35例急性白血病细胞IL—2受体α的基因表达的检测分析

为研究ＩＬ－２受体α链基因在急性白血病（ＡＬ）细胞的表达，对１９例ＡＬＬ和１６例ＡＭＬ患者治前白血病细胞用逆转录＝聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及芝光素标记单抗ＩＬ－２Ｒ１流式细胞分析，分别进行了ＩＬ－２Ｒα基因ｍＲＮＡ和蛋白质水平表达的检测。３５例ＡＬ患者白血病细胞ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和Ｐ阳性表达者分别为５例和１４例，前者阳性表达明显高于后者，１４例ＡＬ患者白血病细胞ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ表达阳性，     

维拉帕米减敏巨噬细胞机制研究

目的：探讨维拉帕米对严重烧伤小鼠早期腹腔巨噬细胞（ＭХ）内毒素（ＬＰＳ）后信号转导途径的影响。方法：ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠随机分成烫伤组和假烫组，将收集到的腹腔ＭХ加入不同浓度维拉帕米（１０、１００和１０００ｎｍｏｌ／Ｌ）培养。用细胞免疫组化、逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和酶联免疫方法，观察维拉帕米对小鼠ＭХ表达磷酸化酪氨酸（Ｔｙｒ－Ｐ）、ＣＤ１４ｍＲＮＡ的产生肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）、白介     

GATA—2与免疫球蛋白重链胚系基因Cμ在白血病细胞中的表 …

应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对不同类型白血病患者骨髓（ＢＭ）或外周血（ＰＢ）细胞ＧＡＴＡ－２和ＩｇＨ胚系基因ＣμｍＲＮＡ的表达进行检测，探讨ＧＡＴＡ－２与ＩｇＨ胚系基因Ｃμ在白血病细胞中的表达与共表达及意义。在正常人ＢＭ和ＰＢ细胞中未检测到ＧＡＴＡ－２和ＩｇＨ胚系基因Ｃμ。在急性髓性白血病（ＡＭＬ）和急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）以及慢怀粒细胞白血病慢性期（ＣＭＬ－ＣＰ）ＧＡＴＡ－２检出     

中期荧光原位杂交在急性早幼粒细胞白血病诊断和微小残？…

为研究中期荧光原位杂交（Ｍ－ＦＩＳＨ）在急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）诊断及其微小残留病（ＭＲＤ）检测中的价值，应用１７号全染色体彩涂探针对１０例初诊时按细胞形态学诊断为急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）的未治疗患（初治ＡＰＬ５例，复发ＡＰＬ３例，ＡＭＬ－Ｍ１和ＡＭＬ－Ｍ５各１例）和１０例治疗后获完全缓解（ＣＲ）的ＡＰＬ患作耻Ｍ－ＦＩＳＨ检测，并与常规细胞遗传学和逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）结     

急性白血病患者肺耐药蛋白基因表达及其临床意义

目的 探讨急性白血病（ＡＬ）患者肺耐药蛋白（ＬＲＰ）基因表达临床耐药的关系。方法 应用产定量逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,并以β２微球蛋白（β２ＭＧ）作内对照,检测了６１例ＡＬ患者及１５名正常对照者ＬＲＰ基因的表达,奖ＬＲＰ／β２ＭＧ≥０．３定为ＬＲＰ阳性。结果 初治组ＬＲＰ的阳性率为３２．４％,ＬＲＰ阳性与ＬＲＰ阴性患者的首次完全缓解（ＣＲ１）率分别为３３．３％和８４．０％,两者的差异有     

血小板生成素及其受体在急性白血病中的改变

目的 探讨血小板生成素（Ｔｐｏ）受体Ｃ－ｍｐｌ在急性白血病中的表达主其意义以及重组人Ｔｐｏ对急性白血病细胞增殖的影响。方法 采用半定量逆转录,聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测４３例急性白血病患骨髓单个核细胞Ｃ－ｍｐｌ基因的表达,用ＭＴＴ法研究重组人Ｔｐｏ单独或联合某些造血生长因子对急性白血病细胞增殖的影响。结果 ３５例急性髓系白血病（ＡＭＬ）患中有２２例表达Ｃ－ｍｐｌ,各ＦＡＢ亚型无均有表     

