不同利什曼原虫分离株在培养基中生长繁殖观察

目的　比较我国不同类型内脏利什曼病流行区利什曼原虫前鞭毛体在不同培养基中的生长繁殖情况,为选择合适培养基用于利什曼原虫培养提供实验依据。方法　将3 ×105个KS?2、Cy、JIASHI?5株利什曼原虫前鞭毛体分别接种至1 mL NNN培养基、1 mL M199 + 20%胎牛血清培养基、1 mL M199 + 20%马血清培养基及1 mL 脑心浸液培养基（含血红素）中,22 ℃温箱中无菌静置培养,显微镜下连续观察计数8 d,绘制3株利什曼原虫前鞭毛体的生长曲线。 结果 KS?2、Cy、JIASHI?5株利什曼原虫前鞭毛体均能在NNN培养基、M199 + 20%胎牛血清培养基和M199 + 20%马血清培养基中生长繁殖,在NNN培养基中培养不同时间后的3株利什曼原虫前鞭毛体计数均显著高于M199 + 20%胎牛血清培养基和M199 + 20%马血清培养基（P均 < 0.05）,在这3种培养基中培养不同时间后的KS?2株利什曼原虫前鞭毛体计数均显著高于Cy和JIASHI?5株（P均 < 0.05）。KS?2、Cy、JIASHI?5株利什曼原虫前鞭毛体均不能在脑心浸液培养基中生长繁殖。结论　分离自我国不同类型内脏利什曼病流行区的利什曼原虫在同一培养基中生长增殖速度有差异,同一利什曼原虫分离株在不同培养基中的生长繁殖速度亦有差异。NNN培养基是最适合我国内脏利什曼病流行区利什曼原虫分离株的培养基。     

几种利什曼原虫前鞭毛体在不同培养基上生长繁殖的观察

在三恩氏培养基和经过改良的RPMI1640培养基上比较了5株杜氏利什曼,1株沙鼠利什曼和1株蜥蜴利什曼前鞭毛体的繁殖动态。结果表明有四种类型。其中761株杜氏利什曼和蜥蜴利什曼属于一组;杜氏利什曼801株和852株为一组;771株杜氏利什曼与沙鼠利什曼为一组,自1株杜氏利什曼本身为一组。7株利什曼在两种培养基上处于繁殖峰值的原虫数分别为2.8～3.8×10~7和3.9～7.9×10~6。讨论了这四种繁殖动态类型的生物学意义,并认为经过补充的RPMI 1640培养基可供在利什曼原虫的生物化学和免疫学研究中应用。     

四川汶川的杜氏利什曼原虫人及犬分离株培养观察

本文报道了从四川汶川地区分离的两株杜氏利什曼原虫(人分离株和犬分离株)前鞭毛体在培养中的生物学特征。犬株的生长迟缓期较长,为6～7天,人株仅2天。人株和犬株前鞭毛体达到增殖高峰的时间分别在培养6天和10天。人株梭状前鞭毛体大小(长×宽)为6.68～10.02×1.17～1.84μm(平均8.77×1.59μm),成熟前鞭毛体为11.69～18.37×1.17～1.67μm(平均14.41×1.59μm)。犬株梭状前鞭毛体为8.35～11.69×1.67～2.00μm(平均10.25×1.93μm),成熟前鞭毛体为13.36～21.71×1.50～2.17μm(平均15.97×1.85μm)。两株原虫前鞭毛体的大小差异有显著的统计学意义,两者的生长曲线亦有差别。     

哈密沙虎体内蜥蜴利什曼原虫前鞭毛体的超微结构观察

从内蒙古额济纳旗从哈密沙虎肝组织内培养分离的蜥蜴利什曼原虫前鞭毛体进行了超微结构观察。前鞭毛体多为柳叶状，其膜下微管数平均为５７±８，微管直径为２４ｎｍ，微管间距为１８－２２ｎｍ，质膜厚度为７－８ｎｍ。该原虫的膜下微管数和微管间距均较Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ａｇａｍａｅ主Ｌ．ａｄｌｅｒｉ两种蜥蜴利什曼原虫为少和窄。     

杜氏利什曼原虫人工感染家犬血清中IgG动态观察

本文采用杜氏利什曼原虫四川人分离株前出毛体人工感染家犬１１只，按不同感染剂量（１×１０４～１×１０８／只）分组并设未感染对照犬２只，骨髓涂片法感染组均查见利什曼原虫无鞭毛体，感染成功。感染前犬血清ＩｇＧ含量均数为１２６．５９Ｉｕ／ｍｌ，１５周时达１９２．５４Ｉｕ／ｍｌ，（Ｐ＜０．０５）。说明本试验人工感染Ｌ．ｄ前毛体导致了犬ＩｇＧ的上升。     

