单核细胞CD36表达与强直性脊柱炎

背景：强直性脊柱炎是一种涉及到慢性全身炎症的自身免疫性疾病,肿瘤坏死因子和白细胞介素6在强直性脊柱炎患者中升高,而肿瘤坏死因子和白细胞介素6等炎症因子可以抑制CD36在单核细胞的表达。 目的：分析单核细胞CD36的表达与强直性脊柱炎的关系。 方法：纳入84例初诊为强直性脊柱炎的患者和111例健康对照人群,应用流式细胞学技术检测强直性脊柱炎患者和健康人群单核细胞CD36的表达情况,同时,检测两组的生物化学、免疫学、血液常规以及相关炎症因子等指标。 结果与结论：两组受试者基本资料比较结果显示,强直性脊柱炎患者单核细胞CD36荧光强度低于健康对照人群(P < 0.01)。单核细胞CD36荧光强度水平与C-反应蛋白、血沉、白细胞介素6以及肿瘤坏死因子负相关。另外,单核细胞CD36荧光强度水平与BASDAI评分呈负相关。Logistic回归分析结果显示,血沉、肿瘤坏死因子、白细胞介素6以及单核细胞CD36荧光强度与强直性脊柱炎相关,为强直性脊柱炎患者的危险因素(P < 0.05)。结果提示,强直性脊柱炎释放的炎症因子可以下调单核细胞CD36的表达,单核细胞CD36低表达与在强直性脊柱炎存在联系。在临床上,检测单核细胞CD36的表达可能可以作为判断强直性脊柱炎患者机体炎症反应程度和疾病活动性有效的指标。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

强直性脊柱炎患者Th17细胞与CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞的变化及意义

目的 探讨强直性脊柱炎( ankylosing spondylitis,AS)患者Th17和CD4+ CD25+ FoxP3+调节性T细胞比例及相关细胞因子水平的变化及意义.方法 强直性脊柱炎患者40例,正常同年龄对照37例.采用流式细胞术检测外周血Th17与调节性T细胞的比例,双抗体夹心酶联免疫吸附法( ELISA)检测血清IL-6、IL-23、IL-17和TGF-β水平.结果 AS组患者外周血Th17细胞比例明显高于对照组[(1.02±0.34)％vs(0.68:±0.29)％,P＜0.05],CD+ CD25+ FoxP3+细胞比例明显低于对照组[(3.77±0.81)％ vs (4.69±1.23)％,P＜0.05].AS患者血清中IL-6、IL-23、IL-17水平明显高于对照组[ (6.15±2.71) ng/L vs(3.31±1.65) ng/L; (9.44±3.12) ng/ml vs (5.82±2.61) ng/ml;( 10.53±4.97) ng/L vs (6.78±3、26) ng/L,P均＜0.01];差异有统计学意义.与对照组相比,AS组TGF-β水平有下降的趋势[(4,76±2.15) ng/ml vs(5.16±2.02) ng/ml,P＞0.05],但差异无统计学意义.AS患者血清各细胞因子含量与临床及实验室指标无相关性.结论 强直性脊柱炎患者Th17与CD4+CD35+FoxP3+调节性T细胞比例失衡,血清IL-6、IL-23、IL-17和TGF-β水平变化,这些原因可能参与强直性脊柱炎免疫发病过程.     

