免疫印迹法检测结缔组织病患者血清ENA抗体的研究

目的 检测系统性红斑八疮（ＳＬＥ）口才和其它结缔组织病患血清ＩｇＧ类ＥＮＡ抗体。方法 用小牛胸腺提取核抗原（ＥＮＡ），用免疫印迹法（ＷＢ）与对流免疫电泳（ＣＩＥ）检测结缔组织病口才血清ＥＮＡ抗体。结果 Ｓｍ、ＲＮＰ、ＳＳＢ抗体检出率分别为６３．２％、４４．７％、３８．６％、４４．７％，另发现９０ｋｄ，８５ｋｄ，６６ｋｄ等抗体。结论 免疫印迹法可在分子水平检测抗体，特异性高，并可用于抗原表位和发病     

抗人载脂蛋白E多抗的制备与纯化

利用纯化的人载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）作为抗原，常规免疫纯系大耳白家兔，获得高效价、高特异性的抗血清，抗体滴度经ＥＬＩＳＡ法检测达１：１２８００倍稀释度，抗体特异性检验证明抗体只与ａｐｏＥ反应。抗血清经ＰｒｏｔｅｉｎＡ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ亲和层析纯化，分离为碱性洗脱峰Ⅰ和酸性洗脱峰Ⅱ，峰Ⅱ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测在分子量为２７ｋｄ和５４ｋｄ处呈现两条带，分别相当于抗体的重链和轻链的分子量，证明峰Ⅱ为纯化的抗体，这就为建立测定人血清ａｐｏＥ浓度的免疫学方法奠定了基础。     

佐剂对日本血吸虫31／32kd蛋白保护性免疫力的影响

本实验用纯化的日本血吸虫３１／３２ｋｄ蛋白（Ｓｊ３１／３２）辅以ｐｏｌｙａｌｐｈａｏｉｅｆｉｎ（ＰＡＯ）佐剂免疫小鼠，同时比较了Ｓｊ３１／３２辅以福氏完全佐剂（ＦＣＡ）对小鼠保护性免疫力的影响。Ｓｊ３１／３２＋ＰＡＯ组小鼠减虫率为４３．１７％，肝减卵率为６７．０２％，Ｓｊ３１／３２＋ＦＣＡ组小鼠减虫率为２８．７４％，肝减卵率为６４．２４％，Ｓｊ３１／３２组小鼠减虫率为２６．９９％，肝减卵率为５１．     

人巨细胞病毒52kd糖蛋白和150kd磷蛋白基因的表达及临床应用研

〔９３１２〕人巨细胞病毒５２ｋｄ糖蛋白和１５０ｋｄ磷蛋白基因的表达及临床应用研究成果完成单位华西医科大学附二院主研人员唐泽媛吴均王朝晖熊英姚裕家主持鉴定单位四川省卫生厅鉴定日期１９９３年４月获奖情况获１９９３年度四川省科技进步奖二等奖成果简介采用基因...     

钩体39kd疏水外膜蛋白疫苗对豚鼠神经体液和红细胞免疫功 …

为进一步为钩体基因工程疫苗的研究提供理论和实验依据，采用纯化的强毒０１７钩体３９ｋｄ疏水外膜蛋白疫苗免疫豚鼠，对其免疫力进行检定并观察该疫苗对神经体液和红细胞免疫功能的影响。结果显示：ＯｍｐＬ３９在豚鼠体人能产生高产价的阳性抗体，免疫力合格 ；在免疫力答期，ＯｍｐＬ３９疫苗对豚鼠外周血５－羟色胺，去甲肾上腺素，多巴胺等有明显影响，其中５－ＨＴ，ＤＡ，ＮＥ明显降低，５－羟吲哚乙酸明显升高，与空白对照     

