葛根素经p53/GLIPR1途径调节膀胱癌UMUC-3细胞增殖及侵袭的机制研究

摘要：目的:探讨葛根素经p53/GLIPR1途径调节膀胱癌UMUC-3细胞增殖及侵袭的机制。方法:设膀胱癌UMUC-3细胞组、氟尿嘧啶组(80. 0μg·ml-1)、葛根素低、高剂量组(剂量分别为60. 0μg·ml-1、120. 0μg·ml-1),置于CO2培养箱（37℃、5%CO2、2%O2、93%N2）培养72 h。细胞培养结束后,测定各组UMUC-3细胞增殖水平、侵袭能力、凋亡率水平以及p53、GLIPR1基因蛋白水平。结果:氟尿嘧啶组、葛根素低、高剂量组吸光度（A）值、存活率水平、克隆形成数目、穿膜数、p53 m RNA、蛋白水平低于UMUC-3细胞组（P<0. 05）,凋亡率、GLIPR1 m RNA、蛋白水平高于UMUC-3细胞组（P<0. 05）;葛根素低剂量组A值、存活率水平、克隆形成数目、穿膜数、p53 m RNA、蛋白水平高于氟尿嘧啶组（P<0. 05）,凋亡率、GLIPR1 m RNA、蛋白水平低于氟尿嘧啶组（P<0. 05）;葛根素高剂量组A值、存活率水平、克隆形成数目、穿膜数、p53 m RNA、蛋白水平低于氟尿嘧啶组（P<0. 05）,凋亡率、GLIPR1 m RNA、蛋白水平高于氟尿嘧啶组（P<0. 05）。结论:葛根素通过抑制p53 m RNA、蛋白的表达,促进GLIPR1 m RNA、蛋白的表达进而抑制膀胱癌细胞的增殖及侵袭,促进膀胱癌细胞的凋亡。     

SFRP1通过抑制Wnt/β-catenin通路促进心肌细胞增殖的分子机制

目的 探讨SFRP1是否通过抑制Wnt/β-catenin通路促进心肌细胞增殖。方法 选取c57BL/6雄性小鼠18只,出生后1 d、7 d及28 d的c57BL/6小鼠各6只分为3组,分离和提取心肌组织,检测心肌组织中SFRP1的mRNA及蛋白表达水平。利用出生后1 d的乳鼠心脏培养小鼠原代心肌细胞,予SFRP1-shRNA慢病毒转染细胞,免疫荧光检测心肌细胞增殖标志物Ki67和PH3表达变化,Western blot检测胞浆β-catenin蛋白表达变化。结果 SFRP1 mRNA和蛋白水平在小鼠出生后逐渐下降(P<0.05)。转染SFRP1-shRNA慢病毒后,SFRP1蛋白表达水平均下降(P<0.05),其中shRNA-2干扰效果最好。与空载组相比,shRNA组细胞Ki67和PH3表达下降,同时胞浆β-catenin蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论 SFRP1通过抑制Wnt/β-catenin信号通路促进心肌细胞增殖。     

汉防己碱对人膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的分析汉防己碱(Tet)对人膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响,并初步探讨其分子机制。方法利用结晶紫染色和克隆形成实验检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞侵袭;Hochest 33258染色和Western blot检测细胞凋亡;Western blot检测Wnt/β-catenin信号的活化情况。结果汉防己碱可抑制人膀胱癌细胞增殖和侵袭,并促进细胞凋亡。汉防己碱可抑制DVL蛋白表达,抑制GSK3β在9位丝氨酸的磷酸化,并降低β-catenin及其下游靶分子Cyclin D1和c-Myc的蛋白水平。结论汉防己碱可抑制人膀胱癌细胞增殖和侵袭,并促进细胞凋亡,这可能与其对Wnt/β-catenin信号的抑制作用有关。     

隐丹参酮通过 G蛋白偶联受体 55调节 Wnt/β?catenin信号通路抑制舌鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及其作用机制研究

