一定浓度下三氧化二砷对T细胞淋巴瘤Hut-78细胞株增殖的影响

背景：近年来有将三氧化二砷试用于T细胞肿瘤的有效报道,但未见其治疗机制的相关研究。目的：检测三氧化二砷对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞的抑制增殖、诱导凋亡及细胞周期的影响。方法：分别采用MTT、PI单标记流式细胞术和TUNEL法检测2,5,10μmol/L的三氧化二砷干预24,48,72h,对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞株抑制增殖、诱导凋亡和细胞周期的影响,及其凋亡相关基因bcl-2及血管内皮细胞生长因子基因表达的变化。结果与结论：在一定的浓度范围内,三氧化二砷对Hut-78细胞存在增殖抑制作用,其增殖抑制作用在一定程度上可能与下调血管内皮细胞生长因子基因的表达有关,同时还存在一定的细胞毒作用;三氧化二砷可诱导Hut-78细胞发生凋亡,凋亡机制主要发生在G2～M期,其凋亡作用可能与下调bcl-2基因表达有关。三氧化二砷对Hut-78细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用呈时间剂量依赖性。     

三氧化二砷诱导套细胞淋巴瘤细胞株凋亡及机制研究

本研究旨在探讨三氧化二砷(ATO)诱导套细胞淋巴瘤(MCL)细胞株凋亡的效应及其机制。以不同浓度的ATO处理细胞,再通过MTT法检测细胞MCL细胞株(jeko-1,mino,JVM-2)增殖;用AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测jeko-1细胞的凋亡;用DiOC6(3)染色流式细胞术检测jeko-1细胞的线粒体跨膜电位丢失;用Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及凋亡相关蛋白MCL-1,BCL-2,PUMA,NOXA,cCaspase-3,cCaspase-9,cPARP在ATO处理前后的表达变化。结果表明:ATO抑制MCL细胞增殖,诱导MCL细胞凋亡,并且引起MCL细胞线粒体跨膜电位丢失,引起MCL-1,PUMA,cyclin D1蛋白表达水平降低,cPARP,cCaspase-3,cCaspase-9表达水平增加,不影响BCL-2,NOXA表达。结论:ATO能有效抑制MCL细胞增殖,诱导MCL细胞株凋亡,其中细胞凋亡的线粒体途径起着重要的作用。     

乌索酸对T细胞淋巴瘤细胞株Hut-78细胞体外增殖的影响及其机制研究北大核心CSCD

目的 探讨乌索酸对T细胞淋巴瘤细胞株Hut-78细胞体外增殖的影响及其作用机制.方法 采用MTT法观察不同浓度（10、20、40、80 μmol/L）乌索酸作用不同时间（4、12、24、48、72 h）对Hut-78细胞增殖的抑制作用,并采用流式细胞术分析其早期凋亡的情况.采用免疫印迹法检测乌索酸作用后Hut-78细胞细胞核因子-κB（NF-κB）p65、p50、p52和p100亚基蛋白,以及caspase-8、3、9蛋白表达变化,采用逆转录PCR法检测血管内皮生长因子（VEGF）和环氧合酶-2（COX-2）mRNA表达水平.结果 与不加药对照组比较,不同浓度的乌索酸作用组Hut-78细胞的增殖均受抑制（P值均＜0.05）;AnnexinⅤ＋/pI-细胞比例均升高（P值均＜0.05）;经10、20、40、80 μmol/L乌索酸处理Hut-78细胞72 h后,Hut-78细胞NF-κBp65、p50蛋白和VEGF、COX-2 mRNA表达水平均下降（P值均＜0.05）,caspase-8、3、9蛋白表达均增加（P值均＜0.05）;NF-κBp100、p52蛋白表达差异均无统计学意义（P值均＞0.05）.上述作用均呈剂量和（或）时间依赖性（P值均＜0.05）.结论 乌索酸抑制Hut-78细胞增殖,作用可能与促其凋亡有关,经过死亡受体和线粒体途径完成;影响NF-κB经典信号路径可能是其机制之一,VEGF和COX-2可能也参与其中.     

