Western印迹技术研究神经管发育和神经管畸形鼠胚Bcl-2蛋白的表达

目的：探讨转染外源性bcl-2基因后，能否通过Bcl-2蛋白表达抑制凋亡。从而减轻和改善鼠胚神经管缺陷的程度。方法：分别取维甲酸致神经管缺陷鼠胚、转染正义bcl-2 DNA的神经管缺陷鼠胚、正常鼠胚、转染反义bc／-2DNA的正常鼠胚神经管组织，用Western免疫印迹实验技术检测Bcl-2蛋白和Bax蛋白的表达情况。结果：经转染外源性bcl-2后，神经管缺陷鼠胚的Bcl-2蛋白表达升高，神经管缺陷程度得到改善。结论：维甲酸对内源性bcl-2的抑制包括了mRNA水平和蛋白水平。本实验从蛋白表达水平证实了外源性6cl-2转染成功并有表达。     

正常神经管发育和神经管缺陷中转染重组bcl-2的作用

目的:探讨bcl-2在正常神经管发育和异常神经管缺陷中的作用。方法:构建了重组bcl-2的真核表达载体,建立了维A酸致小鼠神经管缺陷(neuraltubedefects,NTD)模型。用全胚胎培养结合显微注射技术将重组的正义bcl-2表达质粒导入NTD鼠胚后,观察神经管缺陷的改善程度。结果:经转染bcl-2基因后,前脑的关闭率由原来的34%增至80%,中脑的关闭率由原来的17%增至70%,后脑的关闭率也由原来的25%增至增加了70%,脊神经管的关闭率达到100%。结论:RA介导的神经管缺陷可部分被重组的bcl-2基因缓解。     

正常神经管发育和神经管缺陷中转染重组bcl-2的作用

目的：探讨bcl-2在正常神经管发育和异常神经管缺陷中的作用。方法：构建了重组bcl-2的真核表达载体，建立了维A酸致小鼠神经管缺陷(neural tube defects，NTD)模型。用全胚胎培养结合显微注射技术将重组的正义bcl-2表达质粒导入NTD鼠胚后，观察神经管缺陷的改善程度。结果：经转染bcl-2基因后，前脑的关闭率由原来的34％增至80％，中脑的关闭率由原来的17％增至70％，后脑的关闭率也由原来的25％，增至增加了70％，脊神经管的关闭率达到100％。结论：RA介导的神经管缺陷可部分被重组的bcl-2基因缓解。     

小鼠神经管发生中抑凋亡基因bcl-2的表达及其对细胞生长的作用

目的:研究小鼠神经管形成过程中原癌基因bcl-2表达及与程序性细胞死亡(programedcelldeath,PCD)的关系。方法:分别取交配后7.5,8.5,9.0,9.5,10.5d鼠胚做全胚胎交实验。结果:交配后7.5d鼠胚,Bcl-2mRNA杂交信号弥散分布于整个胚体,但胚体前1/2的杂交信号较弱,后1/2则相对较强。交配后8.5d鼠胚Bcl-2mRNA有较强的杂交信号沿逐渐升高的神经褶分布(权重为19)。到交配后9.0d,随着神经管的关闭,Bcl-2mRNA在神经褶的表达下降(权重为8)。到交配后9.5dBcl-2mRNA的表达开始回升(权重为14),到交配后10.5dBcl-2mRNA的表达在胚胎颅神经管升高(权重为19)。结论:Bcl-2在早期神经管发生中的作用是多方面的,参与对细胞凋亡的调节和促进细胞的生长和分化。     

小鼠神经管发生中抑凋亡基因bcl-2的表达及其对细胞生长的作用

目的：研究小鼠神经管形成过程中原癌基因bcl-2表达及与程序性细胞死亡(programed cell death，PCD)的关系。方法：分别取交配后7．5，8．5，9．0，9．5，10．5d鼠胚做全胚胎交实验。结果：交配后7．5d鼠胚，Bcl-2mRNA杂交信号弥散分布于整个胚体，但胚体前1／2的杂交信号较弱，后1／2则相对较强。交配后8．5d鼠胚Bcl-2mRNA有较强的杂交信号沿逐渐升高的神经褶分布(权重为19)。到交配后9．0d，随着神经管的关闭，Bcl-2mRNA在神经褶的表达下降(权重为8)。到交配后9．5dBcl-2mRNA的表达开始回升(权重为14)，到交配后10．5dBcl-2mRNA的表达在胚胎颅神经管升高(权重为19)。结论：Bcl-2在早期神经管发生中的作用是多方面的，参与对细胞凋亡的调节和促进细胞的生长和分化。     

