MNNG诱导日本血吸虫成虫培养细胞的扫描电镜观察

目的 观察甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对不同培养时间日本血吸虫成虫培养细胞作用的变化，确定培养细胞发生转化进而增殖的最佳诱导时间。方法 将23～28d虫龄的日本血吸虫成虫制成细胞悬液，接种于小盖玻片上，培养于含20％小牛血清及常量抗生素的RPMI-1640常规培养基中。将接种培养第4、5、6、7、8d的细胞分别设为5个实验组及其相应的对照组。实验组用含终浓度为3μg／ml MNNG的常规培养基处理48h，对照组用不含MNNG的常规培养基处理相同时间，嗣后换用常规培养基培养4周，再改用含5％小牛血清的培养基继续培养。MNNG诱导后每周取各组培养细胞固定、制样，每组随机取3张小盖玻片进行电镜扫描观察，连续取样11周。结果 经MNNG诱导的日本血吸虫成虫培养细胞表面出现形态各异的结构，既有与对照组类似的表面较光滑和有乳突的培养细胞，也有表面光滑如玻璃珠状的细胞，还有具长纤突、微嵴、皱褶、微绒毛、蜂窝和仙人球状等形态的细胞；实验1组培养至第5周即出现大量分裂细胞。结论 MNNG诱导培养第4d的日本血吸虫成虫细胞培养至第5周可发生转化而出现分裂、增殖。     

甲基硝基亚硝基胍对日本血吸虫成虫培养细胞磷酸酶影响的研究

目的 研究甲基硝基亚硝基胍（MNNG）对日本血吸虫成虫培养细胞碱性磷酸酶（AKP）和酸性磷酸酶（ACP）活性的影响。方法 将虫龄26d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上，在RPMI－1640含20％小牛血清附加常量抗生素的常规培养基中培养第7天时，随机分为实验组和对照组，实验组用含浓度为3μg/mlMNNG的常规培养基处理48h，对照组用不含MNNG的常规培养基处理同样时间，随后换用常规培养基培养3周，当再换用含5％小牛血清的培养基培养1周时，分别用Gomori钙钴法和Gomori硫化铅法对两组培养细胞进行AKP和ACP细胞化学染色，用实验组培养细胞的AKP、ACP活性明显高于对照组培养细胞的活性（P＜0．01）。结论 MNNG能增强日本血吸虫成虫培养细胞AKP、APC的活力，对培养细胞有促生长或／或诱导其转化的作用。     

甲基硝基亚硝基胍对日本血吸虫成虫培养细胞骨架作用的研究

目的 通过观察N－甲基－N－硝基－N－亚硝基胍（MNNG）诱导日本血吸虫培养细胞后骨架的改变,研究MNNG对培养细胞转化、增殖的作用。方法 将日本血吸虫成虫培养细胞接种于小盖玻片上,培养1周时用浓度为3mg/L的MNNG处理48h,然后用RPMI－1640含20％小牛血清附加常量抗菌素的培养基培养2周,再换用RPMI－1640含5％小牛血清的培养基继续培养,用考马斯亮兰染色法和鬼笔环肽荧光染色法显示培养细胞骨架。结果 MNNG诱导后,在培养第4、5周时部分培养细胞骨架排列紊乱,微丝集聚于细胞边缘。结论 MNNG有一定诱导日本血吸虫成虫培养细胞转化、促进其分裂的作用。     

