应用长片段PCR扩增全长HIV-1 DNA的研究

目的 探讨长片段PCR(LD-PCR)扩增特点,并将它用于对全长HIV DNA的研究。方法 应用LTR(U5)/LTR(R),CL-NSC/CL-NEF和gagA1/gagA2等不同引物,~(32)P标记gag、pol、nef和tat等为片段探针,对克隆有HIV-1完整基因片段、部分基因片段的质粒和HIV感染者外周血单核细胞(PBMC)中的HIV-1 DNA进行扩增。结果 LD-PCR对0.4～9kb的一系列标本扩增都很满意,它的扩增效率与DNA分子片段的大小成反比,在混合竞争扩增中,短片段DNA浓度较低时主要扩增长片段标本,增加短片段浓度导致减少长片段DNA的扩增。同时发现在HIV感染者中存在大量大小不一、范围较广的缺失HIV-1基因片段。结论 LD-PCR能混合扩增不同大小片段标本,特别是对大片段标本的扩增具有独特的优越性,是普通PCR无法解决的。     

套式PCR对HIV—1 env基因检测的敏感度分析

采用套式ＰＣＲ对含ＨＩＶ－１膜蛋白基因的Ｂ亚型质粒和ＨＩＶ－１感染者外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）进行ｅｎｖ基因部分片断的扩增,套式ＰＣＲ则扩增出全部样品中ＨＩＶ－１膜蛋白基因片断。     

深圳市HIV—1B亚型感染毒株env基因序列测定和分析

应用巢式－ＰＣＲ方法，对深圳检出的２份ＨＩＶ－１感染者的外击血单核细胞样本进行扩增，获得ＨＩＶ－１膜蛋白基因核酸片段，并对其Ｃ２－Ｖ３区及邻区３５０￣４５０个核苷酸序列进行测定和分析。     

重庆市HIV—1样本的亚型分析及G亚型HIV—1毒株在我国的发现

目的 分析重庆市高危人群中ＨＩＶ－１亚型的流行情况。方法 对采自重庆市经性传播和静脉吸毒途径感染的３倍ＨＩＶ－１阳性外周血分离ＰＭＢＣ,扩增ｅｎｖ基因Ｃ２－Ｖ３区核酸片段,并进行核苷酸疗列分析,结果 在其中一孕妇体内发现一株Ｇ亚型ＨＩＶ－１毒株。结论 这表明ＨＩＶ在重庆市高危人群口民有流行并且流行情况复杂。     

不同病期HIV—1感染者的血浆中和抗体研究

目的：了解HIV－1感染者体内中和抗体状况,探讨HIV－1感染的病理机制,方法：病毒的分离和培养采用共培养（co-culture)方法,从29例HIV－1感染者的外周血淋巴细胞（PBMC）分离了29株HIV－1原代病毒,中和实验采用病例血浆中和分离的相应病毒株,再感染经PHA刺激活化后的正常人PBMC,培养5天检测其HIV－1 p24抗原含量以判断中和效果。结果：29例研究中,24例是无症状感染者,5例为AIDS患者,我们发现17例无症状感染者的ID50≥8,其中10例ID90≥8,4例产生高滴度中和抗体ID90≥64,交叉中和实验结果表明这4例感染者的血浆对异体 病毒均有不同程度的中和效应,其中尤以s7,s28作用最强,而AIDS患者中仅2例ID50≥8,其中1例ID90≥8,无1例产生高滴度中和抗体。结果：通过对HIV－1感染者血浆中和效应的观察,表明多数感染者对自身同血源病毒的中和抗体滴度较低,但也有少数感染者能产生较高滴度的中和抗体,有必要深入研究其广泛的中和病毒效应,此外,早期无症状的感染者似比晚期有症状者对自体病毒的中和效应强,提示抗病毒治疗应于感染早期进行,以免机体体液免疫反应的进一步恶化。     

中国人HIV—1感染相关的基因CCR5多态性检测和不同方法提取 …

目的 检测中国人基因组中ＨＩＶ－１感染相关的特异性协同受体（ＣＣＲ５）的基因多态性和比较提取人基因组ＤＮＡ方法的优缺点。方法 我们分别用常规法和柱层析法从１２１９名中国人外周血ＰＢＭＣ中提取基因组ＤＮＡ样品,对纯化后的ＤＮＡ样品质量进行定笥和定量分析,并对其基因组ＤＮＡ中ＣＣＲ５基因进行了ＰＣＲ,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和直接ＤＮＡ测序等分析。     

新疆地区静脉吸毒人群中HIV—1感染者细胞免疫特征的研究

目的 通过测定新疆地区静脉吸毒人群中ＨＩＶ－１（１型人免疫缺陷病毒）感染者ＣＤ４细胞、血浆细胞因子（ＩＬ－２,ＩＮＦγ,ＩＬ－４和ＩＬ－１０）水平和末梢血单核细胞（ＰＢＭＣ）产生细胞因子的活性,了解该人群中ＨＩＶ－１感染者细胞免疫学特征及其病程的关系。方法 将３６例ＨＩＶ－１感染者分为２组,第一组ＣＤ４细胞≥５００／ｕｌ,第二组ＣＤ４细胞〈５００／ｕｌ。ＣＤ４细胞和细胞因子分别采用流氏细胞仪和ＥＬ     

