起关键作用。目的:建立体外分离、培养与鉴定星形胶质细胞瘤干细胞的方法。方法:采用直接培养法分离培养星形胶质细胞瘤干细胞。参照神经干细胞培养条件,进行体外培养。观察其增殖、分化并进行巢蛋白、CD133免疫细胞化学鉴定和诱导分化后神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白及O4免疫细胞化学鉴定。结果与结论:培养7-10d,可形成大量悬浮生长巢蛋白及CD133免疫阳性的神经球,经诱导分化后细胞呈神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白或O4免疫阳性。提示星形胶质细胞瘤中存在具有神经干细胞特性的肿瘤干细胞。CD133和巢蛋白是星形胶质细胞瘤干细胞重要的表面标记,可以用于星形胶质细胞瘤干细胞的分离。     

星形胶质细胞瘤干细胞的体外分离、培养与鉴定

背景：肿瘤干细胞理论认为肿瘤中存在一小部分具有无限增殖潜能和自我更新能力,能够分化为成熟细胞表型的干细胞样细胞,对肿瘤发生、增殖、侵袭起关键作用。目的：建立体外分离、培养与鉴定星形胶质细胞瘤干细胞的方法。方法：采用直接培养法分离培养星形胶质细胞瘤干细胞。参照神经干细胞培养条件,进行体外培养。观察其增殖、分化并进行巢蛋白、CD133免疫细胞化学鉴定和诱导分化后神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白及O4免疫细胞化学鉴定。结果与结论：培养7-10d,可形成大量悬浮生长巢蛋白及CD133免疫阳性的神经球,经诱导分化后细胞呈神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白或O4免疫阳性。提示星形胶质细胞瘤中存在具有神经干细胞特性的肿瘤干细胞。CD133和巢蛋白是星形胶质细胞瘤干细胞重要的表面标记,可以用于星形胶质细胞瘤干细胞的分离。     

预诱导与全反式维甲酸并脑源性神经营养因子体外诱导骨髓基质干细胞向神经元样细胞的分化

背景:骨髓基质干细胞可定向诱导分化为神经元样细胞,但目前培养的方法尚不统一.目的:采用预诱导与全反式维甲酸和脑源性神经营养因子为培养体系,拟在体外诱导大鼠骨髓基质干细胞向神经细胞分化.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-12/2008-06在新疆医科大学第一附属医院医学研究中心干细胞室完成.材料:清洁级雄性SD大鼠2只,由新疆医科大学动物试验中心提供.方法:采用贴壁法体外分离培养大鼠骨髓基质干细胞,经反复传代细胞逐渐纯化.取生长状态良好的第3代骨髓基质干细胞,按8×107L-1密度接种后,改换含10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子、20 μg/L表皮生长因子的神经干细胞培养体系进行预诱导,48 h后去除预诱导液,加入含10 μg/L脑源性神经生长因子、1 μmol/L全反式维甲酸的神经干细胞培养体系定向诱导骨髓基质干细胞分化为神经细胞.以未诱导的骨髓基质干细胞作为对照.主要观察指标:流式细胞仪检测第3代骨髓基质干细胞表面标志的表达,诱导后免疫荧光染色和流式细胞仪检测巢蛋白阳性的表达,免疫荧光染色鉴定神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白的表达.结果:第3代骨髓基质干细胞CD29,CD44表达率分别为97.1%,99%,CD45表达率为0.5%,CD34呈阴性表达.预诱导48 h后巢蛋白阳性率为24%,而对照组仅为4.6%.诱导48 h后,巢蛋白染色呈阳性,并可见大量神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞出现;对照组均呈阴性表达.结论:神经干细胞培养体系联合全反式维甲酸与脑源性神经生长因子,可在体外高效、稳定地诱导骨髓基质干细胞转化为神经元样细胞,并进一步向神经元和神经胶质细胞方向分化.     