MNNG诱导日本血吸虫成虫培养细胞的扫描电镜观察

目的　观察甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)对不同培养时间日本血吸虫成虫培养细胞作用的变化 ,确定培养细胞发生转化进而增殖的最佳诱导时间。　方法　将 2 3～ 2 8d虫龄的日本血吸虫成虫制成细胞悬液 ,接种于小盖玻片上 ,培养于含 2 0 %小牛血清及常量抗生素的RPMI 164 0常规培养基中。将接种培养第 4、5、6、7、8d的细胞分别设为 5个实验组及其相应的对照组。实验组用含终浓度为 3 μg/mlMNNG的常规培养基处理 48h ,对照组用不含MNNG的常规培养基处理相同时间 ,嗣后换用常规培养基培养 4周 ,再改用含 5 %小牛血清的培养基继续培养。MNNG诱导后每周取各组培养细胞固定、制样 ,每组随机取 3张小盖玻片进行电镜扫描观察 ,连续取样 11周。　结果　经MNNG诱导的日本血吸虫成虫培养细胞表面出现形态各异的结构 ,既有与对照组类似的表面较光滑和有乳突的培养细胞 ,也有表面光滑如玻璃珠状的细胞 ,还有具长纤突、微嵴、皱褶、微绒毛、蜂窝和仙人球状等形态的细胞 ;实验 1组培养至第 5周即出现大量分裂细胞。　结论　MNNG诱导培养第 4d的日本血吸虫成虫细胞培养至第 5周可发生转化而出现分裂、增殖。     

肝基质与MNNG对日本血吸虫成虫培养细胞糖细胞化学作用的研究

目的研究肝基质与甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对日本血吸虫成虫培养细胞糖类物质的影响。方法日本血吸虫成虫细胞分别接种于普通小盖玻片(实验1组)和铺敷有肝基质的小盖玻片上(随机分为实验2组和3组),培养于含20%小牛血清及常量抗生素的RPMI-1640常规培养基中。培养第4d,实验1组和3组细胞分别在含3μg/ml MNNG的常规培养基中培养48h,彻底清洗后继续用常规培养基培养;实验2组细胞用不含MNNG的常规培养基处理相同时间。培养第4w,均换用含5%小牛血清的低血清培养基培养。培养第5~7w,每周取各组细胞进行高碘酸雪夫(PAS)染色和唾液淀粉酶处理后的PAS染色,观察培养细胞内糖类物质的含量及分布变化。取培养第6w(MNNG作用后第5w)的各组染色细胞,用HPIAS-2000图像分析仪测定细胞内代表糖含量的光密度,并作统计学分析。结果实验3组细胞与实验1、2组比较,PAS染色显示的四种类型细胞其着色均显著增强,淀粉酶处理后的PAS染色显示细胞内糖原含量增多,差异均具显著性(P<0.01)。培养过程中,第二类细胞数目逐渐增多,体积增大;分裂细胞增多。这种状况在MNNG处理后第5w最为明显。结论肝基质和MNNG联合可显著增强日本血吸虫培养细胞的糖代谢和分裂增殖能力,二者具协同作用能力。     

EGF对用或未用MNNG诱导的日本血吸虫成虫培养细胞生长的影响

目的研究表皮生长因子(E GF)对用或未用甲基硝基亚硝基胍(MNNG)诱导的日本血吸虫成虫培养细胞的促生长、增殖作用.方法将联合法接种培养至第3天的日本血吸虫成虫培养细胞,一部分在含EGF终浓度分别为0、0.5、1、2、4、8、12、16、20、 24、28 ng/ml的附加20%小牛血清及常量抗菌素的RPMI-1640培养基中培养 ;另一部分,先用含MNNG终浓度为3 μg/ml附加20%小牛血清和常量抗生素的RP MI-1640培养基处理48h,再换用含终浓度分别为0、1、8、12、16、20 ng /ml的EGF培养基继续培养.每日用Olympus IM倒置显微镜观察细胞生长和增殖情况.结果两实验组中,用不同浓度EGF处理后的日本血吸虫成虫培养细胞均在2周以后出现不同程度的脱落、退化;并且,随着EGF浓度的升高, 培养细胞脱落、退化的现象更加严重;两实验组相比,未用MNNG诱导的培养细胞出现脱落和退化现象的时间比用MNNG诱导的相对更早.结论外加EGF对用或未用MNNG诱导的日本血吸虫成虫培养细胞的生长增殖均无促进作用,相反,加速了培养细胞的老化,尤其是对未用MN NG诱导的日本血吸虫成虫培养细胞,这种作用更加明显.     

