质粒DNA促进HBsAg—抗HBs复合型疫苗诱生的免疫应 …

目的 研究ＨＢｓＡｇ－抗ＨＢｓ－质料ＤＮＡ复合型疫苗的免疫原性及其诱生细胞免疫应答的类型。方法 分别以ＨＢｓＡｇ、ＨＢｓＡｇ－抗－ＨＢｓ（ＩＣ）、ｐＩ／ＡｍｐＨＢｓ、ＩＣ－ｐＩ／ＡｍｐＨＢｓ及ＩＣ－ｐＩ／Ａｍｐ免疫小鼠，检测抗－ＨＢｓ的效价，分析抗－ＨＢｓ ＩｇＧ亚类（ＥＬＩＳＡ）；取免疫小鼠脾细胞，体外抗原刺激，用竞争性ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＩＦＮ－γ及ＩＬ－４ ｍＲＮＡ转录水平。结果 ＩＣ－ｐＩ     

新型疫苗佐剂

新型疫苗佐剂柳钟勋（中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所，北京１０００５０）新型免疫佐剂（Ｎｏｖｅｌｉｍｍｕｎｏａｄｊｕｖａｎｔ）是生物反应调节剂（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｒｅｓｐｏｎｓｅｍｏｄｉｆｉｅｒ，ＢＲＭ）中的免疫调节剂（Ｉｍｍｕｎｏ...     

重组BCG疫苗和结构杆菌HSP65 DNA疫苗免疫原性的 …

目的 研究重组ＢＣＧ（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＢＣＧ，ｒＢＣＧ）疫苗和人结核杆菌热休克蛋白（ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＨＳＰ）６５ ＤＮＡ疫苗对小鼠免疫应答的影响，评价两种疫苗；的免疫原性。方法 用ｒＢＣＧ疫苗和ＨＳＰ６５ ＤＮＡ疫苗免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，免疫８周时，采血、取腹腔巨噬细胞和脾脏进行０实验，以释放量检测巨噬细胞吞噬活性，以淋巴细胞刺激指数（ＳＩ）反应细胞增殖能力，以ＥＬＩ     

抗HBs-HBsAg复合物诱生体液免疫应答的研究

目的研究抗ＨＢｓ－ＨＢｓＡｇ复合物在ＢＡＬＢ／ｃ小鼠诱生体液免疫应答的特点。方法分别用鼠抗ＨＢｓ－ＨＢｓＡｇ免疫原性复合物（ＩＣ）或单独ＨＢｓＡｇ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠（加或不加氢氧化铝），分析其诱生的抗ＨＢｓＩｇＧ效价及ＩｇＧ亚类。结果用ＩＣ加氢氧化铝为佐剂免疫小鼠诱生的抗ＨＢｓ中以ＩｇＧ１亚类为主，而用ＨＢｓＡｇ免疫鼠则以ＩｇＧ２ｂ亚类较高。ＩＣ不加氢氧化铝佐剂诱生的抗ＨＢｓ中ＩｇＧ１及ＩｇＧ２ａ均高于单独ＨＢｓＡｇ免疫鼠。研究还显示，抗ＨＢｓＩｇＧＦｃ段是巨噬细胞（ＭΦ）等抗原提呈细胞摄取ＩＣ的主要途径。结论抗ＨＢｓ－ＨＢｓＡｇ复合物免疫诱生的体液免疫应答较单独ＨＢｓＡｇ免疫强。抗ＨＢｓ主要通过Ｆｃ段的介导作用，改变了机体抗原提呈细胞对ＨＢｓＡｇ的摄取、加工及抗原提呈，并可增强ＨＢｓＡｇ的免疫原性。     

细胞因子对乙肝病毒基因疫苗诱导产生抗体的影响

将构建的三套乙肝病毒基因疫苗（分别编码Ｓ蛋白、ｐｒｅＳ１＋ｐｒｅＳ２＋Ｓ蛋白及ｐｒｅＳ２＋Ｓ蛋白）注射于Ｃ５７ＢＬ／６小鼠胫前肌内。基因疫苗接种３天后，以同样部位注射ｒｈＩＬ－２、ｒｈＩＬ－４、ｒｈＩＬ－６、ｒｈＩＦＮ－γ。运用ＥＬＩＳＡ检测不同时间小鼠血清中乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）及抗－ＨＢｓ。结果显示：注射基因疫苗３天内，小鼠体内即可表达ＨＢｓＡｇ；两周后，血清中可测到抗－ＨＢｓ，两月后抗体水平达到高峰，并保持高水平至少两月以上；肌内注射的几种细胞因子均可提高血清中抗－ＨＢｓ水平，与对照组相比差异有极显著性（Ｐ＜０．０１），其中，ｒｈＩＬ－４、ｒｈＩＬ－６、ｒｈＩＦＮ－γ较ｒｈＩＬ－２作用强。提示，细胞因子可作为基因疫苗的佐剂。该研究为增强基因疫苗免疫效果提供了新途径。     