慢性炎症状态对强直性脊柱炎外周CD8~+记忆性T细胞的影响

本研究通过分析不同组别强直性脊柱炎患者外周记忆性CD8~+T细胞比例、亚群、IFN-γ,IL-2分泌及抗原特异性记忆性T细胞比例与正常对照的差异,探讨自身免疫性炎症反应对强直性脊柱炎患者记忆性T细胞的影响;主要通过流式细胞术检测强直性脊柱炎患者外周血CD8~+记忆性T细胞分布和分泌IFN-γ、IL-2的记忆性T细胞百分比及产生IFN-γ的抗原特异性记忆性T细胞百分比。结果发现与正常对照组相比,强直性脊柱炎各组患者外周总CD8~+记忆性T细胞的比例无显著差异,但亚群比例分析显示疾病组中央型记忆性T细胞比例升高,效应型记忆性T细胞比例有所下降。进一步研究发现各组强直性脊柱炎患者分泌IFN-γ的外周CD8~+记忆性T细胞比例与正常对照相比显著下降(P0.05),而IL-2的分泌细胞比例无统计学差异;并且疾病组抗原特异性记忆性T细胞比例较正常对照明显升高(P0.05)。因此强直性脊柱炎患者在疾病状态下,CD8~+TM的数量虽然没有变化,但其产生IFN-γ的功能下降,且抗原特异性记忆性T细胞的比例升高,这可能与患者感染高发相关。     

强直性脊柱炎患者外周血CD4+调节性T细胞的变化及意义

目的 探讨强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者外周血中CD4+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的表达、功能及意义.方法 采用流式细胞术检测78例AS患者和50例健康志愿者外周血中CD4+CD25+CD127lo/- Treg、细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)和NK细胞,采用ELISA法检测血清中β型转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平.从患者外周血单个核细胞中磁珠分选出CD4+CD25+ Treg细胞,混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte culture, MLC)分析其免疫抑制功能.结果 AS活动期患者外周血中CD4+CD25+CD127lo/-Treg占CD4+ T淋巴细胞的百分比为(4.36±1.21)%,MLC中CD4+CD25+ Treg抑制同种异体T淋巴细胞增殖功能低下,与其Treg分泌TGF-β减少相关,CD4+ Treg含量及功能均低于健康志愿者(P<0.05).AS患者外周血中CD4+CD25+CD127lo/- Treg水平与TGF-β呈正相关,与TNF-α呈负相关.结论 AS患者外周血中Treg表达水平低,且存在功能缺陷,导致体内诱导免疫耐受机能不足,可能参与AS免疫发病.     

强直性脊柱炎患者外周记忆性T细胞亚群及功能初探

通过分析强直性脊柱炎患者外周血CD4+和CD8+记忆性T细胞亚群比例和产生细胞因子IFN-γ的能力,探讨记忆性T细胞在强直性脊柱炎发病中的作用。流式细胞术检测强直性脊柱炎患者外周血CD4+和CD8+记忆性T细胞亚群分布和分泌IFN-γ的记忆性T细胞百分比。强直性脊柱炎患者外周CD4+和CD8+记忆性T细胞的比例和正常对照组相比,无差异,进一步比较效应型(TEM)和中央型记忆性T细胞(TCM)在CD4+和CD8+亚群中的分布,发现CD4+TEM及CD4+TCM与正常人相比无明显差异(P>0.05),而CD8+TCM与正常人相比显著升高(P<0.05),CD8+TEM与正常对照相比则明显下降(P<0.05)。同时,强直性脊柱炎患者外周CD4+和CD8+记忆性T细胞分泌细胞因子IFN-γ的细胞比例与正常人相比显著下降(P<0.05)。强直性脊柱炎患者在疾病活动期状态下,其外周CD8+记忆性T细胞的亚群分布发生异常,同时CD4+TM和CD8+TM的数量虽然没有变化,但是其产生细胞因子IFN-γ的功能下降。这可能与患者对感染的易感性提高有一定关联。     

强直性脊柱炎患者外周血T细胞亚群及其CD3+CD69+、CD3+CD54+检测

强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)是一种主要侵犯脊柱,并累及骶髂关节和周围关节,以慢性进行性炎症为主要表现的自身免疫性疾病.     

强直性脊柱炎HLA-B27检测及其临床意义

强直性脊柱炎(AS)是一种慢性、进行性,中轴关节受累的关节病变,其中以骶髂关节和脊柱关节受累为主要临床表现.该病早期进展较慢,但后期发展较快,很短时间内形成驼背畸形,髋、膝等关节强直,故早期诊断显得尤为重要.人类主要组织相容性抗原HLA-B27表达与强直性脊柱炎高度相关,检测外周血HLA-B27的表达是诊断强直性脊柱炎的重要手段.现综述如下.     

