1型糖尿病与脾脏CD4^＋CD25^＋调节性T细胞及相关基因Foxp3表达的关系

目的：研究链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)诱导糖尿病小鼠发病中CD4^+CD25^+调节性T细胞(regulatory T cell，Tr)及相关基因Foxp3表达的变化，从而探讨CD4^+CD25^+Tr在自身免疫耐受中的作用。方法：实验选用健康昆明小鼠60只，将60只小鼠随机分对照组(n=20)和模型组(n=40)。模型组给与腹腔注射6g／L STZ溶液，60mg／(kg&;#183;d)，连续5d；对照组给予枸橼酸钠缓冲液0．2mL／d腹腔注射，连续5d。流式细胞仪检测脾脏CD4^+和CD4^+CD25^+Tr细胞数量的变化，RT-PCR检测脾小鼠脾脏细胞中CD4^+CD25^+Tr细胞相关基因Foxp3 mRNA的表达。结果：模型组血糖和抗胰岛素抗体水平明显高于对照组(t=0．023，P&;lt;0．05；t=0．018，P&;lt;0．05)；模型组小鼠脾脏CD4^+T细胞数量[(29．69&;#177;4．77)％]明显高于对照组[(19．60&;#177;11．42)％](t=0．014，P&;lt;0．05)，模型组CD4^+CD25^+Tr／CD4^+T比值低于对照组；Foxp3 mRNA水平模型组的表达普遍高于对照组。结论：CD4^+CD25^+Tr细胞的相对降低，引起外周耐受状态的打破：在STZ破坏胰岛细胞，自身抗原存在的同时，导致了自身免疫糖尿病的发生。     

哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞及Foxp3表达的变化

目的 探讨哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞数量的变化及相关转录因子Foxp3表达的变化.方法 24只5周龄C57BL/6小鼠随机分为哮喘模型组和对照组,每组12只,于第0天和第14天,哮喘组以腹腔注射致敏液[0.1%的鸡卵蛋白(OVA)0.1ml与等体积液态铝混合]0.2ml致敏,对照组注射等体积生理盐水,第24、25、26天开始雾化吸入1%的OVA(哮喘组)或生理盐水(对照组)进行激发,连续3 d,于最后1次激发后48 h处死小鼠.取脾脏,制备脾细胞悬液,流式细胞术检测脾脏CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞比例.取脾脏组织以RT-PCR和Western blot分别检测脾脏Foxp3 mRNA和蛋白的表达.数据结果以Levene法行方差齐性检验后,进行独立样本的t检验,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 脾脏CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞比例哮喘组为(7.03±2.19)%,对照组为(9.70±2.80)%,哮喘组低于对照组,两者相比差异有统计学意义(P=0.016);脾脏Foxp3 mRNA的表达水平哮喘组为(0.37±0.11),对照组为(0.237±0.118),哮喘组高于对照组,两者相比差异有统计学意义(P=0.009);脾脏Foxp3蛋白的表达水平哮喘组(0.692±0.171),对照组(0.515±0.135),哮喘组高于对照组,两者相比差异有统计学意义(P=0.01).结论 哮喘时抗原对CD4+CD25+T细胞的激活不足,可能在哮喘发病机制中起一定作用.     