目的探讨隐丹参酮对舌鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法实验设置不同浓度隐丹参酮( CT)组、空白对照( NC)组、 pcDNA?con组、 pcDNA?GPR55组、 CT+si?con组、 CT+si?GPR55组。 MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡; qRT?PCR检测 GPR55 mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测蛋白表达。结果 MTT法检测显示, 0 CT组、 2 CT组、 4 CT组、 8 CT组、 16 CT组、 32 CT组细胞增殖抑制率分别为( 0.00±0.02)%、(25.04±2.50)%、(68.56±5.86)%、(85.44±8.54)%、(88.25±8.82)%、(80.11±8.01)%,与不含隐丹参酮的细胞相比,不同浓度隐丹参酮处理组 TSCC细胞的增殖抑制率均显著升高( F＝284.028,P＜0.05)。隐丹参酮可抑制舌鳞状癌细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制 Bcl?2、β?catenin表达,促进 Bax、 GPR55表达。过表达 GPR55也抑制舌鳞状癌细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制 CyclinD1、Bcl?2表达,促进 Bax表达。低表达 GPR55逆转了隐丹参酮对舌鳞状癌细胞的增殖抑制、凋亡促进及对 β?catenin表达的抑制作用。与 NC组( 0.75±0.08)相比, CT组 TSCC细胞中 β?catenin表达水平( 0.26±0.03)显著降低;与 CT+si?con组( 0.30±0.03)相比, CT+si?GPR55组 TSCC细胞中 β?catenin表达水平( 0.62±0.06)显著升高( F＝176.212,P＜0.05)。结论隐丹参酮可抑制舌鳞状癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与调控 GPR55及 Wnt/β?catenin信号通路有关。     

二氢丹参酮对人肺癌GLC-82细胞的抑制作用及其机制研究

目的:研究二氢丹参酮(DTS)对人肺癌GLC-82细胞的抑制作用及其作用机制。方法:以质量浓度为0(空白对照)、5、10、20、40、80、100μg/ml的DTS作用细胞24、48 h后,采用MTT法测定细胞的增殖抑制率和半数抑制浓度(IC50);流式细胞术检测17.85μg/ml DTS作用12、24、48 h后细胞的凋亡情况,计算凋亡率;Western blot法检测Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶3(Caspase-3)蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,DTS组细胞的增殖受到抑制,作用24、48 h后最大细胞抑制率分别为54.48%、64.95%,IC50分别为62.36、33.94μg/ml;DTS可诱导细胞的凋亡且与作用时间呈正相关,凋亡率为5.6%~29.6%;Western blot检测结果表明,DTS能下调细胞中Bcl-2蛋白的表达、上调Caspase-3蛋白的表达(P<0.01或P<0.05)。结论:DTS对人肺腺癌GLC-82细胞有较强的抑制作用,并诱导其凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白的表达、上调Caspase-3蛋白的表达有关。     

基于Wnt/β-catenin信号对胡椒碱抗肿瘤作用机制的研究

目的 研究小剂量胡椒碱通过下调Wnt/β-catenin信号分子的表达调控胃癌细胞HGC-27增殖及侵袭的机制。方法 体外培养人胃癌HGC-27细胞,设置梯度浓度的胡椒碱,CCK-8法检测24 h细胞的活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。将细胞分为正常组（HGC-27）细胞、对照组（Wnt/β-catenin抑制剂组）、实验组（小剂量胡椒碱）。CCK-8法检测12,24,48 h细胞的活力,BrdU标记流式细胞术检测细胞增殖率、划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力,Western-blot法检测Wnt/β-catenin信号分子的表达以及MMP2、MMP9和N-cadherin的表达水平,RT-qPCR检测β-catenin、MMP2、MMP9、N-cadherin的mRNA表达水平。结果 5 μmol·L^-1的胡椒碱可以抑制细胞的增殖但无明显细胞毒性,可以显著降低HGC-27细胞的增殖能力,且具有时间依赖性,相比正常组差异具有统计学意义（P<0.05）。划痕试验和Transwell小室试验结果显示,5 μmol·L^-1的胡椒碱可以降低HGC-27细胞的迁移能力和侵袭能力,相比正常组差异具有统计学意义（P<0.05）。胡椒碱可以显著下调Wnt/β-catenin信号分子的表达,以及关键蛋白MMP2、MMP9、N-cadherin的表达水平,相比正常组差异具有统计学意义（P<0.05）。RT-qPCR结果显示,β-catenin、MMP2、MMP9、N-cadherin的mRNA表达水平相比正常组显著下调（P<0.05）。结论 小剂量的胡椒碱可以通过下调Wnt/β-catenin信号分子的表达调控胃癌细胞HGC-27的增殖及侵袭,可能是胡椒碱抗肿瘤的作用机制之一。     

