血小板型磷脂酶A2 mRNA在大鼠体内的分布

目的全面探讨血小板型磷脂酶A2(PLA2) mRNA在正常大鼠体内的分布情况,增加对血小板型PLA2的了解. 方法从大鼠不同器官和组织的匀浆中提取总RNA,合成第1链cDNA,利用PCR扩增大鼠血小板型PLA2 DNA. 结果在我们研究的30种器官和组织中,除唾液腺和胰腺之外,都能检测到血小板型PLA2 mRNA,其中,在肺、腹主动脉、腹静脉、血液、大肠、胸腺、骨髓、膀胱和子宫中尤其丰富. 结论血小板型PLA2 mRNA广泛分布在大鼠的各个器官和组织中,在防御细菌感染的过程中,除参与先天性免疫之外,在适应性免疫中也可能扮演重要角色.     

3种抗菌蛋白mRNA在大鼠生殖系统的分布

目的研究抗菌蛋白血小板型磷脂酶A2(PLA2)、杀菌/渗透增强蛋白(BPI)和β-防御素-1mRNA在正常大鼠生殖系统内的存在情况,以了解生殖系统的天然抗菌机制的状况。方法从大鼠生殖系统不同器官和组织的匀浆中提取总RNA,合成第1链cDNA,利用PCR扩增大鼠血小板型PLA2、BPI和β-防御素-1的DNA片段,在凝胶电泳的胶上观察PCR产物条带。结果在大鼠的7种生殖器官和组织中,睾丸、附睾和卵巢均能检测到血小板型PLA2、BPI和β-防御素-1的mRNA,其中以卵巢中的血小板型PLA2mRNA、睾丸中的BPImRNA和附睾中的β-防御素-1mRNA含量尤为丰富;另外,在前列腺、子宫、阴道中也能检测到β-防御素-1和血小板型PLA2的mRNA。结论血小板型PLA2、BPI和β-防御素-1在大鼠雄性和雌性生殖系统中的多种器官和组织存在,提示天然免疫的重要成分抗菌蛋白在防御生殖系感染方面起了重要的作用。     

大鼠细菌感染模型血中磷脂酶A2变化的研究

目的 探讨血小板型磷脂酶A2在宿主防御细菌感染中的作用，使我们对PLA2分子有新的认识。方法 大鼠静脉注射活金黄色葡萄球菌造成细菌感染模型，分别抽取不同时间段的静脉血，进行血浆杀菌实验、PLA2酶活性及全血PLA2mRNA含量测定。结果 经过活菌刺激后，3h大鼠血浆中PLA2的活性升高了27倍，此时血浆对革兰阳性细菌具有较强杀灭作用；全血中PLA2mRNA含量也有所增加，1h达最高值。结论 血小板型PLA2在宿主防御G^ 细菌感染中起着非常重要的作用。     

杀菌/渗透增强蛋白mRNA在大鼠体内的分布

目的 研究杀菌/渗透增强蛋白(BPI)mRNA在正常大鼠体内的存在情况,为了解和临床应用BPI提供重要的信息.方法 从大鼠不同器官和组织的匀浆中提取总RNA,合成第1链cDNA,利用PCR扩增大鼠BPI的DNA片段.结果 遍及全身的21种器官和组织中,肾、卵巢、睾丸、肝脏、小肠、大肠、胸腺、脾脏和白细胞等9种器官中均能检测到BPI的mRNA,其中,在睾丸中最为丰富,在肝脏、大肠中也较为丰富.结论 BPI的mRNA在正常大鼠体内多个器官和组织中都存在,提示它在机体内控制细菌感染的作用较为广泛.     

13个VNTR位点用于113株结核分支杆菌的基因分型研究

目的 应用数目可变串联重复序列（VNTR）分子分型技术，对北京地区113株肺结核临床分离菌株进行分型研究，探讨北京地区菌株DNA多态性和基因型特征。方法 采用PCR和琼脂糖凝胶电泳技术对结核分支杆菌13个VNTR位点进行检测，并应用Gel-Pro analyzer 3．1软件和BioNumerics3．0软件进行结果分析。结果 113株结核分支杆菌可分为4个基因型（分别为Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ和Ⅴ型），其中Ⅰ型占92．0％（104/113），其他3型所占比例很小，分别为Ⅱ型占4．4％（5／113），Ⅳ和Ⅴ型均为1．8％（2／113），而标准菌株H37Rv在分型中为独立的一个基因型，即Ⅲ型。结论 北京地区的结核分支杆菌存在基因多态性，其主要流行型为Ⅰ型。     

