rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA用于慢性日本血吸虫病的诊断研究

目的探讨rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA用于慢性日本血吸虫病的诊断价值。方法分别以rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)作为包被抗原,通过Immunogold-IgG-Dot-ELISA检测慢性日本血吸虫病患者血清抗体,同时以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核病人血清及健康人血清作为对照。结果 rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA检测日本血吸虫抗体的敏感性和特异性分别为95.00%和97.67%,且与华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎和肺结核患者血清均无交叉反应;诊断慢性日本血吸虫病的阳性预告值、阴性预告值分别为97.44%和95.45%,诊断效率为96.39%,与SjAWA-Immunogold-IgG诊断效率(96.39%)相同。结论 rSj26-Sj32-Immunogold-IgG-Dot-ELISA法可用于慢性日本血吸虫病的诊断。     

rSj26-Sj32-HRP-IgG-Dot-ELISA用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值

目的探讨rSj 26-Sj 32-HRP-IgG-Dot-ELISA用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法利用纯化的rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)建立HRP-IgG-Dot-ELISA检测急性日本血吸虫病患者血清,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核病患者和健康人血清作对照,观察二者的检测结果。结果 rSj 26-Sj 32和SjAWA检测急性日本血吸虫病患者阳性检出率均为100%,特异性分别为95.35%和93.02%;二者均与华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病和泡型棘球蚴病患者血清存在不同程度的交叉反应。结论纯化的rSj26-Sj32融合蛋白是一种较好的免疫诊断抗原。     

卫氏并殖吸虫感染循环抗原检测方法的建立与应用

用CAg-dot-ELISA法和CAb-ELISA法分别对并殖吸虫病临床诊断患者、并殖吸虫病流行区人群、卫氏并殖吸虫早期感染者及其他寄生虫感染者进行循环抗原和抗体检测。用CAg-dot-ELISA检测70份卫氏并殖吸虫病临床诊断患者血清，阳性29份，敏感性为41.5%（29/70），与华支睾吸虫病和日本血吸虫病患者血清分别有25%（5/20）和20%（4/20）的交叉反应，与其他寄生虫感染者血清和健康人血清（60份）均为阴性，特异性为93.6%。CAb-ELISA检测70例卫氏并殖吸虫病临床诊断患者血清阳性67份，敏感性为95.7%（67/70），与华支睾吸虫病和日本血吸虫病患者血清分别有25%（5/20）和20%（4/20）的交叉反应，对其他寄生虫感染者血清和健康人血清的特异性为92.1%。CAg-dot-ELISA和CAb-ELISA分别检测并殖吸虫病流行区人群220份血清，阳性率分别为0和3.2%（7/220）。CAg-dot-ELISA法对辅助诊断并殖吸虫早期感染有一定价值。     

rSj26GST-Sj32融合蛋白-IgG4-ELISA诊断慢性血吸虫病的研究

目的探讨rSj26GST Sj32 IgG4 ELISA诊断慢性血吸虫病的价值。方法用rSj26GST Sj32融合蛋白作为包被抗原,通过rSj26GST Sj32 IgG4 ELISA检测慢性日本血吸虫病患者血清抗体,同时以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核患者血清和健康人血清作为对照。结果该法检测慢性血吸虫病的敏感性和特异性分别为95.00%和100.00%,且与泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎和肺结核患者血清均无交叉反应;诊断慢性血吸虫病的阳性预告值、阴性预告值及诊断效率分别为100.00%、95.56%和97.59%。结论rSj26GST Sj32 IgG4 ELISA可用于慢性血吸虫病的免疫诊断。     