急性粒-单核细胞白血病CBFβ-MYH11融合基因转录本和inv(16)的检测

目的：探讨ｉｎｖ（１６）和ＣＢＦβ－ＭＹＨ１１融合基因在急性髓系白血病Ｍ４ＥＯ型的临床诊断、预后判断中的意义。方法：用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）技术分别检测急性粒－单核细胞白血病（Ｍ４）患者的ＣＢＦβ－ＭＹＨ１１融合基因转录本和ｉｎｖ（１６）。结果：在１５例中国人Ｍ４中，１０例患者用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＣＢＦβ－ＭＹＨ１１融合基因转录本，其中９例不伴异常嗜酸粒细胞的Ｍ４中有１例阳性；１例伴异常嗜酸粒细胞增多（Ｍ４ＥＯ）为阳性。随访该例完全缓解２个月后，其ＰＣＲ仍持续阳性。用ＦＩＳＨ技术检测的９例Ｍ４中得到的２例阳性病例，与ＰＣＲ方法测得的结果完全一致。结论：对Ｍ４患者无论其经典的染色体核型分析有无１６号染色体异常的提示，都应用ＲＴ－ＰＣＲ和ＦＩＳＨ方法检测ＣＢＦβ－ＭＹＨ１１融合基因进行筛选，这对Ｍ４的临床诊断、预后判断等具有重要临床价值。     

p16基因异常与慢性粒细胞白血病关系的研究

我们采用半定量多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）和ＰＣＲ单链构象多态性（ＳＳＣＰ）检测了４８例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）患者ｐ１６基因纯合缺失和点突变，以期从分子生物学水平探讨ｐ１６基因分子生物学异常与ＣＭＬ的关系。对象和方法１　对象　１２名正常人，男性７名，女性５名，平均年龄３１．６岁。４８例ＣＭＬ患者，其中慢性期２０例，急粒变１６例，急淋变１２例（所有病例原始淋巴细胞＋幼稚淋巴细胞≥０．２０，组织化学染色都表现为糖原染色过碘酸反应强阳性，ＰＯＸ阴性），男性３３例，女性１５例，平均年龄３３．６岁。Ｋ…     

RARα／MYL融合mRNA是诊断和监测急性早幼粒细胞白血病的特异标志

应用四条引物（Ｒ＿５，Ｒ＿６，Ｄ＿３，Ｄ＿４）通过逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了２０例初治急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）患者的ＲＡＲα／ＭＹＬ融合ｍＲＮＡ。建立的方法可在０．１ｎｇ细胞总ＲＮＡ中检出ＲＡＲα／ＭＹＬ融合ｍＲＮＡ，相当于在１０￣４～１０￣５个正常细胞中检出一个ＡＰＬ细胞，扩增产物的特异性经ＫｐｎＩ酶切法确认。１８例患者表达Ｂ型融合ｍＲＮＡ（２９０ｂｎ片段），２例表达Ａ型（３１１ｂｐ片段）。２例患者在完全缓解（ＣＲ）达４周和１６周时仍可检出融合ｍＲＮＡ。１例患者在ＣＲ期ＲＴ－ＰＣＲ检测持续阳性，４周后；临床复发。４例在ＣＲ期随访９～２９周融合ｍＲＮＡ均阴性。２例急性白血病在维甲酸治疗前拟诊ＡＰＬ，但ＲＴ。ＰＣＲ检测阴性，这２例对维甲酸治疗无效，核型分别是ｔ（８；２１）和正常。我们认为，ＲＡＲα／ＭＹＬ融合ｍＲＮＡ与ＭＹＬ／ＲＡＲα融合ｍＲＮＡ一样，也是诊断和监测ＡＰＬ的一个敏感和特异的标志。     

巨细胞病毒感染与儿童特发性血小板减少性紫癜

巨细胞病毒感染与儿童特发性血小板减少性紫癜李兰娜佟莉贞何丽雅赖冬波伍劲松我们用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测１０３例特发性血小板减少性紫癜（ＩＴＰ）患儿巨细胞病毒（ＣＭＶ）－ＤＮＡ、ＣＭＶ－ＩｇＭ水平和Ｔ－淋巴细胞（Ｔ－细胞）转化功能，以探讨ＣＭＶ感...     