小鼠调节性T细胞的CD4+ CD25+ CD127low/-标记分析

新的特异性细胞表面标记的发现是提高调节性T细胞(Treg)测量和分选技术的重要环节,Foxp3是公认的天然Treg的标记,却不能作为分选细胞的标记,CD127是新发现低表达于Treg细胞表面的标记。本实验测定CD4+CD25+CD127low/-和CD4+CD25+Foxp3+标记的小鼠外周血及脾脏Treg细胞的数量,并测定CD4+CD25+CD127low/-细胞内Foxp3转录因子的表达水平,分析CD4+CD25+CD127low/-标记在小鼠Treg细胞测定及分选的价值。收集BALB/c小鼠外周血及制备脾细胞悬液,分别三重荧光染色CD4、CD25、CD127及CD4、CD25、Foxp3后应用流式细胞仪检测,得出CD4+CD25+CD127low/-、CD4+CD25+Foxp3+这两种标记的小鼠外周血和脾脏Treg细胞的比例;再在CD4、CD25、Foxp3基础上加CD127染色(四重荧光染色),检测CD4+CD25+CD127low/-细胞Foxp3转录因子的表达情况。结果显示:①BALB/c小鼠外周血CD4+T细胞的分布:在总T细胞中CD4+TCD4+CD25+T细胞的中位表达水平分别为39.02%、5.35%;在CD4+T细胞中CD4+CD25+CD127low/-、CD4+CD25+Foxp3+细胞的中位表达水平分别为7.13%、3.97%;②BALB/c小鼠脾脏CD4+T细胞的分布:在总T细胞中CD4+T、CD4+CD25+T细胞的中位表达水平分别为23.49%、3.86%;在CD4+T细胞中CD4+CD25+CD127low/-、CD4+CD25+Foxp3+细胞的中位表达水平分别为12.8%、8.23%;③BALB/c小鼠外周血和脾脏CD4+CD25+CD127low/-细胞比例高于CD4+CD25+Foxp3+细胞,以脾脏更为明显(P<0.01);④小鼠外周血及脾脏CD4+CD25+CD127low/-细胞高表达Foxp3转录因子,CD4+CD25+Foxp3+细胞低表达CD127。结论:BALB/c小鼠外周血和脾脏CD4+CD25+CD127low/-较CD4+CD25+Foxp3+能定量更多的Treg细胞;CD127low/-作为CD4+CD25+Treg细胞表面的特征性标志,在细胞分选时受其他细胞的干扰最小,是定量和纯化小鼠Treg细胞的更好标记选择。     

中西医结合治疗对免疫低下肺炎小鼠CD4~+CD25~+调节性T细胞的影响

目的建立免疫功能低下小鼠肺炎克雷伯菌肺炎的模型,观察中西医结合治疗对于此种肺炎的CD4+CD25+调节性T细胞表达的影响。方法采用腹腔注射环磷酰胺的方法建立免疫功能低下的小鼠模型,通过鼻腔滴种肺炎克雷伯菌液制作肺炎模型,用流氏细胞学技术检测各组小鼠给药前、给药后12 h,给药后24 h,给药后36 h小鼠外周血CD4+T细胞表面Foxp3阳性表达率和CD4+Foxp3+T细胞CD25表达强度。结果各组各时间点的小鼠外周血CD4+Foxp3+T细胞CD25表达强度较正常小鼠显著升高(P<0.05),CD4+T细胞表面Foxp3阳性表达率较正常小鼠明显降低(P<0.05)。给药后12 h,中西医治疗组小鼠外周血的CD4+Foxp3+T细胞CD25表达强度较模型组显著下降(P<0.05),CD4+T细胞表面Foxp3阳性表达率较对照组、单纯西药组及单纯中药组显著升高(P<0.05)。结论①应用环磷酰胺后,小鼠外周血CD4+Foxp3+T细胞CD25表达强度显著升高,CD4+T细胞表面Foxp3阳性表达率明显降低。②中西医结合治疗在免疫功能抑制小鼠肺炎感染模型中可能具有"双向调节免疫"功能的作用,即一方面维持CD4+T细胞Foxp3阳性表达率,提高机体抗感染能力,同时维持了机体免疫耐受的状态。③中西药结合治疗有改善免疫功能低下感染生存率的趋势。     

静脉输注过氧化氢溶液上调小鼠脾脏和外周血CD4+Fox03+调节性T细胞

背景:现已证实,天然生成的调节性T细胞在维护机体免疫稳态、抑制炎性反应、抗移植排斥、抑制抗肿瘤免疫应答以及防治自身免疫病中都有重要的功能和作用.目的:探讨静脉输注过氧化氢对BALB/c小鼠CD4+CD25+Foxo3+调节性T细胞的影响.方法:取BALB/c小鼠12只,随机分为两组.H2O2处理组小鼠尾静脉注射含有H2O2的PBS;PBS组小鼠静脉注射无菌PBS.分别在注射2周后处死小鼠,采集小鼠外周血、脾脏和胸腺,采用流式细胞仪检测其中CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例.结果与结论:H2O2处理组小鼠外周血和脾脏CD4+Foxp3+T细胞比例、CD4+Foxp3+/CD4+细胞比例均高于对照组小鼠(P<0.05).提示静脉注射H2O2能上调小鼠外周血和脾脏内CD4+Foxp3+调节性T细胞的比例.     

CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞增龄性变化及其与老年肺癌的关系

目的探讨CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的增龄性变化及其与老年肺癌发生、发展的关系。方法肺癌患者70例和体检健康者60例,分别按年龄(青年18~45岁、中年45~60岁、老年60岁)分为青年肺癌组21例、中年肺癌组25例、老年肺癌组24例和青年健康组20例、中年健康组20例、老年健康组20例。采用流式细胞分析法测定各组外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T细胞的百分率,采用实时荧光定量PCR法测定功能基因Foxp3 mRNA的相对表达量;分析肺癌患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞百分率与临床特征的关系。结果老年肺癌组外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分率[(11.81±2.40)%]及Foxp3 mRNA相对表达量(3.14±1.30)高于中年肺癌组[(11.25±1.84)%、2.53±1.16]和青年肺癌组[(9.05±2.14)%、2.28±1.21],中年肺癌组高于青年肺癌组(P0.05);老年健康组外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分率[(9.82±1.19)%]及Foxp3mRNA相对表达量(2.67±0.99)高于中年健康组[(7.81±1.16)%、1.76±0.80]和青年健康组[(6.23±0.91)%、1.17±0.51],中年健康组高于青年健康组(P0.05);相同年龄段,各肺癌组中CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分率及Foxp3 mRNA相对表达量均明显高于各健康组(P0.05);肺癌患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分率在肺癌分期、有无淋巴结转移上差异有统计学意义(F=28.660,P=0.002;t=21.084,P0.001),在不同性别、病理类型上差异无统计学意义(t=2.330,P=0.120;F=0.020,P=0.980)。结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的增龄性变化可能是导致老年肺癌发生、发展的原因之一。     

溃疡性结肠炎患者外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞的表达

目的:探讨溃疡性结肠炎(ulcerative coitis,UC)患者外周血CD4+CD25+ Foxp3+T细胞的表达及意义.方法:采用流式细胞术检测UC患者22例及健康对照组20例外周血CD4+ CD25+ Foxp3+在T淋巴细胞的单独或联合表达比例.结果:UC患者外周血T淋巴细胞表达CD4+的比例为(34.76±5.40)%,与健康对照组的(33.23±11.38)%比较无差异(P>0.05);CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例为(8.27±1.46)%,显著低于健康对照组的(11.4±2.17)%(P<0.05);CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞比例为(0.87±0.25)%,显著低于健康对照组的(1.55±0.55)%(P<0.05).结论:UC患者CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25+Foxp3+T细胞明显减少,可能打破了自身免疫耐受,发生了针对肠道抗原的自身免疫反应,参与了UC的发病.     

宫颈癌患者外周血CD4~+CD25~+调节性T淋巴细胞与白细胞介素-17水平及其相关性研究

目的探讨外周血CD4~+CD25~+调节性T淋巴细胞(Tr细胞)和白细胞介素-17(IL-17)水平在宫颈癌患者中的变化及其相关性。方法选取2014年1月至2015年3月该院确诊宫颈癌患者60例(宫颈癌组)和查体的健康女性60例(健康对照组),采用流式细胞仪检测外周血Tr细胞数量及占CD4~+细胞百分比,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IL-17水平。结果宫颈癌组外周血Foxp3~+Tr、Tr、CD4~+T淋巴细胞百分比,Foxp3~+Tr/Tr、Tr/CD4~+T淋巴细胞比值及血清IL-17水平均较健康对照组明显升高,而IL-17/Tr比值明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。宫颈癌组患者外周血CD4~+CD25~+Tr细胞水平与血清IL-17水平呈正相关(r=0.768,P0.05)。结论宫颈癌患者存在细胞免疫功能紊乱,IL-17与Tr细胞比值失衡可能在宫颈癌发病机制中起一定的作用。     

CD4~+ CD25~+ T细胞在脂多糖诱导多器官功能障碍综合征小鼠中的保护作用研究

目的探索CD4+CD25+T细胞在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)小鼠中的作用。方法选择雄性BALB/c小鼠,以LPS 9.0 mg/kg腹腔注射制备小鼠MODS模型作为建模组(60只),对照组小鼠(10只)同法注射0.9%氯化钠注射液,应用流式细胞术在第2、5天分别检测两组小鼠体内CD4+CD25+T细胞水平;选择180只小鼠,于-2 d分别腹腔注射磷酸盐缓冲液、IgG1及200μg Anti-CD25 mAb,再于0 d注射LPS分别建立LPS组、IgG1+LPS组和Anti-CD25 mAb+LPS组小鼠模型,每组60只,计算各组CD4+CD25+T细胞百分比,并取各组小鼠肺脏组织行HE染色,观察组织细胞学改变;再建立LPS组小鼠54只,IgG1+LPS组小鼠34只,Anti-CD25 mAb+LPS组小鼠32只,观察3组小鼠的生存率。结果建模组小鼠CD4+CD25+T细胞比例与对照组相比,在2 d时下降(t=2.873,P=0.006),在5 d时上升(t=2.963,P=0.004)。Anti-CD25 mAb+LPS组注射LPS后2 d、5 d CD4+CD25+T细胞比例均下降,与其余两组比较差异均有统计学意义(P均0.01)。肺组织HE染色结果提示中和CD4+CD25+T细胞会加重LPS诱导MODS小鼠的肺部损伤,并增加小鼠的死亡率。结论 CD4+CD25+T细胞在LPS诱导的MODS中起保护作用。     