Mobilization kinetics of CD133+ hematoprogenitor cells for hematopoietic grafting

BACKGROUND: Quantification of CD34+ mononuclear cells is the most important quality control measure for hematopoietic stem cell (HSC) transplantation. A fraction of CD34+ cells also express the CD133 antigen. These cells constitute a group of earlier, less-differentiated HSCs with a potentially higher capacity for engraftment. The correlation between total CD34+ peripheral HSCs and the fraction of these cells that coexpress CD133 was determined before and after automated collection by leukapheresis, as well as the effect of HSC CD133+ dose on hematopoiesis recovery.
STUDY DESIGN AND METHODS: Granulocyte–colony-stimulating factor mobilization of HSCs from the marrow to the peripheral blood (PB) of allogeneic and autologous donors was followed by automated collection through leukapheresis on the fifth day. Quantification of CD34+ and CD133+ cells was performed on PB before collection and in the hematopoietic graft (HG) by flow cytometry.
RESULTS: There was a significant correlation between CD133+ and CD34+ HSCs in the PB before collection and in the final product for grafting (r = 0.62 and 0.64; p < 0.01). CD34+ HSCs per µL in PB and the HG was the only variable that did not correlate (r = 0.18). CD34+/CD133+ correlation increased from 0.33 on PB to 0.94 on the leukapheresis product (p < 0.01). Time to recovery was not related to CD133+ HSCs infused.
CONCLUSION: There was a significant correlation of both number per µL and percentage of CD34+/CD133+ HSCs before and after collection for transplantation; number of CD133+ cells had no apparent clinical impact on time to hematopoiesis regeneration.     

脐血CD133^＋细胞体外扩增巨核系祖细胞的研究

本研究探讨脐血CD133^＋（UCB—CD133^＋）细胞体外扩增巨核系祖细胞的能力和最佳收获时间。采用免疫磁珠激活细胞分选系统（MACS）分选UCB—CD133^＋细胞，将纯化的UCB—CD133^＋细胞接种于含TPO、IL-3和SCF的无血清液体培养体系中体外扩增巨核系祖细胞，在培养第7、10和14天进行细胞计数，流式细胞仪检测扩增过程中CD133、CD34、CD41抗原表达的动态变化，并采用半固体法对不同扩增阶段的细胞进行巨核祖细胞集落形成单位（CFU—MK）培养。结果表明：培养至第7天时，UCB—CD133^＋细胞扩增效果最佳，扩增了8、2-1-2．2倍；培养至第14天，细胞总数扩增了116倍；培养至10天时，平均1个CD133^＋细胞所产生的CD133^＋CD41^＋和CD34^＋CD41^＋细胞数最多，分剐为2．5±0．9和2．6±0.5个，所产生的CD41^＋细胞为20．3±5、9个；扩增前后的UCB—CD133^＋细胞均能形成CFU—MK，扩增第10天的UCB—CD133^＋细胞所形成的CFU—MK总数最多，CFU—MK扩增倍数为59．5±11．8倍。巨核细胞免疫组织化学染色显示，扩增后的巨核系细胞多呈幼稚状态，未见血小板形成。结论：UCB—CD133^＋细胞具有较强的体外扩增巨核系祖细胞的能力，培养第10天扩增效能最佳。     

Cell cycle analysis of the CD133+ and CD133- cells isolated from umbilical cord blood

BACKGROUND: Umbilical cord blood cells (stem/progenitor cells) exhibit high proliferative capacities leading to a large expansion of cells in appropriate cell culture conditions. The aim of this study was to evaluate by flow cytometry the cycling status of CD133+ and CD133- cells depending on various culture conditions, such as sera, stem cell factor (SCF), interleukin 3 (IL-3) and interleukin 6 (IL-6). METHODS: An immunomagnetic system was used for cell separation. CD133+ and CD133- cells were seeded in Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM) with different serum concentrations and were stimulated with SCF (100 ng/ml), IL-3 (50 ng/ml) and IL-6 (50 ng/ml). RESULTS: Our experiments demonstrated that immediately after separation, 96.75+/-0.58% of CD133+ cells and 97.04+/-1.76% of CD133- cells were in G0/G1-phase, while 2.02+/-0.38% and 0.88+/-0.52% were in the S-phase, respectively. Our data documented that CD133+ cells are more active than CD133- cells after the first week of cultivation (p<0.01). Statistically significant difference was found for CD133+ cells vs. CD133- cells after second week of cultivation in G0/G1- and S-phases under all tested conditions. A combination of 12.5% FCS+12.5% HS yielded the highest cell expansion for CD133+ cells; this was concomitant with highest percentage of S-phase and G2M-phase. Our data show that the medium with 25% HS was the best for cell expansion and cycling of the CD133- cells for the first week, followed by the 12.5% FCS+12.5% HS. After 2 weeks of cultivation, obviously 12.5% HS and 12.5% FCS+12.5% HS exhibited similar S-phase amounts in CD133- cells. A decrease of HS concentrations seemed to stimulate CD133- cells' S-phase after the second week. CONCLUSIONS: Our data indicate that the source and the concentration of the serum used for cultivation have an impact on both cell populations: CD133+ cells are most comfortable with a combination of FCS and HS; CD133- cells prefer media-containing HS. Cell cycle status may be an important factor for defining cultivation strategies for stem cell expansion.     