BCR/ABL-mediated increased expression of multiple known and novel genes that may contribute to the pathogenesis of chronic myelogenous leukemia

The BCR/ABL chimeric protein plays a central role in the pathogenesis of chronic myelogenous leukemia (CML). Intensive research has elucidated many signal transduction pathways activated by BCR/ABL. However, few studies addressed BCR/ABL-dependent alterations in gene expression that may contribute to the pathobiology of CML. To additionally define such downstream genes, we performed a subtractive hybridization between cord blood (CB) CD34(+) cells transduced with an MSCV-retrovirus vector containing either enhanced green fluorescent protein (eGFP) alone or p210(BCR/ABL)-internal ribosome entry site-eGFP. Thirty-four subtracted clones expressed in p210-eGFP but not eGFP-transduced CD34(+) cells have been confirmed by Northern blot and sequenced. Fifty-nine percent represent novel proteins, and 41% are homologous to known genes. Quantitative real-time PCR analysis confirmed that 14 of 14 genes tested were also overexpressed in additional populations of p210(BCR/ABL)-transduced CB CD34(+) cells, as well as in CD34(+) cells from primary newly diagnosed CML patients versus GFP-transduced CB or samples from normal donors. Western blot analysis showed that the known sequences were also overexpressed at the protein level. Treatment of BCR/ABL(+) cells with the Abl-specific tyrosine kinase inhibitor STI571 decreased expression at the mRNA as well as protein level of some but not all of the gene products. This suggests that increased gene expression is in some cases tyrosine kinase-independent. Some of the overexpressed genes are implicated in cellular processes known to be disturbed in CML, including the mitogen-activated protein kinase or the ubiquitin pathway, whereas overexpression of other genes, including RAN and NUP98, may implicate new cellular pathways involved in CML. Additional characterization of downstream genes activated by BCR/ABL may lead to important new insights in the molecular mechanisms underlying CML and identify potentially novel therapeutic targets for CML.     

荧光原位杂交技术检测BCR/ABL融合基因

目的建立荧光原位杂交(FISH)技术,直接原位检测间期细胞中BCR/ABL融合基因,辅助临床诊断和治疗慢性粒细胞性白血病(CML)。方法应用FISH技术检测15例CML患者骨髓培养细胞BCR/ABL融合基因,其中5例CML患者同时取骨髓直接涂片检测,5例CML患者同时取外周血浓缩单个核细胞直接涂片检测。以5例非CML患者骨髓培养细胞为阴性对照。结果15例患者骨髓标本成功培养10例,染色体分析检测到Ph1染色体8例。15例患者骨髓培养细胞FISH检测BCR/ABL融合基因阳性14例。5例CML患者同时做骨髓直接涂片FISH检测,结果阳性4例。5例CML患者同时做血标本浓缩单个核细胞FISH检测阳性2例。5例非CML患者FISH结果均阴性。结论FISH技术能直接原位检测间期细胞中BCR/ABL融合基因,且快速、可靠、成功率高,是诊断和监测CML的一项有效新技术。     

BCR／ABLDCDF—FISH信号特征与染色体核型的关系及其在慢性粒细胞白血病中的意义

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）BCR／ABL DCCF—FISH的信号特点及其与染色体核型的关系。结果使用BCR／ABL的DCDF探针对65例慢性粒细胞白血病骨髓标本进行荧光原位杂交及染色体核型检查。结果65例CML核型43例Ph阳性,1例阴性,其余21例未行核性检查或无可分析分裂相;FISH结果65例均为BCR／ABL阳性,其中9例伴ASS基因缺失,5例复杂易位,1例＋Ph伴ASS基因缺失。结论传统核型与DCDF-FISH,应互相结合,方可对遗传学特征作出更准确分析。     

