聚合酶链反应快速诊断白色念珠菌菌血症

目的：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术诊断白色念珠菌菌血症。方法：设计的引物特异性扩增编码白色念珠菌细胞色素Ｐ４５０Ｌ１Ａ１的基因，其长度为２４３ｂｐ。ＥＤＴＡ抗凝血用去污剂溶解，用ＤＮａｓｅＩ去除人体白细胞和污染的细菌ＤＮＡ；念珠菌的细胞壁用溶胞酶消化并用ＳＤＳ和蛋白酶Ｋ裂解。用酚／氯仿／异戊醇提取模板ＤＮＡ。用ＰＣＲ技术扩增。结果：与细菌、病毒及人体细胞ＤＮＡ无非特异扩增。检出血中白色葡萄的阈值     

白色念珠菌的致病性

白色念珠菌为条件致病性真菌,常寄生于人的皮肤、口腔、阴道和肠道粘膜处。随着免疫功能低下或免疫缺陷的病人日益增多,其感染率不断增加。国内外学者对白色念珠菌（简称白念菌）的致病性已进行了不少研究,至今尚未确定其有内毒素或分泌外毒素。较肯定的主要致病因素是...     

聚合酶链反应法快速诊断真菌血症的实验研究

目的探讨聚合酶链反应（PCR）与普通血培养在诊断真菌血症方面的应用。方法分别以5×107,1×108,5×108CFU/ml的白色念珠菌菌液1ml注射造成兔的真菌血症模型,于注射前,注射后2,24,48及72小时分别抽取兔血进行PCR和血培养检测,比较PCR检测与血培养结果的差别,并观察1周内不同浓度注射组的病死率。结果在2h时各浓度组间PCR法和血培养两种检测方法无明显差异,24,48和72h各浓度组间两种检测方法有明显的差异（P〈0.05）,PCR法较灵敏。随着注射菌液浓度的提高,真菌血症兔模型的病死率也逐渐上升。结论PCR检测法较血培养法灵敏,用于早期快速诊断真菌血症有其重要的临床价值,白色念珠菌血症的致死性与其侵入机体的菌株量呈正相关。     

输尿管白色念珠菌感染1例的诊治

病例男,57岁,因右侧腰部胀痛15d入院,无尿频、尿急、尿痛。查体：右肾区叩痛;尿常规：白细胞8-10／HP,红细胞1～2／HP,尿脱落细胞及抗酸染色检查均为阴性;CT提示输尿管上段密度增高影,考虑输尿管肿瘤。尿细菌培养阴性,抗感染治疗效果不佳。行输尿管镜检查,见输尿管上段白色棉花样新生物堵塞输尿管,以活检钳取出该新生物,     

IgY防治SPF小鼠白色念珠菌感染的研究

目的：观察自制的抗白色念珠菌鸡蛋黄抗体IgY体内生物学效应。方法：建立服小鼠烧伤后口服白色念珠菌(白念菌)感染模型，应用活菌计数方法检测其回肠膜粘附白念菌量、盲肠内容物白念菌量，应用ELISA检测血浆肿瘤坏死因子(INFα)和二胺氧化酶(DAO)含量。结果：烧伤SPF小鼠喂服IgY后，能明显抑制肠道内白念菌生长和白念菌粘附肠上皮细胞；明显降低小鼠血浆中DAO和TNFα含量。结论：特异性鸡蛋黄抗体IgY具有良好的体内生物学效应。     

A,B组轮状病毒的分子生物学研究进展

本文介绍了Ａ、Ｂ组轮状病毒的基因结构与编码蛋白，并就ＰＣＲ技术用于轮状病毒的检测作了重点论述。     

128株白色念珠菌感染菌种的分布及耐药分析

目的 了解院内白色念珠菌感染菌种的分布及耐药情况,为临床抗真菌治疗提供依据.方法 采用VITEK微生物鉴定仪、酵母菌鉴定卡进行菌种鉴定,ATB FUNGUS 2真菌药敏条进行药敏试验.结果 2006年6月～2007年6月从临床送检的痰、尿、分泌物等标本中共检出白色念珠菌128株,检出率为2.0%,其中痰标本白色念珠菌检出率最高93株占72.7%;在各年龄段白色念珠菌的分布中,70岁以上患者所占比例最大66.5%;同时以呼吸内科检出率最高36株占28.1%;体外药敏试验显示两性霉素B敏感性最好,耐药率最低为0.结论 白色念珠菌感染越来越多,加强真菌分离及药敏监测,合理用药,有助于患者的治疗.     