中国HIV早期感染者CD+4CD+25Foxp3+调节性T淋巴细胞变化研究

目的 研究1年以内感染HIV的感染者(早期感染者,EHI)体内CD+4 CD+25 Foxp3+调节性T淋巴细胞水平及其与疾病进展相关性.方法 随机选取51例HIV感染者,依据感染时间及CD+4 T淋巴细胞水平分为3组:EHI组30例、HIV组15例、AIDS组6例,20名健康人作为对照组,各组对象的年龄、性别具有可比性.用EDTA抗凝管采集全血,应用FACSAria流式细胞仪及Foxp3染色试剂盒,检测外周血单个核细胞CD+4CD+25Foxp3+调节性T淋巴细胞表达水平,分析EHI者及全部HIV感染者CD+4 CD+25Foxp3+调节性T淋巴细胞表达水平与CD+4T淋巴细胞数量、病毒调定点、病毒载量及淋巴细胞活化水平间的相关性.结果 健康对照组、EHI组、HIV组及AIDS组CD+4C+25Foxp3+T淋巴细胞百分率逐级上升,其中EHI组CD+4CD+25Foxp3+T淋巴细胞百分率[3.79(2.11～5.43)%]低于AIDS组[8.09(4.90～8.90)%],差异有统计学意义(Z=-2.29,P=0.022);EHI组CD+4 CD+25Foxp3+T淋巴细胞百分率与病毒调定点正相关(r=0.479,P=0.038),与CD4T淋巴细胞计数呈负相关(r=-0.455,P=0.011),与CD+3 HLA+T淋巴细胞呈正相关(r=0.533,P=0.002).结论 中国EHI者CD+4 CD+25Foxp3+调节性T淋巴细胞百分率高与高病毒调定点及低CD+4 T淋巴细胞数量相关,提示CD+4 CD+25Fox3+调节性T淋巴细胞是加速HIV感染早期疾病进展的因素之一.     

CD4+CD25+和CD8+调节性T细胞的作用机制

调节性T细胞（Treg）主要在机体免疫系统中发挥负向调节作用,既能抑制不恰当的免疫反应,又能限定免疫应答的范围、程度及作用时间,对CD4^＋和CD8^＋效应性T淋巴细胞的增殖起抑制作用,因此在移植物抗宿主病、自身免疫病、过敏性疾病等的发病机制和临床治疗中有潜在的应用价值.本文重点介绍CD4^＋CD25^＋Treg和CD8^＋Treg的作用机制,并简述调节性T细胞研究面临的挑战与展望.     

哮喘患儿CD8+CD28+、CD8+CD28-T淋巴细胞检测及其临床意义

目的通过对哮喘患儿CD4、CD8和CD28的联合检测,探讨哮喘患儿淋巴细胞免疫功能状态及其临床意义.方法采用流式细胞术检测哮喘患儿外周血的总T细胞(CD3+)、辅助/诱导T淋巴细胞(CD4+)、抑制/细胞毒T淋巴细胞(CD8+)、细胞毒T细胞(CD8+CD28+)、抑制T细胞(CD8+CD28-).结果哮喘患儿组与对照组比较;CD3+、CD4+、CD8+CD28-细胞均低于对照组(P＜0.01,P＜0.05),CD8+CD28+细胞增高(P＜0.05),CD4+/CD8+比值、CD8+与对照组比较均无显著性差异(P＞0.05).结论哮喘患儿存在T淋巴细胞亚群免疫功能紊乱,而CD8+CD28+、CD8+CD28-T细胞失衡可能是导致机体免疫功能紊乱的主要因素.     

