脑创伤后神经元细胞内游离钙的变化及其影响因素

目的：研究液压冲击伤时体外培养的单个大鼠神经细胞内游离钙([Ca^2+]i的变化，探讨尼莫地平D-2氨基戊酸(D-2-amino-5-phosphono-valeric acid,D-AP-5)和亚低温对创伤后细胞内[Ca^2+]i的影响及其机制。方法：以Fluo-3／AM为细胞内钙离子的荧光指示剂，用激光共聚焦显微镜测定液压冲击伤时体外培养的单个大鼠神经细胞内游离钙([Ca^2+]i)的变化。结果：液压冲击伤后脑皮质细胞内游离Ca^2+迅速升高，24h达高峰，随后逐渐下降，48h仍维持较高水平[(411.29&;#177;52．46)，(396．53&;#177;51．32)nmol／L]，尼莫地平，D-AP-5于各时相关均降低细胞内[Ca^2+]i，其中Nimodipine 10h内应用最佳[6h：(98.65&;#177;15．65)nmol／L],D-AP-5于1～10h应用较好而亚低温30min内显著降低细胞内[Ca^2+]i(t=13．74，P&;lt;0．001)，最佳时机在伤后15min内，伤后1h以上无效。结论：创伤后神经元细胞内钙超载，尼莫地平、D-AP-5和亚低温均降低细胞内[Ca^2+]i，但各自最佳时间窗不同，揭示对创伤后神经细胞Ca^2+超载应注意综合治疗，并选定各自作用最佳时间窗。     

兴奋毒损伤海马神经细胞机制的研究

目的　探讨谷氨酸 (Glutamicacid ,Glu)的神经性兴奋毒损伤作用机制。方法　在体外快速剥离新生大鼠 (0 1天 )双侧海马 ,制成海马神经细胞悬液 ,用Fura 2 /AM负载 ,建立了Fura 2 /AM检测海马神经细胞胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)的方法 ,并检测Glu兴奋毒对海马神经细胞 [Ca2 + ]i的影响。结果　Fura 2单细胞检测表明 ,静息状态下海马神经细胞 [Ca2 + ]i=2 5 2 .6± 36 .1(nmol/L) ,Glu可使海马神经细胞 [Ca2 + ]i明显升高。大剂量Glu可使 [Ca2 + ]i升高几倍。结论　Glu导致神经细胞损伤的原因与细胞 [Ca2 + ]i超载有关。     

液压冲击对体外神经细胞钙超载的影响及牛磺酸的作用

目的 探讨液压冲击对体外神经细胞钙超载的影响及牛磺酸的作用.方法 将体外培养的神经细胞随机分为①正常对照组:将未经任何处置的神经细胞分为24 h组和48 h组;②创伤组:液压冲击致神经细胞创伤24 h和48 h组;(3)牛磺酸组:分别于神经细胞创伤后0 h和1 h给予牛磺酸(终浓度为0.50 mmol/L)治疗.观察24 h和48 h,分别为0 h 24 h、0 h 48 h、1 h 24 h、1 h 48 h组.用激光扫描共聚焦显微镜(Iaser Scanning Confocal Microscope,LSCM)观察各组细胞形态,同时以Fluo-3/AM为钙离子荧光指示剂负载各组细胞,测定24 h和48 h后细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的变化.结果 ①组织形态学变化:与正常对照组比较,伤后24 h和48 h创伤组神经细胞胞体肿胀、突起回缩;牛磺酸治疗组神经细胞胞体无明显肿胀,突起回缩明显改善.②细胞内[Ca2+]i改变:创伤后即刻细胞内[Ca2+]i水平即开始升高,24 h达峰值水平,48 h仍维持于较高水平,显著高于正常组(P＜0.01);牛磺酸治疗0 h或1 h,24 h和48 h均能明显降低细胞内[Ca2+]i,创伤后1 h给药的[Ca2+]i显著低于0 h给药(P＜0.01),且随着时间的推移,对神经细胞的保护作用逐渐增强.结论 牛磺酸对液压冲击伤后大鼠神经细胞内Ca2+超载有较好的保护作用,创伤后1 h给药并维持48 h,对神经细胞保护作用最佳.     

