地塞米松对永生化人眼小梁细胞流畅阻力和水通道蛋白-1表达的影响

目的探讨地塞米松对永生化人眼小梁细胞的流畅阻力和水通道蛋白-1(AQP-1)表达的影响。方法将永生化人眼小梁细胞株第18代接种于0.4μm孔径的滤膜上,待细胞近融合时加入含10-7mol/L地塞米松培养液。细胞融合后1、3、7d,应用内皮细胞电阻测量仪(EVOM)测定滤膜上单层小梁细胞电阻(TEER),评价其流畅阻力的变化;采用免疫印迹法检测小梁细胞AQP-1的表达情况。结果细胞融合后1、3、7d时,对照组TEER分别为(36.4±1.4)Ω、(34.0±1.7)Ω、(36.1±2.9)Ω,而经地塞米松处理组TEER则分别为(48.4±2.3)Ω、(60.3±3.1)Ω、(58.8±0.9)Ω,差异有统计学意义。用免疫印迹法检测,显示经地塞米松处理后的小梁细胞AQP-1表达量较未经处理组增多,差异亦有统计学意义。结论经地塞米松处理后的滤膜上小梁细胞AQP-1表达水平上调、表达量增多,小梁细胞TEER也升高,提示地塞米松上调AQP-1的表达水平可能与小梁细胞的流畅阻力改变有关。应用EVOM检测TEER可以体现内壁单层小梁细胞的流畅阻力,将为房水引流的研究提供新手段。(中华眼科杂志,2005,41:209-211)     

地塞米松及Lat—A对人眼小梁细胞蛋白质表达的影响

目的探讨地塞米松（Dex）及latrunculin—A（Lat-A）处理后人眼小梁细胞蛋白质表达的变化。方法正常供体人眼小梁细胞培养后用Dex及Lat—A处理,经二维凝胶电泳分离小梁细胞蛋白质,分析凝胶电泳图谱,选取部分差异凝胶斑点并采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI—TOFMS）鉴定蛋白质。结果采用24cm IPG胶条获得正常人眼小梁细胞对照组、Dex组、Dex＋Lat—A组以及Lat—A组的二维电泳凝胶图谱,得出不同培养条件下人眼小梁细胞蛋白质表达的差异。应用GDPi MALDI—TOFMS得出不同培养条件下差异表达的蛋白质斑点并成功鉴定出其中的24种蛋白质,主要包括细胞骨架相关的蛋白、热休克蛋白、氧化还原相关的蛋白和糖代谢相关的蛋白4类蛋白质。ADLH和Rab蛋白在Lat—A组的人小梁细胞中表达增加,但在Dex组表达减少,而热休克蛋白27（HSP27）和人CRMP2呈现相反的结果。结论成功建立Dex及Lat—A诱导人眼小梁细胞蛋白质表达图谱。Dex及Lat—A能诱导人眼小梁细胞的蛋白质表达变化,可能与青光眼致病的分子机制相关。     

地塞米松对牛眼小梁水通道蛋白表达的影响

目的观察地塞米松对牛眼小梁细胞的损伤使其水通道蛋白-1(aquaporin-1,AQP-1)表达的影响。方法体外培养牛眼小梁细胞,取第4代细胞鉴定后用于实验。应用浓度为5,25,50,250μg/L地塞米松的培养液培养7天,通过WesternBlot方法检测培养的牛眼小梁细胞在不同浓度地塞米松作用下AQP-1的蛋白表达水平。结果牛眼小梁细胞可见AQP-1蛋白条带表达,未经地塞米松作用的AQP-1蛋白条带表达灰度值为102.87±11.73。在浓度为5,25,50,250μg/L地塞米松的培养液培养7天后AQP-1蛋白条带表达灰度值分别为111.64±13.32,115.31±9.41,121.39±9.81,129.42±13.52。当地塞米松浓度≥25μg/L时,AQP-1表达出现抑制作用(P<0.05)。结论地塞米松使培养的牛眼小梁细胞AQP-1的表达减少,这可能是皮质类固醇性青光眼房水流出阻力增加的原因之一。     

