基于UPLC-TQ-MS考察不同树龄银杏叶双黄酮含量变化规律

目的:建立超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法同时测定银杏叶中5个双黄酮成分的含量。方法:采用UPLC BEH C_(18)色谱柱(2. 1 mm×100 mm,1. 7μm),流动相0. 10%甲酸溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0～3 min,60%A; 3～4 min,60%～50%A; 4～6 min,50%A; 6～8 min,50%～0A),流速0. 3 m L·min~(-1),柱温35℃,进样量1μL。结果:穗花杉双黄酮、白果黄素、银杏素、异银杏素、金松双黄酮分别在0. 02～13. 20 mg·L~(-1)(r=0. 996 3),0. 05～23. 60 mg·L~(-1)(r=0. 995 5),0. 09～18. 60 mg·L~(-1)(r=0. 992 7),0. 10～21. 00 mg·L~(-1)(r=0. 998 8)和0. 06～16. 00 mg·L~(-1)(r=0. 996 7)线性关系良好。5个双黄酮加样回收率分别为101. 50%,98. 78%,97. 59%,97. 24%,101. 09%,RSD分别为2. 7%,2. 7%,3. 1%,2. 8%,1. 3%。银杏叶中双黄酮含量差异性较大,穗花杉双黄酮、白果黄素、银杏素、异银杏素、金松双黄酮的质量分数分别为121. 30～434. 74,268. 39～847. 14,251. 80～1 297. 10,195. 87～691. 10,477. 48～3 003. 90μg·g~(-1),总双黄酮质量分数1 474. 45～5 635. 40μg·g~(-1),但显示具有一定的规律性,即低树龄银杏叶含总双黄酮较高,随着树龄的增长,总双黄酮含量逐渐降低。结论:该方法专属性强,为银杏叶双黄酮类化合物的质量控制提供了一定的参考。     

银杏叶黄酮的提取及其注射液的制备

目的探讨银杏中黄酮提取及其注射液制备工艺.方法用大孔树脂吸附和乙醇洗脱法制备银杏黄酮;用所得提取物制备注射液;用HPLC法测定提取物及所制备注射液中总黄酮含量.结果本法所得提取物中总黄酮为含量20.15%,得率为9.18%;银杏注射液含总黄酮4.2 mg/5 ml/支.结论本提取方法简便易行,提取目的产物效率高;注射液符合设计要求.     

高效液相方法和络合显色方法测定银杏黄酮含量的比较

目的:考察在银杏黄酮含量的测定中能否用络合显色方法代替高效液相方法来进行。方法:将银杏黄酮粉溶液过大孔吸附树脂,用络合显色方法和效液相方法分别检测流出液中黄酮浓度,计算大孔吸附树脂的吸附量和吸附率并进行比较。结果:用络合显色方法测得的实验结果比高效液相方法的结果平均大36.4%,但计算得到的吸附率结果相比没有显著性差异。结论:络合显色方法可以在一些特定实验中代替高效液相方法,在数值的检测中不能代替。     

多种药用裸子植物中双黄酮的定量测定

目的用HPLC法同时测定多种药用裸子植物中穗花衫双黄酮、扁柏双黄酮及银杏双黄酮的量。方法采用Hanbon Lichrospher C18(150 mm×4.6 mm,5μm)柱,甲醇-0.1%甲酸水梯度洗脱,检测波长337 nm,体积流量1.0 mL/min,柱温30℃。结果所测样品中双黄酮类成分的量差异大,其中,穗花杉双黄酮的量在0.08~4.61mg/g;扁柏双黄酮的量在0.03~4.68 mg/g;银杏双黄酮的量在0.10~3.03 mg/g。穗花杉双黄酮在所测样品中存在比较普遍,而银杏双黄酮则相对较少。此方法加样回收率和线性范围均符合要求。结论本方法结果准确、灵敏度高、重现性好,可作为部分药用裸子植物中双黄酮类成分的质量控制定量方法。     

马齿苋不同提取部位抗氧化活性的比较

目的:研究马齿苋不同提取部位的体外抗氧化活性。方法:采用苯酚-硫酸比色法测定马齿苋提取物中多糖含量,紫外分光光度法测定马齿苋提取物中总黄酮含量;在体外化学模拟条件下,采用Fenton反应法和模拟机体中黄嘌呤与黄嘌呤氧化酶反应系统分别测定马齿苋多糖、总黄酮对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除能力。结果:用紫外分光光度法测得马齿苋多糖提取物中多糖百分含量为39.6%,黄酮提取物中总黄酮百分含量为10.51%;多糖剂量为4.53 mg/ml对O2.-的抑制率只有2.4%,与多糖比较,黄酮对O2.-和OH.均有良好的清除能力,在剂量为0.59 mg/ml时清除O2.-可达43.7%,剂量在0.59 mg/ml～4.92 mg/ml对O2.-有良好的清除作用;而两者对OH.的清除能力明显强于O2.-,多糖在剂量为0.04 mg/ml～0.49 mg/ml,对OH.的抑制率为37.0%～90.7%,黄酮提取物剂量在0.02 mg/ml～0.18 mg/ml时对OH.的抑制率为32.0%～90.2%,且均呈良好的量效关系。结论:在两种测定方法中马齿苋总黄酮的抗氧化能力明显强于多糖,表明总黄酮是马齿苋抗氧化活性的主要成分。     