颅脑创伤后神经细胞钙通道的变化及其机制

目的探讨颅脑损伤后神经细胞钙离子(Ca2+)通道出现的变化,分析Ca2+浓度变化与颅脑损伤及治疗的相关性。方法制备颅脑损伤大鼠48只,采用激光共聚焦显微镜分组测定大鼠受伤前后及治疗前后神经细胞内外游离钙离子[Ca2+]i浓度的变化。结果大鼠受伤后脑皮质细胞内[Ca2+]i迅速升高,24h后达到高峰,经亚低温和注射尼莫地平治疗后[Ca2+]i浓度逐渐下降至正常水平。结论颅脑外伤后Ca2+通道开放,胞浆游离Ca2+浓度显著升高,亚低温及钙拮抗剂等药物治疗能缓减胞外Ca2+移入胞内,减轻脑水肿程度,注意选好治疗的最佳时间窗。     

钙通道阻滞剂对缺血再灌注兔脑皮质一氧化氮、含水量和细胞内游离钙的影响

背景近年来研究发现一氧化氮参与了脑缺血损伤的发生,但对于其确切作用至今尚无统一的结论.目的探讨一氧化氮在缺血再灌注脑损伤中的作用,比较两类钙通道阻滞剂的脑保护作用.设计完全随机设计,对照实验研究.地点和材料实验在首都医科大学附属北京儿童医院ICU实验室完成,实验动物为由首都医科大学动物实验室提供体质量2.0～2.4kg新西兰兔66只. ,方法夹闭双侧颈总动脉和颈动脉30 min后放开制作兔脑缺血再灌注模型.选取36只新西兰兔分为假手术、再灌注0.5、1.5、3、6、24 h共6组,测定脑皮层匀浆一氧化氮及含水量.另选30只新西兰兔分假手术、安慰剂(0.9%生理盐水)、尼莫地平(首剂5μg/kg,20 min内静脉注入,维持量0.5 μg/kg·min)、氯胺酮(首剂20 mg/kg,30 min内静脉注入,维持量10 mg/(kg·h)、尼莫地平+氯胺酮治疗共5组,于再灌注30min开始持续静脉用药至再灌注6h取脑皮层,使用Griess法测定一氧化氮,以Fluo-3 Ca2+荧光试剂标记新鲜活脑片细胞内游离钙([Ca2+]i),激光共聚焦显微镜测定[Ca2+]i相对荧光强度.主要观测指标生理参数变化,再灌注不同时间兔脑皮层一氧化氮及含水量变化,用药组兔脑皮层一氧化氮、含水量、[Ca2+]i.结果再灌注后脑皮层一氧化氮、含水量逐渐升高,于再灌注6h达较高水平[分别为(14.72±1.66)μmol/g,(86.68±1.90)%,P＜0.05],一氧化氮与含水量间具有相关性(r=0.577,P＜0.01).尼莫地平、尼莫地平+氯胺酮组一氧化氮明显降低[分别为(5.08±0.88)、(5.14±1.12)μmol/g,P＜0.01],尼莫地平、氯胺酮以及尼莫地平+氯胺酮组含水量明显降低[分别为(76.31±4.00)、(81.04±1.86)、(78.16±1.41)%,P＜0.01],尼莫地平组较氯胺酮组降低更明显(P＜0.01).安慰剂组[Ca2+]i较假手术组明显升高[分别为(26.84±1.39)、(4.99±0.39),P＜0.01],尼莫地平、氯胺酮及尼莫地平+氯胺酮治疗后[Ca2+]i明显降低[分别为(7.74±1.11)、(13.30±1.99)、(8.97±2.01),P＜0.01].尼莫地平组较氯胺酮组降低更明显(P＜0.01)结论一氧化氮与脑缺血再灌注损伤的发生有密切关系.尼莫地平、氯胺酮均有一定脑保护作用,但氯胺酮作用弱于尼莫地平.     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞内游离钙的影响