实时定量RT-PCR监测慢性粒细胞白血病患者伊马替尼治疗过程中bcr/abl mRNA水平

目的观察甲磺酸伊马替尼(简称伊马替尼)治疗Ph+慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓bcr/ablmRNA水平的变化。方法采用实时定量(Realtimequantitative)RTPCR(RQPCR)技术连续监测34例α干扰素治疗无效Ph+CML患者在伊马替尼治疗前后不同时间120份骨髓标本bcr/ablmRNA水平。治疗前骨髓Ph+细胞百分率均≥95%。结果RQPCR的敏感度为10pgRNA,标准品日间差及日内差均<5%。10例伊马替尼治疗前标本中位bcr/ablmRNA水平为5.79%,各例之间差异甚大(0.24%～60.90%)。72份Ph+细胞百分率为0%～94%的治疗后标本bcr/ablmRNA水平与Ph+细胞百分率显著相关(r=0.82,P<0.001)。7例治疗12个月内达到完全遗传学缓解(CCyR)的患者bcr/ablmRNA水平随治疗时间延长而迅速降低,可供分析的6例患者治疗3个月时较治疗前下降65.9%～98.8%。达到CCyR后,bcr/ablmRNA水平随治疗时间延长继续下降,直至为0。4例治疗12个月后获得显著遗传学缓解患者(Ph+细胞百分率均<35%)bcr/ablmRNA水平缓慢下降,可供分析的3例患者治疗3个月时的bcr/ablmRNA水平分别比治疗前下降2.5%、18.5%及61.6%。5例持续遗传学无效,并且维持在慢性期的患者bcr/ablmRNA水平1例缓慢下降,2例缓慢上升,2例基本不变。4例治疗中发生急变的患者bcr/ablmRNA水平均逐步升高。结论对于伊马替尼     

达沙替尼治疗伊马替尼耐药的BCR/ABL阳性白血病的临床研究

本研究评价达沙替尼治疗原发或继发伊马替尼耐药的BCR/ABL阳性白血病的疗效和安全性。对27例原发或继发伊马替尼耐药的慢性髓系白血病(CML)或Ph阳性急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)患者,给予达沙替尼100-140 mg/d口服治疗,评估疗效、总体生存和耐受情况。结果表明:27例伊马替尼耐药的BCR/ABL阳性白血病中位达沙替尼治疗时间8(1-66)个月,中位随访时间54(3-75)个月。27例接受达沙替尼治疗的患者中,88.8%获得完全血液学反应(CHR),44.4%获得主要细胞遗传学反应(mCyR),37%获得完全遗传学反应(CCyR),18.5%获得主要分子学反应(MMR)。伊马替尼耐药的进展期(CML-AP、CML-BC、骨髓复发Ph+ALL)患者接受达沙替尼治疗获CCyR率低于疾病稳定期(CML-CP、骨髓缓解Ph+ALL)患者(P=0.0377),且3-4级不良反应发生率明显增高。达沙替尼治疗后获得CCyR的患者生存期(OS)较未达CCyR者明显延长(63个月vs 9个月,P=0.0126)。达沙替尼治疗后最常见的3-4级不良反应包括血液学反应如血小板减少(51.8%)、中性粒细胞减少(48.1%)、贫血(33.3%)和非血液学反应如胸腔积液(18.5%)、肺部感染(18.5%)、心包积液(11.1%)。3-4级不良反应主要发生在疾病进展期时改服达沙替尼者,均发生于服药12个月内。结论:达沙替尼治疗伊马替尼耐药的BCR/ABL阳性白血病有效,且在疾病稳定期改服达沙替尼疗效和耐受性更好。     

Liposomal cytarabine for treatment of myeloid central nervous system relapse in chronic myeloid leukaemia occurring during imatinib therapy

