四色法流式细胞术分析正常人T细胞亚群中IFN-γ和IL-4的表达

目的：研究IFN-γ和IL-4在正常人T淋巴细胞亚群中的表达情况。方法：50例正常人的外周血在PMA、ionomycin和BFA存在的奈件下在体外短期培养，进行细胞膜表面抗原和细胞内细胞因子染色，再用流式细胞仪对CD3 、CD3 CD8 、CD3 CD8-细胞内的IFN-γ和IL-4进行测定。并对分析方法中的一些测定条件进行了探讨。结果：正常人9．89％-33．39％的CD3 CD8-细胞为Th1细胞，0．64％-6．87％为Th2细胞，14．00％-63．76％的CD3 CD8 细胞为Tcl细胞，0．92％—5．44％为Tc2细胞；Th1、Tcl细胞百分比明显多于Th2、Tc2细胞，并且Tcl细胞百分比比Th1细胞多，而同时分泌两种细胞因子的Th0、Tc0细胞均较少。结论：T淋巴细胞各个亚群产生IFN-γ和IL-4的能力明显不同且正常人分泌细胞因子的能力有较大的个体差异。     

流式细胞术在血小板膜糖蛋白Ⅱb/IIIa位点定量检测中的应用及临床意义

目的评价流式细胞术（FCM）定量检测血小板膜糖蛋白（GP）Ⅱb／Ⅲa位点的性能，探讨正常人与白血病患者GPⅡb／Ⅲa位点数及CD41／CD61阳性表达率的关系。方法用FCM检测GPⅡh／Ⅲa位点，以国际标准评价其检测性能；并检测13例正常人和16例急性白血病患者血小板GPⅡb／Ⅲa的位点数及CD41／CD61表达率。结果FCM检测GPⅡb／Ⅲa位点的批内CV〈1％、批间CV〈3％及总重复性的CV〈2％；检测线性良好，标本量（血小板数1000～7000）对GPⅡh／Ⅲa位点检测无影响，CV〈2％；GPⅡb／Ⅲa位点检测标准曲线的平均荧光强度（MFI）与位点数间相关性很好（r=0．9998）。同时，正常人GPⅡb／Ⅲa的游离位点数平均为76944，总位点数平均为74432，CD41／CD61平均表达率为98．0％，急性淋巴细胞白血病患者GPⅡb／Ⅲa游离位点数平均为64180，总位点数平均为61079，CD41／CD61平均表达率为68．5％，急性非淋巴细胞白血病患者GPⅡb／Ⅲa游离位点数平均为63634，总位点数平均为58667，CD41／CD61平均表达率为61．6％。经t检验，急性白血病患者的GPⅡb／Ⅲa位点数及CD41／CD61表达率明显低于正常者（P均〈0．02）。结论流式细胞术可直接、快速、特异地检测血小板GPⅡb／Ⅲa位点数，可为急性白血病患者的出血机制研究及治疗提供依据。     

脂质体流感疫苗免疫效果评价

目的 对脂质体流感疫苗体液免疫和细胞免疫效果进行评价。方法 血凝抑制法（HI）和ELISA法检测特异性抗体；MTT法检测小鼠淋巴细胞增殖情况；流式细胞仪测小鼠T淋巴细胞表面标记；ELISA法检测小鼠肺内溶物中细胞因子含量。结果 脂质体流感抗原可激发更强的体液免疫；脾细胞增殖效率，CD4水平和CD4／CD8比例，以及细胞因子（IL4、JFN-γ）水平均有显著的增强作用。结论 脂质体流感疫苗能够刺激机体产生较高的体液免疫，并且能够激发机体产生细胞免疫。     

结核病患者淋巴细胞内腺苷脱氨酶活性的变化与T淋巴细胞亚群的关系

目的：探讨结核病患者外周血淋巴细胞内腺苷脱氨酶（ADA）活性和T－淋巴细胞亚群的关系。方法：应用免疫学技术测定了外周血淋巴细胞内ADA活性和单克隆抗体技术测定了T－淋巴细胞亚群。结果：结核病患者外周血LADA活性显著高于正常人组（P＜0．01），体周血淋巴细胞CD4，CD8及CD4／CD8比值亦存在明显的差异（P＜0．01），相关分析显示；LADA活性与CD4／CD8比值呈高度相关（P＜0．01）。结论；结核病患者淋巴细胞内ADA活性升高与T淋巴细胞亚群比例失调有关。     