利什曼原虫与巨噬细胞的相互作用及相关抗原

本文对利什曼原虫前鞭毛体表面的巨噬细胞相关抗原的性质，结构，结构，分布状况，种内差异作了综述。并也论及在血清调理和非血清调理环境下，此种抗原与巨噬细胞表面相关受体的作用关系。阐明了利什曼原虫入侵哺乳动物巨噬细胞是确定原虫寄生生活的基础。     

不同pH肝浸汤培养基培养阴道毛滴虫的观察

目的 观察不同pH值对阴道毛滴虫生长发育的影响，为实验室培养或临床诊断培养阴道毛滴虫提供参考。方法 配制pH值分别为2、2．5、3、3．5、4、4．5、5、5．5、6、6．5、7、7．5、8、8．5的肝浸汤培养基，分别接种相同数量的阴道毛滴虫，37℃恒温培养48h，用血球计数板计数滴虫数量。以pH值为横坐标，滴虫密度为纵坐标作曲线图，找出培养滴虫的最适pH值范围。同时，连续观察各pH值管滴虫生长情况，直至滴虫死亡，记录各pH值培养基中滴虫的最长存活时间。结果 阴道毛滴虫能在pH3～8的肝浸汤培养基中生长繁殖，最适pH范围为5～7．5，最适pH值是6。在pH4和pH8的培养基中连续不转代培养时，滴虫存活时间最长，分别达180h和189h。结论 肝浸汤培养基pH值为6时，滴虫生长良好，运动活泼，繁殖速度快，适用于快速繁殖滴虫，提高滴虫收获量；在pH4和pH8时，滴虫生长缓慢，但存活时间显著延长，适合保种培养。     

杜氏利什曼原虫前鞭毛体和无鞭毛体的比较蛋白质组学分析

目的 应用蛋白质组学技术分析杜氏利什曼原虫前鞭毛体和无鞭毛体蛋白质表达状况。 方法 分别提取和纯化杜氏利什曼原虫四川SC6株前鞭毛体与纯培养无鞭毛体的总蛋白,分别经pH3～10的预制胶条进行双向电泳分离,凝胶用考马斯亮蓝染色,凝胶图像以PDQuest 1.0软件分析,并对主要差异表达蛋白点用电喷雾质谱法进行鉴定。 结果 等量的前鞭毛体与纯培养的无鞭毛体总蛋白经双向电泳分离后均可获近700个蛋白点,其中超过90%的蛋白点的分布和相对强度基本一致。与前鞭毛体比较,6个蛋白点在无鞭毛体蛋白中明显高表达,3个蛋白点低表达。6个明显高表达的蛋白点中有5个为已知功能蛋白,分别为Reiske铁硫蛋白前体、α微管蛋白、过氧化物酶1、二氢硫辛酰胺乙酰转移酶前体和甘露糖-1-磷酸瓜氨酸转移酶;3个低表达的蛋白点中有2个为已知功能蛋白,分别为热休克蛋白70和β微管蛋白。这些差异调节表达蛋白与碳水化合物/能量代谢,应激反应,细胞膜和细胞骨架形成相关。 结论 前鞭毛体与无鞭毛体蛋白质的表达存在差异。     

新疆不同地区杜氏利什曼原虫抗原制备及应用研究

目的用从新疆不同地区分离得到的利什曼原虫前鞭毛体提取抗原,观察ELISA法检测黑热病病人和疫区健康人血清抗体时的敏感性和特异性,为制备ELISA诊断试剂盒和进一步提高这种检测方法的敏感性和特异性,提高黑热病现场流行病学调查结果的准确性和可靠性提供实验依据。方法(1)抗原提取:收集新疆不同地区分离得到的利什曼原虫前鞭毛体,常规方法提取抗原,滴定出抗原工作浓度。(2)检测:用提取的3株抗原,测定黑热病病人和疫区健康人血清抗体。结果3株抗原检测24份肺结核病人血清,均为阴性;3株抗原分别检测60份非疫区健康人血清801株和951株的检测结果均为阴性,901株检测出1份阳性(临界值);3株抗原分别检测131份黑热病病人血清,阳性率分别为:901株(80.9%)、801株(92.3%)、951株(89.9%)。801株明显高于901株。3株抗原分别检测334份疫区健康人血清,901株(10.5%)明显高于801株(6.0%)和951株(5.1%),有显著差异。按不同地区人群阳性率比较,3株抗原检测巴楚县人群阳性率有显著差异,901株(18.8%)与951株(8.5%)有显著差异,乌什县人群阳性率无显著差异;按不同年龄组的人群阳性率比较,3株抗原在每个年龄组的阳性率无显著差异。结论利什曼原虫前鞭毛体抗原有较好的稳定性,耐热性极好;901株、801株抗原的敏感性、特异性较好,可做为新疆血清流行病学调查所用的抗原株;801株的特异性更好,可用于黑热病的特异性抗体的检测及研究。     