Regulatory CD4+CD25+ T cells restrict memory CD8+ T cell responses

CD4+ T cell help is important for the generation of CD8+ T cell responses. We used depleting anti-CD4 mAb to analyze the role of CD4+ T cells for memory CD8+ T cell responses after secondary infection of mice with the intracellular bacterium Listeria monocytogenes, or after boost immunization by specific peptide or DNA vaccination. Surprisingly, anti-CD4 mAb treatment during secondary CD8+ T cell responses markedly enlarged the population size of antigen-specific CD8+ T cells. After boost immunization with peptide or DNA, this effect was particularly profound, and antigen-specific CD8+ T cell populations were enlarged at least 10-fold. In terms of cytokine production and cytotoxicity, the enlarged CD8+ T cell population consisted of functional effector T cells. In depletion and transfer experiments, the suppressive function could be ascribed to CD4+CD25+ T cells. Our results demonstrate that CD4+ T cells control the CD8+ T cell response in two directions. Initially, they promote the generation of a CD8+ T cell responses and later they restrain the strength of the CD8+ T cell memory response. Down-modulation of CD8+ T cell responses during infection could prevent harmful consequences after eradication of the pathogen.     

CD4+CD25+调节性T细胞的研究进展

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（regulatory T cell,Treg）具有维持自身免疫耐受和调节免疫应答的功能,其功能紊乱或数目下降是导致自身免疫性疾病的重要原因之一。近年来,研究发现Foxp3在调控CD4^＋CD25^＋Treg细胞的发育和功能上起着重要作用。本文就CD4^＋CD25^＋Treg细胞的免疫抑制机制、Foxp3在其发育和功能上的作用、IL-2和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）等对其产生、维持及活化的作用等方面作一综述。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓CD34+CD59+细胞与CD34+CD59-细胞生物学性能的研究

目的 探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患CD34^ CD59^ 细胞的特性及PNH克隆呈优势造血的可能原因，以探索PNH发病的内在机制。方法 用免疫磁珠吸附法富集纯化CD34^ 细胞，再用流式细胞仪分选出PNH患的CD34^ CD59^ 细胞、CD34^ CD59^ 细胞及正常对照CD34^ 细胞。分别进行体外扩增液体培养2周，并对扩增前、后的细胞进行半固体培养。结果 ①PNH患CD34^ CD59^ 细胞与正常对照CD34^ 细胞形成集落形成单位(CFU)均在第7天达到扩增高峰，并且扩增后的细胞仍能保持CD59抗原，无GPI锚连蛋白的丢失。②正常对照的CD34^ 细胞在生存、增殖、形成CFU及扩增能力上均明显强于FHN患的CD34^ CD59^ 细胞及CD34^ CD59^-细胞.③PNH患CD34^ CD59^ 细胞及CD34^ CD59^ 细胞体外半固体培养，其形成CFU的能力无明显差异。④PNH患CD34^ CD59^ 细胞及CD34^ CD59^ 细胞在SCF IL3 IL6 FL Tpo及SCF IL3 IL6 FL Tpo Epo组合下液体培养，其生存、增殖、扩增等能力上均无明显差异。但在SCF IL3 IL6 FL Tpo Epo GM-CSF组合下液体培养，CD34^ CD59^ 细胞的生存、增殖、扩增能力均明显强于CD34^ CD59^ 细胞。结论 ①正常对照的CD34^ 细胞在生存、增殖、形成CFU及扩增能力上均明显强于PNH患的CD34^ CD59^ 细胞。②PNH患CD34^ CD59^ 细胞及CD34^ CD59^ 细胞体外半固体培养，以及在SCF IL3 IL6 LF Tpo及SCF IL3 IL6 FL Tpo Ep组合下液体培养，其生存、增殖、扩增等能力上均无明显差异，说明CD34^ CD59^ 细胞在造血能力上并无内在的优势。GM—CSF或许是使PNH克隆呈造血优势的原因之一。     

CD4+CD25+ T cells regulate virus-specific primary and memory CD8+ T cell responses

Naturally occurring CD4+CD25+ regulatory T cells appear important to prevent activation of autoreactive T cells. This article demonstrates that the magnitude of a CD8+ T cell-mediated immune response to an acute viral infection is also subject to control by CD4+CD25+ T regulatory cells (Treg). Accordingly, if natural Treg were depleted with specific anti-CD25 antibody before infection with HSV, the resultant CD8+ T cell response to the immunodominant peptide SSIEFARL was significantly enhanced. This was shown by several in vitro measures of CD8+ T cell reactivity and by assays that directly determine CD8+ T cell function, such as proliferation and cytotoxicity in vivo. The enhanced responsiveness in CD25-depleted animals was between three- and fourfold with the effect evident both in the acute and memory phases of the immune response. Surprisingly, HSV infection resulted in enhanced Treg function with such cells able to suppress CD8+ T cell responses to both viral and unrelated antigens. Our results are discussed both in term of how viral infection might temporarily diminish immunity to other infectious agents and their application to vaccines. Thus, controlling suppressor effects at the time of vaccination could result in more effective immunity.     