赖型钩体重组质粒pDJH_2亚克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

为了探讨ｐＤＪＨ２的１．９ｋｂ０１７株钩体ＤＮＡ片段可否作为钩体重组疫苗广谱保护性抗原的候选，采用重组ＤＮＡ技术，将ｐＤＪＨ２的１．９ｋｂＤＮＡ片段分别与ｐＴ７－７，ｐＲＳＥＴ系列重组，转化入大肠杆菌进行亚克隆，ＩＰＴＧ诱导表达。结果显示：阳性亚克隆ｐＤＪｔ．ｐＤＪｒＢ１能在大肠杆菌中高效表达；对其进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，可见６８ｋｄ和２３ｋｄ处出现新带，与钩体０１７株外膜同分子量蛋白带位置一致，免疫印迹（特异性抗０１７株外膜抗血清）在６８ｋｄ和２３ｋｄ处分别有印迹；用ｐＤＪｔ亚克隆重组质粒主动免疫豚鼠，可抵抗强毒力株攻击，表现出免疫保护作用。本实验结果提示：（１）ｐＤＪＨ２１．９ｋｂ重组ＤＮＡ片段能以不同质粒为载体，在不同大肠杆菌株中高效表达；（２）该重组ＤＮＡ片段表达产物——６８ｋｄ和２３ｋｄ蛋白，可能是赖型钩体０１７株外膜的保护性抗原。     

唇腺活检及抗SS－A、SS－B抗体对干燥综合征诊断价值的探讨

分析了１８６例干燥综合征的临床、免疫学和病理学特点，观察到唾液腺病理变化与血清ＳＳ－Ａ、ＳＳ－Ｂ多肽抗体在诊断原发性、继发性干燥综合征中呈显著正相关（Ｐ＜０．０１），成为干燥综合征准确诊断的重要组成部分。并阐述唾液腺病理分型与疾病轻重、内脏累及的关系。另外尚发现该征患者的多种自身抗体中，抗ＳＳ－Ａ、ＳＳ－Ｂ抗体持续时间长，并强调抗ＳＳ－Ｂ抗体对干燥综合征有高度特异性，是诊断的标志性抗体     

猪心肌球蛋白及其轻,重链亚基的纯化和鉴定

采用一种改进的方法，从１００ｇ猪心室肌中提取心肌肌球蛋白３７０ｍｇ，并进一步分离和纯化其亚基成分，分别得到肌球蛋白轻链２４ｍｇ和重链２１０ｍｇ，核酸含量＜１％，不含有肌动蛋白、原肌球蛋白、肌钙蛋白及其它杂蛋白；ＳＤＳＰＡＧＥ显示，猪心肌球蛋白重链为２００～２２０ＫＤ一条带，肌球蛋白轻链则为２７ｋｄ、２１．４ｋｄ、１９ｋｄ三条带；纯化猪心肌球蛋白的Ｃａ２＋激活ＡＴＰ酶活性为０．２４μｍｏｌＰｉ／（ｍｇ·ｍｉｎ），但其分离后的亚基则无此活性。     

人子宫颈粘液抗菌多肽的分离

用５％乙酸提取人子宫颈粘液可溶物，经电泳凝胶琼脂糖弥散法抗菌试验发现，子宫颈粘液酸溶性提取物有两条主带对致病性大肠杆菌２５９２２株和金葡球菌２５９２３株有强抗菌活性，并分别命名为Ｈｃｐ－１和Ｈｃｐ－２。经Ｔｒｉｃｉｎｅ－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析，Ｈｃｐ－１分子量为６．７ｋｄ、１０ｋｄ和１５．４ｋｄ，Ｈｃｐ－２分子量为４．４ｋｄ、６．７ｋｄ、９ｋｄ和１５．４ｋｄ，均为多肽混合物。实验结果提示子宫颈粘膜能合成一类抗菌多肽，在子宫颈抗菌机理中发挥重要作用。     

低亲和力抗tpA单克隆抗体在tpA纯化中的应用

用低亲和力组织型纤溶酶原激活剂（ｔｐＡ）Ａ链单克在抗体制备了免疫亲和层析柱，纯化５０ＯｍｌＢｏｗｅｓ细胞无血清培液中的ｔｐＡ，回收率达７５％，经ＳＤＳ一ＰＡＧＥ电泳证实纯化的洗脱液蛋白的分子量为６７ｋｄ，仅呈一条带，用发色底物法（Ｓ２３９０）测定表明洗脱液蛋白具有ｔｐＡ活性。     