三氧化二砷对骨髓瘤细胞株RPMI8226作用的研究

血管新生在肿瘤发生、发展中起着重要的作用,而血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)是血管新生的重要正性调控因子,我们应用抗癌新药三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)作用于人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226,利用细胞培养、原位杂交、酶联免疫     

三氧化二砷对淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡的影响及其与Mcl-1基因表达关系的研究

本研究探讨不同浓度的三氧化二砷（As2O3）对人淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡诱导的作用特点及其机制,并探讨其与mcl—1基因表达的关系。应用琼脂糖凝胶电泳检测不同浓度As2O3作用于Raji细胞后的典型DNA—Ladder凋亡条带,激光共聚胶显微镜检测Raji细胞线粒体膜电位的变化,实时荧光定量PCR技术检测As2O3对mcl-1基因表达的影响。结果表明：1μmol／L As2O3作用于Raji细胞时其凋亡不明显,2—8μMol／L As2O3可以诱导Raji细胞凋亡。随着药物浓度的增加,Raji细胞线粒体的呼吸功能和跨膜电位明显减低,同时mcl-1基因表达量明显下调。结论：As2O3降低Raji细胞线粒体的呼吸功能和跨膜电位、下调mcl-1基因表达,而这些可能是导致细胞凋亡的机制。     

三氧化二砷诱导淋巴瘤Raji细胞凋亡与细胞周期阻滞

本研究探讨研究三氧化二砷（As2O3）对人淋巴瘤Raji细胞株凋亡诱导的作用特点及其机制。用MTT比色法观察不同浓度As2O3对Raji细胞的增殖抑制效应，电子显微镜观察不同浓度As2O3作用不同时间后细胞的凋亡形态，DNA-ladder琼脂糖凝胶电泳观察凋亡条带，流式细胞术检测Raji细胞凋亡、细胞周期分布。结果表明：1—8μmol／LAs2O3能明显抑制Raji细胞的活力，并存在一定的量效、时效关系。2—8μmol／L浓度的As2O3可以诱导Raji细胞周期阻滞及凋亡，而1μmol／LAs2O3不诱导细胞凋亡，只是通过细胞周期阻滞作用抑制细胞增殖。结论一定浓度三氧化二砷可以抑制Raji细胞的增殖，阻滞细胞周期，诱导细胞凋亡。细胞周期阻滞伴随细胞凋亡而发生。     

氨茶碱对淋巴瘤细胞系增殖与凋亡的影响及机制探讨

为探讨磷酸二酯酶（phosphodiesterase，PDE）抑制剂在淋巴瘤细胞增殖与凋亡中的作用及机制，研究了非选择性PDE抑制剂氨茶碱（aminophylline，AM）对Burkitt淋巴瘤细胞系Raji的影响。采用MTT检测，光学显微术，电镜术及膜联蛋白V染色观察细胞增殖、细胞凋亡的形态学变化及凋亡率；用流式细胞术和RT-PCR技术检测细胞周期，周期蛋白B1和Bcl-2的表达及线粒体跨膜电位的变化。结果显示，氨茶碱对Raji细胞增殖呈浓度依赖性抑制作用；形态学观察发现随氨茶碱浓度增加，细胞体积明显缩小，核固缩，核染色质核膜下聚集，出现凋亡小体；细胞涂片显示，核染色质凝聚、核碎裂；电镜观察有典型凋亡细胞；膜联蛋白V染色显示氨茶碱诱导Raji细胞凋亡率增加，线粒体跨膜电位（Δφm）呈浓度依赖性下降；流式细胞术及RT-PCR显示氨茶碱下调Bcl-2蛋白及mR-NA的表达；细胞周期分析显示经氨茶碱处理的细胞出现S期阻滞、细胞周期蛋白B1表达下调。结论：氨茶碱可通过S期阻滞抑制细胞增殖、下调Bcl-2的表达及降低线粒体膜电位而诱导Raji细胞凋亡。     

