肺炎克雷伯菌新德里金属β-内酰胺酶结构功能分析

目的:描述新出现的肺炎克雷伯菌超级耐药酶-新德里金属β-内酰胺酶(NDM-1)氨基酸序列的结构功能特征,及时提供潜在有用的超抗细菌诊断、预防、抗生素的协同治疗药物研制和分子流行病学信息。方法:采用生物信息频谱分析平台,对NDM-1氨基酸序列进行结构和功能及活性多肽特性的研究,包括ClustalW、MEGA、Modeller和PyMOL等方法。结果:NDM-1的核苷酸和氨基酸序列与亲缘关系较近的意大利维罗纳金属β-内酰胺酶(VIM-1)的相似性分别为44.6%和32.6%,同源性较低。所分析的NDM-1的270个氨基酸区域有共同的信息频谱特征,其主峰特征为F(0.20743,),显示了NDM-1的共同作用模式。对NDM-1预测的N110D和D199G氨基酸残基变异明显增加了F(0.2074)的特征峰高,可能对抗生素作用的模式有较大正影响;预测的G69D和D192G氨基酸残基变异明显减小了F(0.2074)的特征峰高,可能对抗生素作用的模式有较大负影响。NDM-1的78-104位区域是细菌/抗生素反应活性热点,它的许多残基分布在该酶同源建模3D结构的表面。同源建模显示NDM-1特有的4个氨基酸短肽在该酶3D结构的表面。NDM-1和金属锌离子的结合位点具有金属β-内酰胺酶B1亚型的保守性。结论:这些数据和信息较深层次地显示了新出现的NDM-1酶的结构和功能特点、相关的氨基酸的预测变异和活性多肽的同源建模的3D分布。可为今后预防和处置NDM超抗细菌的感染和流行,扩展鉴别潜在的治疗和诊断的分子靶标,提供分子生物学基础。     

肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶类型的动态比较研究

目的动态比较研究肺炎克雷伯菌(KPN)所产各种β-内酰胺酶(β-lase)分布情况. 方法采用多底物改良相邻纸片法检测230株,S1期(2000年1月～2001年6月)70株、S2期(2001年7月～2002年7月)70株和S3期(2003年1月～2004年11月)90株;KPN所产各种β-lase. 结果 S1期Kpn总β-lase检出率为28.7%,其中产青霉素酶、头孢菌素酶各1株(1.4%),产广谱酶4株(5.7%),产ESBLs14株(20.0%);S2期70株KPN总β-lase检出率为85.7%,其中产青霉素酶4株(5.7%),头孢菌素酶3株(4.3%),产广谱酶11株(15.7%),产ESBLs 42株(60.0%);S3期KPN总β-lase检出率为64.0%,其中产青霉素酶9株(10.0%),AmpCs酶3株(3.3%),广谱酶3株(3.3%),单纯产ESBLs20株(22.2%),同时产ESBLs AmpCs产酶株15株(16.7%),酶抑制剂耐药的β-内酰胺酶14株(15.6%,1株IRT、13株IRESBLs),ESBLs总检出率为53.3%;3期均未检出碳青酶烯酶. 结论本组KPN所产各种β-lase的总产酶率、β-lase类型数均随时间而提高.     

产IMP-4型金属β-内酰胺酶多药耐药产酸克雷伯菌耐药基因分析

目的 了解产IMP-4型获得性金属β-内酰胺酶产酸克雷伯菌耐药基因存在的状况.方法 分别采用K-B法、双纸片增效法、Etest法、聚合酶链反应(PCR)及序列分析方法检测其产金属β-内酰胺酶(MBLs)表型及相关的耐药基因.结果 多药耐药产酸克雷伯菌除对阿米卡星、多黏菌索B敏感外,对碳青酶烯类、三代、四代头孢菌素、头孢西丁、氟喹诺酮类、头孢哌酮/舒巴坦、复方新诺明、阿莫西林/克拉维酸、替卡西林/克拉维酸、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、利福平等均耐药;金属β-内酰胺酶基因型别为IMP-4型(blaIMP-4)、int Ⅰ1、qacE△1-sull、aadA1、AmpC(blaADC)、CTX-M-14基因阳性.结论 产酸克雷伯菌的多药耐药与整合子相关,且携带有多种耐药基因.     

