几种人血清肌酐常规测定方法与反相高压液相色谱测定法的比对研究

目的观察人血清肌酐反相HPLC测定的不精密度和准确性，以HPLC为标准，评价几种人血清肌酐常规测定方法的准确性。方法Beckman LX20测定系统采用Jaffé动力学法，强生Vitros250测定系统采用干化学法，酶法采用协和酶法试剂盒，在Hitatchi7170全自动生化分析仪上进行测定人血清肌酐。肌酐HPLC测定以反相C18为固定相，5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil，5-Fu）为内标，于235nm处进行检测。结果HPLC法的批内不精密度（n=5）〈2．0％，日间不精密度（n=20）〈5．1％。绝对回收率〉95．31％，相对回收率〉98．95％。不同肌酐浓度有证参考物质的测定值与靶值一致，平均偏倚为-0．31％-1．35％。HPLC法作为独立变量，当肌酐浓度〈200μmol／L时，Beckman LX20系统、强生干化学系统及酶法的偏倚分别为-19％～21％、-14％～21％和-30％～11％；当肌酐浓度〉200μmol／L时，Beckman LX20系统、强生干化学系统及酶法的偏倚分别为-10％～13％、-13％～14％和-20％～10％，其中酶法结果基本为负偏倚，在肌酐浓度〈70μmol／L时，有的负偏倚达到30％。结论以5-Fu为内标的人血清肌酐反相高压液相色谱法精密度和准确性好。Beckman LX20和强生测定系统与反相高压液相色谱法的偏倚相对较小，酶法测定结果系统偏低，且当血清肌酐浓度〈70μmol／L时不能准确测定。     

应用反相高效液相色谱内标法测定血清尿酸

目的 评价以5-氟尿嘧啶(5-FU)作内标的反相高效液相色谱(HPLC)测定血清尿酸(UA)的方法 ,拟初步推荐其作为血清UA测定的候选参考方法 ;并应用此方法 评价常规酶比色法测定血清UA的结果 偏倚.方法 对测定血清UA的反相HPLC内标法进行方法 学评价;通过测定有证参考物质(SRM)、参加国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)参考实验室考察活动,验证此方法 的准确性及可靠性.以反相HPLC内标法为比较方法 ,以6种常用检测系统中的酶比色法作为实验方法 ,对61份血清样本进行测定.组成6个比对组,对每组比对数据作散点图、偏倚图,计算线性方程和相关系数(R2),进行偏倚评估.结果 反相HPLC内标法测定UA线性范围达1 190 μmol/L,批内变异系数(CV)＜2.1%,日间CV＜3.9%,绝对回收率为96.2%～101.0%,平均相对回收率为95.1%～99.4%.测定SRM的平均相对偏倚为-8.29%;测定IFCC参考实验室考察活动提供的样本,其结果 与同位素稀释质谱(ID-MS)法的相对偏倚范围为-3.45%～-1.26%;在Beckman、Roche、Dade、Vitros封闭系统及Beckman、Roche开放系统中的酶比色法分别与反相HPLC内标法比较,各组中2种方法 均相关良好(R2=0.996 9、0.997 2、0.995 2、0.996 7、0.997 3、0.994 7),在UA为120、470L、630 μmol/L时,预期相对偏倚范围分别为-14.6%～4.3%、-0.4%～8.0%、0.8%～8.8%,其中Beckman封闭系统测定结果 与反相HPLC内标法的一致性好,Roche封闭系统低值偏低,Dade和Vitros封闭系统高值偏高,封闭系统比开放系统结果 略好.结论 拟推荐以5-FU为内标的反相HPLC法作为血清UA测定的候选参考方法 .酶比色法在不同检测系统中所测结果 存在一些差异.     

