旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物中46～58kD蛋白的纯化

证实了以转移于硝酸纤维膜（NC，paper）的标准蛋白为参照标准（Marker）用SDS－PAGE结合电洗脱技术，分离纯化靶蛋白的可行性。用该技术分离井纯化了旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物（TsL1－ES）中具免疫原性的抗原组份－46～58kD蛋白，获得近2mg具有明显免疫反应性的高纯度的靶蛋白组份。为进一步研究该特异性抗原组份的诊断价值和保护性免疫作用提供了先决条件。     

旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物中46-58kD蛋白的纯化及其在诊断中的应用

本研究以常规ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和电洗脱技术相结合，分离纯化旅毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物（ＴＳＬＩ－ＥＳ）中４６－５８ｋＤ的蛋白组份，并用于Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ诊断旋毛虫病．检测结果：旋毛虫病人血清３４份，阳性３２份，阳性反应率为９４．１２％；正常人血精１００份未发现假阳性；对蛔虫病人（１２份）、囊虫病人（１５份）、血吸虫病人（１５份）及肺吸虫病人（２０份）血清亦无交叉叵应出现；建立的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ易于操作．重复性和稳定性较好。用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ比较纯化抗原和ＴｓＬ１－ＥＳ的诊断效果，结果经卡方检验后显示：用纯化抗原和用ＴｓＬ１－ＥＳ检测的敏感性无显著差异，但纯化抗原的特异性显著优于ＴｓＬ１－ＥＳ。     

羊源细粒棘球蚴抗原B的免疫分析

用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳对羊源细粒棘球蚴两种抗原（抗原Ｂ、粗抗原）蛋白组进行对比，并采用酶免疫印渍技术（ＥＩＴＢ），抗原Ｂ显示三个特色异免疫活组份（２３ｋＤ、１６ｋＤ、１２ｋＤ），而推测这三个蛋白组份可能是抗原Ｂ诊断继发棘球蚴病鼠有效的行异性抗原组份。     

约氏疟原虫保护性抗原快速蛋白液相色谱法纯化及鉴定

目的：建立制备级纯化约氏疟原虫（Ｐ．ｙ．）保护性抗原的新方法。方法：应用快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ），将重度感染Ｐ．ｙ．的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠血液中提取的粗抗原，首先用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶色谱柱进行分离，收集活性组分，再用ＤＥＡＥ－４０ＨＲ阴离子交换色谱柱进一步纯化。结果：一次上样量约２００ｍｇ，可得到纯化抗原１４ｍｇ。经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）测定抗原纯度＞９０％，抗原分子量为５３ｋＤａ。结论：动物实验证明，该抗原具有很好的保护作用。该法操作比亲和色谱法简单，制备量大于亲和色谱法和高效液相色谱法（ＨＰＬＣ），纯化效率和纯度与ＨＰＬＣ法相似，一次纯化周期仅需３ｈ，是Ｐ．ｙ．抗原纯化的高效方法。     

亲和层析纯化胰吸虫抗原免疫活性的鉴定

本文采用对流免疫电泳、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和免疫印渍技术对亲和层析纯化胰吸虫抗原（ＥＰＰ）的免疫活性作了初步鉴定。结果显示：ＥＰＰ与兔免疫血清在对流免疫电泳中出现沉淀线，ＥＰＰ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、考马斯亮蓝Ｒ－２５０染色后显示４条蛋白多肽，分子量约为５９～６２、４９、２７～２９、１５ＫＤ；转印至ＮＣ膜上的ＥＰＰ与兔免疫血清呈现２条带，分子量为４９、２７ＫＤ，而与胰吸虫病牛血清则主要出现４９ＫＤ的反应带：揭示该亲和层析纯化抗原具有免疫诊断价值。     

旋毛虫幼虫排泄分泌抗原中48kD蛋白的化学及免疫化学分析

用生理盐水培养旋毛虫肌肉期幼虫，２４小时后收集上清，从中获得排泄分泌抗原（ＴｓＬ－ＥＳＡ）．经用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，过碘酸银染，Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ，单克隆抗体２Ｇ８Ｂ１０Ａ３、２Ｅ５Ｆ１１Ａ３识别和酶免疫组化定位等方法分析ＥＳＡ中４８ｋＤ蛋白组份．结果显示该蛋白为糖蛋白，能被２Ｅ５Ｆ１１Ａ３及２Ｇ８Ｂ１０Ａ３所识别，并定位于旋毛虫肌肉期幼虫角皮和杆状体．而２Ｅ５Ｆ１１Ａ３及２Ｇ８Ｂ１０Ａ３均不能识别犬弓首线虫幼虫、人钩蚴、蛔虫幼虫可溶性抗原及肺吸虫、姜片虫、血吸虫成虫可溶性抗原．实验表明４８ｋＤ蛋白组份为旋毛虫特有，是一种特异性较强的抗原．     