MNNG对日本血吸虫成虫细胞鸟氨酸脱羧酶活性作用的初步研究

目的　观察 N-甲基 - N-硝基 - N-亚硝基胍 MNNG)诱导后日本血吸虫成虫细胞鸟氨酸脱羧酶 ODC)活性的变化。　方法　将日本血吸虫成虫剪碎后 ,收集成虫细胞 ,培养 1wk后依次用 3μg/ ml的 MNNG处理 4 8h,用 RP-MI- 16 4 0加 10 %小牛血清及常量抗生素的培养基清洗数次并继续培养。对照组不用 MNNG处理。分光光度法测定ODC活性。　结果　 MNNG诱导后第 2、3周 ODC活性显著增高。　结论　日本血吸虫成虫细胞内存在 ODC活性 ,MNNG具有增强 ODC活性的作用     

亚精胺对日本血吸虫成虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的影响

目的以日本血吸虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(Argyrophilicnucleolarorganizerregionassociatedproteins,AgNORs)为评价指标,探讨亚精胺(Spermidine,Spd)对培养细胞的促增殖作用。方法采用联合法将虫龄为24d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上,培养于常规培养基中。接种后第3天,随机分为实验组和对照组。将实验组细胞用无血清培养基配制的终浓度为75μmol/L的Spd处理48h,对照组细胞则用不含Spd的无血清培养基处理,时间相同;PBS清洗3次后换用常规培养基继续培养。于第7、14、21、28、35天分别对培养细胞进行AgNORs染色。使用HPIAS-2000图像分析系统,计算培养细胞核内AgNORs颗粒数及平均吸光值,并作统计分析。结果经Spd处理,各实验组培养细胞AgNORs着色明显深于对照组;但随着培养时间的延长,实验组与对照组细胞着色均逐渐变浅。各实验组细胞AgNORs颗粒数目与平均吸光值高于对照组,二者比较差异有统计学意义(u7=50.95、43.78;u14=55.23、43.54;u21=36.65、32.25;u28=31.6、32.95;u35=28.86、9.54;P<0.01)。各实验组AgNORs吸光值两两比较,除第7天与第14天之间差异无统计学意义外(q=0.008058,P>0.05),其余差异都有统计学意义(P<0.01)。结论Spd具有促进日本血吸虫培养细胞增殖的能力,每周用Spd处理培养细胞1次,能更大限度地促进血吸虫培养细胞的生长。     

条件培养基对日本血吸虫童虫培养细胞LDH及AgNORs的影响

目的以乳酸脱氢酶(LDH)及核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)为评价指标,观察条件培养基对日本血吸虫童虫培养细胞的影响。方法灌注法获取21d虫龄的日本血吸虫虫体,冷消化法制备细胞悬液,调细胞为1×106个/ml,联合法接种细胞。将接种于小盖玻片上的血吸虫细胞随机分为对照(0h)组和24、48、72h3个实验组共4组。对照组用常规培养基即RPMI-1640含20%小牛血清附加常量抗生素(青霉素1×105U/L,链霉素100mg/L)培养,实验组培养基为常规培养基分别与培养24、48、72h的鼻咽癌细胞上清液的条件培养基1∶1的混合液。培养第7天,对培养细胞进行LDH及AgNORs染色;每组随机选取300个LDH染色细胞、50个AgNORs染色细胞输入HPIAS-2000图像分析仪测定培养细胞的吸光度(A)值,并作统计分析。结果日本血吸虫童虫细胞在不同条件培养基作用下,其LDH及AgNORs着色均比对照组深,其中72h组细胞着色最深,其次是48h组,再是24h组,对照组细胞着色最浅,条件培养基培养的各组细胞,LDH含量及AgNORsA值显著大于对照组细胞(q24=8.5287,q48=15.4253,q72=27.6207,P均0.01;q24=13.5690,q48=18.7288,q72=27.0356,P均0.01)。72h的条件培养基作用日本血吸虫童虫细胞后,培养细胞的LDH含量及AgNORsA值明显较对照组高(q0/72=27.6207,P0.01;q0/72=27.0356,P0.01),亦高于其他组(q24/72=19.0919,q48/72=11.8426,P均0.01;q24/72=13.5690,q48/72=18.7288,P均0.01)。结论条件培养基可明显增强日本血吸虫童虫培养细胞LDH的活性及增加AgNORs的含量,且72h的条件培养基对童虫培养细胞的影响最大。     