miR-9通过Wnt/β-catenin信号通路调控甲状腺癌细胞侵袭和迁移的机制研究

目的 探讨miR-9对甲状腺癌细胞侵袭和迁移影响及对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用.方法 采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测miR-9在正常甲状腺上皮细胞系Nthyori3-1和人甲状腺癌细胞系TPC-1、MDA-T32及SW579中的表达情况,采用脂质体转染技术将miR-9 mim...     

百合总皂苷经VEGF/Akt信号通路调节人前列腺癌LNCaP细胞增殖及侵袭的机制研究

摘要：目的:探讨百合总皂苷经血管内皮生长因子（VEGF）/蛋白激酶B（Akt）信号通路调节人前列腺癌LNCaP细胞增殖及侵袭的机制。方法:体外培养人前列腺癌LNCaP细胞,阴性对照组不进行处理,阳性对照组给予浓度为1.6μg·L-1的顺铂,百合总皂苷高、中、低剂量组分别给予浓度为200,100,50 mg·L-1的百合总皂苷后继续培养48 h,检测细胞增殖、凋亡及侵袭情况,同时检测VEGF受体2（VEGFR2）、Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（caspase-3）蛋白表达水平。结果:各组LNCaP细胞Akt蛋白变化不显著（P>0.05）;与阴性对照组比较,阳性对照组LNCaP细胞增殖率、侵袭数、VEGFR2、p-Akt和Bcl-2蛋白表达降低（P<0.05）,凋亡率、Bax和caspase-3蛋白表达升高（P<0.05）;给予百合总皂苷干预后,LNCaP细胞增殖率、侵袭数、VEGFR2、p-Akt和Bcl-2蛋白表达均较阴性对照组降低（P<0.05）,凋亡率、Bax和caspase-3蛋白表达均较阴性对照组升高（P<0.05）,且具有浓度依赖性（P<0.05）,但效果不如阳性对照组（P<0.05）。结论:百合总皂苷通过抑制VEGF/Akt信号通路,抑制人前列腺癌LNCaP细胞增殖和侵袭,可能是前列腺癌治疗的一种新选择。     

Wnt/β-catenin信号转导通路在瘢痕疙瘩形成中的作用机制研究

目的 了解Wnt/β-catenin信号转导通路在瘢痕疙瘩原代成纤维细胞中关键蛋白和mRNA水平,探讨其在瘢痕疙瘩形机制中的作用.方法 采用组织块培养法进行原代成纤维细胞培养,通过Western Blot和RT-PCR法分别检测正常皮肤以及瘢痕疙瘩成纤维细胞中Wnt/β-catenin信号转导通路中相关信号分子Wnt5...     

雷公藤红素对致敏肥大细胞的抑制作用及其中PI3K/AKT/GSK3-β信号通路的影响

目的 研究雷公藤红素对P物质诱导P815肥大细胞致敏脱颗粒的抑制作用和对PI3K/AKT/GSK3-β通路的影响,探讨雷公藤红素对脱颗粒细胞模型抑制作用的机制.方法 P815细胞分为正常组、模型组、雷公藤红素各浓度组.CCK8法测定细胞增殖抑制率,RT-PCR检测雷公藤红素干预前后PI3K/AKT通路Pik3r3、Akt2、Gsk3b mRNA表达水平.结果 雷公藤红素浓度在0～2.0 μm,对P815细胞的增殖抑制率随着浓度升高而升高(P＜0.05),当雷公藤红素浓度＞2.0μm,浓度与细胞增殖抑制率并无明显关系(P＞0.05).雷公藤红素组的Pik3r3、Akt2的mRNA平均光密度值比分别为(0.753±0.637)和(0.378±0.277),与模型组相比,表达降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05).雷公藤红素组的Gsk3b的mRNA平均光密度值比为(3.969±3.403),与模型组相比,表达增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 雷公藤红素对P815肥大细胞致敏脱颗粒反应的抑制功能,是通过减弱PI3K/AKT/GSK3-β信号通路的主要靶基因Pik3r3、Akt2的信号介导作用,增加下游促凋亡基因Gsk3β的表达,从而抑制P815细胞的致敏脱颗粒反应.     