强直性脊柱炎外周血中B细胞亚群格局和英夫利西单抗对它的影响

研究强直性脊柱炎患者外周血B细胞亚群格局和血浆中IgG浓度的变化,探讨B细胞在强直性脊柱炎发病中的作用机制。收集18例健康人、10例强直性脊柱炎患者以及10例经英夫利西单抗治疗前后的强直性脊柱炎患者外周血,流式细胞术分析外周血中B细胞亚群的比例;ELISA技术检测血浆中IgG和IgM的含量。结果显示,与健康对照相比,强直性脊柱炎患者外周血中CD19+CD24int CD38int成熟B细胞比例显著升高,CD19+CD24hi CD38-记忆性B细胞比例显著降低,而CD19+CD24hi CD38hi调节性B细胞和CD19+B细胞分泌IL-10的能力无显著变化;强直性脊柱炎患者血浆中IgG浓度显著升高,而IgM浓度无显著变化;英夫利西单抗治疗后,强直性脊柱炎患者外周血中CD19+CD24hi CD38-记忆性B细胞比例显著上升,CD19+CD24int CD38int成熟B细胞比例和血浆中IgG浓度显著下降。研究结果表明,强直性脊柱炎患者体液免疫反应活跃,抑制B细胞的活化可作为治疗强直性脊柱炎的备选方案。     

CD38在类风湿关节炎外周血与滑膜组织中的表达

CD38是单链Ⅱ型跨膜蛋白,为B淋巴细胞活化的标记物。类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是自身免疫性疾病,病变滑膜内存在大量B淋巴细胞增生。本研究通过对RA患者外周血及滑膜中的CD38进行表达分析从而探寻RA发病的免疫机制。应用流式细胞术检测RA患者(N=103)及正常人(N=120)外周血中CD38的表达;采用免疫组织化学法分别对5例RA患者、骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者及强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者滑膜组织中CD38的表达进行检测;将靶向CD38的SiRNA转入RA患者滑膜成纤维细胞(RASF)(N=5)后,ELISA法检测培养基中TNF-α、IL-1α和IL-β的表达。流式结果显示RA患者外周血中CD38+(P=1.92E-09)、CD3+CD38+(P=0.019)和CD56+CD38+(P=0.007)亚群细胞表达率明显升高,且CD38+细胞的表达率与RA患者类风湿因子(RF)水平显著相关(P=0.026);免疫组织化学结果表明CD38在RA患者滑膜中特异性高表达;ELISA实验证实:对CD38基因进行SiRNA干扰后,RASF培养基中的IL-1α和IL-1β表达水平显著降低。该项研究表明:CD38基因的表达增加可能参与RA患者的免疫激活。     

血清miR-146a变化与强直性脊柱炎的相关性

目的:探究强直性脊柱炎血清miR-146a表达情况,从而发现潜在的强直性脊柱炎的生物标记分子。方法:qRTPCR检测强直性脊柱炎患者和正常人血清miR-146a表达水平。根据脊柱后凸的程度将患者分为A(后凸畸形70%)和B(后凸畸形≥70%)两组。疾病的活性以及患者功能状态分别由强直性脊椎炎疾病活动度指数(BASDAI)和强直性脊椎炎功能指数(BASFI)来表示。采用qRT-PCR检测A和B两组血清miR-146a表达水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价血清中miR-146a对强直性脊柱炎的诊断价值,同时将miR-146a表达量与临床指标进行相关性分析。结果:miR-146a在强直性脊柱炎血清组表达明显上调(P0.05)。miR-146a的ROC曲线下面积值为0.917;且B组强直性脊柱炎患者血清中miR-146a表达水平显著高于A组(P0.05)。此外,miR-146a表达水平同BASDAI之间存在显著相关性(r=0.5,P0.05)。结论:血清中miR-146a表达检测可作为强直性脊柱炎诊断的辅助性生物标记。miR-146a表达水平也可能与疾病活性和胸腰椎后凸畸形的严重程度成一定的相关性。     