EGF对用或未用MNNG诱导的日本血吸虫成虫培养细胞生长？…

目的 研究表皮生长因子（ＥＧＦ）对用或未用甲基硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）诱导的日本血吸虫成虫培养细胞的促生长、增殖作用。方法 将联合法接种培养至第３天的日本血吸虫成虫培养细胞，一部分在含ＥＧＦ终浓度分别为０、０．５、１、２、４、８、１２、１６、２０、２４、２８ｎｇ／ｍｌ的附加２０％小牛血清及常量抗菌素的ＲＰＭＩ－１６４０培养基中培养；另一部分，先用含ＭＮＮＧ终浓度为３μｇ／ｍｌ附加２０％小牛血清和常     

食管癌引流淋巴结细胞体外培养及其抑瘤作用的观察

目的观察食管癌引流淋巴结（TDLN）细胞体外培养结果及其抑瘤作用。方法术中切取食管癌患者的TDLN进行培养,分为3组：A组,培养基中添加IL-2;B组,添加IL-2＋IL-4＋粒—巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）;C组,添加IL-2＋IL-4＋GM-CSF＋自身食管癌细胞抗原。于培养第1、7、14、21天行细胞计数;采用流式细胞技术测定TDLN细胞的CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD5＋6、CD8＋3;MTT法测定各组TDLN细胞和淋巴因子激活杀伤（LAK）细胞对自体瘤细胞的抑瘤率。结果每1.0 g淋巴结组织培养第7、14、21天收获细胞数三组间差异不显著;A组第14天细胞明显多于第7天和第21天（P〈0.01）,第7天和第21天之间无明显差异;B组、C组结果类似。三组间CD4＋、CD8＋、CD8＋3细胞数相比,P〈0.05。未经培养的TDLN细胞、LAK细胞和各培养组TDLN细胞对自体肿瘤细胞的杀伤率有显著差异（P〈0.01）。结论TDLN细胞通过培养可以获得大量成熟树突状细胞和T细胞;培养基中添加GM-CSF和IL-4的TDLN培养后对自身肿瘤细胞的杀伤率最高。     

EGCG和叶酸对MNNG诱导的大鼠消化道肿瘤的化学预防作用

背景：表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）和叶酸对消化道肿瘤均具有化学预防作用。目的：研究EGCG和叶酸对N-甲基-N＇-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）诱导的大鼠消化道肿瘤的化学预防作用及其作用机制。方法：159只健康雄性Wistar大鼠分为肿瘤模型组（M组,MNNG100mg/L自由饮用）、EGCG对照组（E组,EGCG12.5mg/d）、叶酸对照组（F组,叶酸1mg/d）、EGCG干预组（ME组,MNNG＋EGCG）、叶酸干预组（MF组,MNNG＋叶酸）、EGCG＋叶酸干预组（MEF组,MNNG＋EGCG＋叶酸）和正常对照组（C组）。第29周停止MNNG和药物干预,第44周终止实验,处死各组大鼠,比较各组消化道肿瘤发生情况,行肿瘤组织Ki-67和原位凋亡检测。结果：与M组相比,MEF组肿瘤发生率显著降低（P=0.011）;ME组和MEF组肿瘤组织Ki-67阳性率显著降低（P=0.038和P=0.009）;ME组、MF组和MEF组肿瘤组织细胞凋亡率显著增高（P=0.000、P=0.003和P=0.000）。各干预组间上述指标差异均无统计学意义。结论：EGCG与叶酸联合应用对MNNG诱导的大鼠消化道肿瘤具有化学预防作用,但并不比两者单用更为有效;两者联用对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响亦与单用无明显差异。     