丹参酮I和二氢丹参酮I对人胃癌细胞MGC-803、乳腺癌细胞MCF-7的抗肿瘤活性研究

目的:比较研究丹参酮I和二氢丹参酮I对人胃癌细胞MGC-803、乳腺癌细胞MCF-7的抗肿瘤活性。方法:从白花丹参中分离、纯化丹参酮I和二氢丹参酮I成分,采用MTT法测定对肿瘤细胞的生长抑制作用,同时采用流式细胞仪检测细胞周期的改变以及凋亡情况。结果:丹参酮I、二氢丹参酮I对MCF-7几乎没有生长抑制作用,对MGC-803有很明显的生长抑制作用,同时可明显阻滞人胃癌细胞MGC-803的细胞周期,使细胞核裂解呈现碎片状而产生凋亡小体,且其凋亡率成明显的上升趋势。结论:丹参酮I、二氢丹参酮I通过诱导细胞凋亡,对MGC-803肿瘤细胞具有很好的抑制作用,而对MCF-7几乎没有活性。     

miR-338-5p通过靶向TSHZ3促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-338-5p通过靶向TSHZ3调控膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-338-5p在33例膀胱癌组织和癌旁组织中的表达;在膀胱癌T24和UM-UC-3细胞中分别转染mimics-NC、miR-338-5p mimics、inhibitor-NC和miR-338-5p inhibitor,qRT-PCR检测转染效率;采用CCK-8实验检测过表达或者敲低miR-338-5p对膀胱癌细胞增殖能力的影响;Transwell实验检测miR-338-5p对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响;TargetScan、miRDB和Targetminer数据库预测miR-338-5p潜在的靶基因,选定靶基因TSHZ3;双萤光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-338-5p和TSHZ3的靶向关系;在膀胱癌细胞中共转染miR-338-5p mimics和TSHZ3过表达质粒,通过CCK-8和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力;Western blot检测过表达miR-338-5p或者TSHZ3对Wnt/β-c...     

丙泊酚对滋养细胞增殖、侵袭的影响及相关机制研究

目的 探讨丙泊酚对滋养细胞JEG-3增殖、侵袭的影响并探讨可能机制.方法 试验分为对照组、低剂量丙泊酚组(1μg/ml)、中剂量丙泊酚组(4μg/ml)、高剂量丙泊酚组(7μg/ml),通过CCK-8法检测丙泊酚对滋养细胞JEG-3增殖的影响,通过Transwell小室法检测丙泊酚对滋养细胞JEG-3增殖、侵袭的影响,...     

下调miR-19b表达对骨肉瘤MG63细胞侵袭、迁移及Wnt/β-Catenin通路的影响

摘要：目的:探讨下调miR-19b表达对骨肉瘤MG63细胞侵袭、迁移能力的影响,并探讨可能机制。方法:采用脂质体转染法转染人骨肉瘤MG63细胞,实验分为空白组、miR-19b inhibitor NC组、miR-19b inhibitor组,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖情况,通过Transwell小室法检测各组细胞侵袭、迁移情况,通过免疫印迹(WB)法检测侵袭、迁移以及Wnt/β-连环蛋白(β-Catenin)通路相关蛋白表达情况。结果:与空白组、miR-19b inhibitor NC组相比,miR-19b inhibitor组miR-19b相对表达量、转染后48 h、72 h吸光度(A)值、侵袭与迁移细胞数、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Wnt、细胞核β-Catenin表达水平显著降低(P<0.05),细胞质β-Catenin表达水平显著升高(P<0.05)。结论:下调miR-19b表达可能通过抑制Wnt/β-Catenin信号通路激活,从而抑制骨肉瘤MG63细胞侵袭、迁移。     