rSj26-Sj32融合蛋白Dot-ELISA检测慢性日本血吸虫病患者血清IgG

目的探讨rSj26-Sj32融合蛋白对慢性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法分别用rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)作为包被抗原,采用Dot-ELISA检测慢性日本血吸虫病患者(40例)血清IgG,同时以华支睾吸虫病(21例)、卫氏并殖吸虫病(13例)、泡型棘球蚴病(10例)、囊型棘球蚴病(9例)、乙型肝炎(20例)和肺结核患者(20例)及健康人(43例)血清作为对照。结果 rSj26-Sj32融合蛋白检测慢性日本血吸虫病患者的敏感性和特异性分别为92.5%(37/40)和94.9%(129/136);SjAWA的为95.0%(38/40)和91.9%(125/136),两种抗原检测率间的差异无统计学意义(P>0.05)。两种方法与华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病和泡型棘球蚴病患者血清均有不同程度的交叉反应;但与囊型棘球蚴病、乙型肝炎和肺结核患者血清均无交叉反应。rSj26-Sj32融合蛋白诊断慢性日本血吸虫病的阳性预测值、阴性预测值及诊断效率分别为84.1%(37/44)、97.7%(129/132)和94.3%(166/176),SjAWA的为77.6%(38/49)、98.4%(1...     

卫氏并殖吸虫TPx基因的克隆、表达和免疫学诊断价值

目的免疫筛选卫氏并殖吸虫成虫c DNA表达文库,克隆并表达卫氏并殖吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx),初步评价其免疫诊断价值。方法用卫氏并殖吸虫病患者的混合血清筛选卫氏并殖吸虫成虫λZAP c DNA表达文库,取阳性噬菌体进行克隆、测序和序列比对分析。将TPx基因全长片段和前端截短片段分别克隆至原核表达质粒pET28a (+)中,构建r Pw TPx (全长型)和r Pw TPx1 (截短型)表达载体。构建的重组蛋白经1 mmol/L的异丙基-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达。使用蛋白抽提剂、溶菌酶和核酸酶裂解表达细菌,用组氨酸标签亲和纯化柱(Ni-NTA树脂)纯化r Pw TPx和r Pw TPx1, SDS-PAGE检测重组蛋白的表达情况。以r Pw TPx、r Pw TPx1和粗抗原作为检测抗原,间接ELISA法检测36份卫氏并殖吸虫病、 15份华支睾吸虫病、 15份日本血吸虫病、 15份片形吸虫病和15份猪囊尾蚴病的患者血清,以及36份健康人血清,评价该重组蛋白的免疫诊断价值。以健康人血清对照组的平均值加上4个标准差作为阳性判断值。所有数据均采用SAS 9.2软件进行统计学分析。结果克隆的卫氏并殖吸虫TPx基因,经原核表达、纯化,获得其可溶性重组蛋白r Pw TPx和r Pw TPx1,相对分子质量(Mr)分别为25 000和22 000。以r Pw TPx作为检测抗原的ELISA检测结果显示,卫氏并殖吸虫病患者、健康者、华支睾吸虫病患者、日本血吸虫病患者、片形吸虫病患者和猪囊尾蚴病患者血清组的吸光度(A450值)分别为0.150±0.092、 0.036±0.014、 0.043±0.019、 0.047±0.013、 0.060±0.022和0.048±0.021。卫氏并殖吸虫病患者血清阳性率为58.3%(21/36), 36份健康人血清、 15份华支睾吸虫病患者血清、 15份日本血吸虫病患者血清、 15份猪囊尾蚴病患者血清均未检出阳性,15份片形吸虫病患者血清假阳性为2/15。以r Pw TPx1作为检测抗原ELISA检测结果则为0.144±0.092、 0.022±0.009、 0.027±0.015、 0.033±0.022、 0.036±0.015和0.032±0.018。卫氏并殖吸虫病患者血清阳性率为88.9%(32/36),健康人血清未检出阳性,15份华支睾吸虫病患者血清仅1份存在交叉反应,15份日本血吸虫病患者血清假阳性为3份,15份片形吸虫病患者和15份猪囊尾蚴病患者血清假阳性均为2份。重组蛋白r Pw TPx的ELISA检测敏感性为58.3%,特异性为97.9%,总符合率为87.1%;r Pw TPx1则分别为88.9%、 91.7%、 90.9%。r Pw TPx1敏感性高于r Pw TPx (P <0.05)。以成虫粗抗原为检测抗原的ELISA检测结果显示,36份健康者血清A450值为0.012,标准差为0.006。敏感性为100%,特异性为83.3%,总符合率为87.9%,与r Pw TPx-ELISA和r Pw TPx1-ELISA检测的总符合率差异无统计学意义(P> 0.05)。结论筛选并克隆了卫氏并殖吸虫TPx基因,表达并纯化全长型和截短型两种重组TPx抗原,构建的全长型和截短型重组TPx抗原作为人体卫氏并殖吸虫病的免疫诊断抗原具有一定的诊断意义。     

