骨桥蛋白促进人肝癌细胞株SMMC-7721肿瘤转移相关基因改变的研究

目的研究骨桥蛋白(OPN)促进肝癌转移的可能机制。方法经质粒转染、G418筛选获得稳定高表达OPN人肝癌细胞株SMMC-7721,以空质粒转染组为对照。比较两组细胞的肿瘤转移相关基因表达差异。选取其中3个肿瘤转移相关基因(MMP-2、MMP-9、uPA),用ELISA方法检测其细胞培养上清液的蛋白表达情况。结果经肿瘤转移基因芯片比较发现SMMC-7721高表达OPN后,有88个肿瘤转移相关基因表达上调,有6个肿瘤转移相关基因表达下调。高表达OPN SMMC- 7721上清液MMP-2、uPA水平明显高于对照组[(46．11±3．12)vs(19．66±3．69)μg/L,(5．36±0．94)vs(1．39±0．64)μg/L,而MMP-9表达水平差异无统计学意义[(7．97±2．42)vs(7．25±2．14)μg/L,]与基因芯片结果符合。结论在SMMC-7721肝癌细胞株中OPN高表达引起多个肿瘤转移相关基因改变。OPN可能通过上调MMP-2、uPA等基因表达促进肝癌转移。     

CD147-shRNA对SMMC-7721细胞增殖和运动能力的影响

目的：探讨CD147-shRNA重组质粒对肝癌细胞SMMC-7721增殖和运动能力的影响。方法：将前期合成并筛选的重组质粒pBS/U6/CD147-shRNA3转染至SMMC-7721细胞中,采用MTT法检测细胞增殖;采用划痕愈合实验测定细胞迁移能力。结果：MTT实验结果显示0.3 μg和1 μg的pBS/U6/CD147-shRNA3转染后,SMMC-7721细胞的增殖受到明显抑制,且呈浓度依赖性,最大抑制率为32.2%;转染对照载体的SMMC-7721细胞在划痕24 h后趋于愈合,相比之下,转染pBS/U6/CD147-shRNA3的SMMC-7721细胞划痕愈合能力明显减弱。结论：基因沉默CD147基因对肝癌细胞SMMC-7721的增殖和运动有抑制作用。     

生长激素干预肝癌细胞及共培养脐静脉内皮细胞生长

目的 观察重组人生长激素(rhGH)对人肝癌细胞株SMMC-7721和Bel-7402,共培养脐静脉内皮细胞株ECV304增殖的影响.方法 ECV304及其与Bel-7402、SMMC-7721共培养三组分别行rhGH 50及250μg/L、贝伐单抗50 mg/L及其联合rhGH 250 μg/L的干预.Bel-7402和SMMC-7721分别接受两浓度rhGH干预.流式细胞术测细胞周期比.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)/酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定肝癌细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA/蛋白表达.结果 Bel-7402表达生长激素受体(GHR),SMMC-7721不表达GHR;两剂量rhGH干预后Bel-7402的PI指数(42.69.4±0.40和44.10±0.19)较空白组(39.40±0.48)明显升高,同环境ECV304的PI指数显著升高[(45.62±O.87)%和(47.64 ±1.28)%,呈浓度依赖(P<0.05);贝伐单抗干预后,Bel-7402共培养ECV304的PI指数显著下降[(42.69 ±1.05)%和(42.84±0.77)%,P<0.05).与对照组[mRNA/蛋白:(14.179±3.110)ns/L/0.171±0.064]比较,两rhGH浓度干预,Bel-7402表达VEGF mRNA/蛋白水平也显著增加[(125.499 4-2.680)和(131.312 4-2.560)ng/L/0.296 ±0.024和0.460 ±0.037,P<0.05];SMMC-7721各组均未出现类似情况.结论 rhGH明显促GHR阳性表达人肝癌细胞株Bel-7402增殖,促其过量分泌VEGF致共培养内皮细胞ECV304增殖.     

Wnt-1重组腺病毒的构建及其对人表皮干细胞分化的影响

目的 构建Wnt-1重组腺病毒,并观察Wnt-1对人表皮干细胞分化相关蛋白表达的影响.方法 连接穿梭质粒与骨架质粒,构建重组腺病毒;扩增后感染人表皮干细胞,检测其3种角蛋白和基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达.结果 重组质粒酶切后可得到30 kb和4.5 kb两条特异性条带;人表皮干细胞感染重组腺病毒后,聚合酶链反应(PCR)与绿色荧光蛋白均指示Wnt-1基因的表达,且角蛋白10表达变为阳性;角蛋白18表达增强;角蛋白19表达减弱;细胞培养基中MMP-2浓度由(-16.25±2.40)μg/L升高至(714.88±30.45)μg/L(t=58.45,P<0.01).结论 Wnt-1具有促使人表皮干细胞向腺样上皮细胞分化的趋势.     