地塞米松对人眼小梁细胞MMP-3及TIMP-1 mRNA表达的影响

目的:研究地塞米松对人眼小梁细胞MMP-3及TIMP-1mRNA表达的影响,探讨激素性青光眼的发病机制。方法:采用原代培养的人眼小梁细胞,用10-7mol/L的地塞米松培养24h,通过RT-PCR方法检测小梁细胞MMP-3及TIMP-1mRNA的表达。结果:地塞米松处理后MMP-3mRNA的表达明显减少,与正常对照组相比相差显著(0.74±0.10vs0.46±0.11,P<0.05),TIMP-1mRNA的表达与正常对照组相比无明显改变(2.01±0.13vs1.95±0.11,P>0.05)。结论:地塞米松抑制小梁细胞MMP-3mRNA的表达,提示激素性青光眼的发病与MMP-3的降低有关。     

地塞米松体外抑制人眼小梁细胞生长及表皮生长因子mRNA的表达

目的 探讨地塞米松对培养的人眼小梁细胞生长的影响及抑制小梁细胞表达表皮生长因子（epidermal growth factor EGF)mRNA的情况。方法 取人眼小梁组织进行小梁细胞体外培养,对传3代的小梁细胞进行地塞米松处理实验。实验组在传代后的培养液中按300ug/ml加入地塞米松,另一组作为对照组进行常规培养,观察生长5d后的细胞情况,取培养7d的两组的小梁细胞分别提取RNA,用EGFcDNA探针,a-^32P同位素标记进行斑点杂交,放射自显影。对显影片用计算机激光密度扫描,测定吸光度A值相对值进行组间比较。结果 加入地塞米松300ug/ml实验组,小梁细胞生长明显受到抑制,5d时对照组细胞已经融合,地塞米松组的细胞仍呈集落状态。从对照组小梁细胞提取RNA22.5ug,地塞米松组提取RNA 14ug,取14ug两组等量RNA,用EGFcNDA探针进行斑点杂交。结果阳性。激光密度扫描值地塞米松明显低于对照组。结论 地塞米松对培养的人眼小梁细胞有明显的生长抑制作用,通过抑制总RNA转录及EGFmRNA表达而抑制小梁细胞生长。提示糖皮质激素性青光眼是因抑制了小梁细胞的多种代谢和生理功能所致。     

曲伏前列素对地塞米松诱导的人眼小梁细胞骨架及β黏蛋白的影响

目的 研究曲伏前列素对地塞米松诱导的人眼小梁细胞肌动蛋白细胞骨架及β黏蛋白表达的影响.方法 对照实验研究.人眼小梁细胞体外培养、传代.实验分为4组,第1组为空白对照组,第2组为地塞米松(1 ×10-6mol/L)处理组,第3组为地塞米松(1×10-6mol/L)+曲伏前列素(1×10-6mol/L)处理组,第4组为曲伏前列素处理组.培养的人眼小梁细胞于相差显微镜下观察其形态并拍照,于荧光显微镜下观察细胞骨架结构及β黏蛋白变化,用免疫印迹法半定量检测β黏蛋白的表达水平.组间β黏蛋白表达水平比较采用方差分析,进一步两两比较采用q检验.结果 培养的人眼小梁细胞经地塞米松诱导后微丝重组杂乱,形成交叉连接肌动蛋白网结构,β黏蛋白染色明显加强.地塞米松联合曲伏前列素处理组可部分逆转地塞米松诱导的微丝重组和交叉连接肌动蛋白网结构的形成,使β黏蛋白染色明显减弱.空白组、地塞米松组、地塞米松联合曲伏前列素组及曲伏前列素组β黏蛋白表达相对灰度值分别为0.84±0.03、1.65±0.05、1.21±0.05及0.65±0.04,组间β黏蛋白表达差异有统计学意义(F=143.07,P＜0.05).进一步两两比较,除空白组与曲伏前列素组β黏蛋白表达差异无统计学意义(q=2.84,P＞0.05)外,空白组与地塞米松组(q=15.32)、空白组与地塞米松联合曲伏前列素组(q=11.40)、地塞米松组与地塞米松联合曲伏前列素组(q=9.38)、地塞米松组与曲伏前列素组(q=16.55)、地塞米松联合曲伏前列素组与曲伏前列素组(q=14.31)比较,β黏蛋白表达差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 曲伏前列素可以部分逆转由地塞米松诱导的人眼小梁细胞骨架及β黏蛋白的改变,这可能是曲伏前列素通过调节小梁网房水流出途径并降低眼压的机制之一.