CD133+CD34+ and CD133+CD38+ blood progenitor cells as predictors of platelet engraftment in patients undergoing autologous peripheral blood stem cell transplantation

BackgroundHematopoietic stem cells (HSC) have been characterized by CD34+ expression and an adequate dose of CD34+ cells is associated with a complete engraftment. CD133 is a more specific marker of HSC.Materials and methodsWe studied the relationship between graft content of CD34+, CD133+, and CD38+ cells and trilineage engraftment after autologous stem cell transplantation in patients with different hematological disorders. Blood samples were obtained before and after mobilization with recombinant granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF, 16 μg/kg), from apheresis collections, and after transplantation.ResultsCell subsets were quantified by flow cytometry, and the dose of each population infused was correlated with success of engraftment. G-CSF induced mobilization of CD133+CD38+ cells (12.6-fold) and CD133+CD34+ cells (14.7-fold). A correlation was observed between the infused dose of CD133+CD34+ and CD133+CD38+ cells and platelet engraftment.ConclusionCD133+CD34+ and CD133+CD38+ cells were mobilized with G-CSF and these cell subsets were correlated with platelet engraftment.     

肝癌干细胞标志物及细小病毒H-1非结构蛋白NS-1对肝癌干细胞生长的影响

目的:研究肝癌细胞系SMMC7721肿瘤干细胞表面标志物,探讨细小病毒H-1非结构蛋白NS-1对肝癌细胞的生长抑制作用,以及其对肝癌细胞中具有干细胞特性群体的影响。方法:用流式细胞仪将肝癌细胞按细胞表面标志CD133、CD44进行分离,分为CD133+CD44+、CD133+CD44-、CD133-CD44+、CD133-CD44-4个群体,采用脂质体法将细小病毒H-1非结构蛋白NS-1质粒转染入人肝癌细胞SMMC7721,采用G418筛选稳定转染的细胞克隆,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染细胞NS-1基因的表达。流式细胞仪分析SMMC7721转染前后肿瘤干细胞表面标志CD133、CD90、CD44的表达和细胞生长周期,检测细胞群体的变化。以裸鼠成瘤实验和软琼脂克隆形成实验评价具肿瘤干细胞性质的肝癌细胞表面标志物以及细小病毒H-1非结构蛋白NS-1转染对肝癌细胞生长的影响。结果:肝癌SMMC7721细胞分成CD133+CD44+、CD133+CD44-、CD133-CD44+、CD133-CD44-4组亚群的细胞存在着异质性,4组亚群细胞中均有少数肿瘤干细胞样细胞能在软琼脂上形成克隆,其中CD133+CD44+、CD133+CD44-亚群克隆形成率分别为3.5%和1.8%,CD133-CD44+、CD133-CD44-亚群克隆形成率为0.7%和0.5%。转染细小病毒H-1非结构蛋白NS-1后,4组亚群细胞克隆的形成率都显著下降。裸鼠成瘤实验提示,CD133+表型的细胞成瘤能力强于CD133-表型细胞,CD133-CD44+亚群细胞成瘤能力最弱。流式细胞仪分析显示转染NS-1后,CD133+群体细胞被明显抑制,由31.9%下降至6.3%,而CD90+和CD44+的表达未出现改变;转染NS-1后细胞S期百分率明显下降。结论:肝癌细胞表型为CD133+CD44+和CD133+CD44-亚群中富含肝癌干细胞,转染细小病毒H-1非结构蛋白基因NS-1的部分亚群SMMC7721细胞生长被抑制,提示其对肝癌细胞株中具有干细胞特性的CD133+群体有一定的抑制效应。     