HIF-1α通过MMP-2/9途径介导缺氧环境下肝癌细胞侵袭的实验研究

目的:探讨缺氧环境下缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对肝癌细胞侵袭的影响及机制。方法:选取肝癌SMMC-7721/Bel-7402细胞,Western blot检测HIF-1α蛋白在缺氧环境下的表达;将肝癌SMMC-7721细胞分为常氧组、缺氧组、缺氧+con sh RNA组、缺氧+HIF-1αsh RNA组,将慢病毒介导的HIF-1αsh RNA转染细胞,继续培养36 h,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测HIF-1α、MMP-1、MMP-2、MMP-9表达。结果:缺氧增强了肝癌细胞HIF-1α表达(缺氧组vs常氧组,均P0.01);缺氧条件下,侵袭细胞数目明显增多(缺氧组vs常氧组:218.33±5.51 vs 105.66±7.02,P0.01);HIF-1α降低后,细胞侵袭能力显著降低(缺氧+Con sh RNA组vs缺氧+HIF-1αsh RNA组:217.33±4.51 vs 127.66±3.06,P0.01);缺氧条件下,HIF-1α上调了MMP-2、MMP-9表达。结论:HIF-1α通过调控MMP-2/9表达增强了缺氧条件下肝癌细胞的侵袭能力。     

靶向抑制皮层肌动蛋白装配对大肠癌细胞侵袭作用的影响

目的 构建能够靶向抑制细胞皮层蛋白装配的重组质粒,观察其对于肿瘤细胞侵袭作用的影响.方法 构建重组质粒EGFP/N2/Repeat,将其和空载体质粒转染入人大肠癌细胞Lo-Vo和HCT-8,分别扩增培养,绘制生长曲线,通过boyden小室模型观察大肠癌细胞侵袭性的改变.结果 实验获得与预期一致的DNA特异性片段,经双酶切和测序证实目的 片段正确的与载体质粒连接,重组质粒经过双酶切证实构建成功.显微镜下观察重组质粒成功转染人大肠癌细胞,细胞生长曲线提示转染与未转染该基因的细胞生长曲线相同;行细胞侵袭力实验,含有EGFP/N2/Repeat的癌细胞、空质粒转染细胞和对照组细胞(未转染)穿膜数分别为LoVo组:35.27±6.70、85.47±5.50、87.47±6.39;HCT-8组:15.07±2.34、26.73±4.43、26.07±3.67,含有拮抗分子的细胞穿膜数较其余两组明显减少,差异有统计学意义(P<0.01).结论 通过抑制皮层肌动蛋白装配可抑制大肠癌细胞的侵袭性.     

HER-2/neu siRNA对人胶质瘤细胞株T98G侵袭性的抑制作用

目的 探讨人表皮生长因子受体-2(HER-2/neu)特异性siRNA对高表达HER-2/neu的人胶质瘤细胞株T98G侵袭性的影响及其机制.方法 用脂质体介导终质量浓度50 nmol/LHER-2/neu siRNA转染人胶质瘤细胞株T98G,实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)和免疫印迹法检测转染后HER-2/neu mRNA和蛋白表达变化.Transwell体外侵袭实验检测终质量浓度25、50、100 nmol/L HER-2/neu siRNA转染T98G后细胞侵袭能力的变化.免疫印迹法检测转染后细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达变化.明胶酶谱法检测转染后MMP-9活性变化.结果 终质量浓度50 nmol/L HER-2/neu siRNA转染T98G细胞后HER-2/neu mRNA和蛋白表达为对照组的(29.3±6.2)%和(13.1±8.9)%(P＜0.01).终质量浓度25、50、100 nmol/L HER-2/neu siRNA转染后细胞侵袭抑制率分别为(37.7 ±7.2)%、(65.0±10.1)%和(69.7±9.3)%,三者与对照组的差异均有统计学意义(P＜0.01).与对照组比较,转染组细胞MMP-9蛋白表达减少(49.9±10.7)%,酶活性下降(55.6±12.7)%(P＜0.01).结论 HER-2/neu siRNA转染人胶质瘤细胞株T98G后明显抑制细胞的侵袭能力,其机制与MMP-9蛋白表达和活性显著受到抑制有关.     