改良人原生殖细胞培养基培养日本血吸虫生殖类细胞的初步研究

目的探讨改良人原生殖细胞（human primordial germ cells,HPGC）培养基培养日本血吸虫（Schistosoma ja-ponicum,Sj）生殖类细胞的可行性。方法用HPGC培养基和改良HPGC培养基,分别对日本血吸虫36d成虫全细胞进行选择性培养,比较观察培养细胞的生长特性和一般形态,对2种培养基培养4-6周的细胞进行超微结构和AKP染色鉴定,对改良HPGC培养基培养细胞用BrdU掺入法检测细胞增殖与染色体核型分析。结果HPGC培养基培养2周后出现形态和大小较均匀的细胞,6周时多数细胞死亡或崩解;培养4周的细胞超微结构显示异常形态,APK染色呈阳性反应。改良HPGC培养基培养细胞呈半悬浮集落状态,4周内生长较快,形态差异悬殊,随着培养期延长,细胞呈相似的圆形,核和核仁清晰;培养6周后,细胞生长速度减慢,细胞核逐渐消失,至第10周左右死亡;培养8周内均可见细胞分裂相。BrdU掺入法检测培养4周细胞可见细胞核酸合成;培养5周的细胞超微结构显示正常形态,具生殖类细胞特征（胞质中可见大小不等的囊泡）,细胞染色体核型表现血吸虫单倍体和双倍体特征;培养6周的细胞AKP染色呈强阳性反应。结论用HPGC改良培养基能使日本血吸虫成虫的某些类别的细胞增殖,该类细胞具有生殖类细胞的部分特征。     

PGC-1α对高糖状态下血管内皮细胞线粒体生物合成的调节作用

目的探讨过氧化物酶增殖体激活受体γ辅激活因子1α（PGC-1α）对高糖状态下血管内皮细胞线粒体生物合成的影响。方法体外原代培养人脐静脉内皮细胞,分别放置于正常糖浓度（对照组）和高糖浓度（高糖组）培养液中。用含有编码PGC-1α蛋白基因的腺病毒表达载体及空壳载体分别感染上述两组细胞,采用Southern印记法以细胞色素b DNA为探针检测线粒体DNA拷贝数。结果与对照组相比,高糖组线粒体DNA拷贝数显著下降;通过质粒转染过度表达PGC-1α导致细胞总DNA中细胞色素b DNA升高,线粒体生物合成增加。结论内皮细胞中过量表达的PGC-1α可以显著促进线粒体生物合成,这一作用在高糖培养的内皮细胞中更加明显。     

恒稳电磁场对体外培养的日本血吸虫童虫细胞LDH的影响

目的以乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)为评价指标,探讨恒稳电磁场对感染21d虫龄的日本血吸虫童虫培养细胞LDH的影响,筛选恒稳电磁场作用的最适强度与时间。方法将虫龄为21d的日本血吸虫童虫细胞接种于小盖玻片上,培养于常规培养基中。接种后第2d,将一部分细胞分别置于强度为0Gs(对照)、5Gs、10Gs、15Gs、20Gs、25Gs的恒稳电磁场中作用48h;另一部分置于20Gs磁场强度中分别作用为0h(对照)、12h、24h、36h、48h、60h、72h。然后运用酶细胞化学方法对日本血吸虫童虫培养细胞进行LDH染色,Olympus-BH2显微镜下观察并拍照,HIPAS-2000图像分析仪测定其含量,并作统计分析。结果日本血吸虫童虫培养细胞经不同强度恒稳磁场处理后其LDH着色均比对照组深,其中20Gs组的着色最深,其次是15Gs组,再是10Gs组,5Gs组与25Gs组细胞的着色相似,为最浅;统计分析显示,恒稳磁场处理后的各组培养细胞其LDH活性与对照组之间的差异均显著(q5/0=32.7054,q10/0=51.1946,q15/0=74.6917,q20/0=82.5062,q25/0=33.5342,P<0.01);各处理组之间两两比较,除5Gs与25Gs组间差别不显著(q5/25=0.4181,P>0.05)外,其余各组之间差异均有统计学意义(q5/20=49.5414,q5/15=41.4658,q5/10=18.33163,q10/25=18.1466,q10/20=31.3085,q10/15=23.0460,q15/25=41.5878,q15/20=8.5468,q20/25=49.7640,P<0.01)。相同磁场强度作用不同时间后,随着作用时间的延长,细胞的LDH逐渐变深,48h时达到最深,之后逐渐变浅;统计分析表明,不管磁场作用多长时间,培养细胞的LDH活性均明显强于对照组(P<0.01);各实验组之间两两比较亦然。结论恒稳电磁场可以明显增强日本血吸虫童虫细胞的LDH活性,其最佳作用强度与时间分别为20Gs、48h。     

