4种结核分枝杆菌检测方法的比较

目的建立更快速、准确的痰结核分枝杆菌检测方法。方法收集83份肺结核病患者的痰标本,分别采用涂片抗酸染色、荧光染色法、罗氏培养和DNA环介导恒温扩增(LAMP)试验对结核分枝杆菌进行检测,并对其阳性检出率进行比较。结果 LAMP试验结核分枝杆菌检出率为72.6%,高于罗氏培养法的57.8%(χ2=11.4,P<0.01),同样高于荧光染色的59.8%(χ2=8.6,P<0.01),显微镜下抗酸染色法的检出率最低,为51.8%,明显低于LAMP法(χ2=22.2,P<0.01);荧光染色法与萋尼染色法比较,差异无统计学意义。结论 LAMP试验检测痰结核分枝杆菌具有快速、敏感、简便、特异等优点,在肺结核患者的早期诊断中将发挥重要作用。     

荧光定量PCR在结核分枝杆菌检测中的应用价值

目的比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)与抗酸染色、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,探讨FQ-PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法对311例临床确诊的肺结核病患者和40例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本应用FQ-PCR法、痰涂片抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌。结果FQ-PCR、抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的阳性率分别为47.0%(146/311)、28.3%(88/311)、35.4%(110/311),特异性分别为100.0%、100.0%、95.2%,以FQ-PCR检测的阳性率最高。结论FQ-PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,在临床上有重要应用价值。     

荧光定量PCR技术在痰结核菌检测中的应用

目的 比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术与痰涂片抗酸染色、改良罗氏培养法在检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,探讨FQ-PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值.方法 对240例临床确诊的肺结核病患者和107例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本分别应用FQ-PCR法、痰涂片抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌;另用FQ-PCR法检测14例非结核分枝杆菌DNA以评价该方法对非结核分枝杆菌检测的特异性.结果 FQ-PCR检测结核分枝杆菌的敏感性分别为52.1％ (125/240),明显高于抗酸染色法的24.2％ (58/240)和改良罗氏培养法的35.4％ (85/240),x2=39.36,P＜0.01;FQ-PCR法对14例非结核分枝杆菌检测结果全部为阴性,特异性为100％.结论 FQ-PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,并且可以有效地鉴别非结核分枝杆菌感染,在肺结核的临床实验室诊断上有重要的应用价值.     

TB-LAMP法检测阳性痰标本再培养增加耐药肺结核发现率

目的 评价结核分枝杆菌环介导等温扩增法(TB-LAMP)在检测肺结核患者痰标本LAMP阳性后再培养及表型药物敏感试验对耐药结核分枝杆菌的检出效果。方法 随机收集2017年5月至2019年2月于遵义医科大学附属医院结核病专科门诊就诊和结核病区住院的疑诊肺结核患者7823例,每例留取4份痰标本,随机分别进行1份痰涂片镜检、2份传统罗氏培养和1份TB-LAMP核酸检测,将TB-LAMP阳性标本进一步行传统罗氏培养及表型药物敏感试验,分析TB-LAMP阳性标本再培养对耐药结核病的诊断价值,提高对耐药结核病的防治意识。采用graphpad prism6.0软件进行分析,χ2检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果 所纳入的可疑肺结核患者7823例,TB-LAMP法、传统罗氏培养和涂片镜检的阳性检出率分别为16.6%、7.8%和4.6%,痰TB-LAMP法阳性检出率与痰涂片抗酸染色、传统L-J培养检查相比,差异具有统计学意义(分别为χ2＝593.57,P＜0 .01;χ2＝283.49,P＜0 .01)。TB-LAMP阳性痰标本再培养阳性率为44%(574/1298),其中52.8%(303/574)与传统结核分枝杆菌培养共同阳性,另外47.2%(271/574)为传统结核分枝杆菌培养阴性,而TB-LAMP阳性标本再培养阳性;228株结核分枝杆菌临床分离株进行结核分枝杆菌药物敏感试验,敏感结核分枝杆菌占75%(171/228),耐药结核分枝杆菌25%(57/228),其中RR-/MDR-TB为12.72%(29/228)。结论 TB-LAMP阳性标本再培养可提高RR-/MDR-TB发现率,为耐药结核病的早诊断、早治疗、减少传播提供了检测思路,值得推广应用。     