靶向MMP-2的RNAi抑制胰腺癌PANC-1细胞侵袭性的研究

目的 观察RNAi体外沉默胰腺癌PANC-1细胞MMP-2基因对胰腺癌细胞MMP-2表达及细胞侵袭能力的抑制作用.方法 设计靶向MMP-2的siRNA并构建到pGCsi-U6质粒,重组质粒通过脂质体Lipofectamine 2000转染PANC-1细胞,流式细胞仪检测质粒的转染率,RQ-PCR检测细胞MMP-2的mRNA表达水平;ELISA检测细胞MMP-2蛋白的分泌量;Transwell小室侵袭观察各组细胞侵袭能力;MTT比色法检测各组细胞增殖活性.结果 测序鉴定证实,干扰质粒构建成功,重组质粒转染率最高达82.1%.转染干扰质粒PANC-1细胞的MMP-2基因mRNA表达抑制了71.74%(P＜0.05);MMP-2蛋白分泌下降了49.82%(P＜0.05);细胞侵袭能力抑制率达33.0%(P＜0.05);细胞的增殖活性无明显变化(P＞0.05).结论 靶向MMP-2的RNAi能抑制胰腺癌PANC-1细胞的体外侵袭能力,提示MMP-2可以作为胰腺癌基因治疗的靶点,亟待RNAi能为肿瘤治疗开创崭新局面.     

15-脱氧-前列腺素J2激活过氧化物酶体增殖物激活受体信号抑制肝癌细胞侵袭转移的实验研究

目的探讨15-脱氧-前列腺素J2(15-d-PGJ2)对肝癌细胞SMMC-7721侵袭转移的影响及其内在的机制。 方法SMMC-7721肝癌细胞经天然配体15-d-PGJ2和(或)抑制剂GW9662处理,用伤口愈合实验和Transwell方法检测细胞的转移侵袭能力,用RT-PCR检测细胞PTEN和MMP-9 mRNA的表达,用Western blotting检测细胞PTEN和MMP-9蛋白的表达。 结果15-d-PGJ2对SMMC-7721细胞的转移侵袭具有抑制作用,并能上调PTEN mRNA和蛋白的表达,下调MMP-9 mRNA和蛋白的表达;单药GW9662无此效应,GW9662与15-d-PGJ2联合能够逆转此效应。 结论15-d-PGJ2是通过激活PPAR信号上调PTEN表达,下调MMP-9表达,抑制肝癌细胞的侵袭转移。     

重组人生长激素对体外培养的SMMC-7721肝癌细胞生长的影响

目的 探讨重组人生长激素(rhGH)对体外培养的Bel-7721肝癌细胞生长的影响及机制.方法 采用放射配体法检测SMMC-7721肝癌细胞生长激素受体(GHR)的表达.采用噻唑蓝(MTT)比色法检测Bel-7721肝癌细胞株在不同浓度rhGH(0、1.33、13.33、133.30、1333.00μg/L)作用下的药物敏感性,计算细胞生长率;用流式细胞仪检测肝癌细胞在上述浓度rh-GH作用下细胞周期各时相细胞比率、增殖指数(PI)以及凋亡率.结果 rhGH对体外培养的SMMC-7721肝癌细胞的生长具有一定程度刺激作用,表现为rhGH在133.30μg/L浓度促进肝癌细胞增殖较显著,而rhGH在其他浓度(1.33、13.33、1333.00μg/L)对肝癌细胞增殖虽也表现出一定程度的促进作用,但总体效果较rhGH在133.30 μg/L浓度为弱.rhGH作用48 h后流式细胞检测各实验组S期所占比率、PI均较对照组升高(P<0.05);G_2-M细胞所占比率,13.33、133.30与1333.00μg/L组较对照组显著增高(P<0.05),1.33μg/L与对照组比较差异无统计学意义;各实验组凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).放射配体法发现SMMC-7721肝癌细胞株表达GHR.结论 一定浓度范围的rhGH对7721肝癌细胞生长有促进作用,原因可能与7721肝痛细胞表达GHR,rhGH可促进肝癌细胞DNA合成,提高细胞分裂增殖能力有关.     