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对大鼠脑缺血再灌注后大脑皮层神经细胞内游离钙浓度 [Ca2 + ]i 的影响。方法　用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型 ,采用Fura 2 /AM双波长荧光光度法检测脑组织悬液内 [Ca2 + ]i。结果　缺血再灌注组细胞 [Ca2 + ]i 显著高于假手术组 ,bFGF组细胞 [Ca2 + ]i明显低于缺血再灌注组。结论　bFGF可通过减轻脑缺血损伤后脑细胞内钙超载程度来发挥抗脑缺血作用。     

剪切应力作用下血小板活化反应对血栓形成的影响

目的:通过剪切应力对血小板细胞骨架和细胞内游离钙离子浓度(犤Ca2+犦i)及血栓形成的影响,探讨物理作用下血小板活化机制。方法:利用锥板式血小板聚集仪、SDS-PAGE方法及Fura-2/AM法观察剪切应力对血小板聚集、细胞支架和胞浆内犤Ca2+犦i变化。结果:剪切前肌动蛋白纤维含量为(40.16±15.03)%,细胞内犤Ca2+犦i浓度为(29.88±8.89)nmol/L,低剪切与高剪切作用1min后肌动蛋白纤维含量分别达(47.42±18.00)%与(48.62±18.04)%,而细胞内犤Ca2+犦i浓度升高达(57.32±18.32)nmol/L及(128.28±56.28)nmol/L,与剪切前相比差异均有显著性意义(P<0.05或0.01),此外,钙调蛋白抑制剂阻碍血小板肌动蛋白纤维的形成及血小板聚集。结论:剪切应力作用下血小板发生了肌动蛋白纤维含量及细胞内游离钙水平的增高,并与剪切诱导的血小板聚集存在着平行关系,物理作用对体内血栓形成的机制有助于对血栓形成和一级康复干预的进一步认识。     

Na+/H+交换器-1抑制诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的可能机制

背景肺动脉平滑肌细胞( pulmonary artery smooth muscle cells,PASMC)的增殖在缺氧肺动脉高压肺血管重构中起重要作用.解放军第三军医大学附属新桥医院全军呼吸研究所在前期实验中通过构建 Na+ /H+交换器- 1( sodium/proton exchanger isoform-1, Na+ /H+ exchanger isoform-1, Na+ /H+ antiporter isoform-1, NHE-1)特异性核酶基因逆转录病毒载体,转染入体外培养的大鼠 PASMC内表达,发现 NHE-1抑制可诱导细胞内酸化而抑制 PASMC增殖,并促进其凋亡.但这种促凋亡作用是通过什么途径来完成,尚不清楚.目的探讨 Bcl-2、 Bax蛋白表达在 NHE-1抑制而诱导大鼠 PASMC凋亡中的作用.设计分组对照实验.地点和材料实验在解放军第三军医大学附属新桥医院全军呼吸内科研究所完成.转染表达 NHE-1特异性核酶基因的体外培养大鼠 PASMC( PRZ细胞)、转染 PLXSN空载体的大鼠 PASMC( PX细胞)、未处理大鼠 PASMC细胞( PA细胞)为前期实验所制备.干预已构建 NHE-1特异性核酶基因逆转录病毒载体,转染入体外培养的大鼠 PASMC内表达,同时转染 pLXSN空载体入另一组大鼠 PASMC内,后者与未转染的大鼠 PASMC细胞为对照组.用荧光指示剂( Fura-2/AM)测定法检测转染 NHE-1特异性核酶基因的大鼠 PASMC内 Ca2+( [Ca2+ ]i)变化; RT-PCR方法检测细胞内 Bcl-2和 Bax mRNA表达变化,免疫组化法检测细胞内 Bcl-2和 Bax蛋白表达变化.主要观察指标①转染 NHE-1特异性核酶基因的大鼠 PASMC内 Ca2+( [Ca2+ ]i)变化.②细胞内 Bcl-2和 Bax mRNA表达变化.③细胞内 Bcl-2和 Bax蛋白表达变化.结果转染 NHE-1特异性核酶基因后,大鼠 PASMC内 [Ca2+ ]i显著升高,细胞内 [Ca2+ ]i在 PA细胞 [(95.94± 6.39) nmol/L]与 PX细胞 [(98.08± 7.37) nmol/L]之间差异无显著性意义( P 》0.05),而 PRZ细胞 [(198.08± 16.59) nmol/L]显著高于 PA细胞及 PX细胞 , 差异有显著性意义( P《 0.001).Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低( PA细胞、 PX细胞、 PRZ细胞的平均积分光密度分别为 2.21± 0.18, 2.09± 0.30, 1.45± 0.20), Bax mRNA和蛋白表达显著增加( PA细胞、 PX细胞、 PRZ细胞的 ABax/Aβ-actin分别为 0.17± 0.02, 0.23± 0.06, 0.59± 0.08).结论 NHE-1抑制诱导的 PASMC凋亡与 [Ca2+ ]i增加、 Bcl-2表达降低及 Bax表达增加有关.     

