短链脂肪酸通过ANGPTL4、ANGPTL6分子抑制3T3-L1前脂肪细胞分化成熟及脂肪储存

目的研究短链脂肪酸(short chain fatty acids, SCFAs)是否直接影响3T3-L1前脂肪细胞的分化成熟及脂肪储存,以及该过程中血管生成素样蛋白4(angioprotein-likeprotein4,ANGPTL4)和血管生成素样蛋白6(angioprotein-likeprotein6,ANGPTL6)分子mRNA和蛋白的表达变化,探讨SCFAs与脂肪细胞成熟及脂肪储存过程中ANGPTL4和ANGPTL6表达的相互关系。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,光镜及油红O染色观察SCFAs(乙酸或丙酸)干预对脂肪细胞分化成熟及脂滴形成的影响;并在诱导过程中(第0、4、8、12日)分别采用Real-time PCR和Western blot检测ANGPTL4、ANGPTL6的mRNA和蛋白表达水平。si-RNA转染技术检测是否ANGPTL4参与了乙酸和丙酸对脂肪细胞分化成熟的作用。结果光镜及油红O染色显示2 mmol/L乙酸或4 mmol/L丙酸干预明显抑制3T3-L1细胞的分化成熟及脂滴形成;在3T3-L1细胞分化成熟过程中,ANGPTL4、ANGPTL6的mRNA及蛋白表达随细胞成熟逐步下调;乙酸和丙酸处理组,细胞第8日和12日时ANGPTL4及ANGPTL6 mRNA水平及蛋白水平较对照组均显著升高(P<0.05)。ANGPTL4 si-RNA转染削弱了乙酸及丙酸对前脂肪细胞分化成熟的抑制。结论乙酸和丙酸能抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化成熟及脂肪储存,其机制可能经由ANGPTL4及ANGPTL6介导。[营养学报,2020,42(1):49-55,67]     

辛伐他汀对人骨髓基质细胞成骨、成脂分化的作用及其机制

[目的]研究辛伐他汀对体外培养的成人骨髓基质细胞成骨分化和成脂分化的影响,并探讨其作用机制。[方法]分离健康成人骨髓基质细胞进行培养,传代后骨分化诱导组和脂肪分化诱导组分别添加10-7mol/L的辛伐他汀,同时进行空白对照。实时荧光定量PCR检测转录因子Cbfa1在成骨细胞中的分化,PPARγ2和LPL在脂肪细胞分化过程中的表达;碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测成骨细胞ALP比活性;流式细胞仪、油红O(oilredO)染色检测细胞成脂分化能力。[结果]骨分化诱导组Cbfa1表达(P﹤0.01)、ALP比活性(P﹤0.05)均高于对照组,脂肪分化诱导组PPARγ2(P﹤0.01)、LPL(P﹤0.05)表达均低于对照组;流式细胞仪脂肪细胞计数及脂肪细胞形成脂滴能力实验组均低于对照组。[结论]10-7mol/L辛伐他汀能促进Cbfa1的表达,增强成骨细胞ALP比活性和细胞外基质矿化;抑制PPARγ2、LPL的表达及脂肪细胞分化。     

脂肪细胞分化过程中脂联素受体的时序性表达(英文)

目的探讨SW872前脂肪细胞分化过程中脂联素受体基因表达的时序性变化。方法体外培养,0.6mM油酸诱导SW872前脂肪细胞分化24h,48h,72h,油红0染色观察细胞内脂肪的聚积;RT-PCR方法检测不同分化时间点脂联素受体1及脂联素受体2 mRNA水平。结果0.6mM油酸诱导分化72h,能成功地将SW872前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞。SW872前脂肪细胞表达两种脂联素受体,诱导分化刺激24h,脂联素受体1 mRNA水平是诱导分化前的1.95倍,脂联素受体2 mRNA水平是诱导分化前的1.61倍;诱导分化刺激48h,脂联素受体1 mRNA水平是诱导分化前的2.16倍,脂联素受体2 mRNA水平是诱导分化前的2.34倍;诱导分化72h,脂联素受体1 mRNA水平是诱导分化前的2.54倍,脂联素受体2 mRNA水平是诱导分化前的4.09倍。结论SW872脂肪细胞表达脂联素两种受体增殖,且两种脂联素受体的基因表达呈分化相关性。     

姜黄素对脂肪细胞脂联素及抵抗素表达影响

目的探讨姜黄素对3T3-L1脂肪细胞脂联素和抵抗素mRNA表达的影响。方法在诱导3T3-L1前脂肪细胞分化过程中加入姜黄素,于第6 d收集细胞,或用姜黄素处理分化成熟3T3-L1脂肪细胞,24 h后收集细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测脂肪细胞中脂联素和抵抗素mRNA水平。结果在3T3-L1前脂肪细胞分化期间,姜黄素2.5,5,10,15和20μmol/L分别使脂联素mRNA表达增强48.7%,25.6%,89.7%,128.2%和207.7%,抵抗素mRNA表达下降了42.3%,35.4%,31.5%,58.3%,33.9%;20μmol/L姜黄素使成熟脂肪细胞脂联素mRNA表达增强203.3%;5,10,20μmol/L的姜黄素分别使抵抗素mRNA的表达降低15.2%,49.0%和55.6%。结论姜黄素可增强脂肪细胞脂联素mRNA表达,降低抵抗素mRNA表达。     