点突变p53肽诱导肽特异性CTL的研究

目的探索点突变ｐ５３肽诱导细胞免疫应答的可能性,为其作为肽疫苗用于肿瘤免疫治疗提供实验依据。方法人工合成小鼠点突变ｐ５３肽Ｐ１３２Ｆ（ＬＮＫＬＦＦＱＬ,１３２Ｃｙｓ→Ｐｈｅ突变）,与不完全弗氏佐剂（ＩＦＡ）或ＲＩＢＩ佐剂（ＲＡＳ）混合,皮下免疫Ｃ５７ＢＬ／６小鼠,分离脾细胞体外用肽再刺激,诱导细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）,并以５１Ｃｒ释放法检测其杀伤活性。结果Ｐ１３２Ｆ肽加上ＩＦＡ或ＲＡＳ免疫小鼠,均能诱导肽特异性ＣＤ８＋ＣＴＬ;低剂量重组白细胞介素２（ｒＩＬ－２）能增强肽免疫效果。结论所用突变的ｐ５３蛋白具有免疫原性,提示来源于突变ｐ５３的抗原肽有可能作为肽疫苗用于临床肿瘤免疫治疗     

新型免疫佐剂在疫苗中的应用

新型免疫佐剂在疫苗中的应用柳钟勋编者按：半个世纪前Ｒａｍｏｎ在研究白喉毒素或类毒素的免疫原性时，发现了有些与免疫原无关的物质可增强其免疫原性。之后Ｇｌｅｍｙ用明矾将白喉类毒素沉淀，免疫效果显著增强，从而导致铝佐剂的出现。Ａｌ（ＯＨ）３作为疫苗佐剂沿用...     

Epstein—Barr病毒基因工程亚单位疫苗膜抗原gp340／ …

利用病毒学研究所免疫研究室重组的表达Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒膜抗原（ＭＡ）ｇｐ３４０／２２０重组痘苗病毒感染１４３细胞，２４小时后裂解细胞，获得的上清液经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ及Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２００层析纯化，经免疫打点分析后收集阳性蛋白，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，考马斯亮蓝Ｒ－２５０染色，显示为单一的蛋白带，从而获得纯化的亚单位疫苗ＭＡ ｇｐ３４０／２２０。将纯化的ＭＡ与Ａ１（     

IFNαA－HBVPre－S融合基因的克隆及序列测定

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｐｒｅ－Ｓ蛋白是ＨＢＶ与靶细胞结合的重要蛋白。ＩＦＮ是生物体内具有多种生物功能的细胞因子，ＩＦＮ在乙型肝炎的防治中具有重要意义。通过ＰＣＲ技术，我们在体外扩增了ＩＦＮαＡ基因的全序列和ＨＢＶＰｒｅ－Ｓ基因的全序列。为了便于融合基因的克隆和表达，我们在引物的５’端设计了相应的酶切位点，保护位点，起始密码和终止密码。通过基因克隆技术，我们构建了ＩＦＮαＡ－ＨＢＶＰｒｅ－Ｓ融合基因的克隆并进行了序列测定。大量研究表明，ＨＢＶ和靶细胞的结合可能是由ＨＢＶ包膜上的Ｐｒｅ－Ｓ蛋白表位介导的，因此带有附着位点的Ｐｒｅ－Ｓ蛋白，可能比ＨＢｓＡｇ疫苗保护效果好。另一方面，α－干扰素作为治疗乙型肝炎的重要生物制剂，也是乙肝免疫接种过程中良好的免疫性剂。ＩＦＮαＡ－ＨＢＶＰｒｅ－Ｓ融合基因克隆的成功，为表达同时具有ＩＦＮαＡ生物学活性以及ＨＢＶＰｒｅ－Ｓ蛋白免疫原性的双特性蛋白奠定了基础。     

乙型肝炎疫苗免疫持久性预防效果的定人研究

报告了新生儿乙型肝炎（乙肝）血源疫苗免疫后１－９年的抗－ＨＢｓ持久性。结果表明，母亲乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阳性和阴性儿乙肝疫苗免疫后，抗－ＨＢｓ一率（Ｓ／Ｎ≥２．１）等１年分别为９３．７％和９８．６％，至８－９年已降低为６３．６％，而低抗体水平（≥２．１）仍在６０％以上。表明国产乙型肝炎血源疫苗免疫原性和持久性是好的。而对１９８５年的一批疫苗始终进行定量观察，至第１０年阳性率还能达到６     