肾小球硬化大鼠血清和肾脏apoE水平及作用

载脂蛋白E(apolipoprotein,apoE)作为脂类代谢中一种重要配体,在肾脏中主要表达于肾小球系膜细胞和肾小管上皮细胞.肾脏疾病患者常出现继发性脂代谢紊乱和apoE水平升高.研究提示,apoE可能参与肾小球硬化(glomerulo-sclerosis,GS)复杂的病理过程[1].本研究通过建立GS大鼠模型,采用免疫组化法检测肾脏组织apoE、Ⅳ型胶原(collagenⅣ,Col-IV)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的表达,用双抗体夹心ELISA试剂盒检测血清中apoE蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测肾脏组织apoE mRNA表达,初步探讨apoE在GS发病中的作用机制.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因分型及PVL基因研究

目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)SCCmec基因型的分布特征并检测杀白细胞毒素(PVL)基因。方法收集2007年10月-2008年5月临床标本中,分离的非重复金黄色葡萄球菌110株,用头孢西丁纸片扩散法对MRSA进行初筛;用多重聚合酶链反应(PCR)对MRSA进行SCCmec基因分型及PVL基因检测;用琼脂稀释法对MRSA菌株进行抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)检测。结果 64株MRSA中,63株医院获得性(HA)-MRSA,1株社区获得性(CA)-MRSA,其中SCCmecⅢ型57株(89.0%),Ⅱ型1株(1.6%),SCCmecⅣ型1株(1.6%),未分型5株(7.8%);未发现SCCmecⅠ、Ⅴ型菌株;SCCm ecⅡ型、SCCm ecⅢ型的菌株均为多药耐药株,SCCmecⅣ型的菌株除对β-内酰胺类抗菌药物耐药外,对其他类抗菌药物较敏感。结论 HA-MRSA主要以SCCmecⅢ型为主,CA-MRSA菌株为SCCmecⅣ型,携带PVL毒力基因,HA-MRSA对抗菌药物呈多药耐药性,CA-MRSA菌株耐药谱比HA-MRSA菌株耐药谱窄,加强对MRSA的监测,对指导临床合理使用抗菌药物具有重要意义。     

手机辐射对胚胎期接受辐射小鼠免疫损伤的初步研究

目的检测暴露于手机辐射下的孕鼠子代的细胞因子含量,探讨电磁辐射对胚胎期小鼠免疫功能的影响,为孕妇科学、合理使用移动通信工具提供参考。方法 30只孕鼠随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组,每组6只,对应为空白对照组、待机组、10 min低强度组3、0 min中强度组和60 min高强度组。ELISA检测脾细胞上清中IFN-γ和IL-4的含量;MTT法检测淋巴细胞增殖情况。结果实验Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ各组新生小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-4含量以及淋巴细胞SI与Ⅰ组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;但Ⅴ组与Ⅰ组差异有统计学意义（P〈0.01）;而且Ⅴ组与Ⅲ组比较IFN-γ和IL-4含量以及淋巴细胞SI,差异亦有统计学意义（P〈0.05）。结论高强度的手机辐射能影响胚胎期小鼠的免疫功能。     

社区医院耐苯唑西林金黄色葡萄球菌的分子流行病学调查

目的调查本院2014年7月-12月MRSA分布情况、耐药表型、SCCmec分型及检测PVL基因。方法收集本院2014年下半年MRSA共53株。用VITEK 2鉴定菌株,检测耐药模式,多重PCR检测SCCmec分型,PCR检测PVL基因。结果 MRSA检出率前2位的科室是普外科9株(17.0%)、儿内呼吸科8株(15.1%)。标本类型居前2位的是脓液18株(34.0%)、痰17株(32.1%)。SCCmec分型为Ⅰ型3株、Ⅱ型14株、Ⅲ型25株、Ⅳa型7株、Ⅴ型1株、未分型5株。检出PVL基因阳性株10株。Ⅱ型、Ⅲ型和部分Ⅳa型除对β内酰胺类耐药外,对其他抗生素也多重耐药。结论本院分离的MRSA主要分布在普外科和儿科,标本类型以脓液、痰为主。SCCmec的型别以Ⅱ型、Ⅲ型为主,存在对非β内酰胺类抗生素耐药的SCCmecⅣ型菌株。应加强抗生素的合理使用,减少多重耐药菌的产生。     