光动力疗法治疗食管癌合并白色念珠菌感染

目的观察光动力疗法抗食管真菌感染的疗效。方法临床及病理确诊为食管癌合并食管白色念珠菌感染的患者1例,静脉注射光敏剂PSD-0075mg／kg后6h,以波长630mm的半导体激光（激光功率密度150mW／cm^2）出光段为3em的柱状光纤分节段及分次进行照射。食管癌或食管癌合并白色念珠菌感染灶处,每光斑照射30min;单纯白色念珠菌感染灶,每光斑照射15min。观察术中和术后不良反应发生情况,根据相应标准进行近期临床疗效评价。结果该患者共进行了3次PDT治疗,其中距门齿21-24cm的食管癌2次治疗后达到完全效应,伴发的白色念珠菌感染1次治疗后治愈;距门齿25～28cm念珠菌性食管炎2次治疗后治愈;距门齿35～33、33～30cm的食管癌分别经2次和3次治疗后达到明显效应。除距门齿21～24cm的食管癌第2次PDT治疗病变完全消失后遗留少量瘢痕外,余区未发生瘢痕,狭窄、穿孔等不良反应。结论光动力疗法不仅能有效控制进展期食管癌,还能有效治疗食管白色念珠菌感染,具有高选择性、安全、毒副作用小、可重复应用等优点,对食管真菌感染,尤是对食管真菌感染合并食管癌的患者是一种有希望的治疗方法。     

PCR法检测患者血清中念珠菌的临床应用研究

在化疗后的肿瘤患者、器官移植者以及其他原因引起的免疫缺陷患者中，深部念珠菌感染已经成为一种重要的医院感染。念珠菌感染患者的预后比一般细菌感染者要差，所以，快速、早期诊断念珠菌感染和及时的抗念珠菌治疗十分重要。以PCR为核心的分子生物学方法是早期、敏感的诊断方法，可用于检测全血和血清标本。我们采用PCR法分别鉴定全血和血清标本中的念珠菌感染，探讨了使用血清标本鉴定念珠菌感染的可行性。     

用聚合酶链反应和限制性内切酶技术快速鉴定医学真菌

介绍了一种基于聚合酶聚链反应（ＰＣＲ）结合限制性内切酶分析技术区分临床重菌的方法，首先利用９种真菌的通用引物扩增其１８ＳｒＲＮＡ基因，然后用ＨａｅⅢＢｇｌＩ和ＮｈｅＩ三种限制性内切酶将扩增产物消化成不同数量和不同大小的ＤＮＡ片段，可以对白色念珠菌，新型隐球菌和烟曲霉菌等９种临床上常见的医学真菌作出快速鉴定，该技术具有快速，敏感，不需杂交，可在２４ｈ以内完成鉴定等优点，有良好的临床应用前景。     

医学重要真菌的实验室诊断进展之二--分子生物学鉴定技术的研究进展

医学真菌的实验室常规鉴定方法尽管有了很大发展，但仍存在耗时长、敏感性低的问题。近年来，研究者做了大量工作，试图应用分子生物学方法鉴定医学重要真菌弥补传统方法的不足。本文根据近年来的文献报道，概括总结了以念珠菌为主的分子生物学检测方法的进展情况。     

应用原位逆转录PCR 检测石蜡切片中HCV RNA

目的：检测石蜡包埋组织中的HCV RNA。方法：原位PCR是一种能够检测单拷贝、低拷贝（20bp）DNA或RNA序列的新技术，本研究应用原位逆转录PCR检测石蜡包埋人肝外胆管癌组织中的HCV RNA。结论和结论：（1）基因组DNA去除一定要彻底。（2）选择合适的逆转录酶。（3）用原位PCR仪专用的封片装置封好，以防扩增液流出。（4）无水乙醇后固定10min防止扩增产物扩散。（5）对于不同组织来源的DNA或RNA进行原位PCR扩增的次数不同，不是循环次数越多越好，次数增多有可能使扩增产物从细胞内溢出，增加非特异性。     