水解时间对银杏黄酮含量的影响

目的:优选测定银杏黄酮含量时的水解时间.方法:用甲醇-25%盐酸(4:1)的混合液25ml热回流水解后稀释,用HPLC法测定银杏黄酮含量.以槲皮素、山萘素和异鼠李素为对照品,甲醇-0.4%磷酸50:50为流动相,Shimpack CLC-ODS(150mm×6mm)为固定相,检测波长为360nm,柱温30℃.结果:银杏叶、银杏叶粗提物、银杏叶精制物水解2.0h时银杏黄酮的检测含量最高.结论:用甲醇-25%盐酸(4:1)的混合液热回流测定银杏叶和银杏叶提取物的黄酮含量时水解2.0h为最佳.     

银杏磷脂复合物的制备工艺优化

目的优化银杏提取物与磷脂形成复合物的制备工艺。方法以银杏提取物中黄酮复合率为评估标准,采用单因素(溶剂)和正交设计试验考察各因素对复合率的影响;并用高效液相色谱法测定银杏磷脂复合物中黄酮醇苷的含量。结果确定银杏磷脂复合物在室温下的最优制备条件,即以四氢呋喃为反应溶剂,银杏与磷脂的投料比为1∶2,反应时间为20h。结论在室温下银杏磷脂复合物的形成受溶剂、反应物投料比、反应时间的影响较大。     

酶解-溶剂联合提取银杏黄酮的工艺研究

目的:研究酶解与溶剂联合提取银杏叶中黄酮类化合物的最佳工艺条件.方法:以黄酮得率为考察指标,通过单因素试验及正交实验确定最佳提取工艺.结果:酶解-溶剂联合提取银杏黄酮的最佳工艺条件是:酶解pH值为5.7,酶解浓度为0.4 mg/mL,酶解温度为45℃,酶解时间为2h,液固比为20∶ 1,提取温度为70℃,提取时间为2h,乙醇浓度为70%,银杏黄酮平均得率为3.62%.结论:采用酶解-溶剂联合提取银杏黄酮,工艺方法简单,可大大提高原料利用率.     

绿康银杏叶片质量标准初步研究

目的:研究并制定绿康银杏叶片的质量控制方法.方法:采用薄层色谱法对绿康银杏叶片中的有效成分银杏叶内酯进行定性鉴别,采用GC/MS法测定其中紫苏子脂肪油中的脂肪酸组成,并用高效液相色谱法测定银杏黄酮、银杏内酯的含量,对其中限量的银杏酸进行了测定.结果:精密度试验RSD为1.2%～2.5%(n=5),稳定性试验24 h内稳定不变,峰面积与其浓度线性关系良好(r值均为0.999以上),平均回收率均为95%以上.结论:本法结果准确,可作为该制剂的质量控制方法.     

微波技术辅助测定补阳还五汤中黄酮的含量

目的　提取补阳还五汤中总黄酮和水溶性黄酮并测定其含量。方法　用微波辅助萃取法提取 ,提取时间 2 0 min,微波功率 32 5 w;用改进的铝盐分光光度法测定含量。常温显色 ,测定波长λ=5 2 4 nm,回归方程 Y=0 .0 0 2 5 +0 .3342 9X ,r=0 .99993,加标回收率在 94 .7%～ 10 0 .97%。结果　补阳还五汤中总黄酮含量为 4 .4 0 mg/ m L ,水溶性黄酮含量为 1.2 7m g/ m L。结论　微波辅助萃取缩短了提取时间 ,提高了收率 ,黄酮的测定方法简便 ,准确可靠。     

HPLC测定南方红豆杉叶中两种双黄酮含量

目的:建立南方红豆杉叶子中金松双黄酮和银杏双黄酮两种双黄酮含量的HPLC法。方法:以Agilent Eclipse XDB-C18柱(4.6mm×150 mm,5μm),以0.1%甲酸水(A)-甲醇(B)为流动相,梯度洗脱(0-20min,40%B,20-35 min,40%-70%B,35-45 min,70%B),流速1 m L/min,检测波长337 nm,柱温30℃。结果:金松双黄酮含量明显高于银杏双黄酮。此方法加样回收率和线性范围均符合要求。结论:该方法简便快速,可用于南方红豆杉叶子中金松双黄酮与银杏双黄酮的含量测定。     