人胎盘CD133+细胞体外扩增巨核系祖细胞的研究

目的 探讨人胎盘组织CD133+(PT-CD133+)细胞体外扩增分化巨核系祖细胞(MPC)的能力.方法 采用磁珠激活细胞分选系统(MACS)分选PT-CD133+细胞,接种于含TPO、IL-3和SCF的无血清液体培养体系中体外扩增MPC,于培养7、10和14 d进行细胞计数,流式细胞术检测细胞扩增过程中CD133、CD34、CD41抗原表达的动态变化,并采用半固体培养法对不同扩增阶段的细胞进行巨核祖细胞集落(CFU-MK)培养.结果 培养至7 d时,PT-CD133+细胞扩增效果最佳,扩增了(13±2)倍,培养至14 d,细胞总数扩增了160倍;随着扩增时间的延长,CD133、CD34表达逐渐下调,而CD41的表达逐渐增强,扩增后的巨核系细胞多呈幼稚状态,未见血小板形成;PT-CD133+细胞扩增前后均能形成CFU-MK,扩增10 d的细胞形成的CFU-MK总数最多,扩增了(54±10)倍.结论 人PT-CD133+细胞具有体外扩增分化为MPC的能力,培养10 d的细胞形成的CFU-MK总数最多.     

肾癌细胞株786-O中CD133~＋细胞分选及基因表达谱研究

目的探讨应用免疫磁珠细胞分选方法分离肾癌细胞株786-O中CD133＋的可能性,并分析CD133＋细胞与CD133-细胞的基因表达谱差异。方法应用免疫磁珠细胞分选技术分选肾癌细胞株786-O中的CD133＋细胞,流式细胞仪分析CD133细胞含量,提取RNA用基因芯片技术分析其基因表达谱。结果 786-O细胞中CD133＋细胞占13.70%,磁珠分选收集的CD133＋细胞阳性率可达98.46%。免疫磁珠细胞分选技术可以有效分选肾癌CD133＋细胞,基因表达谱分析可见CD133＋细胞较CD133-细胞有8种基因表达上调2倍以上,23种基因下调2倍以上。结论免疫磁珠细胞分选技术可以有效分离肾癌CD133＋细胞,CD133＋细胞与CD133-细胞表达差异基因分析为后续研究提供了新的思路。     

犬外周血淋巴管内皮祖细胞的分选及其向内皮细胞的诱导分化研究

目的研究犬外周血中CD34^＋／CD133^＋／VEGFR-3^＋淋巴管内皮祖细胞的生物学特征，探讨血管内皮生长因子-C（VEGF-C）／血管内皮生长因子受体3（VEGFR-3）信号途径在淋巴管内皮祖细胞向淋巴管内皮细胞分化中的作用。方法用密度梯度离心法从犬外周血分离单个核细胞，再用流式细胞仪从单个核细胞分选VEGFR-3^＋细胞。通过VEGF-C诱导使VEGFR-3^＋细胞向内皮细胞分化。在扫描电镜和透射电镜下观察细胞表面形态和超微结构，并在共聚焦激光扫描显微镜下观察特征性标志物的表达。结果VEGFR-3^＋细胞同时表达CD34和CD133。经流式细胞仪分析，外周血单个核细胞中CD34^＋／VEGFR-3^＋细胞的含量约为0.13％，VEGFR-3^＋／CD133^＋细胞的含量约为0.08％。CD34^＋／CD^33^＋／VEGFR-3^＋细胞的体积较大，直径约为15μm。经VEGF-C诱导后，细胞数目增多。细胞变为梭形，伸出板状伪足和许多丝状伪足。诱导后1周，细胞表达血管性血友病因子。诱导后2周，细胞表面出现小凹，细胞内可见Weibel-Palade小体。细胞表达淋巴管内皮细胞特异性标志物LYVE-1，CD133标志消失。结论在VEGF-C诱导作用下，外周血中的CD34^＋／CD133^＋／VEGFR-3^＋淋巴管内皮祖细胞能向淋巴管内皮细胞分化。VEGF-C／VEGFR-3信号途径在淋巴管内皮祖细胞的分化过程中起着重要作用。