血吸虫病快速早期诊断试纸条的研究

目的探索一种血吸虫病快速早期诊断的试纸条检测方法.方法用标记胶体染料的可溶性尾蚴抗原(SCA)作为检测抗原,建立用于血吸虫病早期诊断的简便快速的可溶性尾蚴抗原胶体染料试纸条法(SCA-DDIA),并与可溶性虫卵抗原胶体染料试纸条法(SEA-DDIA)比较,检测感染家兔早期血清和急、慢性血吸虫病人血清中抗血吸虫抗体,并检测卫氏并殖吸虫病、华支睾吸虫病、姜片虫病人和健康人血清.结果早期感染血吸虫家兔感染后首次检出阳性的平均时间为22 d,全部家兔检出阳性为30 d,均早于SEA-DDIA法.检测急、慢性血吸虫病人的敏感性分别为100.0%、93.3%,检测非血吸虫病流行区健康人的特异性为99.0%,与卫氏并殖吸虫病、华支睾吸虫病、姜片虫病人的交叉反应率分别为26.3%、0、0.其敏感性、特异性和交叉反应率与SEA-DDIA法相似.结论 SCA胶体染料试纸条法是一种快速简便的血吸虫病早期诊断方法,并具有较高的敏感性和特异性.     

组分抗原斑点金标免疫渗滤法检测血吸虫短程抗体的研究

目的建立一种可用于检测血吸虫病人短程抗体的斑点金标免疫渗滤法（dot immuno-gold filtration assay,DIG-FA）。方法将血吸虫可溶性虫卵组分抗原（107～121 kDa）包被于混纤膜上,以胶体金标记的抗人IgG为二抗,建立组分抗原-DIGFA。用该法检测慢性血吸虫病人、健康人、卫氏并殖吸虫病人和华支睾吸虫病人血清。同时与血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）-DIGFA比较。结果检测54份慢性血吸虫病人血清,组分抗原-DIGFA敏感性为94.4%,SEA-DIGFA敏感性为96.3%,两种方法检测50份正常人血清的特异性均为100%。检测19份卫氏并殖吸虫病人血清和30份华支睾吸虫病人血清,SEA-DIGFA敏感性分别为26.3%和10.0%,组分抗原-DIGFA均未检出阳性反应。结论应用组分抗原-DIGFA检测血吸虫短程抗体具有较高的敏感性和特异性,且与其他吸虫病几乎无交叉反应,特异性优于SEA-DIGFA。     

华支睾吸虫成虫14～33 ku抗原诊断价值的研究

目的探讨纯化华支睾吸虫成虫14~33 ku抗原在华支睾吸虫病免疫诊断中的应用价值。方法使用SDS-PAGE和电洗提法,从可溶性华支睾吸虫成虫抗原中分离纯化14~33 ku抗原,用此抗原经ELISA方法检测华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、日本血吸虫病、姜片虫病患者血清及健康人血清特异性IgG抗体,并与粗制可溶性成虫抗原和可溶性成虫脱脂抗原ELISA结果相比较。结果检测63例华支睾吸虫病患者血清,纯化华支睾吸虫成虫14~33 ku抗原ELISA阳性率为76.2%,可溶性成虫抗原和可溶性成虫脱脂抗原ELISA阳性率均为100%;检测25例卫氏并殖吸虫病、85例日本血吸虫病、27例姜片虫病患者血清,14~33 ku抗原的ELISA交叉反应阳性率分别为8.0%、3.5%、0,而可溶性成虫抗原分别为80.0%、62.4%、14.8%,可溶性成虫脱脂抗原分别为64.0%、55.3%、7.4%;检测127例健康人血清,14~33 ku抗原的ELISA假阳性率为0,可溶性成虫抗原和可溶性成虫脱脂抗原的假阳性率分别为5.5%、3.1%。结论纯化华支睾吸虫成虫14~33 ku抗原用于华支睾吸虫病免疫诊断的特异性优于粗抗原,但敏感性较低。     