淋巴细胞免疫表型质控品的初步研究

目的研究液氮冻存对外周血单个核细胞（PBMCs）CD4^＋T和CD8^＋T百分比的影响，探索冻存PBMCs作为淋巴细胞免疫表型质控品的可行性。方法收集健康成人抗凝全血，用淋巴细胞分离液分离PBMCs后液氮冻存。定期复苏PBMCs检测CD4^＋T和CD8^＋T百分比，计算细胞存活率、回收率。并分析不同厂家试剂、复苏方法、固定时间等因素对CD4^＋T和CD8^＋T百分比的影响。结果液氮冻存0～12个月、12～24个月的PBMCs CD4^＋T和CD8^＋T百分比均保持在稳定水平。冻存12个月PBMCs CD4^＋T和CD8^＋T百分比的平均变异系数（CV）分别为14．5％和9．8％，细胞存活率为85．4％～94．3％，回收率33．3％～97．8％；冻存12-24个月PBMCs的CD4^＋T和CD8^＋T百分比的平均CV值分别为7．1％和6．5％，细胞存活率为88．3％～98．5％，回收率52．3％～101％。不同复苏方法和检测试剂的结果相对稳定，CD4^＋T和CD8^＋T百分比的平均CV值分别为8．1％和6．4％。复苏后的PBMCs经多聚甲醛固定可在48h内检测。结论液氮冻存的PBMCs有望作为淋巴细胞免疫表型测定的质控品。     

肺结核患者外周血腺苷脱氨酶活性与T淋巴细胞亚群定量检测的相关性及临床意义

目的探讨肺结核患者外周血淋巴细胞内腺苷脱氨酶（ADA）活性和T淋巴细胞亚群定量检测的关系及临床意义。方法应用全自动生化分析仪测定肺结核患者血清ADA的活性和用流式细胞仪测定外周血中T淋巴细胞亚群。结果肺结核患者外周血ADA活性显著高于对照组,化疗2个月及6个月后,其活性显著降低,外周血CD4＋、CD8＋及CD4＋／CD8＋比值差异有统计学意义,ADA与CD4＋／CD8＋之间存在相关性。结论肺结核患者淋巴细胞内ADA活性升高与T淋巴细胞亚群比例失调有关,检测患者外周血ADA、T淋巴细胞亚群的变化有助于临床病情监控、疗效判定及预后判断。     

白细胞介素12对小鼠T淋巴细胞亚群分化的影响

目的观察白细胞介素12（IL-12）对小鼠T淋巴细胞亚群分化的影响。方法以RPMI-1640培养基培养小鼠脾淋巴细胞，实验组中加入10pg／ml和5pg／ml重组mIL-12，对照组不加，72h后以ELISA检测各组培养上清中IFN—γ和IL-4含量；流式细胞仪检测各组淋巴细胞中CD4T、CD8T细胞亚群变化。结果与对照组相比实验组脾淋巴细胞中T细胞总数、CD4T细胞比例及CD4T／CD8T比值显著增大，上清中Th1型细胞因子（IFN-γ）含量显著增加，而Th2型细胞因子（IL-4）含量则相应减少。结论IL-12可以诱导CD4T淋巴细胞亚群的分化增殖，调节Th细胞亚群平衡，使免疫应答向Th1漂移。     

邻甲酚酞络合酮法直接测定红细胞镁的实验研究

采用邻甲酚酞络合酮（CPC）直接测定红细胞内镁的含量。探讨了CPC的浓度、不同pH条件对实验的影响，掩蔽剂EGTA的用量，并对有关方法学指标进行了考察，建立了红细胞内镁的测定方法。该法显示镁浓度2～25mmol／L内线性良好，r=0．994；平均回收率101．8％；批内CV=2．20％，批间CV=3．95％。测定38例健康成年人，红细胞内镁浓度范围：x=1．699fmol／ceu．s=0．427。     