微波辐照对大鼠海马COXI、IV基因表达影响

目的研究微波辐照后大鼠海马组织细胞色素C氧化酶（COX）亚基Ⅰ、ⅣmRNA表达变化和对酶活性的影响，探讨微波辐照对大鼠海马能量代谢影响的机制。方法采用RT-PCR法检测微波辐照后海马组织COXI、ⅣmRNA水平。采用还原细胞色素C法和高效液相色谱法（HPIC）分别检测微波辐照后海马组织细胞色素C氧化酶活性和兰磷酸腺苷（ATP）、二磷酸腺苷（ADP）、一磷酸腺苷（AMP）含量。结果微波辐照后。大鼠海马组织细胞色素C氧化酶活性和ATP含量明显降低，并与COXI、ⅣmRNA表达变化呈一致性。结论微波辐照可影响大鼠海马COXI、ⅣmRNA表达而降低酶的活性，进而引起能量代谢障碍。     

高脂饮食对幼年大鼠小肠组织FABP2 mRNA表达的影响

目的检测幼年大鼠在应答高脂饮食时,小肠组织FABP2 mRNA的表达情况,探讨FABP2的表达与幼年大鼠肥胖发生、发展的相关性。方法建立幼年大鼠肥胖模型,采用SYBR Green I荧光染料实时荧光定量PCR方法检测、分析幼年大鼠十二指肠、空肠和回肠组织中FABP2 mRNA的表达情况;全自动生化分析仪检测血清生化指标的变化。结果无论是对照组还是肥胖组大鼠,FABP2 mRNA的表达水平在回肠最高,空肠次之,十二指肠最低,差异具有统计学意义(P0.05);与对照组比较,肥胖组大鼠十二指肠、空肠和回肠组织中FABP2 mRNA表达水平均明显降低,差异有统计学意义(P0.05);且肥胖组大鼠血清TG和血糖水平显著升高(P0.05)。结论 FABP2基因在小肠组织不同区段表达量不同;高脂饮食使幼年大鼠小肠组织FABP2 mRNA表达水平降低,体重增加,血清TG水平升高,提示FABP2参与了脂类代谢,与幼年肥胖的发生、发展可能具有一定的关系。     

妊娠晚期孕妇凝血因子活性的变化

目的:探讨妊娠晚期孕妇凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ活性及凝血酶原时间(PT)、活化的部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(Fg)的变化情况。方法:采用美国IL公司的ACLAdvance型全自动血凝仪分别测定94例妊娠晚期孕妇和27例正常未妊娠妇女血浆中凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ的活性、PT、APTT、Fg并进行对比分析。结果:妊娠晚期孕妇血浆中凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅻ的活性显著高于对照组,Ⅱ因子活性只比对照组稍高,而Ⅺ因子活性则明显低于对照组;妊娠晚期妇女PT、APTT比正常对照组明显缩短,而Fg则显著增高;晚孕组PT与凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ活性成负相关,与Ⅶ活性相关性较好,而与Ⅹ因子活性无相关性;APTT与凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ活性成负相关,与Ⅷ、Ⅺ、Ⅻ活性有较好的相关性。结论:正常妊娠晚期孕妇凝血成分处于活化状态,这可能是引起孕妇血液高凝状态的原因之一。     

Agtr2基因在大鼠睾丸发育中转录表达的分析

目的 研究分析血管紧张素Ⅱ2型受体（Agtr2）基因在大鼠睾丸发育中的转录模式。方法 取刚出生的雄性Wistar大鼠,于出生2～65日的不同时间点,脊椎脱臼处死3只不同窝别的幼鼠,提取睾丸组织总mRNA;将mRNA反转录成cDNA,随后采用RT-PCR方法检测大鼠睾丸组织中Agtr2 mRNA的转录情况。结果 Agtr2 mRNA表达在出生后表达量持续下降,与出生后第6日相比,出生后第8日Agtr2 mRNA表达量急剧降低,在第30日后检测不到其表达。结论 Agtr2基因在大鼠睾丸组织早期发育的表达量最高,随后急剧降低,可能与精原干细胞的增殖与分化及初级精母细胞的发生相关。     