不同剂量丁螺环酮联合帕罗西汀治疗抑郁症增效作用的观察

目的探讨不同剂量丁螺环酮联合帕罗西汀治疗抑郁症的疗效及安全性。方法为前瞻性、开放性设计,研究为期8周。选择符合中国精神疾病分类与诊断标准第三版诊断的抑郁症患者,随机分为帕罗西汀联合丁螺环酮40 mg/d治疗组(研究A组,84例),帕罗西汀联合丁螺环酮20 mg/d治疗组(研究B组,83例),单一帕罗西汀治疗组(对照组,45例)。入组时评定基线汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)评分,治疗后第1、2、4、8周末,复评HAMD、HAMA及副反应量表(TESS)。入组及治疗后第2、8周末分别检查心电图,血、尿常规,肝、肾功能。用SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析、χ2检验,疗效进行Ridit分析。结果三组患者帕罗西汀、唑吡坦剂量差异均无统计学意义(F=0.59,P0.05)。三组患者基线HAMD得分差异无统计学意义(F=2.57,P0.05),治疗后第1、2、4周末研究A、B两组的HAMD得分率低于对照组,差异有统计学意义(F值分别为4.64、5.70、3.29,P0.01或P0.05),提示丁螺环酮联合帕罗西汀对抑郁症状的改善优于单一使用帕罗西汀。经两两比较,治疗后第1、2、4周末HAMD得分情况为:研究A组研究B组对照组,差异具有统计学意义(P0.01或P0.05),提示丁螺环酮联合帕罗西汀治疗,丁螺环酮40 mg/d组的疗效优于20 mg/d组,丁螺环酮联合帕罗西汀比单一使用帕罗西汀能够更有效地改善抑郁症状。治疗后第1、2、4、8周末,研究A、B两组的HAMA得分率低于对照组,有统计学意义(F值分别为3.28、3.31、3.34、4.03,均P0.05),提示丁螺环酮联合帕罗西汀可以有效地改善抑郁症伴随的焦虑症状。经两两比较,治疗后第1、2、4、8周末,HAMA得分研究A组研究B组对照组,提示帕罗西汀联合丁螺环酮40 mg/d组,对抑郁症伴随的焦虑症状疗效优于丁螺环酮20 mg/d组,也优于单一使用帕罗西汀组。研究A组治愈率61.90%、研究B组治愈率60.24%、对照组治愈率37.78%,研究组治愈率高于对照组,有统计学意义(R=0.48,P0.05),三组患者常见的不良反应是头痛(头晕)、恶心(厌食)、出汗、便秘,发生率无统计学意义(χ2=0.52,P0.05)。结论丁螺环酮联合帕罗西汀治疗抑郁症可以有效地改善抑郁症状,同时也能有效地改善抑郁症患者伴随的焦虑症状,提高抑郁症患者的临床治愈率及有效率。丁螺环酮联合帕罗西汀不良反应轻微,治疗期间定期复查血常规是必要的。