应用反相高效液相色谱内标法测定血清尿酸

目的评价以5-氟尿嘧啶(5-FU)作内标的反相高效液相色谱(HPLC)测定血清尿酸(UA)的方法,拟初步推荐其作为血清UA测定的候选参考方法;并应用此方法评价常规酶比色法测定血清UA的结果偏倚。方法对测定血清UA的反相HPLC内标法进行方法学评价;通过测定有证参考物质(SRM)、参加国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)参考实验室考察活动,验证此方法的准确性及可靠性。以反相HPLC内标法为比较方法,以6种常用检测系统中的酶比色法作为实验方法,对61份血清样本进行测定。组成6个比对组,对每组比对数据作散点图、偏倚图,计算线性方程和相关系数(R2),进行偏倚评估。结果反相HPLC内标法测定UA线性范围达1190μmol/L,批内变异系数(CV)<2.1%,日间CV<3.9%,绝对回收率为96.2%~101.0%,平均相对回收率为95.1%~99.4%。测定SRM的平均相对偏倚为-8.29%;测定IFCC参考实验室考察活动提供的样本,其结果与同位素稀释质谱(ID-MS)法的相对偏倚范围为-3.45%~-1.26%;在Beckman、Roche、Dade、Vitros封闭系统及Beckman、Roche开放系统中的...     

肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐

肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐倪星忠，舒惠群，田箐，万炸上海市临检中心（２０００５２）肌酐测定是临床生化中常规项目。常用的苦味酸法由于干扰因素多，变异大，故误差大。１９８３年，Ｆａｓｓａｔｉ等提出了肌氨酸氧化酶测定法［１］．近年来国外已有该法的商品试剂盒...     

高效液相色谱法同时测定血清色氨酸和犬尿氨酸浓度的方法建立及应用

目的建立一种高效液相色谱-紫外检测法同时测定血清中色氨酸(Trp)和犬尿氨酸(Kyn)浓度的方法。方法色谱柱采用Agilent Hypersil ODS(125.0mm×4.0mm,5μm),流动相为15mmol/L乙酸钠缓冲液(pH4.0)和乙腈95∶5(V/V),流速为0.8ml/min,柱温25℃,紫外检测λKyn=360nm,λTrp=278nm。结果Kyn和Trp的保留时间分别为3.3min和5.2min,线性范围分别为0.083~21.000μmol/L和2.650~678.000μmol/L,检测限分别为0.028μmol/L和0.053μmol/L,日内和日间相对标准偏差分别低于5%和10%,回收率分别为91.99%~113.89%和95.81%~118.82%。结论该方法简便、快速、特异,适合于临床检测。     

Rapid determination of creatinine in serum and urine by ion-pair high-performance liquid chromatography

We report a simple and reliable high performance liquid chromatography method for measuring creatinine in serum and urine. The chromatographic run is performed on a C(18) column after protein precipitation with acetone and addition of cimetidine as an internal standard. The separation is carried out in 20 min at a flow rate of 0.8 ml/min, with a mobile phase consisting of 100 mmol/l sodium dihydrogen phosphate solution, containing 30 mmol/l sodium lauryl sulfate pH 3.0 and acetonitrile (60:36, v/v). The absorbance is monitored at 200 nm. The relationship between creatinine concentration and the creatinine/internal standard peak area is linear up to 1,088 micromol/l. Within-run precision measured at three different creatinine concentrations ranges from 0.89% to 2.34% in serum and from 0.34% to 1.10% in urine. Between-run precision varies from 1.68% to 3.17% in serum and from 1.58% to 1.85% in urine over a wide range of concentrations. Analytical recovery is between 98.71% and 101.25% in serum and between 98.96% and 100.27% in urine. The detection limit is 3.24 micromol/l for a signal-to-noise ratio of 3. The method shows a good linearity with the reference isotope dilution gas chromatography-mass spectrometry procedure (r=0.999), without interferences, even in the presence of high bilirubin concentrations.     