类风湿关节炎患者CD62P、CD41/CD61的表达及意义

目的:通过检测类风湿关节炎(RA)患者血小板表面活化标志物CD41/CD61、CD62P的表达,研究血小板活化与RA及RA活动性的关系。方法:采用流式细胞技术检测RA患者及健康对照组血小板CD41/CD61、CD62P的表达阳性率。结果:血小板CD62P阳性率在RA活动组及RA组患者分别高于缓解组和健康对照组,CD41、CD61阳性率差别在各组间无统计学意义。结论:(1)RA患者血小板CD62P表达增高与疾病活动有关;(2)血小板CD62P高表达可能是RA患者好发心血管疾病的原因之一;(3)CD41/CD61可能与RA炎症及其好发心血管病无关。     

033 CD30/CD30L的功能研究进展

CD30最初发现于何杰金淋巴瘤中的何杰金细胞和Reed-sternberg(RS)细胞,现已知在一些正常淋巴细胞、病毒感染的淋巴细胞、淋巴系统来源的肿瘤细胞及产生Th2型细胞因子的活化T细胞亚群表面也有表达.CD30属于肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族,CD30的生理功能除具有协同刺激信号的传递外,还有其他多种功能.CD30配体(CD30L)属于肿瘤坏死因子(TNF)超家族,CD30L存在于活化的T细胞、静止B细胞、粒细胞、胸腺髓质细胞以及各种白血病细胞.CD30和CD30L交联后,通过TNFR相关因子(TRAF),包括TRAF1,2,3,5,导致多样的生理功能信号传导.本文就CD30/CD30L的分子生物学特征、细胞上的表达、生理功能及其与疾病关系的研究做以下综述.     

脱氢表雄酮对人脐静脉内皮细胞CD40/CD40L表达的影响

目的:探讨脱氢表雄酮(DHEA)对干扰素-γ(I NF-γ)刺激下的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)CD40/CD40L表达的影响。方法:原代培养人脐静脉内皮细胞,给予I NF-γ刺激和不同浓度DHEA干预。采用流式细胞术检测CD40/CD40L在细胞表面的表达,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CD40/CD40L mRNA的表达。结果:I NF-γ刺激HUVECs表达CD40/CD40L,DHEA下调I NF-γ诱导的HUVECs表面CD40/CD40L的表达,同时对I NF-γ刺激下的CD40/CD40L mRNA的表达有抑制作用,并且呈剂量依赖性。结论:DHEA能减轻I NF-γ刺激下的人脐静脉内皮细胞CD40/CD40L的表达。     

CD40-CD40L在强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞上的表达

目的探讨共刺激分子CD40CD40L在强直性脊柱炎(AS)患者的外周血淋巴细胞亚群上的异常表达与免疫功能紊乱的关系。方法用流式细胞仪采用直接免疫荧光法测定30例AS患者和20例健康对照人外周血淋巴细胞表面标志CD3、CD4、CD8、CD19的表达情况,CD40L在CD4 T和CD8 T细胞上的表达及CD40在CD19 B细胞上的表达。用速率散射比浊法测定血清中免疫球蛋白IgG,IgA和IgM的水平。结果①AS患者CD3 、CD3 CD4 、CD19 细胞较正常对照组显著增高(P<0.05),CD3 CD8 细胞较正常对照组显著降低(P<0.05);②AS患者CD4 T细胞和CD8 T细胞上的CD40L、CD19 B细胞上CD40的表达都较对照组显著增高(P<0.05);③AS患者血清中2种免疫球蛋白IgG、IgA的水平均较对照组显著增高(P<0.05)。结论CD40CD40L途径在AS免疫功能紊乱中起了重要作用。     