干扰素和三氧化二砷诱导淋巴瘤细胞凋亡及细胞周期阻滞的协同作用

干扰素 (ＩＦＮ)局部应用可直接杀伤肿瘤细胞 ,其作用机制和疗效尚不十分清楚。为探讨ＩＦＮ α直接抗肿瘤机制 ,我们研究了ＩＦＮ α对ＥＢ病毒感染的Ｂｕｒｋｉｔｔ淋巴瘤细胞株Ｒａｊｉ和ＥＢ病毒阴性细胞株Ｄａｕｄｉ凋亡和细胞周期阻滞的诱导作用及其与三氧化二砷 (Ａｓ2 Ｏ3)的协同作用 ,旨在探索难治性淋巴瘤治疗的新手段。材料和方法1　药品和试剂　ＩＦＮ α为天津华立达生物制品公司产品 ,Ａｓ2 Ｏ3为哈尔滨伊达制药公司产品 ,溶于ＲＰＭＩ 16 4 0培养液中 ,1ｍｍｏｌ Ｌ作为贮存液于 4℃保存 ,应用前稀释为 1μｍｏｌ Ｌ工作液。…     

STI571联合三氧化二砷对K562细胞增殖、凋亡及Caspase-3、Bcl-xL表达的影响

本研究旨在探讨STI571单独应用及与三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)联合应用对K562细胞增殖、凋亡及凋亡相关因子caspase-3、bcl-xL mRNA表达的影响。用MTT法检测各组K562细胞在药物作用各时间点(24、48、72小时)的OD值,以评估药物对细胞增殖的作用;AnnexinV/PI荧光标记法检测K562细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR检测K562细胞caspase-3、bcl-xL mRNA的表达。结果表明:STI571单独应用及与As2O3联用均可抑制K562细胞的增殖。各实验组的OD值随着实验时间的延长而降低,各时间点之间的差异具有显著性(p0.05),且各实验组均在72小时时OD值降低最明显。在同一时间点,与对照组相比较,各实验组的OD值均逐渐降低(p0.05),其中实验5组下降最明显。流式细胞仪检测发现,对照组的凋亡率随着时间的延长无明显变化;各实验组的凋亡率随着时间的延长逐渐上升,各时间点之间的差异具有显著性(p0.05),以72小时时上升最为明显;在同一时间点,与对照组相比较,各实验组的凋亡率均逐渐上升(p0.05),其中以实验5组的凋亡率上升最明显。实时荧光定量PCR检测发现,与对照组相比,各实验组bcl-xL mRNA的表达减弱,出现了2-ΔΔCT值的减小,且减小程度实验3组大于实验2组(p0.05);与对照组相比,各实验组caspase-3 mRNA的表达增强,出现了2-ΔΔCT值的增大,且增大的程度实验3组大于实验2组(p0.05)。结论:STI571单独应用时能够抑制K562细胞增殖,加速其凋亡。STI571联合As2O3对K562细胞抑制增殖及加速凋亡的作用加强。两药联合后Caspase-3 mRNA的表达较STI571单独应用时增强而bcl-xL mRNA的表达减弱。影响凋亡相关因子caspase-3、bcl-xL mRNA的表达,可能是As2O3与STI571联合抗白血病细胞产生协同作用的分子机制之一。     

KRAS对T-ALL细胞株增殖及凋亡的影响

目的：探讨RAS蛋白家族在维持T-ALL细胞株体外生长中的功能。方法：纯化T-ALL细胞株DNA,利用PCR法扩增3个RAS基因（KRAS、NRAS、HRAS）的编码区。经T-A克隆后,Sanger法对KRAS、NRAS、HRAS基因编码区测序。将siRNA克隆到pSEH-361载体,在HEK-293T细胞中与pAMPHO和pVSVG一起包装成逆转录病毒,随后感染T-ALL细胞。qRT-PCR和Western blot检测基因表达情况。利用Annexin V-PE/7-AAD染色T-ALL细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况。利用Hoechst 33258染色T-ALL细胞,流式细胞术检测细胞周期分布情况。经抗体染色,荧光显微镜观察cleaved-Caspase 3蛋白的表达。结果：在T-ALL细胞株中,除Loucy和P12-ICH细胞KRAS基因发生c. 6187G> A(p. KRASG12D)突变,其余RAS基因均未发现错义突变。除PEER细胞（IC50=47.916μmol/L）外,泛RAS抑制剂Compound 3144对其它T-ALL细胞均有一定杀伤作用。同样,除PEER...     