鼠疫菌pH6抗原的提取,纯化与鉴定

使用ＫＣＮＳ解离、硫酸铵沉淀、电泳制备分离并纯化了鼠疫菌ＰＨ６抗原。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图型显示，提取物单一蛋白，参照标准，推算其分子量约１５ｋＤ。多数情况下，在其上方有一条含量较低、表征分子量约１６ｋＤ的蛋白带，用Ｆ１单克隆抗体及１５ｋＤ制备的抗血清分别进行测定，该蛋白仅能与１５ｋＤ的抗血清产生高滴度反应，从而排除了其为Ｆ１抗原的可能性，依据上述实验结果并ｉｎｄｌｅｒＬＫ等的资料分析，该蛋白与提纯抗     

旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物中特异性抗原的分析

用胃蛋白酶消化旋毛虫感染鼠肌肉，获得肌肉期幼虫。３７℃，用ＲＰＭＩ１６４０培养基培养幼虫，控制虫体死亡率低于５％，每２４ｈｒ收集上清培养液，即为分泌排泄抗原。共获１０天次ＥＳＡ。应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及氨银染色技术进行蛋白组份析显示：各天次ＥＳＡ的主要蛋白区带数及位置基本相同分子量范围在９６－１４ｋｄ，主带３条，分别为４８，５３和５８ｋＤ蛋白组份。     

日本血吸虫3—磷酸甘油醛脱氢酶的分离与纯化

介绍了一种分离与纯化日本血吸虫３－磷酸甘油醛脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）的简易方法，通过超速离心，硫酸铵沉淀，ＤＥＡＥ－纤维素（ＤＥ－５２）柱与ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离，纯化，获得了电泳纯的日本血吸虫３－磷酸甘油醛脱氢酶。日本血吸虫具有丰富的ＧＡＰＤＨ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示的其分子量为３７ｋＤａ，纯化的日本血吸虫的３－磷酸甘油醛脱酸可用于研制日本血吸虫候选疫苗的研究。     

肝细胞DNA合成刺激因子的分离纯化及部分氨基酸序列研究的初…

本文采用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）技术对部分纯化的肝细胞ＤＮＡ合成刺激因子ＬＰＰ－ＨＤＳＳＦ进一步分离纯化，获得了两个活性组份。第一个组份为核酸，表现为非特异性的活性；而另一组份为蛋白质，占蛋白含量的６０％以上，具有明显的特异的生物活性，分子量为２１ＫＤ，其氨基酸序列为Ｎ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｌｙｓ．．．，与国内外报道的同类物质不同，我们初步认为ＨＤＳＳＦ可能为一种新的肝源性肝细胞刺激因子，其氨基酸序列     

斑点免疫金银染色用于弓形虫病血清学诊断的研究

采用斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）和斑眯酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＩ．ＩＳＡ），以弓形速殡子可溶性蛋白抗原作为靶抗原检测６５例弓形虫感染者血清抗弓 虫ＩｇＧ，Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ和Ｄｏｔ－ＥＳＩＳＡ检测阳性率分别不９８．４６％和９２．４６％。血清平均滴度在Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ为１：３９４，在Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ为１：２１８。两法均一的有５９例，其中在两法中抗体滴度相同者２８例，Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ检测滴     

日本血吸虫3－磷酸甘油醛脱氢酶的分离与纯化

介绍了一种分离与纯化日本血吸虫３－磷酸甘油醛脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）的简易方法。通过超速离心、硫酸铰沉淀、ＤＥＡＥ－纤维素（ＤＥ－５２）柱与ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离、纯化，获得了电泳纯的日本血吸虫３－磷酸甘油醛脱氢酶。日本血吸虫具有丰富的ＧＡＰＤＨ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示其分子量为３７ｋＤａ，纯化的日本血吸虫的３－磷酸甘油醛脱氢酶可用于研制日本血吸虫候选疫苗的研究。     

钩虫抗原组份分析及其免疫反应性的研究

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＥＬＩＢ对十二指肠钩虫第三期幼虫和成虫可溶性抗原白组份及免疫反应性进行了比较研究。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳结果显示,钩虫幼虫和成虫蛋白区带数分别为２１条和１９条。ＥＬＩＢ反应表明,钩虫幼虫和成虫特异性抗原组份为４０～４１ｋＤａ和５４～５６ｋＤａ。该结果为钩虫病免疫学及其疫苗的研究提供了科学资料。     

日本血吸虫成虫31／32kDa蛋白的纯化及保护性免…

本文采用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳和电渗析方法分离纯化日本血吸虫成虫３１／３２ｋＤａ蛋白（Ｓｊ ３１／３２蛋白）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹试验和酶联免疫吸附试验检测结果表明采用该方法分离纯化的Ｓｊ ３１／３２蛋白纯度高，且具有较高的活性。用纯化的Ｓｊ ３１／３２蛋白加福氏佐剂免疫的小鼠，不仅可减少虫负荷（减虫率２８。１％），还可降低血吸虫成虫的产卵量（减卵率７１。４％），抑制虫卵肉芽肿的形成。结果     