急性冠状动脉综合征患者血小板CD40L/CD154的增强表达

目的　研究血小板 CD40 L/CD15 4和可溶性 CD40 L/CD15 4是否在急性冠状动脉综合征的炎性过程中起作用。方法　所有研究对象均为大学附属医院的患者 ,急性心肌梗死患者 15例 ,不稳定性心绞痛患者 2 5例 ,稳定性心绞痛患者 15例 ,健康对照者 12例。测定血小板 CD40 L/CD15 4,血小板 P-选择素 / CD6 2 P和可溶性 CD40 L/ CD15 4血清浓度。结果　用均数 (标准差 )表示 ,在心肌梗死组血小板CD40 L/ CD15 4表达为 6 .2 (2 .3)平均荧光强度 ,在不稳定性心绞痛组为 11(3.3) ,与心肌梗死组相比 P<0 .0 0 1;在稳定性心绞痛组为 3.6 (0 .9…     

依那西普治疗升高强直性脊柱炎外周血DC细胞数量

目的:研究肿瘤坏死因子α (TNF-α)拮抗剂依那西普(Etanercept)对强直性脊柱炎(AS)病人外周血DC细胞的影响.方法:10例健康志愿者,40例活动性强直性脊柱炎患者,随机给予依那西普(50 mg,皮下注射,1次/周)或安慰剂治疗.流式细胞术分析健康志愿者及AS患者治疗前后患者髓系树突状细胞(mDC)和CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)水平.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中可溶性白细胞介素2 (IL-2) 受体的水平.结果:依那西普治疗后,MHC Class Ⅱ阳性树突状细胞(MHC Class Ⅱ positive mDC)明显升高.Treg细胞数量升高.血浆可溶性IL-2受体水平降低.结论:抗TNF-α的治疗阻断了MHC Class Ⅱ positive mDC的成熟,从而增强了调节性T细胞的水平,并抑制了效应T细胞的功能.     

CD4+CD25high调节性T细胞在类风湿性关节炎病程中的消长及其意义

目的研究类风湿性关节炎(RA)患者病情发展不同阶段外周血及滑液中CD4 CD25high调节性T细胞数量的差别,及其与类风湿性关节炎活动程度的相关性,探讨CD4 CD25highT细胞在RA发生发展中所发挥的免疫抑制和调节作用。方法分别选取未经过缓解病情抗风湿药(DMARDs)治疗的活动性RA患者11例,经DMARDs治疗病情缓解的RA患者12例,和DMARDs治疗后效果不佳的RA患者9例,以及正常对照8例,检测他们的外周血淋巴细胞,以流式细胞术检测CD4 CD25high调节性T细胞的百分率,并研究CD4 CD25highT细胞百分率与抗环瓜氨酸(CCP)抗体,C反应蛋白(CRP),血沉(ESR)及类风湿因子(RF)的相关性。对其中部分患者的血液和关节滑液同时进行分析。结果RA未经治疗组和治疗效果不佳组CD4 CD25highT细胞的百分率(分别是5.24%和6.43%)明显低于正常对照组和治疗后病情缓解组(分别是17.17%和11.79%,P<0.01)。RA患者CD4 CD25highT细胞的百分率与抗CCP抗体(58.0Ru/mL),ESR(38.8mm/h)及CRP(2.73μg/L)呈明显负相关(P<0.05),与类风湿因子(RF=14.4Iu/mL)无明显的相关性(P=0.054)。正常对照组的CD4 CD25highT细胞百分率与抗CCP抗体(均<5.0Ru/mL),ESR(4.67mm/h),CRP(0.15μg/L)及RF(1.37)无明显相关性(P>0.1)。RA患者关节滑液中CD4 CD25highT百分率明显低于强直性脊柱炎(ankilosing spondylitis,AS)关节积液患者(P<0.05)。结论试验结果表明未经缓解病情治疗和治疗后效果不佳者的外周血中,CD4 CD25high调节性T细胞相对减少,且与病情活动程度负相关,这可能是RA发生和发展的一个重要因素。     