硼替佐米与吡喃阿霉素联合对T细胞淋巴瘤细胞系Hut-78细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨硼替佐米(BTZ)与吡喃阿霉素(THP)联合对人皮肤T细胞淋巴瘤细胞系Hut-78细胞的增殖抑制作用及其机制.方法 不同浓度的BTZ、THP单药或两药联合作用于Hut-78细胞48 h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,应用联合指数分析两药是否存在协同效应,在此基础上应用流式细胞术分析细胞周期分布和细胞凋亡情况,利用Western blot法检测细胞周期抑制蛋白P21的变化.结果 BTZ与THP单药对Hut-78细胞增殖具有显著的抑制作用,呈时间和剂量依赖性,两药联合时,BTZ序贯THP组的细胞增殖抑制率显著高于BTZ与THP同时组及THP序贯BTZ组(P值均＜0.01),当细胞增殖抑制率＞50%时,THP序贯BTZ呈拮抗效应,而BTZ与THP同时及BTZ序贯THP则表现为协同效应,随着增殖抑制作用的增加,仅BTZ序贯THP的协同作用更为显著.BTZ与THP单药能有效诱导Hut-78细胞凋亡,呈剂量依赖性,且BTZ序贯THP的细胞凋亡诱导作用较单药显著增强.BTZ单药可使细胞明显阻滞于G2/M期,上调P21蛋白的表达水平,序贯应用THP可显著增强BTZ对细胞周期的阻滞作用.结论 BTZ序贯THP可协同抑制Hut-78细胞增殖并诱导其凋亡,协同机制可能与序贯应用THP增强BTZ介导的P21表达上调及G2/M期细胞阻滞有关,提示BTZ与THP联合可能成为治疗T细胞非霍奇金淋巴瘤的新选择.

Abstract：

Objective To investigate the in vitro effect of bortezomib (BTZ) alone and in combination with pirarubicin (THP) on the growth inhibition of human cutaneous T-cell lymphoma cell line Hut-78.Methods Hut-78 cells were cultured with different concentrations of BTZ or THP alone and the two drugs combination for 48 h. Cell proliferation, cell cycle and apoptosis were evaluated. The cell cycle inhibitor P21 was determined by Western blot. Results BTZ or THP alone significantly inhibited the growth of Hut-78 cells in a time- and dose-dependent manner. In the combination groups, the inhibitory effect of BTZ followed by THP was the highest ( P ＜ 0. 01 ). When the inhibition rate was more than 50%, the combination index analysis showed significant synergistic if treated with BTZ followed by THP or the two at the same time, but antagonistic if treated with THP followed by BTZ. With the inhibition rate increasing, only the synergistic effect of BTZ followed by THP was further increased. The apoptosis rate of BTZ followed by THP was higher than that of single agent each(P ＜0. 01 ). BTZ alone significantly increased the proportion of cells in G2/M phase ( P ＜0. 01 ) in a dose-dependent manner and up-regulated the expression level of P21. Sequential THP notably enhanced BTZ-induced cell cycle arrest and apoptosis. Conclusions BTZ alone effectively induces growth inhibition and apoptosis of Hut-78 cells in vitro. BTZ followed by THP can synergistically enhance this cytotoxic effect. The mechanism may be that THP enhances BTZ-induced G2/M arrest and P21 up-regulation.     