HPLC 法测定间歇性高容量血液滤过患者血清、尿液及置换液中莫西沙星浓度

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)测定间歇性高容量血液滤过(PHVHF)患者血清、尿液及置换液中莫西沙星浓度.方法:PHVHF联合莫西沙星治疗肾衰合并感染患者8例,测定肾功、电解质.采用依利特SinoChrom ODS-BP色谱柱(5 μm,4.6 mm × 150 mm)测定莫西沙星浓度,流动相为乙腈:(10 mmol/L磷酸二氢钾、1.5 mmol/L四丁基硫酸氢胺) ＝ 25:75(v/v),柱温 40℃,检测波长 290 nm,流速 1 mL/min.结果:血BUN 及SCr、血清K+ 水平显著下降(P ＜ 0.05).血清莫西沙星在0.1 ～ 10.0 mg/L范围的线性回归方程为:y ＝ 4.49x-0.257,r ＝ 0.999 86.准确度为98.7% ～ 101%,日内和日间RSD为1.12% ～ 5.7%.置换液在0.1 ～ 10.0 mg/L范围的线性回归方程为:y ＝ 3.877x-0.249,r ＝ 0.998 5.准确度为85.7% ～ 95.7%,日内和日间RSD 为1.34% ～ 8.9%.尿液在0.1 ～ 10.0 mg/L范围的线性回归方程为:y ＝ 3.565x-0.270,r ＝ 0.986 8.准确度为97.4% ～ 101.7%,日内和日间RSD为1.51% ～ 11.6%.结论:HPLC方法检测血滤患者血清、尿液及置换液中莫西沙星浓度,方法简便、快速、重复性好,可满足临床研究血滤时莫西沙星药代动力学变化的要求.     

高效液相色谱法测定人血清甜菜碱方法的建立

目的 采用柱前衍生高效液相色谱法-紫外检测法建立一种测定人血清甜菜碱浓度的方法.方法 以对溴苯乙酰溴和18-冠醚-6溶于乙腈制成衍生液,将其与甜菜碱反应形成的衍生物用Supelcosil LC-SCX色谱柱进行分离.流动相为乙腈∶水体积比90∶10,含16 mmol/L的氯化胆碱,等度洗脱,流速为0.8 ml/min,检测波长为259 nm,利用甜菜碱标准品绘制标准曲线,外标法定量检测20名健康大学生志愿者血清甜菜碱.结果 甜菜碱的测定线性范围为6.25～200.00 μmol/L,回归方程Y=1 568.1X-2 747.5,R2=0.999 8.最低检测限为3.0 μmol/L.批内不精密度为1.88%～3.79%(平均3.24%),批间不精密度为3.14%～6.76%(平均4.39%).方法 回收率为95.89%～102.86%(平均99.16%).结论 成功建立一种检测人血清甜菜碱浓度的方法,适用于实验室及临床常规检测.     

用肌酐亚氨水解酶偶联谷氨酸脱氢酶的酐酶法鉴定

目的 建立适合于自动化分析的人血清和尿肌酐亚氨水解酶偶联谷氨酸脱氢酶指示系统的酶促动力学测定方法。方法 在反应体系中加入异柠檬酸脱氢酶及其作用底物异柠檬酸，再生由主反应前氨消耗的NADPH和α－酮戊二酸，其后加入镁离子络合剂CyDTA和肌亚氨水解酶的启动试剂启动反应，在此同时NADPH和α－酮戊二酸的再生反应被终止，测定NADPH于340nm处吸光度的变化，计算样品中肌酐的浓度。结果 本法测定线性范围为40－2000μmol／L，批内和常规条件下的变异系数均小于5％，回收率为98．5％，与高效液相色谱法具有良好的相关性（r=0.9930)。乳糜、黄疸、溶血、酮体、乳酸盐、临床常用的治疗药物和高至2mmol/L的氨对测定没有干扰。结论 本法操作简便、精确，推荐作为常规测定方法。     

高效液相色谱法测定血清葡萄糖

摘要：目的:建立一种测定血清葡萄糖（glucose,Glu）的高效液相色谱法（HPLC）,探讨其能否作为血清Glu测定的参考方法。 方法:以D-半乳糖（D-galactose）为内标物,用无水乙醇沉淀、去除血清中的蛋白质,在pH 9.1条件下与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）反应,用HPLC测定血清Glu衍生产物、D-半乳糖衍生产物,用标准曲线法定量;对建立的方法进行方法学评价。 结果:本法测定血清Glu的批内变异系数（CV）为0.33%～0.67%,平均0.51%;批间CV为0.02%～0.85%,平均0.38%;总CV为0.47%～1.03%,平均0.68%。回收率为98.22%～101.96%。分析Glu的参考物质SRM 965a,测定结果与认定值的偏差为-0.928%～0.347%,平均偏差为-0.072%。 结论:初步建立了测定血清Glu的HPLC法;该法准确、精密,有望作为血清Glu测定的候选参考方法。     