脑血栓形成急性期患者血小板静息及激活状态胞浆游离钙离子浓度钙调素含量的实验研究

目的探讨血小板静息状态胞浆游离钙离子浓度([Ca2 ]i)、激活状态胞浆游离钙离子浓度([Ca2 ]ic)、钙调素含量 (CaM)在脑血栓形成(CT)急性期的变化及其作用。方法应用Fura-2荧光标记示踪法及酶联免疫法(ELISA)测定了31例CT急性期患者血小板[Ca2 ]i、[Ca2 ]ic浓度和CaM含量。结果脑血栓形成急性期患者血小板[Ca2 ]i、[Ca2 ]ic、CaM含量分别为(152．25 ±30．57)nmol／L,(200．36±33．62)nmol／L,(441．67±209．31)fg／102个血小板;正常对照组含量分别为(111．31±21．85)nmol／L, (158．43±22．44)nmol／L,(301．88 ±218．10)fg／102个血小板,脑血栓形成急性期患者血小板[Ca2 ]i、[Ca2 ]ic、CaM含量均明显高于正常对照(P<0．01,P<0．05)。结论脑血栓形成急性期患者,应用钙拮抗剂降低血小板胞浆钙离子浓度,可抑制血小板功能。     

细胞内游离钙在血管紧张素转换酶抑制剂逆转高血压病心脏重构中的作用

目的　探讨细胞内游离钙在血管紧张素转换酶抑制剂 (ACEI)逆转高血压病心脏重构中的作用。方法　采用正常血压大鼠 (WKY)、自发性高血压大鼠 (SHR)配对 ,服药前后对比及离体淋巴细胞药物干预研究。结果　①SHR与WKY比较有以下心脏重构现象 :心脏重量指数增加 ,心肌细胞肌节长度延长 ,肌束及核周水肿 ,胶原区扩大 ,心肌细胞内线粒体增多 ,体密度增加 ;线粒体肿胀 ,比表面减少 ,线粒体脊溶解和空泡样变性 ;②SHR外周淋巴细胞 [Ca2 + ]i、血浆血管紧张素Ⅱ浓度 [ATⅡ ]较WKY显著增加 ;③ACEI治疗后SHR心脏重构现象得到逆转 ,血浆 [ATⅡ ]、淋巴细胞 [Ca2 + ]i降低 ;④离体情况下 ,ATⅡ能使SHR、WKY淋巴细胞 [Ca2 + ]i增加 ,ACEI能使淋巴细胞 [Ca2 + ]i降低。结论　ACEI能有效逆转高血压心脏重构现象 ,其作用机制可能同有效纠正细胞游离钙超负荷及调节异常的细胞内游离钙代谢有关     