可溶性Jagged1/Fc融合蛋白对CD4~＋CD25~＋T细胞分化的作用

目的:探讨可溶性Jagged1/Fc融合蛋白对小鼠淋巴细胞CD4+ CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Tr)分化的作用.方法:利用荧光标记的单克隆抗体(mAb)双染技术结合流式细胞术(FCM)观察不同时间Jagged1/Fc融合蛋白及不同浓度Jagged1-Notch信号通路抑制剂DAPT对小鼠淋巴细胞表面分子CD4和CD25表达的影响.通过Luminex蛋白液相芯片技术检测Jagged1/Fc作用下T细胞培养上清中白细胞介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)和转化生长因子β(TGF-β)的表达水平.结果:浓度为1 000 μg/L时,Jagged1/Fc在第1、 3、 5天均能增强淋巴细胞表面CD4,CD25的表达,以第3天的增强作用最为明显(P<0.01);DAPT浓度从2 μmol/L逐渐增至16 μmol/L时,对CD4、 CD25表达的抑制作用逐渐增强,以16 μmol/L DAPT的抑制作用最为明显,呈剂量依赖关系(P<0.01,r=0.96),而Jagged1/Fc能够逆转DAPT对CD4,CD25表达的抑制;Jagged1/Fc能够促进淋巴细胞培养上清中TGF-β表(P<0.01).结论:可溶性Jagged1/Fc融合蛋白可能参与诱导小鼠淋巴细胞向CD4+ CD25+ Tr分化.     

CD25/IL-2Ra在人肝组织毛细胆管上的表达

目的观察CD25/IL-2Ra在人肝毛细胆管上的表达,以利于肝毛细胆管分布、形态的观察。方法引用免疫组化方法观察CD25/IL-2Ra分子在人肝毛细胆管上的表达,并设立阳性对照(扁桃体)和CD4、CD8之间的片间对照。通过免疫荧光法观察CD25/IL-2Ra在肝毛细胆管上的表达,结果与免疫组化相一致。通过阻断试验进一步确认肝毛细胆管上CD25/IL-2Ra分子表达的特异性。通过与国际公认的CEA(多克隆抗体)作对照,进一步确认CD25/IL-2Ra是一种优良的肝毛细胆管标记物。结果常规免疫组化方法DAB显色CD25/IL-2Ra标记的毛细胆管显棕黄色条索状结构,显示结果比国际公认的CEA更佳,免疫荧光呈索状绿色荧光表达,阻断试验进一步确认肝毛细胆管上CD25/IL-2Ra分子的存在。结论免疫组化、免疫荧光法检测CD25/IL-2Ra表达来观察肝脏毛细胆管的分布、形态等,具有明确的特异性。     

抗CD3/抗CD20双特异双链抗体的生物学活性研究

目的研究抗CD3/抗CD20双特异双链抗体的生物学活性.方法采用亲和层析法纯化本室构建的抗CD3/抗CD20双特异双链抗体可溶性表达产物,并用SDS-PAGE,Westernblot和分子排阻层析鉴定纯化产物;采用FACS法和玫瑰花环试验测定纯化产物与靶细胞的结合活性;采用3H-TdR掺入实验和51Cr释放试验测定该双特异双链抗体的生物学性质.结果纯化的抗CD3/抗CD20双特异双链抗体具有与Jurkat(CD3+)和Daudi细胞(CD20+)的结合活性,且能同时与Jurkat和Daudi细胞结合形成玫瑰花环,并能竞争性封闭亲代鼠源性抗体HIT3a和HI47与Jurkat和Daudi细胞的结合位点;该双特异双链抗体具有促有丝分裂原作用和介导激活的T细胞杀伤Daudi细胞的活性.结论抗CD3/抗CD20双特异双链抗体具有与亲代鼠源性抗体HIT3a和HI47相同的性质,且能介导激活的T细胞杀伤表达CD20抗原的肿瘤细胞,是一个有望用于B细胞恶性肿瘤临床治疗的双特异性抗体.