医院感染肺炎克雷伯菌耐药趋势及β-内酰胺酶基因型分析

目的 了解医院重症监护病房2009-2013年医院感染肺炎克雷伯菌的耐药趋势以及10种β-内酰胺酶耐药基因的分布,为临床正确选择抗菌药物提供依据。方法 K-B法检测165株肺炎克雷伯菌对20种抗菌药物的耐药性,PCR方法检测:CTX-M、TEM、SHV、GES、KPC、IMI、IMP、VIM、NDM、GIM耐药基因。结果 ICU 5年共分离165株肺炎克雷伯菌,产ESBLs菌株88株,KPN对三代头孢菌素的耐药率逐年升高;自2011年出现碳青霉烯耐药的菌株,耐药率约10.0%;114株扩增到耐药基因片段,检测出CTX-M、TEM、SHV、KPC共4种耐药基因,165个基因片段;最主要的耐药基因型为SHV型,占46.5%。结论 产ESBLs菌株的增加和耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的出现,应引起高度重视,关注细菌的变迁和耐药性变化,并合理选用抗菌药物治疗。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药性的探讨

目的探讨临床患者分离出来的肺炎克雷伯菌对11种抗菌药物的耐药性. 方法按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的方法与规则,采用浓度梯度法(E-test)测定并比较亚胺培南等11种抗菌药物对肺炎克雷伯菌的体外抗菌活性. 结果除亚胺培南对产ESBLs和非产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药率均为零外,产ESBLs的肺炎克雷伯菌的耐药率显著高于非产ESBLs的肺炎克雷伯菌. 结论临床实验室应将ESBLs作为常规检测项目;在治疗包括肺炎克雷伯菌在内的革兰阴性菌严重感染中,最敏感的抗菌药物是碳青酶烯类,如亚胺培南,其次为头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦等抗菌药物.     

非产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药性分析

目的了解非产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的耐药情况,为临床合理有效使用抗菌药物提供科学依据。方法回顾性地分析医院2006-2009年住院患者临床送检标本经分离确证的126株非产ESBLs肺炎克雷伯菌,用K-B法测定非产ESBLs肺炎克雷伯菌对12种抗菌药物的耐药率。结果确证的非产ESBLs肺炎克雷伯菌126株对氨苄西林、头孢唑林、氨苄西林/舒巴坦的耐药率70.00%,对头孢呋辛、氧氟沙星、庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星的耐药率25.00%,对头孢噻肟、头孢曲松、阿米卡星15.00%,对头孢哌酮/舒巴坦高度敏感,耐药率为2.38%。结论非产ESBLs肺炎克雷伯菌对青霉素类、第一、二代头孢菌素耐药严重,对喹诺酮类、氨基糖苷也存在不同程度的耐药,第三代头孢菌素和阿米卡星是临床治疗非产ESBLs肺炎克雷伯菌感染的有效药物。     