马桑毒内酯对大鼠海马锥体神经细胞内钙稳态的影响

背景:神经元异常放电是癫痫的基本特征,这种异常放电的基础是细胞内外离子的跨膜运动,然而癫痫时是否存在钙离子内流,神经元膜上的钙通道是否开放还不清楚。目的:了解钙离子及钙通道在癫痫发病中的作用,探讨马桑毒内酯(coriamyrtiry,CM)调节神经细胞内钙稳态的机制。设计:培养的原代神经元随机分成:正常对照组;致痫组;尼莫地平组。利用激光扫描共聚焦显微镜技术观察胞内游离钙离子浓度的变化。地点和对象:以培养的Wistar乳鼠海马锥体神经元为靶细胞进行测试,实验在四川大学华西医院完成。干预:正常对照组不加任何条件;致痫组加入不同浓度的致痫剂CM。根据加入CM浓度的不同,又分为致痫10mL/L组、致痫20mL/L组、致痫40mL/L组、致痫80mL/L组。尼莫地平组同时加入CM(40mL/L)和尼莫地平。三组均培养24h后以Fluo-3进行负载,利用激光扫描共聚焦显微镜检测。主要观察指标:测量并记录锥体神经元和背景的荧光强度,以相对荧光强度代表游离钙离子值。结果:正常组神经细胞内Ca2 浓度为95.43±10.52,经致痫剂CM作用后,神经细胞内Ca2 浓度致痫10mL/L组为1299.87±68.53,致痫20mL/L组为1333.00±55.99,致痫40mL/L组为1315.33±55.73,致痫80mL/L组为1379.47±57.11,高于正常组(P<0.01),但其升高不呈剂量依赖性(P>0.05);经     

Effects of Anthopleurin-Q on Concentration in Cultured the Intracellular Free Ca^2＋ Rat Cortical Astrocytes

Objective： To investigate the effect of anthopleurin Q （AP Q） on the intracellular Ca^2＋ concentration （ECa^2＋]i） in cultured cortical astrocytes of rats. Methods： The [Ca^2＋]i was monitored by calcium imaging with Ca^2＋ sensitive fluorescent probe fura 2. Results： A concentration of 300 nmol/L AP-Q increased the [Ca^2＋]i in astrocytes by （136.98%＋35.63%） （n=28）,when compared with the baseline level. Furthermore, the elevation of [Ca2＋]i was prevented by extracellular calcium free solution or when the extraeellular Na^＋ was replaced by NMDG^＋ , and was decreased by Ni^＋ ,a non specific antagonist of Na^＋/Ca^2＋ exchanger. Conclusion： AP-Q induced the intracellular [Ca^2＋]i elevation in cultured rat cortical astrocytes via activating the reverse mode of Na^＋/Ca^2＋ exchanger. AP-Q may be a useful tool to develop experimental model of seizures.     

药物防护电磁脉冲所致海马神经元损伤的可能性

背景:电磁脉冲照射可引起实验大鼠学习记忆能力下降,并可造成离体海马神经元的胞内钙超载,进而发生坏死和凋亡,物理屏蔽可减轻电磁辐射对实验动物的损伤,但缺乏在细胞模型上进行的药物防护研究。目的:观察药物防护电磁脉冲致离体海马神经元损伤的可能性。设计:随机对照动物实验。单位:承德医学院基础部。材料:实验于2004-01/2005-01分别在军事医学科学院和承德医学院完成。实验动物选用Wistar乳鼠若干只。方法:断头取脑分离海马组织,进行海马神经元原代培养与鉴定,原代培养的海马神经元经MK801(N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂)和尼非地平(L型钙离子通道阻断剂)预处理后进行电磁脉冲照射。电磁脉冲照射条件为6×104V/m,脉冲上升时间20ns,脉宽30μs,频率2.5脉冲/min,作用2min。将培养在特殊培养皿的细胞分为正常对照组、电磁脉冲照射组、MK80120μmol/L组和MK80120μmol/L 尼非地平1μmol/L组。采用MTT法对细胞活力进行测定;FACS法检测细胞凋亡率;Fluo-3-AM荧光探针负载、激光共聚焦显微镜扫描测定神经元胞内游离钙离子浓度[Ca2 ]i。主要观察指标:各组细胞内钙超载、细胞活力、细胞调亡的情况比较。结果:①电磁脉冲组在照射后即刻的[Ca2 ]i荧光强度显著高于正常对照组,差异有显著性意义([107.34±26.14),(54.93±16.08),P<0.05];MK80120μmol/L组比电磁脉冲照射组的[Ca2 ]i荧光强度有所下降(81.29±19.96,P<0.05),而MK80120μmol/L 尼非地平1μmol/L组的[Ca2 ]i荧光强度呈进一步下降趋势(69.82±25.54,P<0.05)。但两个给药组的[Ca2 ]i荧光强度仍高于正常对照(P<0.05)。②MK80120μmol/L组和MK80120μmol/L 尼非地平1μmol/L组反映细胞增殖活力的吸光度值分别为0.25±0.06和0.27±0.07,明显高于电磁脉冲照射组(0.17±0.08,P<0.05),但仍低于正常对照组(0.33±0.08,P<0.05)。③电磁脉冲照射组在照后即刻的细胞凋亡率显著高于正常对照组,差异有显著性意义([68.63±9.04)%,(20.14±4.34)%,P<0.01];MK80120μmol/L组比电磁脉冲照射组的细胞凋亡率有所下降(62.12±11.08)%,MK80120μmol/L 尼非地平1μmol/L组的细胞凋亡率呈进一步下降趋势([53.69±13.60)%,P<0.05)],但两个给药组的细胞凋亡率仍高于正常对照组(P<0.01)。结论:MK801和尼非地平预处理可部分阻断电磁脉冲所致的海马神经元损伤;细胞内钙超载在电磁脉冲损伤机制中发挥重要作用。     