BACKGROUND: Central nervous system (CNS) relapse in chronic myeloid leukaemia (CML) is rare and if recorded is usually found to occur in patients with lymphoblastic transformation. The BCR/ABL tyrosine kinase inhibitor imatinib is highly effective in patients with CML, but hardly crosses the blood-brain barrier. PATIENTS AND METHODS: We report on two CML patients who developed a myeloid CNS relapse during treatment with imatinib. One patient was in major cytogenetic response at the time of CNS relapse. In both cases, the myeloid origin of neoplastic cells in the cerebrospinal fluid (CSF) was demonstrable by immunophenotyping, and their leukaemic origin by detection of the BCR/ABL oncoprotein. No BCR/ABL kinase domain mutations were found. Both patients received intrathecal liposomal cytarabine (50 mg each cycle; 6 cycles). In one patient, additional CNS radiation was performed, whereas in the other, consecutive treatment with dasatinib (70 mg per os twice daily) was started. RESULTS: In response to therapy, the clinical symptoms resolved, and the leukaemic cells in the CSF disappeared in both cases. After three months of observation, both patients are in complete cytogenetic and major molecular response, without evidence for a systemic or a CNS relapse. CONCLUSIONS: 'Anatomic' resistance against imatinib in the CNS can lead to a myeloid CNS relapse. Liposomal cytarabine with or without radiation is effective as local therapy in these patients. For systemic treatment and prophylaxis, BCR/ABL kinase inhibitors crossing the blood-brain barrier such as dasatinib should be considered in patients with CNS relapse.     

RQ-PCR在慢性粒细胞白血病细胞BCR-ABL融合基因检测中的应用

目的探讨采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RQ-PCR)技术检测慢性粒细胞白血病(CML)细胞的BCRABLp210融合基因的临床价值。方法应用RQ-PCR技术对60例CML患者骨髓细胞BCR-ABLp210融合基因进行定量检测分析。结果 60例BCR-ABLp210融合基因阳性的CML患者中,慢性期33例,加速期13例,急变期14例,且CML急变期患者BCR-ABLp210转录本水平明显高于慢性期和加速期患者。经异基因造血干细胞移植治疗或经伊马替尼治疗6个月后,BCRABLp210转录本水平均较6个月前明显降低。但这两种方法治疗CML患者12个月后的效果比较差异无统计学意义(P0.05),而采用其他酪氨酸激酶抑制剂治疗CML 12个月后也可达到相似的治疗效果。结论 RQ-PCR技术监测CML患者细胞BCR-ABLp210融合基因表达有助于CML的诊断、治疗效果评价及微小残留的监测。     

应用筑巢式RT—PCR检测BCR—ABL融合基因的探讨

应用筑巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测２０例ＣＭＬ血或／及骨髓中ＢＣＲ／ＡＢＬ基因的表达，证实较普通ＲＴ－ＰＣＲ其为一种快速、敏感而准确的检测方法。同时以ＡＢＬ基因为ＲＮＡ及ｃＤＮＡ质量对照，有效地排除了因标本质量欠佳而致的假阴性或因标本污染所致的假阳性。我们还发现在ＣＭＬ中Ｐ２１０ＢＣＲ／ＡＢＬ的表达接近为１００％，且与化疗无明显相关。     

BCR/ABL探针在骨髓增殖性疾病中的临床运用

本研究通过回顾分析荧光原位杂交(FISH)检测BCR/ABL融合基因结果,探讨其在慢性骨髓增殖性疾病(CMPD)和Ph+急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)的鉴别诊断及治疗后微小残留病(MRD)动态监测中的运用价值。初诊和治疗后病例分别使用BCR/ABL(ES)和BCR/ABL(DF)探针检测BCR/ABL融合基因。结果表明:初诊CMPD 49例,形态学符合CML骨髓象28例,确诊CML 23例,形态符合率23/28(82.1%),BCR/ABL阳性23/23,敏感度、特异度均为100%。确诊病例BCR/ABL阳性细胞率为81.3%±17.7%;allo-HSCT 13例,9例长期无病生存,4例复发,经供者淋巴细胞输注(DLI)、伊马替尼或allo-HSCT治疗后多次监测BCR/ABL阴性;伊马替尼治疗16例,其中11例于1年后多次监测BCR/ABL阴性,5例分别于6、7、10年后监测BCR/ABL阳性,其中1例经allo-HSCT成功,BCR/ABL转阴。结论:FISH技术是一项敏感、特异的诊断技术,针对初诊和治疗后病例分别运用两种不同的探针检测BCR/ABL融合基因,有助于准确、快速鉴别诊断CML、Ph+ALL,动态监测酪氨酸激酶抑制剂治疗和allo-HSCT后MRD。