三氧化二砷对人白血病细胞系MV4-11细胞增殖和凋亡的影响

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三氧化二砷对Burkitt淋巴瘤细胞株Raji凋亡的诱导作用及C-myc表达的影响

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对Burkitt淋巴瘤细胞袜Raji凋亡的诱导作用及C-myc表这的影响.方法 通过噻唑蓝比色法检测观察As2 O3对Raji细胞增殖的影响,流式细胞仪观察As2O3对Raji细胞凋亡的诱导作用,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测As2O3对C-myc mRNA表达的影响.结果 As2O3对Raji细胞生长有抑制作用,呈剂量和时间依赖关系(P＜0.01);As2O3对Raji细胞有诱导凋亡作用,呈剂量和时间依赖关系(P＜0.01);随着As2O3浓度升高,C-myc的表达水平明显下降(P＜0.01).结论 As2O3对Burkitt淋巴瘤细胞株Raji具有增殖抑制和诱导凋亡作用,其作用机制可能与C-myc表达水平明显下降有关.     

紫杉醇联合三氧化二砷作用人结肠腺癌LS-174T细胞增殖及凋亡的实验研究

目的以人结肠腺癌LS-174T细胞系作为体外模型,研究紫杉醇与三氧化二砷联合作用抑制肿瘤细胞增殖及凋亡双重作用的机理。方法采用不同浓度的紫杉醇与三氧化二砷联合作用于体外培养的人结肠腺癌LS-174T细胞,以MTT比色法和形态学观察检测其对人结肠腺癌LS-174T细胞的抑制作用。以TUNEL法和Annexin V-Fife、PI染色、共聚焦显微镜检测其对人结肠腺癌LS-174T细胞系的凋亡诱导作用。结果不同浓度的紫杉醇与三氧化二砷联合组对人结肠腺癌LS-174T细胞增殖的抑制作用均强于紫杉醇或三氧化二砷单用药组。联合用药组从形态学观察及应用TUNEL法和Annexin V-FITC、PI染色结果显示联合用药组可检测到大量凋亡结肠腺癌细胞,明显多于单用药组。结论紫杉醇与三氧化二砷联合应用于人结肠腺癌LS-174T细胞可协同抑制其增殖,并可明显诱导肿瘤细胞凋亡发生。     

三氧化二砷对人宫颈癌细胞放射增敏的体外实验

目的:三氧化二砷(As2O3)具有显著的抗肿瘤效应,且已进入临床研究阶段,在体外实验中将其作为生物材料用于人宫颈癌细胞放射效应研究中,探讨其是否具有辐射增敏作用。方法:实验于2006-01/2007-04在重庆医科大学超声研究所(国家级重点实验室)完成。实验分组:①空白对照组(不做任何处理)。②单纯照射组:将其8×103个细胞悬浮于新鲜培养液中,在室温下行60Coγ射线照射,平均剂量率为62.89cGy/min,根据实验要求照射2Gy。③As2O3组:在培养液中加入1.0μmol/LAs2O3共培养。④As2O3 照射组:加入1.0μmol/LAs2O3后进行60Coγ射线照射。实验评估:用MTT法及平板克隆形成试验检测各实验组人宫颈癌细胞株HeLa细胞存活分数和集落形成率,AO/EB荧光染色法检测各组细胞凋亡率的变化,流式细胞仪测定Bcl-2蛋白的表达。结果:As2O3 照射组细胞存活分数和集落形成率较As2O3组及单纯照射组明显下降,与As2O3组和单纯照射组比较差异具有显著性(P<0.01),而As2O3 照射组细胞凋亡率明显增加,Bcl-2蛋白的表达明显下降,与As2O3组或单纯照射组比较差异皆具有显著性(P<0.01)。结论:As2O3对宫颈癌HeLa细胞具有辐射增敏作用,其增敏作用与As2O3增加照射后肿瘤细胞的凋亡率有关。     

三氧化二砷对白血病细胞株K562的杀伤作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对白血病细胞株K562的杀伤作用。方法采用台盼蓝拒染法计数活细胞数,并计算细胞生长率;细胞涂片经Wright Giemsa染色,光镜下观察细胞的形态。结果As2O3对白血病K562细胞的增殖具有明显的抑制作用。4μmol/L的As2O3能够使K562细胞发生M期阻滞,引起部分细胞发生凋亡。结论As2O3不但抑制K562细胞的增殖,而且导致K562细胞M期阻滞。