Abstract：

Objective To investigate the effect of travoprost on changes of actin cytoskeletal and β-catenin protein in the cultured human trabecular meshwork (HTM) cells treated with dexamethasone (DEX). Methods It was a control experiment study. The HTM cells were cultured in vitro and divided into control group, DEX (1 × 10-6mol/L) group, travoprost (1 × 10-6mol/L) group, and DEX (1 ×10-6mol/L) plus travoprost (1 × 10-6mol/L) group. F-actin in the HTM cells was detected by FITC-phallodin and observed under a fluorescence microscope. The expression of β-catenin was determined by immunofluorescence and western-blot. Statistical analysis was performed using SPSS13.0 software. The difference of β-catenin expression among groups was analyzed through variance analysis and, further by q test. Results The cultured HTM cells were identified by immunohistochemistry. A reorganization of actin cytoskeletal and a formation of cross linked actin networks (CLANs) were seen in the HTM cells treated with DEX, which were partially reversed by the treatment with DEX plus travoprost. An increase of the expression of β-catenin was discovered in the HTM cells treated with DEX, which was also partially reversed by the treatment with DEX plus travoprost. The amount of β-catenin protein in untreated control group, DEX group, DEX plus travoprost group and travoprost group were 0. 84 ± 0. 03,1.65 ± 0. 05, 1.21 ± 0. 05, and 0. 65 ±0. 04, respectively. Expression of β-catenin was significantly ( F = 143.07, P ＜ 0. 05 ) different when compared untreated control group with DEX group ( q = 15. 32 ,P ＜0. 05 ), untreated control group with DEX plus travoprost group (q = 11.40,P＜0. 05), DEX group with DEX plus travoprost group (q =9. 38,P ＜ 0. 05 ), DEX group with travoprost group ( q = 16. 55, P ＜ 0. 05 ), and DEX plus travoprost group with travoprost group (q = 14. 31 ,P ＜ 0. 05 ). No difference was found in untreated control group and travoprost group(q = 2. 84, P ＞ 0. 05 ). Conclusions Our results suggest that reversion of the changes of actin organization and β-catenin by travoparost in the HTM cells treated with DEX may partially elucidate the mechanism of action of increasing outflow by which travoprost reduces intraocular pressure.     

地塞米松对小梁细胞生长周期的影响

目的：探讨地塞米松对小梁细胞生长周期的影响。方法：按常规方法培养人眼小梁细胞,然后分为二组：常规DMEM培养液及含10^-7M地塞米松的DMEM培养液组,培养3d、5d、7d后,应用流式细胞仪检测细胞周期各阶段G1、S、G2期情况。结果：在正常未用地塞米松处理组,G2期细胞为2．0％;地塞米松处理3、5、7d后,G2期细胞比例各为8．0％、16．3％、19．87％,其差异有显著性意义。结论：地塞米松可使小梁细胞生长周期中G2期的比例增加,提示这种作用可能与激素性青光眼的发病 有关。     

地塞米松对小梁细胞粘附及吞噬功能的影响

目的：探讨地塞米松对小梁细胞的粘附及吞噬功能的影响。方法：不同浓度地塞米松(10^-7M，10^-6M，10^-5M)处理体外培养的牛眼小梁细胞3d，消化、漂洗后加入用不同的细胞外基质(Extracellular matrix，ECM)包被的培养板中，37℃孵育90min后．采用甲基噻唑基四唑(Methyl thiazolyl tetrazolium，MW)法测定各组吸光度值反应粘附细胞的量；另外，以乳胶微球为标记，观察不同浓度的地塞米松对小梁细胞吞噬功能的影响。结果：与对照组比较，三种浓度的地塞米松均对小梁细胞与ECM粘附有抑制作用．且呈浓度依赖性；对小梁细胞的吞噬功能亦呈现浓度依赖性抑制作用。结论：地塞米松对小梁细胞的粘附及吞噬功能有抑制作用，抑制小梁细胞的粘附及吞噬功能可能是皮质类固醇性青光眼的发病原因之一。     