产TEM-116型β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌耐药性研究

目的通过比较分析产TEM-116型β-内酰胺酶(-βlactamases)的肺炎克雷伯菌临床耐药性,了解TEM-116型β-内酰胺酶的特性。方法采用纸片扩散法进行细菌药敏试验,并以分析性等电聚焦的方法测定其等电点(isoelectric points,PI),对产TEM-116肺炎克雷伯菌与产TEM-1肺炎克雷伯菌的耐药性进行研究。结果产TEM-1和产TEM-116的肺炎克雷伯菌均对AMP 100%耐药,对第一、二代头孢菌素高度耐药,对第四代头孢菌素FEP敏感,对IPM 100%敏感;而产TEM-116肺炎克雷伯菌对AMC、TZP、AMK、GEN的耐药率较产TEM-1型者高,卡方检验显示二者之间差异存在显著性(P<0.05);分析性等电聚焦显示,TEM-116型β-内酰胺酶PI值为5.4,绝大多数产TEM-116肺炎克雷伯菌有>2条电泳带,仅1株只产TEM-116,它对大多数抗菌药物耐药。结论产TEM-116的肺炎克雷伯菌,对抗菌药物的耐受率比产TEM-1的肺炎克雷伯菌显著升高,排除其他耐药质粒的影响,TEM-116对β-内酰胺的水解能力明显高于TEM-1,具备了ESBLs的特性。     

肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶情况及耐药分析

为了指导临床合理使用抗菌药物,防止高耐药菌株的流行和传播,尤其是控制产ESBLs菌株的流行,我们对来自不同标本中分离的178株肺炎克雷伯菌产ESBLs的情况及药敏进行分析,现报道如下.     

产ESBLs肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因检测

目的 了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌临床分离株中β-内酰胺酶(bla)基因流行状况.方法 采用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐的的表型筛选与确证试验检测ESBLs,应用PCR扩增产ESBLs菌株bla(TEM)、bla(SHV)、bla(CTX-M)基因,并对PCR阳性产物进行克隆后测序确定其基因亚型.结果 46株产ESBLs肺炎克雷伯菌中,基因检出率分别为bla(TEM)11株,占23.9%;bla(SHV)13株,占28.3%;bla(CTX-M)43株,占93.5%;携带1种bla基因菌株21株,占45.7%;携带2种20株,占43.5%;携带3种3株,占6.5%;全部菌株bla(TEM)基因测序结果均为TEM-1亚型,bla(SHV)基因为SHV-11、12、28亚型;部分菌株bla(CTX-M)基因测序结果为CTX-M-15、24、38亚型.结论 产ESBLs肺炎克雷伯菌中ESBLs基因型以CTX-M型为主,其次为SHV型,部分菌株同时携带广谱β-内酰胺酶基因TEM-1或SHV-11;监测产ESBLs细菌β-内酰胺酶基因流行状况,有助于指导临床合理应用抗生素.     

肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶情况及耐药性分析

目的了解临床分离的肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况及对13种抗生素的耐药性。方法收集2005～2007年分离出的216株肺炎克雷伯菌,采用Kirby-Bauer纸片扩散法进行药敏试验,用纸片扩散确证实验检测超广谱β-内酰胺酶。结果共检出产ESBLs菌68株,检出率为31.5%。产ESBLs菌对头孢类抗生素高度耐药,对亚胺培南高度敏感(100%),对头孢西丁,头孢哌酮-舒巴坦,哌拉西林-他唑巴坦等的耐药率较低。结论医院产ESBLs菌的阳性率较高,应加强检测,控制ESBLs的传播,根据药敏结果合理选用药物。     

医院感染肺炎克雷伯菌耐药趋势及β-内酰胺酶基因型分析北大核心CSCD

目的了解医院重症监护病房2009-2013年医院感染肺炎克雷伯菌的耐药趋势以及10种β-内酰胺酶耐药基因的分布,为临床正确选择抗菌药物提供依据。方法 K-B法检测165株肺炎克雷伯菌对20种抗菌药物的耐药性,PCR方法检测:CTX-M、TEM、SHV、GES、KPC、IMI、IMP、VIM、NDM、GIM耐药基因。结果 ICU 5年共分离165株肺炎克雷伯菌,产ESBLs菌株88株,KPN对三代头孢菌素的耐药率逐年升高;自2011年出现碳青霉烯耐药的菌株,耐药率约10.0%;114株扩增到耐药基因片段,检测出CTX-M、TEM、SHV、KPC共4种耐药基因,165个基因片段;最主要的耐药基因型为SHV型,占46.5%。结论产ESBLs菌株的增加和耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的出现,应引起高度重视,关注细菌的变迁和耐药性变化,并合理选用抗菌药物治疗。     

超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药性分析

目的 对超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯氏菌的耐药性研究,更好的指导临床用药.方法 采用Kirby.Bauer纸片扩散法进行药敏试验检测52株产ESBLs的肺炎克雷伯菌的体外抗生素的耐药性.结果 ESBLs肺炎克雷伯菌的阳性率为21.1%,对头孢噻肟、头孢曲松、头孢唑啉耐药率达95%,所有受试菌对亚胺培南均敏...     