日本血吸虫菲律宾株26kDa抗原的表达、纯化与应用

利用亲和层析和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ等分子生物学技术，表达、纯化、鉴定了重组日本血吸虫菲律宾株２６ｋＤａ抗原（ｒＳｊｐ２６ＧＳＴ），并比较了其与日本血吸虫大陆株２６ｋＤａ抗原（ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ）基因ｃＤＮＡ序列的异同，分析了其应用前景。分别以质粒ｐＧＥＸ和血吸虫大陆株总ＲＮＡ为模板，经ＰＣＲ或逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出的Ｓｊｐ２６ＧＳＴ和Ｓｊｃ２６ＧＳＴｃＤＮＡ，其片段长度均为６５４ｂｐ。通过双脱氧测序结果显示两者碱基排列顺序相同。用大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）表达载体在Ｅ．ｃｏｌｉ中高效表达Ｓｊｐ２６ＧＳＴ，ｒＳｊｐ２６ＧＳＴ占菌体总蛋白的２５％。用谷胱甘肽（ＧＳＨ）亲和层析柱一步纯化法，得到纯品Ｓｊｐ２６ＧＳＴ，将其作为靶抗原用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测血吸虫大陆株感染者和感染小鼠血清及用Ｓｊｃ２６ＧＳＴ免疫的小鼠血清，反应均为阳性。本研究提示Ｓｊｐ２６ＧＳＴ与Ｓｊｃ２６ＧＳＴ在ＤＮＡ序列、氨基酸顺序和抗原性等方面高度同源，Ｓｊｐ２６ＧＳＴ在研制日本血吸虫疫苗方面具有一定应用价值     

旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物中46—58kD蛋白的纯化及其在诊断中的…

本研究以常规ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和电洗脱技术相结合，分离纯化旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物中４６－５８ｋＤ的蛋白组份，并用于Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ诊断旋毛虫病。检测结果；旋毛虫病人血清３４份，阳性３２份，阳性反应率为９４．１２％；正常人血清１００份未发现假阳性；对蛔虫病人，囊虫病人，血吸虫病人及肺吸虫病血清谱无交叉反应出现。     

结核分支杆菌16000抗原基因在大肠杆菌中的高效表达及 …

目的 获得高效表达结核分支杆菌１６０００抗原的大肠杆菌工程菌,将培养物纯化后得到重组１６０００蛋白抗原纯品,并检测其免疫学特性。方法 用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法获得目的基因构建大肠杆菌高效表达株。聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ＿ＰＡＧＥ）分析重组蛋白抗原的相对分子质量大小及表达形式。ＤＥＡＥ及ＰＥＩ凝胶纯化重组蛋白。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹及酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）分析重组蛋白的免疫原性。结果 构     

斑点免疫金银染色与Dot—ELISA检测抗弓形虫抗体的对比研究

为比较斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测弓形虫抗体的敏感性和特异性，本实验以弓形虫速殖子可溶性蛋白抗原为诊断用抗原，同时用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测６５份弓形虫感染者血清、１７６份其他寄生虫感染者血清和７６份对照血清。结果显示，用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测弓形虫感染者抗体阳性率分别为９８．４６％及９２．３１％，平均抗体滴度分别为１：３８４及１：     

旋毛虫幼虫排泄分泌抗原用于诊断人旋毛虫病的可行性探讨

作者将自行分离制备的旋毛虫肌肉期幼虫２４小时排泄分泌抗原，用间接ＥＬＩＳＡ共检测３４份旋毛虫病人血清，３２份为阳性，阳性率９４％．而８２份正常人血清均为阴性反应。且不与蛔虫病人、囊虫病人血清发生交叉反应，但与肺吸虫及血吸虫病人血清发生交叉反应。经用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及铵银染色后显示，该抗原含有１１种蛋白组份，分子量介于９６ｋＤ－１７．６ｋＤ之间。有３条主带，分子量分别为４０、４８、５３ｋＤ。酶联免疫印迹试验表明旋毛虫病人血清能特异识别分子量为４８ｋＤ蛋白。而肺吸虫及血吸虫病人血清所能识别的区带均小于４０ｋＤ。该结果表明４８ｋＤ蛋白抗原组分在人旋毛虫病上具有潜在诊断价值，而酶联免疫印迹试验不失为一种可行的人旋毛虫病的诊断方法。     

一株抗十二指肠钩蚴单克隆抗体的特性研究

用间接荧光抗体技术等方法观察了一株抗十二指肠钧蚴单克隆抗体杂交瘤细胞株Ｂ１２分泌的抗体（ＭｃＡｂＢ１２）特性。结果表明ＭｃＡｂＢ１２与十二指肠钧虫成虫切面的肠管、生殖器官和肌肉的基膜及排泄管出现明显的免疫反应，提示ＭｃＡｂＢ１２的“靶抗原”为分泌排泄（ＥＳ）抗原。ＳＤＳＰＡＧＥ结果提示ＭｃＡｂＢ１２具有３条蛋白区带，分子量分别为６１、５２和２１ｋＤ。ＥＬＩＢ结果显示ＭｃＡｂＢ１２能识别十二指肠钧蚴抗原，主要抗原条带的蛋白分子量为２８ｋＤ。