5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞增殖与侵袭的影响及作用机制

目的 观察5-氮杂胞苷（5-Aza-CdR）对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖及侵袭的影响,并探讨其可能的机制。方法 常规方法培养SMMC-7721细胞,加入不同浓度的5-氮杂胞苷,以CCK-8法测定终浓度为0、5、10、25、50 umol/L的5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞作用24、48、72 h后增殖的影响,并计算细胞生长抑制率;Transwell小室侵袭实验检测各不同浓度5-氮杂胞苷处理SMMC-7721细胞后24 h后的细胞侵袭能力特点;Western blotting法检测Caspase-3、MMP-2的表达。结果 5-氮杂胞苷能显著抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖,并呈时间浓度依赖性（P＜0.05）;与对照组相比,随5-氮杂胞苷浓度增加Caspase-3明显增加,MMP-2蛋白表达量明显增加。结论 5-氮杂胞苷对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖有明显抑制作用,且表现为时间浓度依赖性,其机制可能与上调Caspase-3蛋白表达量,诱导细胞凋亡,及对细胞的直接毒性作用有关。5-氮杂胞苷能增强人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的侵袭能力,其机制可能与上调MMP-2蛋白表达量有关。     

microRNA-126靶向PIK3R2调控肝癌细胞SMMC-7721的增殖和凋亡

【摘要】 目的 研究microRNA-126(miR-126)对肝癌细胞SMMC-7721迁移能力的影响以及对靶基因PIK3R2表达的影响。方法 通过慢病毒转染肝癌细胞株SMMC-7721使其过表达miR-126,利用CCK-8法检测细胞增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡;采用实时定量PCR和蛋白印迹检测细胞PIK3R2表达水平的变化,并通过荧光素酶实验验证miR-126与PIK3R2基因的直接调控关系。结果 与对照组相比,转染miR-126组的SMMC-7721细胞的增殖能力减弱,凋亡增加。过表达miR-126后,SMMC-7721细胞PIK3R2的蛋白表达下调(P=0.0135)。荧光素酶报告基因实验显示,miR-126能明显抑制PIK3R2-3’UTR的荧光素酶活性(P=0.0016)。结论〓过表达miR-126可能通过靶向降低PIK3R2基因的蛋白表达,抑制肝癌细胞的迁移。     

淫羊藿苷对肝癌细胞株SMMC-7721增殖与凋亡的影响

目的:探讨淫羊藿苷对肝癌细胞株SMMC-7721的抑增殖和促凋亡作用及其机制。方法:以不同浓度(0,6.25,12.5,25,50,100,200,400,800μg/mL)的淫羊藿苷作用于SMMC-7721细胞株不同时间(24,48,72 h)后,用MTT法检测药物对SMMC-7721细胞增殖状态;以不同浓度淫羊藿苷作用SMMC-7721细胞48 h后,用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,用Western blot检测细胞PCNA,Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果:与对照组(0μg/mL)比较,各浓度的淫羊藿苷均明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,并呈明显的时间与浓度依赖性(均P<0.05);淫羊藿苷呈浓度依赖性诱导SMMC-7721细胞发生G0/G1期阻滞和凋亡,下调SMMC-7721细胞PCNA蛋白和Bcl-2蛋白,上调Bax蛋白的表达(均P<0.05)。结论:淫羊藿苷可抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡。     

聚酯型儿茶素诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的 探讨聚酯型儿茶素（ＴＳ）的抗癌作用机制。方法 应用四氮唑蓝快速比色（ＭＴＴ）法,透视电镜,琼脂糖凝胶电泳,流式细胞术等方法研究ＴＳ诱导体外培养的人肝癌细胞凋亡。结果 ５０－８００ｍｇ／Ｌ ＴＳ对人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞的生长有明显的抑制作用,且量效关系明显。４００ｍｇ／Ｌ ＴＳ作用于ＳＭＭＣ－７７２１细胞２４ｈ后,透射电镜观察到凋亡小体;ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳上可见典型的“阶梯状”：     

T42肽对CD133阳性肝癌干细胞恶性表型的抑制作用

目的:探讨重组肿瘤抑素T42肽对人肝癌干细胞(LCSCs)恶性表型的影响及作用机制。方法:2018年6月至2019年6月,培养人肝癌细胞系SMMC-7721,利用免疫磁珠法富集CD133 ＋肝癌干细胞LCSCs。实验共分3组：正常组、T42肽(40 mmol/L)处理组和5-氟尿嘧啶(40 mmol/L)处...