利什曼原虫K26序列应用于我国利什曼原虫分离株鉴定的价值分析

目的评价利什曼原虫K26序列应用于我国利什曼原虫分离株鉴定的价值。方法收集我国不同流行区的利什曼原虫16个分离株和6个国际参照株,培养后收集前鞭毛体,提取DNA,扩增K26序列并测序,应用ClustalX2进行序列比对,从GenBank下载同源性较高的利什曼原虫分离株的K26序列,构建系统进化树,分析我国不同流行区的利什曼原虫分离株的亲缘关系。结果我国16个利什曼原虫分离株和国际参照株DD8均扩增出单一条带,而5个非杜氏利什曼原虫复合体虫株均未扩增出任何条带。序列分析结果表明,我国人源型利什曼病流行区的3个分离株801、KS-2和KS-6均扩增出920 bp片段,自然疫源型利什曼病流行区的4个分离株XJ771、JIASHI-1、JIASHI-2和JIASHI-5均扩增出491 bp片段,人犬共患型利什曼病流行区4个分离株Cy、SC6、Hebei-Lv和Shanxi-Yang均扩增出404 bp片段,皮肤利什曼病流行区的5个分离株KXG-Xu、KXG-Liu、KXG-65、KXG-918和KXG-927均扩增出449 bp片段,且各流行区内虫株间的序列一致性均为100%。各流行区之间的虫株间的序列一致性较低,为40.2%~91.4%。系统进化树分析结果显示,我国16个利什曼原虫分离株聚集成2个群3个亚群,其中KXG-Xu、KXG-Liu、KXG-65、KXG-918、KXG-927、XJ771、JIASHI-1、JIASHI-2、JIASHI-5分离株聚集为A亚群,Cy、SC6、Hebei-Lv、Shanxi-Yang与婴儿利什曼原虫聚集为B亚群,A亚群和B亚群聚集为Ⅰ群;801、KS-2和KS-6分离株与杜氏利什曼原虫聚集为C亚群,进一步与国际参照株DD8聚集为Ⅱ群。结论利什曼原虫K26序列可应用于我国利什曼原虫分离株的鉴定。     

RT-PCR检测亚马孙利什曼原虫P-4和GP-46基因表达

目的 证明亚马孙利什曼原虫前鞭毛体和无鞭毛体的基因表达水平。 方法 用RNA分离试剂盒，分别提取3种不同来源的无鞭毛体（由小鼠模型皮损组织获得的无鞭毛体、由前鞭毛体培养转化而来的无鞭毛体, 以及来自J774.G8巨噬细胞株的无鞭毛体）的总RNA，以及前鞭毛体总RNA，然后用SuperScripⅡ逆转录聚合酶将其逆转录为cD-NA，再经PCR扩增无鞭毛体特异核酸酶（P-4）和前鞭毛体特异膜糖蛋白（GP-46）的特异片段，经1.5% 琼脂糖凝胶电泳分析。 结果 3种不同来源的无鞭毛体均观察到P-4特异性条带（273 bp），且密度相似，但在前鞭毛体中未观察到; 在前鞭毛体中观察到高表达的GP-46特异性条带（325 bp），但在3种无鞭毛体中弱表达。 结论 由前鞭毛体转化的无鞭毛体能高水平表达亚马孙利什曼原虫无鞭毛体P-4特异基因，可为其生物化学及免疫学研究提供无鞭毛体来源。     

我国不同流行区利什曼原虫分离株动基体小环DNA序列分析

目的分析我国不同流行区利什曼原虫动基体小环DNA序列差异性。方法应用来自小环DNA保守区的一对引物KP1-KP2扩增该利什曼原虫动基体小环DNA,将扩增产物克隆于pGEM—T载体,随机选取5个阳性克隆进行双向测序,对获得的小环序列应用DNAStar软件进行比对分析,并利用Mega5．0构建系统进化树。结果应用KP1-KP2引物分别从来自我国不同流行区利什曼原虫虫株SC、KXG—Xu、KXG-65、JIASHI-1和801扩增出单一小环序列,长度分别为858bp,858bp,858bp,750bp和748bp。SC、KXG—Xu和KX（3-65间序列一致性超过99％,JIASHI-1和801虫株序列均与其它虫株显示高度异质性。进化分析显示801与一杜氏利什曼原虫聚为一类,JIASHI-1与亲内脏的利什曼原虫聚为一大类,而SC、KXpxu和KXG-65三者聚为独自一类,和亲皮肤的利什曼原虫相比,与亲内脏的利什曼原虫有更近的亲缘关系。结论我国不同流行区利什曼原虫虫株小环序列存在较大差异性。