超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的耐药性分析

目的 分析与研究产超广谱;内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的逐年递增趋势和耐药性.方法 采用法国生物梅里埃公司ATB细菌鉴定系统进行细菌鉴定,K-B纸片扩散法进行药敏试验.结果 从293株肺炎克雷伯菌中检出产超广谱;内酰胺酶肺炎克雷伯菌103株,检出率35.2%,且其耐药性比较复杂.结论 产超β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌在临床上出现较多,且呈逐年上升趋势,多药耐药明显,须引起临床重视.     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的耐药性及产酶因素分析

目的 分析医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的耐药性及其产酶因素,为指导临床合理用药提供参考.方法 收集医院2011年住院患者不同标本的肺炎克雷伯菌162株,进行耐药性检测和产ESBLs菌株的确认,采用t检验、x2检验及多因素logistic回归进行分析.结果 162株肺炎克雷伯菌中,检出产ESBLs肺炎克雷伯菌65株,检出率40.1％;所有产ESBLs肺炎克雷伯菌对亚胺培南敏感,耐药率为0,产ESBLs肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物耐药率普遍高于非产ESBLs;多因素logistic回归分析结果表明仅糖尿病、住院时间、抗菌药物联用及机械通气是造成细菌产ESBLs的危险因素.结论 连续使用抗菌药物或使用不当易造成细菌产ESBLs,应及时加强肺炎克雷伯菌中产ESBLs及其对抗菌药物耐药性的检测.     

肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶表型及β-内酰胺酶基因型检测

目的 了解临床分离的肺炎克雷伯菌(KPN)产超广谱β-内酰胺酶(ESBIs)及β-内酰胺酶(BLA)基因型存在状况.方法 在2005年9月-2006年4月从住院患者中分离25株KPN,采用美国CLSI推荐的表型确证试验方法检测ESBLs,用PCR及序列分析的方法分析21种(群、簇)BLA基因bla_(TEM)、bla_(SHV)、bla_(LEN)、bla_(OKP)、bla_(CTX-M-1)群、bla_(CTX-M-2)群、bla(CTX_M_9)群、bla_(OXA-1)群、bla_(OXA-2)群、bla_(CARB)、bla_(PER)、bla_(VEB)、bla_(GES)、bla_(LAP)、bla_(DHA)、bla_(ACT/MIR)、bla_(CMY/MOX)、bla_(FOX)、bla_(CMY/LAT)、bla_(ACC).结果 25株KPN中,ESBLs阳性14株(56.0%)、阴性5株(20.0%)、"不确定"6株(24.0%);bla_(TEM)、bla_(SHV)、bla_(CTX-M-1)群、bla_(OXA-10)群、bla_(LAP)和bla_(DHA)基因阳性株数(%)分别为20株(80.0%)、1株(4.0%)、1株(4.0%)、20株(80.0%)、1株(4.0%)、8株(32.0%),而其余15种(群、簇)基因均阴性;21种(群、簇)BLA基因总阳性率为92.0%;其中HZ12593号菌株bla_(LAP-2)基因序列已登录GenBank,注册号为EU529981.结论 临床分离的KPN产ESBIs比例较高,至少存在6种BLA基因,BLA基因型以bla_(TEM)和bla_(OXA-10)群为主,KPN携带bla_(DHA)基因可以影响ESBLs表型确证试验结果.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析

资料报道很多,对于产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)革兰阴性菌感染的防治日益受到临床重视,为了解我院ESBLs菌的发生率和耐药特点,对我院2000年1月～2003年1月从临床标本分离到的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌 206株,用纸片扩散法检测其产ESBLs情况,了解ESBLs菌的检出率,并分析其对12种抗菌药物的耐药性.     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的耐药特点与基因型分析

菌具有多药耐药的特点;TEM型和CTXM型是医院产ESBLs肺炎克雷伯菌中流行的基因型.     