淋巴细胞CD3~+、CD4~+、CD8~+亚群检测在早发型新生儿败血症诊断中的价值

目的探讨早发型新生儿败血症诊断中,淋巴细胞CD3~+、CD4~+、CD8~+百分比检测的价值。方法将2014年1月至2015年6月出生,7d内发病,疑似感染的患儿纳入本研究,入院24h内采集静脉血,检测CD3~+、CD4~+、CD8~+淋巴细胞百分比,C反应蛋白(CRP)及血常规,在抗菌药物使用前做血培养。将其中血培养证实为早发型新生儿败血症的足月新生儿作为败血症组,血培养阴性的作为局部感染组。同时选择同期因高胆红素血症(排除感染等因素所致)而住院的足月新生儿作为非感染组。采用流式细胞仪对上述患儿标本进行检测,观察并比较3组间淋巴细胞亚群CD3~+、CD4~+、CD8~+百分比。结果败血症组CD3~+[(40.3±10.6)%],CD4~+[(28.6±11.2)%],CD8~+[(10.8±2.6)%]低于局部感染组的CD3~+[(64.8±9.8)%],CD4~+[(48.9±10.2)%],CD8~+[(17.6±5.6)%]和非感染组的CD3~+[(62.6±11.6)%]、CD4~+[(46.4±13.6)%]、CD8~+[(16.5±7.3)%],差异有统计学意义(P0.05),局部感染组的CD3~+、CD4~+、CD8~+与非感染组之间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论CD3~+、CD4~+、CD8~+百分比可以作为诊断早发型新生儿败血症的指标。     

CD4^＋CD25^＋T细胞的扩增及其功能分析

背景:CD4+CD25+T细胞增殖能力低,且在人外周血中仅占单个核细胞的4%左右.若能在体外高效扩增CD4+CD25+T细胞,并保持其免疫调节特性,将会对临床移植产生积极的影响.目的:观察C57BL/6小鼠来源的CD4+CD25+T细胞体外增殖情况及其扩增后的功能变化.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-10/2008-05在南方医科大学珠江医院血液科完成.材料:SPF级C57BL/6及BALB/C雄性小鼠购白南方医科大学动物所.小鼠白血病细胞EL9611由珠江医院血液科惠赠.方法:利用免疫磁珠法分选小鼠CD4+CD25+T细胞;以抗鼠CD3ε单抗、抗鼠CD28单抗、鼠重组白细胞介素2及辐射过的BALB/C小鼠脾细胞为共刺激因子,通过实时定量RT-PCR检测扩增后CD4+CD25+T细胞FoxP3基因mRNA表达变化,以确定增殖效率;3H-TdR掺入法检测扩增后的CD4+CD25+T细胞对CD4+CD25T细胞增殖的影响:LDH释放法检测扩增后的CD4+CD25+T细胞对CD4+CD25T细胞杀伤小鼠白血病细胞EL9611的影响,以CD4+CD25T细胞为效应细胞,以EL9611细胞为靶细胞.结果:经免疫磁珠分选可获得高纯度及较强活性的CD4+CD25+T细胞.扩增后CD4+CD25+T细胞FoxP3基因mRNA的表达平均为扩增前的5.46倍,最高可达14.39倍.扩增后CD4+CD25+T细胞可明显抑制CD4+CD25T细胞的增殖,且随着CD4+CD25+T细胞数的增加,这种抑制增殖的能力也逐渐增强,当两者比例为1:1时抑制率最大,达62.05%.与单纯CD4+CD25+T细胞对EL9611细胞杀伤率比较,效靶比为10:1时扩增后的CD4+CD25+T细胞联合CD4+CD25-T细胞的杀伤率无明显变化(t=2.199,P>0.05):效靶比为5:1时扩增后的CD4+CD25+T细胞联合CD4+CD25-T细胞的杀伤率则明显降低(t=5.839,P<0.05).结论:单抗加异源性抗原能宵效扩增CD4+CD25+T细胞;扩增后的CD4+CD25+T细胞比新鲜分离的CD4+CD25+T细胞能更有效地抑制CD4+CD25-T细胞的增殖,其对CD4+CD25-T细胞杀伤白血病细胞的作用则取决于其与CD4+CD25-T细胞的相对比例.