人脑髓鞘碱性蛋白基因cDNA在大肠杆菌中表达的初步研究

将ＢａｍＨⅠ酶切的人脑髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）基因ｃＤＮＡ克隆片段和表达载体ｐＧＥＸ－５Ｔ重组后转化大肠杆菌，再筛选、增殖和ＩＰＴＧ诱导。结果显示：阳性克隆１０％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ有２条特异区带（４９ｋｄ和３５ｋｄ）；Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交证实该区带具ＭＢＰ抗原特异性；蛋白质含量测定、免疫斑点杂交和ＥＬＩＳＡ分析，该膜蛋白表达量占菌体裂解液蛋白质总量６％（５０ｍｇ／Ｌ菌液）。     

人大颗粒淋巴细胞抗生素肽的部分纯化

为探讨人大颗粒淋巴细胞抗菌分子的抗菌活性，采用制备性酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳对人大颗粒淋巴细胞浆颗粒酸溶性提取物的抗菌组分ＨＬＰ－１，ＨＬＰ－２，ＨＬＰ－３进行分离纯化。结果：Ｔｒｉｃｉｎｅ－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示，ＨＬＰ－２，ＨＬＰ－２均多肽混合物，其分子量范围分别是５．６－１３ｋｄ和５．６－８．８ＫＤ；ｈｌｐ－３Ｏ －７ｋｄ的单一多肽。     

抗人乳腺癌血清抗原单克隆抗体GB2的制备及鉴定

采用人乳腺癌血清抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合，经ＥＬＩＳＡ筛选，有限稀释及克隆后获得了一析玢泌特异抗体的杂交瘤细胞株，命名为单克隆抗体ＧＰ２（ＭｃＡｂＧＢ２）。ＭｃＡｂＧＢ２经硫酸铵及ＤＥＡＥ纤维素纯化后效价达１：２×１０＾６，经琼脂糖免疫双扩证明ＭｃＡｂＧＢ２属小鼠ＩｇＧ１亚类。免疫印迹结果表明ＭｃＡｂＧＢ２识别的抗原呈两条区带，分子量分别为１１６ｋｄ及４５ｋｄ     

抗人乳腺癌血清抗原单克隆抗体GB2的制备及鉴定

采用人乳腺癌血清抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合，经ＥＬＩＳＡ筛选，有限稀释及克隆后获得了一株稳定分泌特异抗体的杂交瘤细胞株，命名为单克隆抗体ＧＢ２（ＭｃＡｂＧＢ２）。ＭｃＡｂＧＢ２经硫酸铵及ＤＥＡＥ纤维素纯化后效价达１∶２×１０６，经琼脂糖免疫双扩证明ＭｃＡｂＧＢ２属小鼠ＩｇＧ１亚类。免疫印迹结果表明ＭｃＡｂＧＢ２识别的抗原呈两条区带，分子量分别为１１６ｋｄ及４５ｋｄ，分布于乳腺癌组织及血清中。     

胆汁泡蛋白ELISA检测法的建立与初步临床应用

目的 建立胆汁泡蛋白快速检测法,筛选有效的胆石症防治手段。方法 获取３３．５ｋｄ胆汁泡蛋白,通过微量抗原免疫法获得高效价抗体,建立ＥＬＩＳＡ标准曲线;并应用ＥＬＩＳＡ法测定正常人、胆石症患者胆汁和血清中泡蛋白含量,同时观察不同溶石防药和利胆冲剂、胆酸钠等对泡蛋白的影响。结果 建立了ＥＬＩＳＡ标准曲线,其曲线方程为Ｙ＝０．０３５Ｘ（ｒ＝０．９９）;正常人胆汁和血清中３３．５ｋｄ泡蛋白含量都明显较胆固     

钩体39kd疏水外膜蛋白疫苗对豚鼠神经体液和红细胞免疫功能影响的研究

为进一步为钩体基因工程疫苗的研究提供理论和实验依据，采用纯化的强毒０１７钩体３９ｋｄ疏水外膜蛋白（ＯｍｐＬ３９）疫苗免疫豚鼠，对其免疫力进行检定并观察该疫苗对神经体液和红细胞免疫功能的影响。结果显示：ＯｍｐＬ３９在豚鼠体内能产生高效价的阳性抗体（ＭＡＴ＞１：３，２００），免疫力合格；在免疫应答期，ＯｍｐＬ３９疫苗对豚鼠外周血５羟色胺（５ＨＴ）、去甲肾上腺素（ＮＥ）、多巴胺（ＤＡ）等有明显影响，其中５ＨＴ、ＤＡ、ＮＥ明显降低，５羟吲哚乙酸明显升高，与空白对照组有显著性差异（Ｐ＜００５）；ＯｍｐＬ３９对红细胞免疫功能也有明显影响，其中红细胞ｃαｂ受体粘附酵母菌花环率，红细胞免疫复合物花环率均明显升高，红细胞免疫粘附因子促进率上升，抑制率下降，两者比值显著增大（Ｐ＜００５）。提示：在免疫应答期ＯｍｐＬ３９除了增强体液免疫外，还能刺激机体影响神经递质的释放，对神经体液免疫功能有明显的调节作用，同时可提高红细胞免疫功能     