肺炎克雷伯菌耐药性及16种β-内酰胺酶基因分型研究

目的:了解20株肺炎克雷伯菌(KPN)耐药性及β-内酰胺酶产生状况.方法:对20株KPN菌进行了16种β-内酰胺酶基因(TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、PER、GES、VEB、CARB、DHA、ACT-1)检测.结果:20株KPN菌检出TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-9群、OXA-1群、DHA等6种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为85%、25%、25%、20%、25%、70%.20株KPN菌中有19株至少检出1种β-内酰胺酶基因,最多同时检出6种β-内酰胺酶基因.并在国内首次发现CTX-M-55型.结论:该20株KPN菌β-内酰胺类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶密切相关.     

温州地区产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的基因型研究

目的 研究温州地区分离的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的基因型.方法 随机挑取经全自动微生物分析仪鉴定的产ESBLs肺炎克雷伯菌35株,非产ESBLs肺炎克雷伯菌29株;用头孢噻肟、头孢噻肟/克拉维酸和头孢他啶、头孢他啶/克拉维酸双纸片扩散法对肺炎克雷伯菌进行ESBLs检测,采用聚合酶链反应(PCR)法对ESBLs阳性株进行TEM型、SHV型、CTX-M型、VEB型和PER型ESBLs基因检测,对PCR阳性产物进行测序确定基因型别,同时采用PCR法检测整合酶基因.对PCR产物进行测序确定整合酶类别.结果 47株经双纸片扩散法确定为ESBLs阳性株中,经仪器法确定为阳性的为35株,仪器法的敏感性为73.4%;在17株经双纸片法确定为ESBLs阴性的菌株中,经仪器法确定为ESBLs阴性的有12株.仪器法的特异性为70.1%;TEM型、SHV型和CTX-M型阳性率分别为90.0%、86.7%和90.0%;整合酶基因阳性率为93.3%,经测序.所有TEM型为TEM-1 ESBLs;26株SHV型阳性的PCR产物经测序证实,SHV-12的有16株、SHV-11的有6株、SHV-2的有2株及SHV-Ⅰ型2株,在27株CTX-M型中,CTX-M-14型有18株、CTX-M-15型9株.结论 温州地区肺炎克雷伯菌临床分离株的ESBLs基因主要为CTX-M型和SHV型,CTX-M-14和SHV-12是主要的基因型.     

儿科产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌检测与耐药性分析

目的 了解医院儿科患者产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌耐药性变化情况,为临床合理选用抗菌药物提供依据.方法 按照NCCLS标准操作,用头孢噻肟、头孢噻肟/克拉维酸等药敏纸片以扩散法检测,样本为2010年1-12月分离的肺炎克雷伯菌,对其产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药率与2008年进行比较.结果 2010年1-12月分离的产ESBLs肺炎克雷伯菌占57.2％,而2008年为36.8％,差异有统计学意义(P＜0.05),产ESBLs肺炎克雷伯菌,对氨曲南敏感率2010年为19.3％,而2008年为47.8％,呈显著下降(P＜0.05),磺胺甲噁唑/甲氧苄啶及利福霉素仍保持较高的敏感率,3年差异无统计学意义,亚胺培南对产ESBLs肺炎克雷伯菌仍100.0％敏感.结论 近年儿科产ESBLs肺炎克雷伯菌检出数及检出率均有明显增加,耐药性也明显增加,应加强儿科抗菌药物使用的管理.