脑源性神经营养因子对持续惊厥后海马凋亡调控基因表达的影响

目的观察外源性脑源性神经营养因子(BDNF)对惊厥持续状态(SC)后海马凋亡调控基因表达的影响。方法选用成年Wistar鼠32只制作氯化锂-匹罗卡品SC模型,另外32只为正常对照组。两组分别于一侧脑室内注射生理盐水、BDNF、抗BDNF抗体或不注射,于注射后6 h处死。免疫组化观察海马Bcl-2和c-Jun蛋白的表达;原位杂交和RT-PCR测定bcl-2和c-jun mRNA的表达。结果正常对照组双侧海马bcl-2及c-jun表达与同组无注射组比较无显著性差异。SC组注射侧海马bcl-2表达由高而低依次为:SC-BDNF组>SC-无注射组=SC-NS组(P<0.05)>SC-抗BDNF组(P<0.05),c-jun表达则呈相反变化趋势(P<0.05);SC组注射对侧海马bcl-2及c-jun表达与无注射对照组相比无显著性差异。结论 SC后,脑室内注射外源性BDNF可能通过上调凋亡抑制基因bcl-2、下调凋亡促进基因c-jun表达发挥其保护作用。脑室内注射BDNF在脑内扩散有限,在临床的应用受限。     

p53基因诱导白血病细胞凋亡的机制研究

目的：探讨p53基因诱导白血病细胞凋亡过程中内源性TGF-β1、TNF-α、端粒酶活性、Bcl-2表达的改变及其意义。方法：利用脂质体将温敏型p53基因[pN53cG(Val135)]导入p53基因缺失的白血病细胞系HL-60、K562细胞，经G418筛选，获得稳定表达p53蛋白的抗性克隆细胞HL-60pN53cG，K562-pN53cG细胞。采用缺口末端标记法、片段化DNA分析、RT-PCR、定量PCR、ELISA、PCR-ELISA、流式细胞术等方法检测外源性p53基因诱导白血病细胞凋亡过程中TGF-β1、TNF-α、bcl-2、端粒酶反转录酶(hTERT)mRNA表达变化、细胞上清TGF-β1水平和端粒酶活性及。TGF-β1、TNF-α反义PS-ODNS对白血病细胞凋亡和Bcl-2蛋白表达的影响。结果:①外源性野生型p53基因诱导细胞凋亡过程中内源性。TGF-β1和TNF-α mRNA表达上调，bcl-2及hTERT mRNA表达下调，细胞培养上清TGF-β1蛋白水平明显升高，端粒酶活性水平下降；②TGF-β1、TNF-α反义PS-ODNS能够明显抑制野生型p53基因诱导细胞凋亡的发生，并使细胞bcl-2 mRNA及蛋白表达恢复到处理前的水平。结论：p53基因诱导白血病细胞凋亡可通过上调内源性TGF-β1和TNF-α水平，下调hTERT mRNA表达及端粒酶活性，抑制bcl-2基因表达而发挥作用。     

bcl-2在HL-60细胞分化和凋亡过程中的表达

细胞凋亡抑制基因bcl-2在髓系造血细胞中的表达与细胞分化程度有关。本研究证实全反式维甲酸(ATRA)可诱导HL-60细胞凋亡。流式细胞仪分析表明,在HL-60细胞分化凋亡过程中bcl-2表达逐渐下降,凋亡细胞bcl-2表达水平较低,而未凋亡细胞bcl-2仍维持在高水平。上述结果提示:经ATRA诱导分化成熟的HL-60细胞与正常粒细胞相似,最终走向凋亡;bcl-2表达降低可能对终末分化细胞凋亡有易化作用;未凋亡细胞bcl-2高表达可能是肿瘤细胞耐药和白血病复发的重要因素。     