大鼠脑缺血后脑甲状腺激素受体的变化

利用Ｐｕｌｓｉｎｅｌｌｉ４血管闭塞法制造ＳＤ大鼠全脑脑血－再灌流动物模型，用受体放射配体结合分析法动态测定大鼠大脑甲状腺腺素受体（Ｔ３Ｒ）含量和受体亲和力（ｋｄ）。结果显示：Ｔ３Ｒ含量在脑血后５ｍｉｎ开始上升（Ｐ，０．０５）；脑反复缺血再灌流后及血再灌注后２天显著升高（Ｐ〈０．０１）；缺血再灌流后１５天显著下降（Ｐ〈０．０１）；ｋｄ改变无统计学意义。上述结果提示甲状腺激素调控系统自由我保护适应性代     

莱姆病螺旋体83kd抗原蛋白基因特异性区段真核及原核表达型载体的构建

从莱姆病螺旋体染色体编码８３ｋｄ抗原蛋白（Ｐ８３）基因序列中选择编码近Ｃ端１５９个氨基酸的基因序列作为扩增的靶序列，自行设计并合成一对寡核苷酸引物，以莱姆病螺旋体Ｂ３１株基因组ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ扩增得到约４７７ｂｐ的扩增片段，再把该片段与质粒载体ｐＢＫ－ＣＭＶ进行重组，经鉴定得到重组质粒ｐＢＸ１。重组质粒ｐＢＸ１可同时在真核和原核细胞中表达，其表达产物可用来制备莱姆病血清学诊断用的标准抗原；该重组质粒也可用来制备用于对莱姆病螺旋体进行分类鉴定的核酸探针。     

人大颗粒淋巴细胞抗生素肽的部分纯化

为探讨人大颗粒淋巴细胞抗菌分子的抗菌活性，采用制备性酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳对人大颗粒淋巴细胞胞浆颗粒酸溶性提取物的抗菌组分ＨＬＰ１、ＨＬＰ２、ＨＬＰ３进行分离纯化。结果：ＴｒｉｃｉｎｅＳＤＳＰＡＧＥ分析显示，ＨＬＰ１、ＨＬＰ２均为多肽混合物，其分子量范围分别是５６～１３ｋｄ和５６～８８ｋｄ；ＨＬＰ３为一７ｋｄ的单一多肽。琼脂糖弥散法和电泳凝胶琼脂糖弥散法抗菌试验显示，ＨＬＰ１、ＨＬＰ２、ＨＬＰ３对致病性大肠杆菌ＭＬ３５Ｐ氨苄青霉素耐药株、金葡球菌ＡＴＣＣ２５９２３株、绿脓杆菌ＡＴＣＣ２７８５３株均有很强的杀菌作用。提示人大颗粒淋巴细胞存在的小分子抗菌多肽可能在人天然免疫的抗感染防御机制中发挥了重要作用     

大鼠脑缺血后脑甲状腺激素受体的变化

利用Ｐｕｌｓｉｎｅｌｌｉ４血管闭塞法制造ＳＤ大鼠全脑缺血－再灌流动物模型，用受体放射配体结合分析法动态测定大鼠大脑甲状腺激素受体（Ｔ＿３Ｒ）含量和受体亲和力（ｋｄ）。结果显示：Ｔ＿３Ｒ含量在脑缺血后５ｍｉｎ开始上升（Ｐ＞０．０５）；脑反复缺血再灌流后及缺血再灌注后２天显著升高（Ｐ＜０．０ｌ）；缺血再灌流后１５天显著下降（Ｐ＜０．０１）；ｋｄ改变无统计学意义。上述结果提示甲状腺激素调控系统由自我保护适应性代偿期进入失代偿期。