银杏黄酮抑制Aβ1-42聚集和纤维形成的分子机制

目的:探讨EGb761中银杏黄酮、银杏内酯抑制Aβ聚集和纤维形成药物作用的分子机制。方法:用园二色谱(CD)和傅里叶变换红外光谱法(FT-IR)曲线拟合定量分析和特征频谱分析Aβ老化后和银杏黄酮、银杏内酯分别干预后二级结构的变化。结果:通过1700～1600cm-1之间的酰胺Ⅰ带和曲线拟合分析,Aβ1-42单独孵育30min到72h,β-折叠片增加了18.50,与银杏黄酮、银杏内酯孵育72h,β-折叠片的含量下降了50.95,36.09,β-转角的含量升高56.56,46.56。呈现出明显的β折叠片向β-转角的转化。基团特征峰谱位显示,酮类和烷烃类的-CH2和-CH参与了Aβ1-42的分子变构。结论:EGb761中银杏黄酮可能是通过抑制Aβ1-42β-折叠形成,Aβ1-42肽侧链基团发生了化学修饰达到抑制Aβ聚集和纤维形成作用。     

银杏黄酮对颈淋巴阻断后蛛网膜下腔出血脑损伤的缓解作用

 目的 探讨银杏黄酮对颈淋巴阻断（CLB）后蛛网膜下腔出血（SAH）继发性脑损伤的保护作用。方法 将Wistar大鼠随机分入对照组、SAH组、SAH+CLB组、SAH+CLB+生理盐水组、SAH+CLB+银杏黄酮50 mg组、SAH+CLB+银杏黄酮200 mg组,银杏黄酮经腹腔注射给予。制作CLB 和SAH模型。于诱导SAH后3 d,用激光多普勒血流计测定局部脑血流量（rCBF）,干湿重比较法测定脑组织含水率,免疫荧光法检测血红素氧合酶-1（HO-1）表达。结果 SAH后3 d rCBF显著降低,CLB可导致rCBF进一步下降,银杏黄酮可减轻rCBF下降的程度;SAH导致脑组织含水率升高,并在CLB时进一步增加,银杏黄酮对之具有拮抗作用;SAH促进脑组织HO-1表达,CLB后HO-1表达进一步增加,银杏黄酮促进CLB后SAH大鼠脑组织HO-1表达。结论 CLB可加重SAH后脑损伤,银杏黄酮对之具有一定缓解作用。     

中药微量元素Cu和总黄酮测定与清除自由基功效关系

目的:通过对治疗呼吸系统疾病中草药中微量元素铜和总黄酮的含量测定,分析微量元素Cu与总黄酮含量的相关性。方法:选取8种中草药板蓝根、五味子、黄芩、紫草、银杏、金银花、柴胡、川芎,粉碎、干燥至恒重,用原子吸收分光光度计测定其微量元素铜的含量,采用70%醇提法,提取药物中总黄酮,用紫外分光光度法测定药物中总黄酮的含量。分析研究黄酮化合物与微量元素Cu协同抗氧化清除自由基的作用机制及其功效。结果:8种治疗呼吸系统疾病中草药中含有丰富的微量元素Cu,含量最高的是柴胡,含量最低的是板蓝根,总黄酮含量较高的有银杏叶、黄芩、川芎、紫草、金银花。结论:不同药物中所含的总黄酮和Cu元素含量具有一定的差异,药材生长环境不同,产地不同,会影响到化学成分的含量,从而影响到药效。银杏叶、金银花、紫草中Cu的含量较高,这几种药物中总黄酮的含量也较高。中药中的黄酮类化合物和微量元素均具有重要的作用,但并不是单独发挥其药效作用,微量元素与黄酮可结合成金属配合物,测定结果为进一步探讨草药抗衰老、清除自由基的机理提供依据。     

硝苯地平与银杏黄酮的体外代谢性相互作用

 目的通过体外代谢获得药物相互作用的有关数据,以预测临床联合用药时发生代谢性药物相互作用的可能性。方法以HPLC测定孵育液中剩余银杏黄酮的浓度,计算共孵育药物硝苯地平对银杏黄酮3个苷元的IC₅₀值和K_i值;以HPLC测定孵育液中硝苯地平的浓度,计算其代谢抑制率。结果硝苯地平与银杏黄酮进行体外共孵育时,代谢互受影响。结论两药合用时宜慎重。     