多色流式细胞术测定急性白血病免疫表型的特征及意义

目的 探讨多色流式细胞术测定急性白血病（AL）免疫表型的特征及意义。方法 采用CD45／N散射（SSC）双参数散点图设门法进行三色或四色流式细胞术的细胞表面及胞浆内分化抗原的检测。结果 按免疫表型的特征可将AL分为4类：未分化型急性白血病（AUL）（2．7％）、单表型急性白血病（63.1％）、表达某一系列抗原为主的AL（28．9％）、急性混合性白血病（HAL）（5．3％）。急性髓细胞白血病（AML）患者主要表达CD13（96．2％）、CD33（92．3％）、MPO（80．8％），急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）主要表达cCD79a（100％）、CD19（87．5％）、CD10（75％）。2例T淋巴细胞白血病（T—ALL），全部表达cCD3、CD7。结论 多色流式细胞术进行AL免疫表型分析，对白血病的准确诊断、治疗和预后均有重要意义。     

SARS患者外周血T淋巴细胞亚群检测的意义

目的 研究SARS患者T淋巴细胞亚群水平。方法 用流式细胞术对7例SARS患者的外周血T淋巴细胞亚群进行系列检测，并选择27名HIV感染者、5名急性腮腺炎和7名麻疹患者作疾病对照，另选20名健康者作正常对照。结果 SARS患者CD3、CD4和CD8绝对数显著低于疾病对照和正常对照；但CD4百分率偏高、CD8百分率偏低，CD4／CD8比值显著高于疾病对照组。疾病日期与T淋巴细胞亚群结果密切正相关。另外，SARS患者CD3^ CD4^ CD8^ 淋巴细胞百分率明显增高。结论 SARS患者T淋巴细胞水平低下。     

儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病的流式细胞术分析

目的 根据白血病细胞的异常免疫表达,建立流式细胞术检测儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)微小残留病(minimal residual disease,MRD)的方法 ,探讨流式细胞术检测MRD在儿童ALL个体化治疗中的意义.方法 用流式细胞术以多种四色荧光抗体组合对健康儿童骨髓进行检测,建立健康儿童骨髓细胞双参数点图分析模板.对75例ALL初诊患儿的骨髓细胞进行MRD筛选,找出在双参数点图上的位置明显区别于正常骨髓细胞的免疫表型组合作为MRD监测的有效免疫表型组合,对其中60例患儿诱导治疗结束及后续治疗中的骨髓标本用这些有效免疫表型组合进行MRD监测.同步进行细胞形态学检测和PCR检测29种融合基因、IgH/T淋巴细胞受体(TCR)基因重排.结果流式细胞术检出69例(92.0%)可用于MRD监测的有效免疫表型组合,PCR检出21例(28.0%)可用于MRD监测的融合基因或IgH/TCR基因重排;诱导治疗结束后及后续治疗中有25份骨髓标本细胞形态学未检出白血病残留细胞,流式细胞术检测仍有0.021%～4.130%的白血病残留细胞.结论 流式细胞术检测儿童ALL MRD能较好地评估临床缓解期间ALL患儿体内残留白血病细胞的数量,其覆盖面和速度优于PCR检测方法 ,敏感性高于形态学检测方法 .     

儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病的流式细胞术分析

目的 根据白血病细胞的异常免疫表达,建立流式细胞术检测儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)微小残留病(minimal residual disease,MRD)的方法 ,探讨流式细胞术检测MRD在儿童ALL个体化治疗中的意义.方法 用流式细胞术以多种四色荧光抗体组合对健康儿童骨髓进行检测,建立健康儿童骨髓细胞双参数点图分析模板.对75例ALL初诊患儿的骨髓细胞进行MRD筛选,找出在双参数点图上的位置明显区别于正常骨髓细胞的免疫表型组合作为MRD监测的有效免疫表型组合,对其中60例患儿诱导治疗结束及后续治疗中的骨髓标本用这些有效免疫表型组合进行MRD监测.同步进行细胞形态学检测和PCR检测29种融合基因、IgH/T淋巴细胞受体(TCR)基因重排.结果流式细胞术检出69例(92.0%)可用于MRD监测的有效免疫表型组合,PCR检出21例(28.0%)可用于MRD监测的融合基因或IgH/TCR基因重排;诱导治疗结束后及后续治疗中有25份骨髓标本细胞形态学未检出白血病残留细胞,流式细胞术检测仍有0.021%～4.130%的白血病残留细胞.结论 流式细胞术检测儿童ALL MRD能较好地评估临床缓解期间ALL患儿体内残留白血病细胞的数量,其覆盖面和速度优于PCR检测方法 ,敏感性高于形态学检测方法 .     