3种方法检验结核分枝杆菌的比较

目的比较直接涂片抗酸染色法、罗氏培养基培养法、环介导等温扩增法(lamp)检测痰结核分枝杆菌的准确度和特异性,及在临床诊断中的应用价值。方法用3种方法对送检的845个痰标本进行检验,并对检验结果进行分析。结果 845个痰标本中,涂片阳性81个,阳性率9.6%;培养阳性136个,阳性率16.1%;lamp阳性124个,阳性率14.7%。结论培养法是检测结核分支杆菌的金方法,检出率高,其次是环介导等温扩增法,其灵敏度较高与培养法检测结果相比差异无统计学意义(P>0.05);涂片法检出率较低,与另外两种方法相比差异有统计学意义(P<0.05)。     

支气管肺泡灌洗液应用TB-LAMP对菌阴肺结核的诊断价值

 目的 评估支气管肺泡灌洗液（BALF）应用结核分枝杆菌环介导等温扩增技术（TB-LAMP）对菌阴肺结核诊断中的应用价值。方法 收集某院2017年12月—2018年11月临床确诊为菌阴肺结核（3次痰涂片阴性且痰培养阴性）的254例患者的资料,所有患者行支气管检查取支气管镜刷检物或BALF标本,同时分为LAMP组（进行涂片抗酸染色、罗氏培养、TB-LAMP检测）、GeneXpert组（进行涂片抗酸染色、罗氏培养、GeneXpert MTB/RIF检测）。结果 LAMP组和GeneXpert组分别纳入96例、158例菌阴肺结核患者,两组患者性别及年龄比较,差异均无统计学意义（均P>0.05）。LAMP组涂片抗酸染色、罗氏培养、TB-LAMP检测阳性率分别为4.17%（4例）、18.75%（18例）、52.08%（50例）;GeneXpert组涂片抗酸染色、罗氏培养、GeneXpert MTB/RIF检测阳性率分别为3.80%（6例）、12.66%（20例）、54.43%（86例）。TB-LAMP、GeneXpert MTB/RIF分别与涂片抗酸染色、罗氏培养阳性率比较,差异均有统计学意义（均P<0.05）。TB-LAMP与GeneXpert MTB/RIF对结核分枝杆菌检测阳性率比较,差异无统计学意义。结论 BALF应用TB-LAMP对菌阴肺结核具有良好的诊断效能,且具有快速、简单、准确及经济等特点,值得在临床进一步推广应用。     

三种不同涂片法对分枝杆菌涂片阳性率的影响

目的探讨液基夹层杯法、荧光染色法和抗酸染色法检测痰液分枝杆菌的应用价值。方法应用液基夹层杯法、荧光染色法和抗酸染色法分别检测311例临床痰液标本,统计分析3种不同方法的分枝杆菌阳性检出率。结果夹层杯法、荧光染色法和抗酸染色法的阳性检出率分别为15.8%、20.9%、11.9%,其中荧光染色法阳性检出率最高,且操作简单快速,夹层杯法次之,抗酸染色法阳性检出率最低。结论总体来说,荧光染色法操作简单、快速、阳性率较高,是直接检测痰液分枝杆菌比较理想的方法。     

噬菌体生物扩增法检测痰标本中结核分枝杆菌在涂阴肺结核诊断中的应用价值

目的对噬菌体生物扩增法检测痰标本中的结核分枝杆菌在涂阴肺结核诊断中的应用价值进行评价分析,为今后的临床及检验工作提供可靠的理论依据。方法抽取在2009年1月²013年12月间我院收治的临床确诊涂阴肺结核患者200例,对其痰液标本分别展开噬菌体生物扩增法和罗氏培养法进行结核分枝杆菌检测,并对检测结果进行对比分析。结果经对比发现,噬菌体生物扩增法对结核分枝杆菌的检出率较罗氏培养法检出率显著升高(p<0.05)。结论采取噬菌体生物扩增法检测痰标本中的结核分枝杆菌的临床价值显著,可使肺结核诊断率得到显著提高,降低误诊和漏诊发生率。     