Epstein-Barr病毒壳抗原gp125的纯化和应用

目的研制ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ（ＥＢ）病毒诊断试剂。方法将重组痘苗病毒表达的Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒（ＥＢＶ）壳抗原（ＶＣＡ）主要多肽ｇｐ１２５纯化，作为诊断抗原建立了酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），检测了４８份鼻咽癌（ＮＰＣ）病人血清及１０份正常人血清中的ＶＣＡ／ＩｇＡ抗体。结果该方法与免疫荧光（ＩＦ）检测结果一致，但ＥＬＩＳＡ的平均几何滴度（ＧＭＴ）是ＩＦ的１２倍。结论以纯化的ＥＢ病毒壳抗原主要多肽ｇｐ１２５作为诊断抗原建立的检测方法，更适合于ＥＢＶ相关疾病的血清学诊断和血清流行病学调查。     

三叉初级感觉神经元的选择性标记--植物凝集素法光镜、电镜研究

为了探讨三叉初级传入路径中传导伤害性信息的小神经元在结构和功能上的差异，用植物凝集素（Ｂａｎｄｅｉｒａｅａｓｉｍｐｌｉｃｉｆｏｌｉａｉｓｏｌｅｃｔｉｎ－Ｂ４，ＢＳＩ－Ｂ４）法在光镜，电镜水平观察了三叉初级传入路径中标记神经元的分布及形态特征，光镜结构表明：ＢＳＩ－Ｂ４标记的初级传入终末只分布于三叉神经尾侧亚核的Ⅰ层和Ⅱ层，尤以Ⅱ层密集，标记终末光滑不呈串珠状。三叉神经节中的ＢＳＩ－Ｂ４标记神经为中     

红细胞作载体的谷胱甘肽过氧化物酶用于脑缺血—再灌注的研究

目的和方法：采用红细胞（Ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ，ＲＢＣ）作为谷胱甘肽过氧化物酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＧＳＨ－Ｐｘ）的载体，将包载ＧＳＨ－Ｐｘ的ＲＢＣ（ＲＢＣ－ＧＳＨ－Ｐｘ）用于兔脑缺血－再灌注（ｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ，Ｉ－Ｒ）研究。结果：包入采用低渗透析法，渗透压达到１３２ｍＯｓｍ。采用５１Ｃｒ标记法测定的兔ＲＢＣ的循环半寿期为（１３４±１５）ｄ（ｎ＝６），ＲＢＣ－ＧＳＨ－Ｐｘ的半寿期为（７３±２５）ｄ（ｎ＝５）。２，３，５—氯化三苯基四氮唑（ＴＴＣ）染色结果表明，ＲＢＣ－ＧＳＨ－Ｐｘ对Ｉ－Ｒ损伤的脑组织有明显的保护作用。ＲＢＣ－ＧＳＨ－Ｐｘ对一氧化氮（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ，ＮＯ）浓度的升高有抑制作用。结论：采用ＲＢＣ作ＧＳＨ－Ｐｘ的载体是可行的     

用碱性磷酸酶免疫斑点试验检测小鼠血清中的HFRS病毒抗体

将ＨＦＲＳ病毒陈株可溶性抗原吸附于硝酸纤维素膜上，建立了用碱性磷酸酶免疫斑点试验（ＡＰ－ＤＩＢＡ）检测小鼠血清中的ＨＦＲＳ病毒抗体的方法，并与应用辣根过氧化物酶的免疫斑点试验（ＨＲＰ－ＤＩＢＡ）作了比较。结果表明，ＡＰ－ＤＩＢＡ具有特异性；其敏感性高于ＨＲＰ－ＤＩＢＡ。该法可用于不同ＨＦＲＳ病毒株感染小鼠血清中抗ＨＦＲＳ病毒抗体的检测。     

用碱性磷酸酶免疫斑点试验检测小鼠血清中的HFRS病毒抗体

将ＨＦＲＳ病毒陈株可溶性抗原吸附于硝酸纤维素膜上，建立了用碱性磷酸酶免疫斑点试验（ＡＰ－ＤＩＢＡ）检测小鼠血清中的ＨＦＲＳ病毒抗体的方法，并与应用辣根过氧化物酶的免疫斑点试验（ＨＲＰ－ＤＩＢＡ）作了比较。结果表明，ＡＰ－ＤＩＢＡ具有特异性；其敏感性高于ＨＲＰ－ＤＩＢＡ。该法可用于不同ＨＦＲＳ病毒株感染小鼠血清中抗ＨＦＲＳ病毒抗体的检测。     