流式微珠阵列法检测IFN-γ诱导的Jurkat细胞Th1/Th2细胞因子表达

本研究旨在探讨流式微珠阵列法检测Th1／Th2细胞因子表达及IFN-1应用于T淋巴细胞白血病治疗的临床价值。以不同浓度IFN-γ诱导培养Jurkat细胞48小时，用流式微珠阵列法检测培养上清液中IL-2、IL-6、TNF-α和IFN-γ表达，并采用流式细胞术检测膜上IL-2受体（CD25）的表达。结果表明：IFN-γ诱导Jurkat细胞IL-2和TNF-α的表达呈浓度依赖性升高，未检测到IL-6表达，CD25表达明显升高。结论：Jurkat细胞能被IFN-γ诱导高表达Th1细胞因子和CD25，流式微珠阵列法能准确客观地反映Th1／Th2细胞因子表达的动态变化。     

淋巴细胞功能相关抗原-3(CD58)在儿童期急性B淋巴细胞白血病近期疗效判断中的应用

本研究评估CD58在急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)近期疗效判断中的价值。应用四色流式细胞分析技术观察135例儿童期B-ALL患者CD58分子的表达特点;建立用CD58/CD10/CD34/CD19抗体组合检测B-ALLMRD的方案;结合CD58的表达情况和MRD监测结果分析CD58在B-ALL中的预后价值。结果表明135例B-ALL的平均CD58MFI为113.08±63.33,15例正常骨髓的CD19+CD10+细胞的平均CD58MFI为14.68±5.26,两者差异显著(P<0.01);51.9%(70/135)B-ALL患者的CD58分子强表达,可以用CD58为指标进行MRD检测;CD58/CD10/CD34/CD19抗体组合的有效频率仅次于TdT/CD10/CD34/CD19,为51.9%;CD58高表达组的MRD阳性率显著低于CD58低表达组(P<0.05)。结论CD58可以作为B-ALLMRD检测的指标,此结果丰富了MRD检测的组合;CD58的高表达可以作为B-ALL预后较好的指标。     

Extracorporeal photopheresis reduces the number of mononuclear cells that produce pro-inflammatory cytokines,when tested ex-vivo

Extracorporeal photopheresis (ECP) has been shown to be clinically effective in the treatment of many T cell-mediated conditions. ECP's mechanism of action includes the induction of apoptosis and the release of pro-inflammatory cytokines. Recently, we have observed early lymphoid apoptosis, detectable immediately post ECP. We were interested to determine what influence ECP has on pro-inflammatory cytokine secretion at this early pre-infusion stage. Samples from 6 cutaneous T cell lymphoma (CTCL) and 5 graft versus host disease (GvHD) patients were taken pre ECP and immediately post ECP, prior to re-infusion. Following separation, the PBMCs were added to a cell culture medium and stimulated with PMA, Ionomycin, and Brefeldin A for 6 hours. Using flow cytometry, intracellular cytokine expression of IFNgamma and TNFalpha was determined in the T cell population. The monocytes were evaluated for IL6, IFNgamma, IL12, and TNFalpha. For both patient groups, the number of IFNgamma-expressing T cells fell significantly at re-infusion, whilst both T cell- and monocyte-expressing TNFalpha levels were reduced at re-infusion. All other cytokines tested showed no significant change post ECP. For GvHD, pro-inflammatory cytokines have a pathological role. Their down-regulation may have a direct clinical benefit. However, the reduction in the number of IFNgamma- and TNFalpha-expressing mononuclear cells means, at this early stage, it is unlikely that these cytokines assist in the removal of the malignant Th2 cells present in CTCL.     

Expression und Funktion des ORL-1-Rezeptors auf humanen Leukozyten

BACKGROUND: The ORL-1 receptor is expressed by human leukocytes. Limited knowledge exists about the function and interaction between the nervous and immune systems. The aim of our study was to investigate the expression of the nociceptin-ORL-1 receptor system on different leukocyte subsets and the influence of the ORL-1 receptor on the intracellular production of cytokines. METHODS: Blood from healthy volunteers of different age and sex was analysed for the expression of the ORL-1 receptor by PCR and flow cytometry and the influence of nociceptin on the LPS-induced production of intracellular cytokines by flow cytometry. RESULTS: The ORL-1 receptor mRNA is expressed by granulocytes, lymphocytes and monocytes. We could also show the expression of the ORL-1 receptor protein on the cell surface of all types of white blood cells. Nociceptin has no influence on LPS-induced cytokine production in human monocytes. There was neither a difference between young and old nor between male or female volunteers. CONCLUSION: The ORL-1 receptor is expressed by all subtypes of leukocytes. The function of this receptor is not the modulation of cytokine production and requires further studies.     