氧化应激条件下miR-21对人眼小梁网细胞胞外基质蛋白表达的影响

目的 探讨氧化应激条件下miR-21对人眼小梁网细胞(human trabecular meshwork cells,HTMCs)胞外基质蛋白表达的影响.方法 用不同浓度H2O2(0μmol·L-1、200 μmol·L-1、400 μmol·L-1、600 μmol·L-1)刺激HTMCs l h,MTT法检测其对HTMCs活力的影响,从而确定后续实验所需H2O2浓度.随后将细胞分成正常组和H2O2组,Real-time PCR检测miR-21的表达,Western blot检测胞外基质蛋白(纤维连接蛋白和胶原蛋白I)的表达.然后将细胞分成5组:H2O2组(只用H2O2处理)、miR-21干预组(H2O2+ miR-21模拟物)、miR-21对照组(H2O2+ miR-21对照模拟物)、miR-21抑制组(H2O2+ miR-21抑制剂)和miR-21抑制对照组(H2O2+miR-21抑制剂对照物),Real-time PCR检测miR-21、转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β2和PTEN mRNA表达,Western blot检测胞外基质蛋白、TGF-β2和PTEN蛋白表达.最后将细胞分成3组:H2O2组(只用H2O2处理)、PTEN干扰组(H2O2 +PTEN siRNA)和干扰对照组(H2O2+ control siRNA),检测PTEN、胞外基质蛋白和TGF-β2蛋白水平表达.结果 当H2O2浓度≥400 μmol·L-1时,可显著抑制HTMCs的活性,后续实验选择此浓度.与正常组相比,H2O2组中miR-21、纤维连接蛋白和胶原蛋白Ⅰ的表达均增加,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).检测氧化应激条件下miR-21对胞外基质蛋白、TGF-β2和PTEN表达的影响,发现与H2 O2组相比,miR-21对照组和miR-21抑制对照组中miR-21、纤维连接蛋白与胶原蛋白Ⅰ蛋白水平表达以及TGF-β2和PTEN mRNA及蛋白水平表达差异均无统计学意义(均为P＞0.05);与miR-21对照组相比,miR-21干预组miR-21、纤维连接蛋白和胶原蛋白Ⅰ蛋白水平及TGF-β2 mRNA和蛋白水平表达均增加,PTEN蛋白水平表达降低,差异均有统计学意义(均为P＜0.05),而PTEN mRNA表达差异均无统计学意义(均为P＞0.05);与miR-21抑制对照组相比,miR-21抑制组miR-21、纤维连接蛋白和胶原蛋白Ⅰ蛋白水平及TGF-β2 mRNA和蛋白水平表达均降低,PTEN蛋白水平表达增加,差异均有统计学意义(均为P＜O.05),而PTEN mRNA水平差异无统计学意义(P＞0.05).采用Western blot检测氧化应激条件下PTEN对TGF-β2和胞外基质蛋白表达的影响,发现与H2O2组相比,干扰对照组PTEN、TGF-β2、纤维连接蛋白和胶原蛋白Ⅰ的表达差异均无统计学意义(均为P＞0.05);与干扰对照组相比,PTEN干扰组PTEN的表达下调,TGF-β2、纤维连接蛋白和胶原蛋白Ⅰ的表达均升高,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 氧化应激条件下miR-21可增加HTMCs胞外基质产物,这可能与其靶向沉默PTEN基因,调节TGF-β2的表达相关.     

体外培养人眼小梁细胞Ang Ⅱ的表达

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在体外培养的人眼小梁细胞(TMC)中的表达情况.方法 原代和传代培养人眼TMC株,收集第3代人眼TMC用于制作细胞爬片.利用免疫组织化学染色法和Western blot法检测体外培养人眼TMC中AngⅡ蛋白的表达.结果 传代培养的人眼TMC呈典型梭形,免疫组织化学检测显示体外培养的人眼TMC细胞膜和细胞质中可见AngⅡ的阳性颗粒,阴形对照片中未见有AngⅡ蛋白表达.Western blot法在相对分子质量为64 000处可见一明显蛋白条带,为AngⅡ蛋白的阳性表达.结论 AngⅡ在体外培养的人眼TMC中呈阳性表达,提示AngⅡ可能参与青光眼眼压和房水循环的调节.     

地塞米松诱导人小梁细胞bcl—2基因的表达

目的:探讨地塞米松对小梁细胞bcl-2基因表达的影响。方法:应用组织块培养的方法建立人小梁细胞培养。取第三代小梁细胞培养于载玻片上,含10~(-7)mol/L地塞米松的培养液作用6小时、12小时、24小时后,应用LSAB观察bcl-2基因表达的情况。结果:地塞米松作用6小时后可见bcl-2蛋白阳性细胞,且随时间的延长,阳性细胞有所增多。结论:地塞米松可诱导小梁细胞bcl-2基因表达,可能在激素性青光眼发病中起着一定的作用。眼科学报1998;14:187～189。     