丙戊酸通过GSK3β/β-catenin信号轴抑制胃癌细胞的增殖和迁移

目的探讨丙戊酸(valproic acid,VPA)对胃癌细胞增殖、迁移的影响及可能涉及的分子机制。方法以0、2、4、6和8 mmol·L^-1浓度的VPA分别处理人胃癌细胞AGS、SGC-7901、MGC-803和BGC-82324、48、72 h后,MTT法检测细胞的活性;软琼脂克隆实验检测VPA对胃癌细胞增殖的影响;划痕实验和Transwell迁移实验检测VPA对胃癌细胞迁移能力的影响;应用STITCH、STRING和Enrichr数据库预测VPA可能影响的信号通路;免疫印迹实验检测上皮间质转化和GSK3β/β-catenin信号通路等标志物的表达情况;免疫荧光实验检测上皮间质化相关标志物的表达情况。结果与对照组相比,VPA可显著抑制AGS、SGC-7901、MGC-803和BGC-823细胞的增殖,且呈浓度和时间依赖性;可抑制AGS和SGC-7901细胞的迁移能力及EMT进程(上皮标志物E-cadherin表达上调,间质标志物Vimentin、Snail表达下调);可下调p-GSK3βser9和β-catenin的蛋白表达水平。结论VPA可有效抑制胃癌细胞的增殖和迁移,其机制可能与GSK3β/β-catenin信号轴的抑制及EMT进程的逆转有关。     

Wnt/β-catenin信号通路在复发性流产的研究现状

复发性流产是育龄期女性的常见疾病,严重影响女性的生活情况及家庭幸福。复发性流产是临床常见病、疑难病,病因至今仍不明确。Wnt/β-catenin信号通路是最经典的Wnt信号通路,参与众多的生命活动与进程,能够影响细胞的增殖、迁移、侵袭等行为,众多研究表明Wnt/β-catenin信号通路参与了复发性流产的发病。本文主要从滋养细胞的增殖、侵袭和侵袭、胎盘的血管生成及子宫内膜的蜕膜化对Wnt/β-catenin信号通路在复发性流产的发病机制进行综述。     

七氟醚通过海马PICK1/ERK1/2/GSK3β信号抑制记忆巩固的研究

目的 研究七氟醚对记忆巩固的影响,并探讨PICK1/ERK1/2/GSK3β信号通路在其中的作用。方法 采用C57BL/6J PICK1基因敲除小鼠进行七氟醚处理（2%,3 h）,提取动物海马组织蛋白,采用Western blot检测PICK1、ERK1/2、p-ERK1/2、GSK3β及p-GSK3β蛋白表达变化。采用原代海马神经细胞,加入ERK1/2磷酸化激动剂Honokiol和/或PICK1抑制剂FSC231,再进行七氟醚处理（2%,3 h）,检测p-GSK3b蛋白表达变化。通过旷场试验检测动物运动能力变化,抑制性逃避试验检测动物记忆巩固的变化。结果 在体实验中,单独进行七氟醚处理或敲除PICK1基因均可明显降低PICK1、p-ERK1/2及p-GSK3β的蛋白表达水平。与七氟醚组相比,PICK1基因敲除+七氟醚处理组,p-ERK1/2及p-GSK3β的蛋白表达水平进一步降低。离体实验中,七氟醚可降低p-GSK3β蛋白表达水平,加入Honokiol可使p-GSK3β蛋白表达增加,而再加入FSC231则可逆转由Honokiol引起的p-GSK3β蛋白变化。行为学结果显示,七氟醚处理或PICK1基因敲除动物运动能力无明显变化,而七氟醚可抑制记忆巩固;PICK1基因敲除小鼠进行七氟醚处理,则可加重抑制记忆巩固。结论 七氟醚可抑制记忆巩固过程,其机制可能与PICK1/ERK1/2/GSK3β信号通路受抑制相关。