HIV—1耐药性基因型检测法在临床治疗随访中的应用

目的 探索HIV－1耐药性基因型检测法在高效抗剪转录病毒疗法（HAART）治疗组中监测HIV－1耐药性病毒株的临床应用。方法 从接受HAART的HIV－1感染者血清中抽提病毒RNA，采用套式RT－PCR方法扩增HIV－1和RT基因片段，并对扩增片段进行序列测定和分析。结果 HIV－1耐药性基因型检测法能够从血浆病毒载量在1000拷贝／ml以上的样本中得到扩增产物。在16例接受HAART的HIV－1感染者中，发现1例感染者DP31的PR和RT基因出现了突变，这些突变为L63P、F215F、K219Q和M184V。所有突变均与公开报道的结果一致，并被证明与HIV－1的耐药性有关。另外，DP31在接受HAART前已出现了T215F、K219Q的耐药性突变，究其原因，还有待进一步研究。结果 HIV－1耐药性基因型检测法能有效地监测接受HAART的HIV－1感染者血浆中耐药性病毒株的存在。该方法提供的结果准确、可靠，并且为临床医生评价HAART效果，合理选择和及时优化药物组合方案提供了可靠的依据。     

ELISA检测HIV感染者尿液标本中抗HIV—1抗体结果分析

目的 利用尿液标本检测抗HIV-1抗体。方法 通过ELISA方法检测50例抗HIV-1抗体阳性感染者及100例抗HIV-1抗体阴性对照组尿液中抗HIV-1抗。结果 显示在50例HIV感染者中有49例尿液抗HIV-1抗体阳性,1例阴性;对照组中尿液中均未检测出抗HIV-1抗体,以血液标本为标准,检测尿液抗HIV-1抗体的灵敏性为98.0%,特异性为100%,尿液标本与血液标本检测的一致性达99.3%。结论 本实验提示在采集血液标本不便的情况下。可通过尿液抗HIV-1抗体的检测对高危人群的HIV感染情况进行监测和筛查。     

采用异源双链泳动法进行HIV—1亚型分析的研究

目的 探索一种简单,敏感,特异和成本低的ＨＩＶ－１亚型亚型测定方法。方法 采用改良的异源双链泳动法（ＨＭＡ）与ＤＮＡ序列分析法对１４份ＨＩＶ－１抗体阳笥者样本进行亚型测定,分析和比较。结果 用ＨＭＡ改良法明确测定了１４份样本中的１３份样本的亚型。在１４份样本中对１３份样本进行ＤＮＡ序列分析有１２份的结果与ＨＭＡ的相符,符合率达９２．３％。结论 改良的ＨＭＡ测序法是一种简单,敏感,特异和经济的ＨＩＶ     

深圳地区艾滋病病毒感染人群的HIV—1抗性基因多态性研究

目的 研究HIV－1相关的等位基因CCR5△32、CCR5m303、CCR2b和SDF1在艾滋病病毒感染人群中的分布,为深入分析这些遗传突变在HIV－1感染、艾滋病发病进程中的作用提供理论依据。方法 收集深圳地区近年来艾滋病毒感染者的血液标本共91份,提取基因组DNA。经PCR或PCR－ RFLP分析,计算遗传突变频率、纯合子和杂合子的构成比例。采用x^2检验或t检验进行群体分布的拟合度和差异的显著性分析。结果 在所有被检测的91例HIV－1感染者的个体中,未发现有CCR5△32和CCR5m303的遗传突变,CCR2b－641和SDF1－3’A的突变频率较高,分别为21．43％和25．82％。与中国普通汉族人的结果相近。结论 研究结果提示深圳地区的艾滋病病毒感染者本身对HIV－1病原体可能具有较大的遗传易感性。由于他们具有较高的CCR2b-641和SDF1－3’A突变频率,后者在艾滋病发病过程中的影响值得进一步研究。     

建立PCR—ELISA定量检测HBV DNA的技术

目的 建立一种敏感特异和精确的乙型肝炎病毒基因ＰＣＲ及其产物酶联杂交定量分析技术。方法 制备了一种与野生扩增片段等长的ＰＣＲ内参照;设计了一对ＨＢＶ基因组Ｓ区基因扩增引物,上游引物的５′－端用生物素修饰,可同时扩增长为３１９ｂｐ的野生和内参照片段。两套捕获探针可分别与竞争ＰＣＲ产物中的野生片段和突变片段杂交,在同一反应管内,加入已知量内参照及待测ＨＢＶ ＤＮＡ标本。进行ＰＣＲ扩增,然后用酶联杂交法进行产物分析。根据Ｃｌｅｍｅｎｔｉ等介绍的公式计算待测标本中的ＨＢＶＤＮＡ标本。进行ＰＣＲ扩增,然后用酶联杂交法进行产物分析。根据Ｃｌｅｍｅｎｔｉ等介绍的公式计算待测标本中的ＨＢＶＤＮＡ含量。结果 灵敏度达到１０＾－３ｆｍｏｌ／Ｌ。在该法中,由于有ＰＣＲ过程中的特异引物及酶联杂交过程的特异探针两个环节的限制,因此具有很