低钙透析液对血液透析患者钙磷代谢的长期影响

目的 观察长期应用钙离子浓度为1.25 mmol/L的低钙透析液(LCaD)对血液透析患者钙磷代谢的影响.方法 本研究共纳入38例稳定透析患者,以1.25 mmol/L钙浓度透析液替换原使用的1.75mmol/L钙浓度透析液(HCaD),回顾性观察使用低钙透析液2年后患者血清钙、磷、钙磷乘积、全段甲状旁腺素(iPTH)等指标的变化.结果 与高钙透析液相比,整体观察,采用低钙透析液后患者血钙水平降低[HCaD(2.32±0.23)mmol/L,LCaD(2.21±0.24)mmoI/L;t=2.286,P=0.028],iPTH水平明显升高[HCaD(20.92±16.04)pmoL/L,LCaD(40.02±30.55)pmoL/L;t=-4.029,P=0.000],血磷及钙磷乘积变化不明显.按照基点处iPTH水平分组观察,低iPTH组(iPTH＜11.0 pmol/L)患者的血钙水平较前下降[HCaD(2.46±0.19)mmoL/L,LCaD(2.11±0.23)mmol/L;t=4.047,P=0.002],钙磷乘积下降[HCaD(4.75±1.66)mmol2/L2,LCaD(3.54±0.77)mmol2/L2;t=3.784,P=0.004],血磷保持稳定,iPTH水平中度升高[HCaD(5.67±2.84)pmol/L;LCaD(27.72±27.79)pmol/L;t=-2.490,P:0.032].高iPTH组(iPTH≥11.0 pmol/L)患者的血钙、血磷及钙磷乘积未见显著差异,iPTH水平显著升高[HCaD(27.15±15.43)pmol/L,LCaD(45.03±30.68)pmol/L;t=-3.138,P=0.004].按照基点处血钙水平分组观察,低血钙组(Ca＜2.10 mmol/L)和正常血钙组(ca 2.10-2.37 mmol/L)患者的钙、磷、钙磷乘积基本保持相对稳定.高血钙组(ca＞2.37 mmol/L)患者的血钙水平下降[HCaD(2.52±0.12)mmol/L,LCaD(2.25±0.20)mmol/L;t=4.153,P=0.001],血磷水平保持稳定,钙磷乘积下降[HCaD(4.94±1.19)mmol2/L2,LCaD(4.10±0.80)mmol2/L2;t=2.587,P=0.012].iPTH水平于低血钙组保持相对稳定,于正常血钙组[HCaD(20.18±11.00)pmol/L;LCaD(37.45±32.61)pmol/L;t=-2.351,P=0.032]和高血钙组[HCaD(14.68±12.98)pmol/L,LCaD(40.19±33.20)pmol/L;t=-3.432,P=0.004]均有升高.结论 1.25 mmoL/L钙浓度透析液可应用于多数不同血钙浓度的患者,长期应用低钙透析液可以降低血钙,促进PTH分泌,有利于减少转移性钙化和动力缺失性骨病的发生,但同时增加了继发性甲状旁腺功能亢进的风险.     