镉对小鼠淋巴细胞增殖功能、IL-2影响与cAMP的关系

目的：观察镉对小鼠脾T淋巴细胞增殖功能、cAMP(环磷酸腺苷)、IL-2(白细胞介素-2)等的影响，探讨它们在镉的免疫毒性中作用和关系。方法：对BALB／C小鼠体外、体内染镉后，测定脾T淋巴细胞增殖功能、IL-2活性、cAMP含量等。结果：体内、体外染镉均引起了小鼠脾T淋巴细胞增殖功能、IL-2水平有剂量一效应关系的降低，两者的变化呈正直线相关。体内染镉引起IL-2水平对数的降低与cAMP水平的升高呈负直线相关。体外染镉引起T淋巴细胞增殖功能、IL-2水平的降低与cAMP水平升高呈负直线相关。结论：镉有抑制小鼠脾T淋巴细胞IL-2活性的免疫毒性作用；IL-2在镉抑制T淋巴细胞增殖活性中有重要作用；cAMP信使系统可能参与介导了镉对脾T淋巴细胞增殖功能、IL-2.     

PLA2G4C基因多态性与精神分裂症关系的病例对照研究

目的探讨中国北方汉族人群PLA2G4Crs1549637位点基因多态性与精神分裂症的关系。方法采用聚合酶链式反应（PCR）和连接酶检测（LDR）的方法，在中国北方汉族403例精神分裂症患者和400例健康对照者的血液样本中检测PLA2G4C基因上的rs1549637位点的基因型。结果PLA2G4C基因上的rs1549637位点基因多态性与精神分裂症无统计学关联（P〉0．05），该位点的基因型频率与等位基因频率与精神分裂症的临床症状无关联（P〉0．05）。结论PLA2G4C基因可能不是精神分裂症的易感基因。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型与耐药性研究

目的研究临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药性,检测MRSA葡萄球菌染色体mec盒(SCCmec)基因型,并进行杀白细胞素(PVL)毒力基因检测。方法采用标准平皿两倍稀释法测定250株MRSA对多种抗菌药物最低抑菌浓度(MIC),采用多重PCR方法对MRSA进行SCCmec基因分型,单一PCR方法对MRSA菌株进行PVL毒力基因检测。结果 250株MRSA经多重PCR方法检测SCCmec基因型,SCCmecⅡ-dcs型菌株30株,占12.0%,Ⅱ型的亚型1株,占0.4%,Ⅲ型62株,占24.8%,含有342 bp(dcs)额外扩增条带的Ⅲ型菌株141株,占56.4%,Ⅳ型7株,占2.8%,Ⅳa型1株,占0.4%,Ⅴ型1株,占0.4%,7株细菌未能分型,占2.8%,未发现Ⅰ型;单一PCR方法获得PVL呈阳性的菌株共2株,占临床分离MRSA的0.8%;各基因型对多种抗菌药物呈现不同程度的耐药。结论临床分离的MRSA以SCCmecⅢ型为主;其次为SCCmecⅡ型;有少量SCCmecⅣ型,少数菌PVL毒力基因阳性。     

压力性尿失禁动物模型的建立

目的 建立压力性尿失禁动物模型.方法 10只雌性SD大鼠为正常对照组(Ⅰ组),另外将40只分娩后雌性SD大鼠分为4组:Ⅱ组为正常分娩组,Ⅲ组为正常分娩+阴道扩张组,Ⅳ组为正常分娩+卵巢切除组,Ⅴ组为正常分娩+阴道扩张+卵巢切除组.然后进行尿动力学检测,以证实压力性尿失禁.结果 整个实验过程中4只大鼠死亡,Ⅰ组腹漏尿点压为74.24±5.01 cmH2O,Ⅱ组为70.81±3.06 cmH2O,Ⅲ组为52.62±3.63cmH2O,Ⅳ组为53.26±3.45 cmH2O,Ⅴ组为35.20±3.61 cmH2O.Ⅱ组的腹漏尿点压低于Ⅰ组,但二者比较无统计学意义(P>0.05);Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组的腹漏尿点压均低于Ⅰ组,经比较有统计学意义(t分别为2.85、2.83、2.97,均P<0.01);Ⅴ组的腹漏尿点压值最低,组间相比,除Ⅰ组与Ⅱ组,Ⅲ组与Ⅳ组相比无统计学意义外,其余各组间比较均有统计学差异.结论 模拟分娩产伤和雌激素减低均能建立压力性尿失禁的动物模型,同时模拟两种病因,模型成功率更高.     