呼吸道合胞病毒病原学和疫苗研究现状

呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）可分为Ａ、Ｂ两亚型，其结构蛋白中，Ｆ蛋白与Ｇ蛋白与诱发保护性免疫应答有关，灭活ＲＳＶ疫苗接种无保护作用，减毒活性疫苗和亚单位疫苗可作为候选疫苗。     

幽门螺杆菌HspA和UreB双价侯选疫苗株的构建

目的 构建表达幽门螺杆菌的组成成分热休克蛋白Ａ亚单位（ＨｓｐＡ）和尿素酶Ｂ亚单位（ＵｒｅＢ）的重组蛋的白质的侯选菌株。方法 用ＰＣＲ方法从幽门螺杆菌的染色休ＤＮＡ上分别扩增出ＨｓｐＡ和ＵｒｅＢ基因片段,将它们融合插入原核表达载体ｐＥＴ－２３ｂ（＋）中,并在ＢＬ２１（ＤＥ３）大肠杆菌表达。结果 经测序,ＨｓｐＡ－ＵｒｅＢ（ＨＵ）事例基因片段由２０６１ｂｐ组成,为编码６８７个氨基酸残基的多肽。ＳＤＳ－     

日本脑炎病毒和乙型肝炎病毒抗原真核表达载体的体外共表达

作者构建了日本脑炎病毒（Ｊａｐａｎｅｓｅｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓｖｉｒｕｓ，ＪＥＶ）前膜蛋白囊膜蛋白（ｐｒＭＥ）和乙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ，ＨＢＶ）前Ｓ蛋白（ｐｒｅＳ）的真核表达载体，分别命名为ｐｃＤＮＡ３Ｅ和ｐＳＧ５ｐｒｅＳ。等量混合这两种质粒，转染ＣＯＳ７细胞进行瞬间表达，应用单克隆抗本ＥＬＩＳＡ法检测特异性抗原。结果表明，单独及混合转染的细胞培养上清中均有特异性抗原表达。本项研究为进一步发展新型日本脑炎病毒和乙型肝炎病毒核酸疫苗打下了基础，也初步显示了核酸疫苗技术在联合疫苗研制中的应用前景     

猪小肠粘膜下层的定向多孔性

猪小肠粘膜下层的定向多孔性［英］／ＦｅｒｒａｎｄＢＫ…／／Ｊ　ＢｉｏｍｅｄＭａｔｅｒＲｅｓ．－１９９３，２７．－１２３５众所周知小肠粘膜下层（ＳＩＳ）是一种应用于血管移植的较好的生物材料，用１３只猪的３５段ＳＩＳ样品，研究了ＳＩＳ多孔性定向效应。试验...     

骶髓后连合核接受盆内脏伤害性信息传入的形态学证明

为阐明投射至骶髓后连合核的盆内脏初级传入中是否含有传递伤害性信息成分，本研究综合运用特异性标记初级传入Ｃ纤维的ＢＳＩ－Ｂ４－ＨＲＰ跨节追踪技术，神经干局部涂抹Ｃ纤维毒素ＣａＰｓａｉｃｉｎ并结合ＳＰ免疫组化方法，研究了猫投射至骶髓后连合核的盆神经初级传入纤维中是否含有传递伤害性刺激的成分；同时观察了秋水仙素处理的骶２后根节内ＢＳＩ－Ｂ４标记的初级传入神经元与ＳＰ免疫阳性神经元的关系。结果如下：（１）向盆神经注入ＢＳＩ－Ｂ４－ＨＲＰ，骶１～３后根节内出现平均直径３４μｍ的标记细胞，后连合核内出现密集的标记终末，电镜下证明通过Ｌｉｓｓａｕｅｒ氏束进入脊髓内的标记纤维均为无髓纤维；（２）对盆神经进行局部Ｃａｐｓａｉｃｉｎ处理，引起后连合核内的ＳＰ免疫阳性纤维和终末明显减少；（３）骶２后根节内ＢＳＩ－Ｂ４－ＦＩＴＣ标记细胞有１７％同时呈ＳＰ免疫阳性；（４）骶２后根节内ＢＳＩ－Ｂ４－ＨＲＰ标记的盆内脏初级传人神经元的３９％同时呈ＳＰ免疫阳性。本研究结果在形态学上证实了骶髓后连合核接受盆腔内脏伤害性信息的传入，它可能是中继和整合盆内脏伤害性信息的低级中枢。