rSj26-Sj32-IgM-ELISA法用于急性日本血吸虫病的诊断价值

目的探讨rSj26-Sj32-IgM-ELISA法用于急性日本血吸虫病的诊断价值。方法用纯化的rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)建立ELISA方法,检测急性日本血吸虫病患者血清中的特异性IgM抗体,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核病患者和健康人血清作对照,比较二者的敏感性、特异性和交叉反应性。结果 rSj26-Sj32-IgM-ELISA和SjAWA-IgM-ELISA检测急性日本血吸虫病患者血清特异性IgM抗体的敏感性分别为98.0%和96.0%,特异性均为97.7%;SjAWA-IgM-ELISA检测华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清时存在不同程度的交叉反应,而rSj26-Sj32-IgM-ELISA则未见交叉反应。结论纯化的rSj26-Sj32融合蛋白对急性日本血吸虫病具有较高诊断价值,可用作急性日本血吸虫病的诊断抗原。     

2种棘球绦虫IgG抗体检测试剂盒应用效果比较

目的 观察不同厂家生产的2种棘球绦虫IgG抗体检测试剂盒的检测效果。 方法 采用2种不同厂家生产的棘 球绦虫IgG抗体检测试剂盒检测相同数量的棘球蚴病人、 正常人血清, 以及卫氏并殖吸虫、 华支睾吸虫、 日本血吸虫和猪囊 尾蚴病人血清, 统计2种方法的特异性、 敏感性和交叉反应性。 结果 2个厂家生产的棘球绦虫IgG抗体检测试剂盒的特 异性和敏感性均为100％。深圳康百得公司生产的试剂盒与卫氏并殖吸虫病、 华支睾吸虫病、 日本血吸虫病和猪囊尾蚴病 的交叉反应率分别为25.00％、 26.09％、 10.00％和87.50％; 珠海海泰公司生产的试剂盒的交叉反应率分别为5.00％、 13.04％、 20.00％和93.75％。2种试剂盒间, 卫氏并殖吸虫病检出率差异有统计学意义 （P ＜ 0.05）, 其他检出率差异均无统 计学意义 （P均 ＞ 0.05）。结论 2个厂家生产的棘球绦虫IgG抗体检测试剂盒均具有敏感性高、 特异性强、 简便快速等优 点; 但需进一步解决与其他寄生虫病的交叉反应问题, 以提高早期诊断的准确性。     

识别血吸虫成虫多肽表位单克隆抗体细胞株的建立及用于检测循环抗原的研究

作者获得１株特异的抗血吸虫成虫２０－２４ｋＤａ蛋白多肽表位的杂交瘤细胞株（ＳｊＡ１１１）。分泌ＭｃＡｂ为ＩｇＧ１,腹水效价１．２×１０６。将ＳｊＡ１１１ＭｃＡｂ－ＨＲＰ结合物用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测４９９例慢性血吸虫病患者的循环抗原（ＣＡｇ）,阳性者３９０例（７８．１６％）;２５例肺吸虫病人,３６例华支睾吸虫病人及１３２例正常人血清中,仅１例肺吸虫病人出现交叉反应。ＣＡｇ的检出率和阳性血清滴度倒数的几何均值（ＧＭＲＴ）随着每ｇ粪便虫卵数（ＥＰＧ）的增加而递增。吡喹酮治疗后各期病人粪孵阴性者ＣＡｇ的转阴率：半年为７５．５０％（１１４／５１）,１年为７３．６８％（８４／１１４）,１年半为８８．０４％（１０３／１１７）。     