Tranilast对人眼小梁细胞胶原合成的抑制

目的 观察tranilast对体外培养人眼小梁细胞胶原合成的影响。方法 体外培养第3～5代牛眼小梁细胞经0μg/ml(对照组)、12.5、25和50μg/ml tranilast处理后,采用~3H-脯氨酸掺入及液体闪烁测量技术观察tranilast对体外培养人眼小梁细胞胶原合成的影响。结果 12.5、25和50μg/ml tranilast处理组~3H-脯氨酸掺入率分别为(187±21)％,(127±18)％,(66±12)％,与对照组的(317±48)％比较有极显著差异;同时,~3H-脯氨酸掺入率随tranilast质量浓度增加而减少,呈剂量依赖性。结论 tranilast明显抑制小梁细胞胶原的合成。利用tranilast防治原发性开角型青光眼的可能性值得进一步研究。     

人眼小梁细胞的体外培养与细胞骨架和细胞连接的研究

目的建立体外培养的人小梁(human trabecular meshwork,HTM)细胞,并观察小梁细胞细胞骨架与细胞连接的形态学特征。方法体外培养的HTM细胞传代后,免疫组化方法鉴定,电镜观察小梁细胞的超微结构,激光共聚焦显微镜观察actin、vinculin、β-catenin的表达。结果通过光镜、透射电镜、扫描电镜和免疫组化的方法证实体外培养的细胞为人眼小梁细胞。人眼小梁细胞的细胞骨架与细胞连接丰富。结论体外培养的小梁细胞细胞骨架结构明显,证明该细胞有收缩能力;β-连接素与纽蛋白着染明显,说明体外培养的小梁细胞,其细胞与细胞间、细胞与细胞基质间的连接仍具有活体小梁细胞的特性。     

可溶性CD44分子对人眼小梁网细胞凋亡调节蛋白bcl-2相关死亡因子bad表达的影响

背景 研究表明可溶性CD44分子(sCD44)在原发性开角型青光眼(POAG)患者眼中的质量浓度高于正常人,POAG患者房水中sCD44水平与小梁网细胞凋亡相关蛋白的表达是否有关及其对POAG的共同作用机制至今尚不明确. 目的 探讨不同质量浓度的sCD44对POAG患者小梁网细胞凋亡调节蛋白bcl-2相关死亡因子bad表达的影响.方法 收集POAG患者行小梁切除术中切除的小梁网组织,采用组织块培养法原代培养小梁网细胞,并用免疫细胞化学法对培养细胞进行鉴定,将第3代的小梁网细胞按随机数字表法随机分为6个组,分别在无血清培养基中加入含终质量浓度为0(对照组)、1、5、10、25、50 μg/L的sCD44,培养细胞48 h.采用细胞计数试剂8(CCK-8)法和ELISA法检测小梁网细胞中凋亡调节蛋白bc1-2相关死亡因子bad蛋白的表达.结果 培养的细胞经层黏连蛋白(LM)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)单克隆抗体、纤维连接蛋白(FN)免疫组织化学染色呈阳性反应.CCK-8法检测0、l、5、10、25、50μg/L sCD44作用48 h后小梁网细胞吸光度(A450)值分别为:0.2460±0.0019、0.1874±0.0015、0.1570±0.0016、0.1302±0.0019、0.1084±0.0018、0.0940±0.0020,差异有统计学意义(F=14.922,P=0.000),各实验组A450值均低于对照组,差异均有统计学意义(P=0.013、0.008、0.011、0.005、0.004).ELISA法检测表明,0、l、5、10、25、50 μg/LsCD44作用48 h后小梁网细胞中bad蛋白质量浓度分别为(114.8461±2.9560)、(137.8270±2.4259)、(161.4194±3.7381)、(170.9453±3.2006)、(221.2252±4.3738)、(324.6167±4.4220) ng/L,差异有统计学意义(F=16.610,P=0.000),各实验组小梁网细胞中bad蛋白质量浓度均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P=0.017、0.013、0.008、0.007、0.006).结论 sCD44在一定质量浓度范围内可促进POAG小梁网细胞的凋亡,并且能上调凋亡调节蛋白bcl-2相关死亡因子bad蛋白的表达.     