大鼠脑出血模型中神经细胞凋亡的特征及Bcl-2蛋白对细胞凋亡的调控

目的:研究大鼠脑出血灶周围是否存在细胞凋亡及Bcl-2蛋白的表达。方法:SD大鼠50只,随机分为5组,10只为对照组,其余40只建立大鼠脑出血模型,分别于模型制备后12,24,48,72h取脑组织,应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,免疫组化SP法检测Bcl-2蛋白。结果:正常细胞对照中未见TUNEL及Bcl-2阳性细胞,其余各组中TUNEL及Bcl-2阳性细胞均有不同程度表达。凋亡率随出血后时间不同而发生相应改变,在出血后48～72h达到高峰,TUNEL阳性细胞率峰值为(24.50±2.69)%,实验组与对照组间差异有显著性意义(P<0.05)。Bcl-2蛋白在出血灶周围细胞中亦有表达,其阳性表达率峰值为(20.76±1.97)%,且Bcl-2蛋白的表达与凋亡细胞之间并无明显线性关系。结论:细胞凋亡参与了脑出血后神经细胞的继发损伤过程,其在出血后的表达存在一个时间窗,对临床及时治疗有一定指导意义;Bcl-2蛋白在出血后一定时间内持续升高,但与细胞凋亡不同步,表明了bcl-2的抑制细胞凋亡的作用。     

转染bcl-2反义寡核苷酸诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的体外实验研究

目的 :体外研究bcl- 2反义寡核苷酸对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响 ,旨在寻求提高肿瘤细胞放射敏感性的方法。方法 :(1)免疫组化、半定量RT -PCR法鉴定ASODN的有效性。 (2 )Giemsa染色、流式细胞术凋亡指数 (AI)、DNALadder检测细胞凋亡。结果 :(1)转染后 ,免疫组化结果示Bcl- 2蛋白表达降低 ;半定量RT -PCR结果显示bcl- 2mRNA表达较对照组明显减弱 (P <0 0 5 )。 (2 )转染后 ,Giemsa染色可见凋亡小体 ;流式细胞术结果显示转染后AI为 :6 6 0± 0 70 % ,明显高于对照组 1 79± 0 19% (P <0 0 5 ) ;DNALadder呈现具有凋亡特征的梯带。结论 :(1)本实验所设计的ASODN能有效地抑制bcl- 2基因的表达。 (2 )转染ASODN (bcl-2 )能够显著增加Hela细胞凋亡。进而有望通过转染ASODN提高肿瘤细胞的放射敏感性。     

Prenatal screening for open neural tube defects

The era of prenatal screening for serious birth defects began in the 1970s with the discovery that amniotic fluid and maternal serum levels of alpha-fetoprotein (AFP) were increased in pregnancies affected by fetal open neural tube defects. Since then, prenatal screening has become a part of routine obstetric care. In this article, the use of AFP in prenatal screening for open neural tube defects is discussed in the context of the laboratory and the laboratory's interactions with the practicing obstetrician.     

Folic acid and prevention of neural tube defects

QUESTION Now that flour and pasta have been fortified with folic acid in Canada, do I still need to recommend folic acid supplements to my patients who are of child-bearing age? If I should recommend supplements, when should I recommend them, and what is an appropriate dose?ANSWER Non-pregnant women should consume 400 μg of folic acid daily, and pregnant women should consume 600 μg of folic acid daily. Mean intakes of folate in Canada before fortification were around 200 μg/d or less. Fortification increased intake of folic acid by up to 100 μg/d. You should discuss the importance of folic acid with your patients who are planning pregnancy; it is recommended that a folic acid supplement or prenatal multivitamin containing at least 400 μg of folic acid be consumed daily. The upper limit for folic acid is 1 mg/d. Women in intermediate- to high-risk categories for neural tube defects, such as a previous neural tube defect–affected pregnancy, should take 4 to 5 mg of folic acid daily.