单克隆抗体74D_(11)、SJA_(111)检测慢性日本血吸虫病循环抗原的研究

本研究用双抗夹心ＥＬＩＳＡ法检测慢性日本血吸虫病人血清循环抗原，观察血吸虫感染家兔血清循环抗原的动态变化。该方法采用兔抗ＡＷＡ－ＩｇＧ作包被抗体，抗日本血吸虫成虫和虫卵单抗ＳＪＡ１１１和７４Ｄ１１组合作Ⅱ抗，１７２例经粪孵毛蚴确诊的血吸虫病人中，１３６例循环抗原阳性（７９．１％），其中轻度（毛蚴数＜５只／２０克粪）、中度（６－２０）、重度（大于２０）感染者循环抗原阳性率分别为７３．４％、８７．７％、９２．８％，检测６５例健康献血员，２０例肺吸虫病人，１２例华支睾吸虫病人，１０倒包虫病人，交叉反应率依次为１．５％、５％、０％、０％，４２例经吡喹酮治疗后的血吸虫病人用该方法复查，治后３月和６月随访粪孵毛蚴阴转者中，循环抗原阴转率分别为７８．０％和９２．１％，考核疗效明显优于检测循环抗体。用单抗ＳＪＡ１１１检测感染家兔循环抗原动态变化，循环抗原于感染后３—４周可检出，７周达高峰，以后逐渐消退，而循环抗体（ＩｇＧ）推迟１周出现，８－９周达高峰。实验结果表明，血吸虫病血清ＣＡｇ阳性率与感染度有关，可在早期检出，检测方法具有较高敏感性和特异性，可用于早期诊断和疗效考核。     

血吸虫循环抗原检测及疗效考核价值

采用单克隆抗体(McAb)S31/32双夹心ELISA法检测感染不同寄生虫病人血清中循环抗原(CAg)427份,其中慢性血吸虫病188例,阳性检出率为95.2%,晚期血吸虫病阳性率4.5%(2/44),正常53人假阳性率5.7%.测定其他寄生虫感染患者及肝炎病人,除发现肺吸虫病、旋毛虫病和华枝睾吸虫病有交叉反应外,其它均呈阴性反应.同时,检测血吸虫病治疗前、后CAg,计495 份血清,慢性血吸虫病治疗前188例,阳性率95.2%,吡喹酮治疗后3、6、12和36个月,其阴转率分别为20.4%、31.9%、96.2%和87.7%.比较双夹心ELISA法和一步法ELISA检查CAg,无显著差异.测试结果提示,采用单抗S31/32建立的双夹心ELISA检测血吸虫循环抗原有很高的敏感性和良好的特异性,病人在治疗后一年其阴转率高,有很好的疗效考核价值.     

RT-PCR扩增Sj26、Sj32和Sj14-3-3抗原编码基因诊断急性日本血吸虫病的初步研究

目的探讨RT PCR扩增Sj26、Sj32和Sj14 3 3抗原编码基因用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法从急性日本血吸虫病患者血清中提取总RNA,利用RT PCR方法扩增Sj26、Sj32和Sj14 3 3抗原编码基因,用1.2%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定,同时以华支睾吸虫病患者血清、卫氏并殖吸虫病患者血清和正常人血清总RNA作为对照。结果50份急性日本血吸虫病血清均通过RT PCR扩增出了400bp的Sj14 3 3抗原编码基因片段,但未扩增出676bp的Sj26和1 270bp的Sj32抗原编码基因片段;对照组呈阴性反应。RT PCR扩增Sj14 3 3抗原编码基因片段敏感性和特异性均为100%,与华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清未见交叉反应。结论RT PCR扩增Sj14 3 3抗原编码基因可用于急性日本血吸虫病的基因诊断。