电磁脉冲对海马神经元的损伤及其对[Ca2+]i的影响

背景:电磁脉冲照射可影响实验大鼠的学习记忆功能,并造成大鼠海马组织损伤和超微结构改变。目的:观察电磁脉冲对离体培养的海马神经元的损伤效应及其对[Ca2 ]i的影响,以深入分析电磁脉冲致脑损伤的可能机制。设计:随机对照动物实验。单位:承德医学院病理教研室。材料:Wistar乳鼠若干只,雌雄各半。电磁脉冲辐射源:高场强电磁脉冲模拟源。方法:实验于2004-03/12分别在军事医学科学院和承德医学院完成。Wistar乳鼠若干只,麻醉下断头取脑,分离海马组织,调整细胞悬液浓度至5×108L-1接种。分组:①培养细胞分为对照组和照射组,于照射后即刻(0h)收集细胞进行形态学观察和胞内游离钙离子浓度测定;②另培养细胞分为对照组和照射后0h组和12h组,进行细胞凋亡和坏死率的测定。(培养细胞用量:每项检查每组1个培养瓶,重复3次。)电磁脉冲辐射条件为6×104V/m,脉冲上升时间为20ns,脉宽为30μs,频率为2.5脉冲/min,作用2min。原代培养的海马神经元经电磁脉冲辐射后,倒置相差显微镜下观察照射前后神经元形态学变化;FACS法检测细胞凋亡和坏死;Fluo-3-AM荧光探针负载、激光共聚焦显微镜扫描测定神经元胞内游离钙离子浓度[Ca2 ]i。主要观察指标:神经元形态学变化;细胞凋亡率和坏死率;胞内游离钙离子浓度[Ca2 ]i。结果:①电磁脉冲辐射后即刻,神经细胞逐渐发生液化,神经元突起回缩、变性。②电磁脉冲辐射后12h凋亡率较辐射后即刻有所恢复,但与对照组相比均显著增加[(59.27±1.27)%,(72.17±6.21)%,(17.45±5.63)%,P<0.05]。③在辐射后即刻和12h坏死率比对照组升高,但差异无统计学意义[(13.71±2.31)%,(11.96±1.04)%,(8.45±0.67)%,P>0.05]。④电磁脉冲辐射后即刻[Ca2 ]i荧光强度显著高于对照组(107.34±26.14,54.93±16.08,P<0.05)。结论:电磁脉冲致海马神经元形态学损伤、坏死与凋亡率增加,神经元内的Ca2 荧光强度明显增加。     

Measurement of intracellular calcium concentration in intact monolayers of human endothelial cells

Intracellular calcium ([Ca++]i) plays an important role in signal transduction and cell activation. The measurement of [Ca++]i in intact monolayers of human umbilical vein endothelial cells with the fluorescent calcium-sensitive probe fura 2 has been evaluated. Monolayers provide a more physiologic cell preparation than suspensions and allow a greater variety of experimental manipulation. Basal [Ca++]i was 117 +/- 5 nmol/L, with a range from 40 to 280 nmol/L that was not affected by cell age (days of primary culture) or degree of confluence. Thrombin in concentrations of 0.005 to 5 NIH units/ml produced a dose-dependent increase in [Ca++]i up to a maximum of 1500 +/- 147 nmol/L; this increase was shown to depend in part on the concentration of extracellular calcium. The presence of antithrombin III at physiologic concentrations abolished responses to 0.5 NIH units/ml thrombin but had no effect on 5 NIH units/ml. The potential of this technique was demonstrated further by our ability to examine [Ca++]i responses in endothelial cells following infection with herpes simplex virus type 1, a virus implicated in vascular injury. After 18 hours' infection, the response to both thrombin and histamine was dramatically reduced despite a normal resting [Ca++]i. It is concluded that this method may be useful for detecting early and subtle changes in endothelial cell function under a variety of physiologic and pathologic conditions.     