戊型肝炎病毒F86株的某些生物学性状及分子生物学特征的鉴定

目的：对法国赠送的戊型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＥｖｉｒｕｓ,ＨＥＶ）Ｆ８６株进行生物学性状与基因特征的鉴定,并与我国分离的８７Ａ株病毒进行比较。方法：用常量法测定病毒的血凝滴度;微量滴定法测定在２ＢＳ、Ａ５４９、ＬＬＣ－ＭＫ２细胞中的病毒滴度;腹腔注射ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,３周后取血清进行抗体检测;利用ＲＴ－ＰＣＲ方法从接种病毒的细胞培养液中直接检测病毒ＲＮＡ,ＰＣＲ阳性产物纯化回收后克隆并测序。结果：Ｆ８６株病毒血凝试验阴性;在２ＢＳ、Ａ５４９细胞中连传３代,病毒滴度稳定,在ＬＬＣ－ＭＫ２细胞中病毒滴度稍低;在接种Ｆ８６株病毒的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠中可检出特异性抗体;在其细胞培养物中检出ＨＥＶ聚合酶区一段核苷酸序列,测序结果与我国８７Ａ株的同源性为９８．７％。结论：Ｆ８６株病毒不能凝集人Ｏ型红细胞,对２ＢＳ、Ａ５４９及ＬＬＣ－ＭＫ２细胞均敏感,对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠不致病。部分序列的测定结果表明该株病毒确为ＨＥＶ,从而由国外实验室证实ＨＥＶ可用人源性细胞分离。     

HBV－DNA套式一次PCR方法的建立

应用乙型肝炎病毒ＤＮＡＣ基因区的一对外引物（ＨＢＣ＿１和ＨＢＣ＿２，扩增片段长度为５６６ｂｐ）及一对内引物（ＨＢＣ＿３和ＨＢＣ＿４，扩增片段长度为３０１ｂｐ）对不同稀释度的ＨＢＶ－ＤＮＡ（ａｄｒ亚型）进行套式一次ＰＣＲ扩增，结果表明灵敏度可达到１０ａｇ水平。此方法快速、简便、灵敏、材异，与分子杂交的灵敏度相当。     

兔肺白念珠菌病急性期CT表现分型的初步研究

目的：对兔肺白念珠菌病急性期的CT表现进行初步的分型。方法：24只新西兰大白兔随机分为实验组及对照组,实验组通过经皮气管穿刺法建立兔肺念珠菌病模型,对照组用同样方法注入生理盐水,于接种后隔日—次行CT扫描观察CT表现,并与病理对照。结果：成功建立13例兔肺念珠菌病模型,CT表现可分为小叶实变型6例,以胸膜下分布为主,病理表现为肺泡炎性渗出;叶段实变型3例,分布于肺低垂部,多表现为肺内出血性梗死灶;结节型2例,均多发,以分布支气管血管束周围多见,病理见肉芽肿性病变;磨玻璃型2例,双肺不对称分布,为肺泡及肺泡壁的炎细胞浸润。结论：原发性肺白念珠菌病急性期CT表现可分为四种类型,包括小叶实变型、叶段实变型、结节型和磨玻璃型。     

普通PCR与TD-PCR在临床医学科研中应用价值的比较

目的 比较普通聚合酶链反应(PCR)与降落聚合酶链反应(Touchdown PCR,TD-PCR)在临床医学科研中的价值.方法 以人类外周血基因组DNA为模板,设计VHL基因3个外显子的3对引物,根据普通PCR及TD-PCR原理设计包括3个外显子片段在内的PCR程序,通过试验选择PCR最佳反应条件,在同一程序中分别对3个片段进行扩增,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物,纯化后PCR产物测序分析两种试验方法 的差别.结果 电泳检测及纯化后DNA产物测序分析均显示TD-PCR扩增产物条带特异性、效率较普通PCR扩增产物高.结论 成功建立了TD-PCR方法 ,TD-PCR方法 较普通PCR更为高效实用,为临床基因突变筛查研究提供了快速可靠的手段.     

流感疫情的快速实验室诊断与分析

目的 通过实验室病原学检查,结合流行病学史及临床症状,初步确定某部集体发热疫情的致病病原体.方法 采集患者的血液、结膜分泌物及鼻、咽拭子等标本,分别通过间接免疫荧光法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、反转录巢氏聚合酶链反应(RT-PCR)实验、病毒分离培养和细菌培养等实验室诊断方法,筛查致病病原体.结果 所有鼻、咽拭子、结膜分泌物及血细菌培养未见致病菌生长.3例最后退热患者咽拭子的病毒分离培养结果为阴性.20种呼吸道病原体免疫荧光IgM抗体筛查结果显示,流感A型阳性率为68.4%(39/57),其余病原体抗体阳性率的升高无统计学意义.ELISA流感病毒总IgM抗体阳性率70.2%(40/57)、流感病毒A型IgM抗体阳性率64.9%(37/57)、B型为35.1%(20/57).所有鼻、咽拭子及结膜分泌物RT-PCR扩增结果未见特异扩增带.结论 初步诊断此次群体发热由流感病毒感染引起.该疫情的实验室快速诊断为今后疫情的早期诊治及医院实验室开展传染病防治工作积累了经验.