嘌呤受体P2X7在人眼小梁网细胞上的表达及分布

目的　探讨嘌呤受体Ｐ２Ｘ７在体外培养正常人眼小梁网细胞上的表达及分布。方法　体外培养、鉴定正常人眼小梁网细胞,利用ＲＴ－ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ和免疫荧光法分别检测正常人眼小梁网细胞上Ｐ２Ｘ７受体ｍＲＮＡ和蛋白的表达情况及受体蛋白的主要分布部位。结果　光镜下观察原代培养的细胞具有人眼小梁网细胞的典型形态;免疫组织化学方法检测结果表明,培养的细胞纤维连接蛋白、层粘连蛋白、神经元特异性烯醇化酶及波形蛋白染色阳性,第Ⅷ因子染色阴性,鉴定为人眼小梁网细胞;ＲＴ－ＰＣＲ扩增到了Ｐ２Ｘ７ｍＲＮＡ１５２ｂｐ大小的基因片段,Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ得到了相对分子质量约为７４０００的Ｐ２Ｘ７的蛋白条带,免疫荧光法证实Ｐ２Ｘ７受体在小梁网细胞膜、细胞质及细胞核内均有广泛分布。结论　人眼小梁网细胞上有Ｐ２Ｘ７受体表达,其在细胞内分布广泛。     

水通道蛋白1在培养人眼小梁细胞中的表达及意义

目的探讨培养人眼小梁细胞水通道蛋白1(AQPl)的存在、定位及意义。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测培养人眼小梁细胞AQP1mRNA的表达。Westernblot用兔抗人AQP1多克隆抗体检测AQP1蛋白表达。免疫荧光测定AQP1在培养人眼小梁细胞的所在部位。结果RT-PCR扩增出一条347bp标志AQP1mRNA的表达产物。Westernblot可见约28000相应位置的发光条带。免疫荧光定位AQP1在培养的人眼小梁细胞胞膜。结论AQP1在培养人眼小梁细胞的细胞膜表达,可能在调节房水通过小梁网流出系统中起到重要作用。     

尿激酶对组织培养人眼小梁细胞的影响

为检验尿激酶在临床应用时对小梁细胞有无不良影响。本研究应用组织培养人眼小梁细胞，观察不同浓度尿激酶对细胞形态的影响，并测定其对细胞DNA合成时氚（标胸腺嘧啶核着（3H-TdR）掺入的量，来判断药物对细胞增殖功能的影响。结果示5000u／ml浓度作用6小时细胞即出现胞突回缩、胞体皱缩等变化，至48小时细胞死亡；5000和500u／ml浓度均显著抑制DNA合成。提示在应用尿激酶冲洗前房积血时，一定要冲洗干净残留药物，以免对小梁细胞造成损害。     

人眼小梁细胞体外培养及生物学特性研究

目的:建立人眼小梁细胞培养方法并研究其生物学特性。方法:以体外组织块培养的方法获得培养的人小梁细胞,应用光镜、电镜观察细胞的形态学特征,并观察其免疫组化特性和细胞的生长曲线。结果:光镜下小梁细胞为扁平多角形、单层生长;电镜下细胞连接为点粘连和缝隙连接、细胞表面可见微绒毛、胞浆细胞器丰富;免疫组化染色对抗纤维连接蛋白(Anti—FN)、抗层粘连蛋白(Anti—LN)、抗神经元特异性烯醇化酶(Anti—NSE)单抗呈阳性,对抗第Ⅷ因子(Anti-ⅧFactor)单抗呈阴性;传代小梁细胞繁殖时间较长,10天后为平台期。结论:根据体外培养的小梁细胞的形态特点、生长特征、免疫组化特性可对其进行鉴定。人小梁细胞体外培养的成功,为在细胞和分子水平研究青光眼的发病机制提供了有利的条件。眼科学报 1996;12:64—69。     

地塞米松诱导牛眼小梁细胞凋亡的研究

目的：探讨地塞米松诱导牛眼小梁细胞凋亡的机制。方法：采取体外组织块培养法,培养新生牛眼小梁细胞。将1－500mg/L地塞米松加入融合的第3－5代小梁细胞培养液中,作用1－14d,用相差显微镜、荧光显微镜、透射电子显微镜、DNA电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：125－500mg/L地塞米松作用1－14d,小梁细胞凋亡呈浓度时间依赖性。 凋亡的小梁细胞经Hoechst3258染色,于荧光显微镜下观察,细胞核呈致密度浓染的颗粒块状荧光;透射电镜下可见小梁细胞染色质固缩,并有凋亡小体,细胞器基本完好;DNA电泳呈梯状条带,流式细胞仪测到亚二倍体峰。结论：地塞米松可诱导体外培养的小梁细胞凋亡,可能是激素性青光眼的发病机制之一。