丹参对兔脊髓损伤区钙、水含量的影响

背景脊髓损伤继发损伤机制是多种病理、生理、生化机制综合作用的结果.各国学者对脊髓损伤的早期治疗,抑制或阻止脊髓损伤继发损害的方面作了较多探索.目的探讨丹参对脊髓伤区水、钙含量的影响,分析丹参对脊髓的保护作用.设计随机分组实验研究.地点和对象实验在武汉大学人民医院骨科完成,对象为日本大耳白兔35只,雌雄不拘,均购自武汉大学医学院实验中心.干预按抽签法随机分成3组正常组5只,仅做L1椎板咬除而脊髓无损伤,对照组15只,治疗组15只.采用改良Allen氏法制作兔脊髓损伤模型.术后治疗组兔静注丹参注射液,对照组兔静注等量生理盐水.主要观察指标3组兔术后2,12,24h测量脊髓损伤段水、钙含量.结果脊髓损伤后,伤区水、钙含量增高,伤后12 h对照组水、钙含量分别为(77.34±2.16)%,(30.83±8.76)μmol/g,治疗组水、钙含量分别为(68.42±3.01)%,(19.32±2.79)μmol/g.丹参治疗后2,12,24 h水、钙含量均较对照组降低,趋近正常值.结论丹参可减轻脊髓伤区水、钙储留,对脊髓起保护作用.     

促肾上腺皮质激素释放激素对下丘脑神经元胞浆内环磷酸腺苷和Ca2+浓度的调节作用

背景:在应激反应中,下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴的激活对下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素表达的增加起着关键的作用。然而关于通过何种途径调控下丘脑神经元表达促肾上腺皮质激素释放激素的神经内分泌活性,促肾上腺皮质激素释放激素能否激活下丘脑神经元,尚不十分清楚。目的:通过外源性促肾上腺皮质激素释放激素刺激培养下丘脑神经元,以观察细胞内环磷酸腺苷和胞浆内钙离子浓度的变化。设计:观察对比实验。单位:解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所,首都医科大学附属天坛医院神经外科。材料:实验于1999-12/2002-03在解放军第三军医大学大坪医院完成。取孕17d胎鼠下丘脑分散培养下丘脑神经元。方法:用外源性促肾上腺皮质激素释放激素刺激培养下丘脑神经元,促肾上腺皮质激素释放激素1受体特异性拮抗剂CP-154526预先处理下丘脑神经元。将培养的细胞分组:①促肾上腺皮质激素释放激素(10-12,10-10,10-8,10-6mol/L)刺激组。②预先用CP-154526(500μmol/L)处理再用促肾上腺皮质激素释放激素(10-12,10-10,10-8,10-6mol/L)刺激组。③分别设置相应的正常对照组,正常对照组用等渗盐水刺激。用PTI荧光成像系统测量和分析外源性促肾上腺皮质激素释放激素对培养下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度变化,用放射免疫方法测定神经元内环磷酸腺苷含量。主要观察指标:①下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度。②下丘脑神经元内环磷酸腺苷含量。结果:正常对照组的下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度和环磷酸腺苷含量较低,外源性促肾上腺皮质激素释放激素刺激后,胞浆内游离钙浓度立即升高,神经元胞浆内环磷酸腺苷生成明显增加[(240±22),(153±11)nmol/L;(3.26±0.19),(0.44±0.02)pmol/dish,P<0.01];CP-154526可明显抑制促肾上腺皮质激素释放激素(10-6mol/L)刺激的下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度和环磷酸腺苷含量的生成[钙离子浓度:(240±22),(171±16)nmol/L;环磷酸腺苷含量:(3.26±0.19),(2.33±0.21)pmol/dish,P<0.01]。结论:促肾上腺皮质激素释放激素可通过与其1受体结合直接作用于下丘脑神经元,使神经元胞浆内游离钙浓度和环磷酸腺苷含量明显增加,在调节下丘脑神经元激活过程中下丘脑合成和分泌的促肾上腺皮质激素释放激素可能起了重要作用。