BACTEC MicroMGIT系统在结核菌快速培养中的应用评价

目的对BACTEC MicroMGIT系统在结核菌快速培养法中的应用进行相关评价。方法选择2011年10月—2011年12月于本院住院以及门诊治疗的结核患者200例,对其结核杆菌进行培养。应用BBL MGITTM分枝杆菌快速培养管及其配套的BACTEC MicroMGIT荧光判读器检测结核杆菌,并与涂片以阳性率进行比较,与罗氏培养法的培养阳性率进行比较。计数资料采用χ2检验,P0.05为差异有统计学意义。结果 200份临床标本抗酸染色镜检法阳性率为15.50%,快速培养法阳性率为37.50%,罗氏培养法阳性率为24.00%。快速培养法、罗氏培养法与抗酸染色镜检结果进行比较,抗酸染色镜检法阳性检出率低于快速培养法与罗氏培养法,差异具有统计学意义(P0.05)。快速培养法阳性检出率显著高于罗氏培养法,差异有统计学意义(P0.05)。结论BACTEC快速培养法和罗氏培养法及抗酸染色镜检法相比,其具有阳性率高,且高效、简单以及易于操作等特点,成为目前较为理想的一种快速检测结核分枝杆菌的方式。     

结核分枝杆菌培养快速烟酸测定法的研究

目的评价结核分枝杆菌培养快速烟酸测定法在肺结核诊治中的应用价值,建立一种经济、快速的结核分枝杆菌培养方法。方法将能与结核菌代谢产物-烟酸发生颜色反应的物质加入结核分枝杆菌液体培养基中,对128例患者痰标本进行抗酸菌培养,同时以改良罗氏培养法作为对照,对两种方法所用时间进行比较。结果快速烟酸测定法比改良罗氏培养法提前10 d左右。结论快速烟酸测定法比常规结核分枝杆菌培养方法所用时间短,经济、实用、快速,适合在各级结核病医院推广应用。     

环介导等温扩增技术检测痰标本中结核分枝杆菌的研究

[目的]寻找1种快速的，且敏感度高，特异性强的结核分枝杆菌的检测方法。[方法]环介导等温扩增基因检测（Loop-mediated isothermal amplification LAMP）是一种便捷、灵敏度高而又特异性强的核酸基因扩增检测技术。木课题组根据结核分枝杆菌gyrB特征性序列设计3对特征性引物对痰液中和培养基中的结核分枝杆菌进行检测。其中1对环状引物结合于特征性序列中环状结构部分，可极大地加快LAMP反应速度，且不干扰内引物在LAMP反应中作用。（结果]实验结果表明：使用环状引物的LAMP反应可在0.5h内完成，总共分析时削不超过1h。LAMP检测技术的灵敏度比经典PCR技术高100倍左右，LAMP检测技术具有与实时PCR（Real-time PCR）技术相同的特异度。另外，由于LAMP检测技术是在恒温的情况下进行，不需要特别昂贵的仪器设备，检测方法简单，结果判定直接。（结论]该方法的特点和优势可以使之在基层实验室及现场监测方面广泛使用，在快速检测方面具有一定的开发潜力。     

环介导等温扩增技术应用于口岸病原体快速检测的现状及展望

环介导等温扩增技术由于不需要专业仪器,操作简便,价格便宜,被广泛应用于口岸多种病原体的快速检测.此文总结了环介导等温扩增技术在检测结核分枝杆菌、寨卡病毒、登革热病毒、疟原虫及肝炎病毒等方面的最新研究成果,并对其在口岸快速检测方面的应用前景进行综合分析.     

环介导等温扩增法诊断初诊肺结核病研究

目的:初步评价环介导等温扩增法(Lamp)检测痰中结核分枝杆菌的准确性,探讨临床诊断初诊肺结核病人的应用价值。方法:选取249例初诊疑似肺结核病人的痰标本,同时进行Lamp、直接涂片抗酸染色法和改良罗氏培养基培养法检测。结果:剔除培养失败和非结核杆菌的标本,共检测了739份痰标本,其中直接涂片抗酸染色法检出阳性标本70份,阳性率9.47%;培养检出阳性标本118份,阳性率15.97%;Lamp检出阳性标本99份,阳性率13.40%。以培养法为标准,涂片法的灵敏度57.63%,特异度99.68%,符合率为94.30%;Lamp的灵敏度77.12%,特异度98.71%,符合率为96.61%。结论:Lamp在检测初诊疑似肺结核病人中有较高的灵敏度和特异性,适用于基层结核病工作中初诊肺结核病人的诊断。     