反相高效液相色谱法测定人血浆中无环鸟苷

目的对流动相的配方进行改良,建立反相HPLC法测定人血浆中阿昔洛韦浓度。方法采用SphericorbC18色谱柱,以2．5％的乙腈水溶液（内含10mmol/L高氯酸,5mmol/L乙酸钠,3．5mmol/L庚烷磺酸钠）为流动相,紫外检测波长254nm。血浆以高氯酸沉淀后高速离心取上清液分析。结果阿昔洛韦峰和其它杂峰得到很好的分离,最低检测限为30ng/ml（进样50μl,信噪比为3：1）。结论本法快速、简便、灵敏度高,且可检测到阿普洛韦代谢物。     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清肌酐

目的 建立一种使用同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清肌酐的候选参考方法.方法 以[2H3]肌酐为内标,用无水乙醇沉淀血清中的蛋白质,用氯仿纯化上清液,用液相色谱串联质谱分离测定,以包括法定量.结果 血清肌酐测定的批内、批间和总变异系数的平均值分别为0.57%(范围0.52%～0.61%)、0.43%(范围0.11%～0.59%)和0.73%(范围0.62%～0.83%).加样回收试验的回收率范围为99.09%～101.13%.分析两种参考物质SRM909b和SRM 967b,测定结果与认定值的偏差小于0.4%.结论 建立了ID-LC/MS/MS法测定血清肌酐的方法,方法准确、精密、简便,可望作为血清肌酐测定的参考方法.     

应用高效毛细管电泳技术快速分离尿肌酐

目的　建立 1种快速测定尿中肌酐浓度的毛细管电泳方法。方法　用pH2 .5、0 .1mmol/L磷酸作为电泳缓冲液 ,利用非涂层石英毛细管 48.5cm× 5 0 μm(id) ,采用外标法定量 ,检测波长 191nm。 结果　本法在34 .5～ 8840 μmol/L浓度范围内呈良好的线性 (r =0 .998) ,日内和日间变异系数分别为 3.5 %、6 .2 %,平均回收率 94.7%。与苦味酸法有良好的相关性 (Y =1.0 0 4X 0 .0 0 4,r =0 .998,n =45 )。结论　本法线性范围宽、简单、快速 ,可应用于临床样品的检测。     

反相高效液相色谱紫外法检测人血清尿酸

目的探讨日本临床化学会(JSCC)推荐的检测人血清尿酸(UA)的反相高效液相色谱紫外(HPLC-UV)法是否可作为候选参考方法来验证同位素稀释质谱法、评价常规方法。方法对反相HPLC-UV法进行复现并进行方法学评价。观察尿酸酶处理人血清样本后的色谱以评价其特异性;检测系列标准液的UA水平并绘制标准曲线,观察线性范围;用朗道公司质控品评价精密度;用UA标准液评价回收率;分别用有证参考物SRM 909b(Ⅰ和Ⅱ)、国家一级标准物质GBW 09176、GBW 09175、GBW 09174评价正确度,并与2008年国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)参考实验室RELA(ring trials for reference labora-tories)结果进行比对;用改良Bland-Altman图评价5种常规检测系统与反相HPLC-UV法间的偏差。结果尿酸酶处理后UA色谱峰消失;本法的线性范围为2.08～1 785μmol/L;批内变异系数(CV)均<0.3%,批间CV均<0.4%,日间CV均<2.3%,总CV均<2.7%;平均相对回收率为96.0%～100.6%;与SRM909bⅠ和Ⅱ靶值的偏移分别为-2.5%、-2.3%;与GBW09176、GBW 09174、GBW 09175靶值的偏移分别为0.29%,-0.74%和0.06%;与参加RELA比对的另3家实验室的平均值进行比较,水平1偏移为0.35%,水平2为-0.69%;Hitachi、Beckman Coulter、Roche、Dade、Vitros常规检测系统检测人血清UA与反相HPLC-UA法的相关系数分别为0.998 9、0.996 5、0.999 2、0.999 2和0.998 7,与反相HPLC-UA法的偏差均小于5%的生物学变异。结论本法特异、简便、快速,精密度好,正确度高,与具有良好溯源的常规测定系统具有良好的相关性和一致性,可推荐作为人血清UA测定的候选参考方法。