银杏叶中双黄酮成分的提取与测定

目的分离纯化银杏Ginkgo biloba叶中的双黄酮类成分,考察银杏叶变黄前后黄酮类成分质量分数的变化。方法从自然脱落的银杏叶中提取分离双黄酮类成分,对其乙醇提取物的二氯甲烷部位进行了分离,通过硅胶柱色谱和半制备液相方法对目标成分进行制备,采用HPLC法对银杏叶中的双黄酮进行了测定。结果分离的4个化合物分别为去甲银杏双黄酮、银杏双黄酮、异银杏双黄酮和金松双黄酮。对变黄前后银杏叶中4种双黄酮进行测定,结果表明,自然黄叶前3周内,银杏叶中双黄酮量逐渐降低,质量分数差别达30%左右。结论 HPLC法可用作银杏叶中双黄酮的测定,方法简便、可靠,能用于银杏叶的质量控制。同时,制备条件可对快速制备双黄酮对照品提供依据。     

不同树龄银杏叶在不同季节中总银杏酸的动态变化规律

目的:探索栽培种植的不同树龄银杏叶在不同生长季节中总银杏酸的含量变化规律.方法:采用HPLC测定银杏叶中总银杏酸的含量.色谱条件为Alltima C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-1%冰醋酸水溶液(90:10),流速1.0 mL·min~(-1),检测波长310 nm,柱温35℃,进样量20μL,外标法计算含量.结果:银杏叶中总银杏酸含量范围为0.48%～2.51%.不同采收期银杏叶中总银杏酸含量呈先上升后逐渐下降趋势,5月底6月初含量最高;不同树龄银杏叶中总银杏酸含量树龄大的较低,树龄小的较高.结论:这一变化规律为确定银杏叶的采收期提供了科学依据.     

黄芩中主要黄酮类成分的含量分析

目的:建立黄芩中主要黄酮类成分的高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)含量测定方法,并研究产地、生长年限、采收期、栽培和加工方法等对主要黄酮类成分含量的影响.方法:采用Thermo ODS-2 Hypersil色谱柱(4.6 min×250mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水一四氢呋喃为流动相进行梯度洗脱,检测波长274 nm,流速1.00 mL·min~(-1),柱温26℃,进样量20μL.结果:6个主要黄酮,黄芩苷(1)、千层纸素A苷(2)、汉黄芩苷(3)、黄芩素(4)、汉黄芩素(5)和千层纸素A(6),分别在选定范围内线性关系良好(R~2≥0.999 3),平均加样回收率介于96.6%～103.0%,RSD均小于5.0%(n=9).结果:不同产区黄芩质量差异很大.传统道地和传统非道地黄芩药材中黄酮含量没有显著性差异,但现在道地与非道地、传统道地与现在道地黄芩药材之间化合物1,2以及6个黄酮含量之和存在较显著差异;生长年限对药材质量影响不是特别显著,但一、二年生药材中的黄酮含量稍高;春季采收比秋季采收的黄芩黄酮含量高;野生与栽培药材中的黄酮含量除化合物3,6外,其他没有显著性差异;与药材比较商品饮片中黄酮苷的含量较低,而黄酮苷元的含量则较高.结论:本法简便、准确、重现性好,可作为黄芩药材质量检测的方法.     

银杏黄酮对人单核细胞泡沫化形成的作用研究

目的:银杏黄酮具有多种生理活性,是临床治疗和预防心脑血管疾病的首选天然药物。通过观察银杏黄酮对人单核细胞THP-1源性泡沫细胞胆固醇含量的影响,探讨银杏黄酮对人单核细胞THP-1泡沫化形成的机制。方法:以氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人THP-1单核细胞源性巨噬细胞形成泡沫细胞模型,通过油红O染色观察银杏黄酮对泡沫细胞形成的影响,胆固醇氧化酶法测定细胞内总胆固醇蓄积情况。结果:利用ox-LDL能使人单核细胞THP-1形成稳定的泡沫细胞模型,用银杏黄酮干预后,泡沫细胞中总胆固醇的含量显著减少。结论:银杏黄酮能抑制THP-1源性泡沫细胞的形成,并减少THP-1源性泡沫细胞内脂质含量。     

HPLC法测定复方银杏口服液中阿魏酸的含量

目的:采用HPLC法测定复方银杏口服液中阿魏酸的含量.方法:流动相为甲醇-1%冰醋酸(45∶ 55),检测波长为320 nm,流速1.0 ml/min,柱温25℃.结果:阿魏酸进样量在0.176～0.88 μg范围内线性关系良好,Y＝3592658x-60674,r＝0.9991,回收率为97.23%,RSD＝1.41%.结论:该方法简便,准确,灵敏,重现性好,专属性强,可用于测定复方银杏口服液中阿魏酸的含量.