PCNAmRNA和Survivin mRNA在不同大肠肿瘤性病变腺管开口组织中表达关系的研究

目的探讨腺瘤癌变过程中其表面腺管开口变化与PCNA、survivin mRNA在各型腺管开口中表达关系的研究。方法标本分别以腺管开口类型及病理组织学分为6组。采用RT—PCR法检测组织中PCNA mRNA及survivin mRNA的表达。结果PCNAmRNA在大肠黏膜腺管开口Ⅰ型、Ⅱ型、ⅢL型、Ⅳ型、Ⅴ1型、ⅤN型6组中阳性表达率分别为0％（0／13）、12．5％（1／8）、38．9％（7／18）、66．7％（12／18）、75．0％（3／4）、100．0％（9／9）,survivin mRNA为0％（0／13）、12．5％（1／8）、22．2％（4／18）、44．4％（8／18）、50．0％（2／4）、77．8％（7／9）。PCNA mRNA阳性表达率在正常大肠黏膜、炎性息肉、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、腺瘤伴不典型增生及癌6组中分别为0％（0／10）、16．7％（2／12）、35．3％（6／17）、63．6％（7／11）、75．0％（6／8）、91．7％（11／12）,survivin mRNA为0％（0／10）、8．3％（1／12）、23．5％（4／17）、45．5％（5／11）、50．0％（4／8）、和66．7％（8／12）,均呈逐渐升高趋势。结论PCNA mRNA及survivin mRNA在腺管开口类型分组其表达强度变化,能较客观反映肿瘤细胞的增殖活性及凋亡状态,并且与病理类型分组得出相同的结果,能即刻将形态学与分子生物学联系起来。     

实验性矽肺大鼠外周血和脾T淋巴细胞亚群的动态变化

[目的]研究实验性矽肺大鼠在染尘后不同时间点外周血和脾组织T淋巴细胞亚群数量的变化，并探讨其意义。[方法]将60只健康雄性SD大鼠随机分为染矽尘组和对照组，每组30只。对染矽尘组以非暴露方式气管内分2次（间隔1周）分别注入1ml二氧化硅悬液（20mg／ml）建立大鼠矽肺模型，对照组气管内注入等量的灭菌生理盐水。染尘后第7、14、21、28、35、42、49、56、63和70天各处死实验组和对照组大鼠3只，采集外周血和脾脏，用流式细胞术检测大鼠外周血、脾组织的T淋巴细胞（CD3、CD4、CD8细胞）百分率。[结果]矽肺大鼠外周血CD4水平在实验早期（第1～3周）高于对照组。在实验后期，CD3、CD4、CD4／CD8明显低于对照组（P〈0，05），CD8明显高于对照组（P〈0．05）。脾组织CD3水平在第1～3周明显高于对照组（P〈0．05），CD8水平在第1～3周轻度增高（差异无显著性）。在实验后期，CD3、CD4、CD4／CD8明显低于对照组（P〈0.05），CD8明显高于对照组（P〈0．05）。[结论]在实验早期，石英增强获得性免疫反应；在实验后期，矽肺大鼠外周血及脾T淋巴细胞亚群存在明显异常，细胞免疫功能严重紊乱，石英降低了获得性免疫反应。     

耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌SCCmec分子流行病学调查研究

目的 调查医院分离耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)染色体mec基因盒的分布,为临床MRCNS分子流行病学调查提供合理的依据.方法 收集医院2011年6月-2012年6月临床标本中分离的98株MRCNS,PCR检测mecA基因携带率,运用多重PCR检测SCCmec的基因型和亚型.结果 98株MRCNS中包括表皮葡萄球菌40株、溶血葡萄球菌32株、人葡萄球菌21株、科氏葡萄球菌5株；98株MRCNS经mecA基因检测均为阳性,其中40株耐甲氧西林表皮葡萄球菌中,SCCmecⅤ型24株占60.0％,SCCmecⅣ型9株占22.5％,SCCmecⅠ型6株占15％,1株未分型；在32株耐甲氧西林溶血葡萄球菌中,SCCmecⅤ型16株占68.75％,SCCmecⅣ型10株占31.25％,包括Ⅳa型5株,Ⅳb型5株；SCCmecⅢ型6株占15.0％;21株耐甲氧西林人葡萄球菌和5株耐甲氧西林科氏葡萄球菌均为SCCmecⅣ型.结论 医院临床分离MRCNS的SCCmec型别主要以SCCmecⅤ和SCCmecⅣ为主；不同种类MRCNS所携带SCCmec的型别不同.