FSC/SSC和CD45/SSC分群法流式T淋巴细胞亚群分析的实验研究

目的 建立并标准化流式细胞术外周血T淋巴细胞亚群含量测定方法,探讨CD45/SSC和FSC/SSC分群法检测的特点与适用性.方法 采用FSC/SSC分群的三色流式细胞术和CD45/SSC分群的四色流式细胞术,对194例健康人外周血T细胞亚群进行测定,并调查两种方法检测结果的精密性及临床应用的成功分群率.结果 FSC/SSC分群法健康人外周血总T细胞、T4细胞、T8细胞、T4/T8比值、DN-T细胞、DP-T细胞的百分含量依次为(69.98±5.79)%、(35.25±5.16)%、(25.08±4.34)%、(6.17±3.08)%、(0.71±0.36)%和(1.45±0.28)%;CD45/SSC分群法结果依次为(71.42±6.02)%、(35.82±5.78)%、(24.98±4.45)%、(5.98±3.11)%、(0.67±0.32)%和(1.47±0.30)%,两种方法检测结果之间差异无统计学意义(F检验,P＞0.05).精密度实验显示,FSC/SSC分群法和CD45/SSC分群法的变异系数均在4%以内,两者之间差异无统计学意义(P＞0.05).临床945份标本分析中,FSC/SSC分群法和CD45/SSC分群法的成功分群率分别为97.78%和99.83%,两者之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 FSC/SSC分群法和CD45/SSC分群法均可用于外周血淋巴细胞亚群含量的检测;FSC/SSC分群法成本相对低廉,上机操作简便,适合大规模临床应用开展,CD45/SSC分群法适合用于特殊标本的复查.     

cMPO/cCD79α/cCD3/CD45抗体组合在交叉系列抗原表达急性白血病诊断中的应用

目的探讨cMPO／cCD79α／cCD3／CIM5抗体组合在胞膜交叉系列抗原表达急性白血病（AL）诊断中的意义。方法采用流式细胞术对269例成人初发AL患者中胞膜交叉系列抗原表达的60例患者加做胞质抗体组合cMPO／cCD79α／cCD3／CD45。结果269例AL患者中有54例（20．1％）加做胞质抗原组合后仅出现一种胞质抗原表达而诊断为交叉系列抗原表达白血病，交叉系列抗原表达白血病在T细胞急性淋巴细胞白血病（T—ALL）、B—ALL及急性髓系白血病（AML）中的比例分别为28．6％、43．6％及13．4％。CD7、CD19、CD5和CD20在交叉系列抗原表达AML中的出现频率依次为65．4％、15．4％、11．5％和7．7％；CD13、CD33、CDl5在交叉系列抗原表达ALL中的出现频率依次为89．3％、21．4％、3．6％；6例（2．3％）患者出现二系胞质抗原表达，诊断为急性双表型细胞白血病，其中T／B型2例、B／M（B／髓系）型4例。结论胞质抗体具有系列特异性，四色组合流式细胞．免疫表型技术能提供快速多参数的分析数据。为保证实验结果的准确性，在对异常细胞免疫分型时应以CD45／SSC设门和正常细胞作内部参照。     

系统性红斑狼疮患者th1/th2失衡的研究

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)病人th1/th2的失衡状况。方法利用三荧光标记法流式细胞术检测抗细胞表面抗原,抗细胞因子。检测出CD4+干扰素(IFN)-γ+白细胞介素(IL)4-及CD4+IFN-γ-IL-4+细胞作为Thl及Th2细胞,从单细胞水平研究初发SLE患者Thl/Th2平衡。结果未用药治疗的SLE病人其Thl细胞明显低于正常对照组(P=0.02)。31例SLE患者按Thl/Th2可分成两组,Thl/Th2降低组与Thl/Th2升高组。Thl/Th2降低组其Thl细胞的降低十分明显。Thl/Th2升高组中Thl细胞仅轻度下降。结论Thl型反应与Th2型反应均参与了SLE的发病。不同患者可能免疫系统的异常并不同。