应用LAMP同时快速检测沙门菌和志贺菌的效果评价

目的探讨环介导等温扩增（LAMP）方法同时快速检测沙门菌和志贺菌的应用价值。方法通过通用增菌培养,应用LAMP方法和分离培养法分别对76份食堂从业人员粪便标本进行沙门菌和志贺菌检测。结果LAMP方法检出1份标本沙门菌阳性,阳性率为1．32％;分离培养法检出1份都柏林沙门菌,阳性率为1．32％;2种方法的检测结果一致。LAMP方法可在3h内检出沙门菌、志贺菌,而分离培养法需要3-5d,鼠伤寒沙门菌LAMP方法的灵敏度为170CFU／ml,福氏志贺菌LAMP方法的灵敏度为190CFU／ml,与常见的食源性致病菌均无交叉反应。结论与分离培养法相比,LAMP方法特异性高,灵敏度高,不需要特殊仪器,能够在简易的实验条件下,快速、简便地同时检测沙门菌和志贺菌,LAMP方法适用于基层疾病控制实验室开展沙门菌和志贺菌的快速筛查检测。     

嗜肺军团菌环介导等温扩增快速检测方法的建立与应用

目的 建立一种适合基层检验部门及小型实验室使用的快速检测嗜肺军团菌的方法.方法 应用环介导等温扩增技术(LAMP),针对嗜肺军团菌mip基因设计5条引物(2条内引物、2条外引物及1条环引物),并对LAMP反应条件和反应体系进行优化.为验证该方法的特异性、敏感性,针对种系背景明确的12株嗜肺军团菌实验对照菌株、45株嗜肺军团菌地方分离株、6株非嗜肺军团菌、11株其他细菌以及59份外环境水样本进行检测,并将其结果与传统培养分离方法及定量PCR方法比较.结果 所检测的菌株样本中不同血清型嗜肺军团菌经LAMP检测均呈绿色为阳性,非嗜肺军团菌及其他菌株检测均呈橙色为阴性.实验结果表明,LAMP方法的检出率高于传统培养分离方法及定量PCR.应用该方法从菌株核酸的提取至检测完成仅需1.5 h左右,该体系检测灵敏度为5 cfu/ml,而且其检测结果在日(灯)光下通过肉眼即可判断.结论 实验建立的LAMP方法能够快速、灵敏、特异地检测嗜肺军团菌,适合基层检验部门及小型实验室与现场监测等使用.     

利用核酸恒温扩增技术检测下呼吸道感染病原菌的分布特征

目的 探讨环介导温扩增技术(Loop-mediate amplification,LAMP)检测呼吸道病原菌在临床中实际应用价值.方法 收集2018年3月-2019年4月徐州医科大学附属医院住院治疗的911例下呼吸道感染成人患者(＞18岁)的痰液标本,分别进行呼吸道病原菌核酸检测和痰培养,比较分析两种检测方法的检出结果...     

339例疑似肺结核患者Xpert Mtb/RIF检测临床分析

目的：探讨基层医院对结核病快速检测的方法。方法：收集2014年全年结核病门诊入选国家免费项目患者的痰标本,进行Xpert Mtb/RIF检测、荧光显微镜涂片找抗酸杆菌,并将二者进行对比,以培养做为最终标准。对结果进行分析。结果：对339份标本进行Xpert Mtb/RIF,荧光镜抗酸染色及培养,其中检测组175例患者标本中,阳性标本123例,阳性率为70.3%;对照组164中涂片阳性标本58例,阳性率为35.4%。卡方检验结果表明两组有显著性差异（P<0.01）。针对两种方法的阳性标本进行固体培养,培养结果为：Xpert Mtb/RIF检测阳性123例标本,阳性为80例,阳性率为70.3%。对照组阳性标本58例,培养出细菌19例,阳性率为19.3%卡方检验结果表明两组显著性差异（P<0.01）。结论：Xpert Mtb/RIF方法能快速、方便、灵敏检测结核杆菌,并快速培养出结核杆菌及耐药分析。