瘦素对体外培养大鼠脂肪细胞ACC、AMPK表达影响

目的观察瘦素对体外培养的大鼠脂肪细胞乙酰辅酶A羧化酶(ACC)及单腺苷酸激活蛋白激酶α1(AMPKα1)mRNA表达的影响。方法取3只Wistar雄性大鼠附睾周围脂肪组织,进行原代脂肪基质细胞分离培养并诱导其成脂分化;采用50 nmol/L大鼠重组瘦素处理分化后的脂肪细胞6 h;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定对照组和瘦素处理组脂肪细胞中ACC、AMPKα1 mRNA表达。结果原代脂肪基质细胞可诱导分化为脂肪细胞,计数分化率约为60%;瘦素处理组大鼠脂肪细胞的ACC mRNA表达水平(0.39±0.29)低于对照组(0.75±0.50),差异有统计学意义(P0.05);对照组和瘦素处理组AMPKα1 mRNA表达水平分别为(0.67±0.39),(0.51±0.34),差异无统计学意义(P0.05)。结论大鼠重组瘦素可抑制体外培养脂肪细胞的脂肪酸合成,其机制可能与AMPKαl无关。     

血管紧张素Ⅱ对前脂肪细胞分化相关转录因子表达的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)对前脂肪细胞分化过程中转录因子PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1表达的调节从而研究AngⅡ调节前脂肪细胞分化可能的分子机制。方法 3T3-L1前脂肪细胞体外传代培养及诱导分化,用RT-PCR技术检测诱导分化过程中不同浓度AngⅡ处理6d对前脂肪细胞分化相关转录因子PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA表达水平的影响。结果 RT-PCR结果显示,100 nmol/L的AngⅡ处理细胞6 d后,PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA的相对表达量与对照组(AngⅡ添加浓度为0 nmol/L)有显著性差异(P<0.05),比对照组相应的转录因子分别增加了48%、50%、43%。结论前脂肪细胞分化过程中AngII能够上调PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA的表达量,AngⅡ可能通过影响PPARγ、C/EBPα和SREBP1-c/ADD-1的表达来调节前脂肪细胞的分化过程。     

染料木黄酮对3T3-L1前脂肪细胞分化的作用及其机制研究

目的观察染料木黄酮(genistein,GEN)对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,探讨GEN抑制3T3-L1细胞分化的作用及分子机制。方法用含1-甲基-3-异丁基黄嘌呤、地塞米松和胰岛素的培养液(MDI)诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,同时用GEN或p38抑制剂SB203580干预。作用6d后,用油红染色实验观察脂肪形成情况;检测细胞培养液中非酯化脂肪酸(NEFA)、甘油三酯(TG)的含量;用Western blotting技术检测细胞中脂肪酸合酶(FAS)的蛋白表达。用GEN预处理30min后,用胰岛素刺激3T3-L1细胞,检测磷酸化p38MAPK(p-p38)的蛋白表达。结果GEN可以有效抑制3T3-L1细胞的脂肪形成,降低培养液中NEFA、TG的含量。胰岛素刺激后,3T3-L1细胞中p-p38的表达迅速增强,并在5min时达到高峰,GEN可以有效降低p-p38的表达。GEN、SB203580均能降低FAS的蛋白表达。结论染料木黄酮能有效抑制3T3-L1前脂肪细胞的脂肪分化,其机制是通过p38途径对FAS的抑制发挥作用。     

脑源性神经营养因子对幼儿前体脂肪细胞分化的抑制作用

目的 探究脑源性神经营养因子(BDNF)对幼儿脂肪细胞增殖和分化的影响,为儿童肥胖症的治疗提供借鉴。方法 采集正常和肥胖儿童脂肪,real-time qPCR和Western blotting分别检测脂肪组织中BDNF、补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白13(CTRP13)和IL-6 mRNA以及蛋白的表达;分离培养原代前体脂肪细胞,采用不同浓度的BDNF和BDNF siRNA分别处理细胞,MTT和油红O染色分别检测细胞增殖和分化,甘油三酯( TG) 测定试剂盒检测细胞成脂情况,Western blotting 技术检测PPARγ、aP2、CTRP13和IL-6的表达。结果 与正常组相比,肥胖组脂肪组织中IL-6的表达较高,而CTRP13和BDNF的表达较低;BDNF对脂肪细胞的增殖没有影响;BDNF促进CTRP13的表达,抑制脂肪细胞分化和IL-6的表达,而BDNF siRNA则作用相反。结论 肥胖儿童脂肪组织中IL-6表达增高,CTRP13和BDNF表达降低,BDNF可抑制幼儿原代脂肪细胞的分化。     

MAPK8基因在小鼠源性3T3-Ll脂肪细胞诱导分化中表达水平的变化

[目的]观察小鼠源性3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化过程中MAPK8基因表达水平的变化,探讨MAPK8基因与肥胖发生之间的关系.[方法]体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,在诱导3T3-L1脂肪细胞分化成熟的不同时段,采用RT-PCR技术检测脂肪细胞中MAPK8基因的mRNA表达水平.[结果]MAPK8基因高表达于3T3-L1脂肪前体细胞中,随细胞分化成熟该基因表达水平逐渐下调.MAPK8基因表达水平除在诱导分化前至第4 d、第2～5 d、第6～10 d时段内差异无显著性外,其余各时段间差异均有显著性(P＜0.05).[结论]MAPK8基因与肥胖发生有关,在3T3-L1细胞分化过程中表达逐渐下调可能有利于脂肪细胞的分化成熟和脂质积聚.     

肝X受体在脂肪生成和脂肪细胞形成中的作用

肝X受体(LXRs)是核受体超家族成员,其通过激活固醇调节元件结合蛋白-1c,促进脂肪的从头合成。此外,LXRs与脂肪细胞的形成亦有密切联系。LXRs的激活可能参与了前脂肪细胞向脂肪细胞分化。介绍肝X受体在脂肪生成和脂肪细胞形成过程中所起的作用及其分子机制,旨在为胚胎干细胞向脂肪细胞定向诱导分化以及多囊卵巢综合征等肥胖相关疾病的发病机制研究提供方向。