参莲提取物对TNF-α刺激下单核细胞株THP-1功能的影响

目的:观察参莲(SL)提取物对炎症因子刺激下单核细胞功能的影响。方法:SL提取物预孵育,以TNF-α20μg.L-1为刺激因子,观察SL提取物对单核细胞株THP-1黏附、迁移、摄脂、分泌功能变化的影响。结果:SL1~3(0.5~2 g.L-1)可明显降低HUVEC和THP-1的黏附率,与模型组比较有显著性差异。SL1~5(0.125~2 g.L-1)均可显著减少THP-1迁移细胞数,与模型组比较有显著性差异。SL1~5(0.125~2 g.L-1)均可显著降低细胞内TC值。SL 1(2 g.L-1)可显著降低细胞上清中异常增高的IL-6值,同时升高IL-10的含量,其他剂量未见明显作用。结论:SL提取物对TNF-α刺激下单核细胞黏附、迁移、摄脂、分泌功能均有显著影响,其作用可能是SL提取物干预AS早期炎症反应的机制之一。     

参莲提取物对动脉粥样硬化家兔血管病理形态和脂质代谢的影响

目的观察参莲提取物(由丹参和穿心莲组成)对动脉粥样硬化(artherosclerosis,AS)的影响。方法以球囊导管内皮损伤术和高脂饵食法建立家兔AS模型,通过胸主动脉油红O大体染色、股动脉HE染色、平滑肌细胞计数等方法观察参莲提取物对AS斑块形成过程中血管病理形态和脂质代谢的影响。结果辛伐他汀和参莲提取物各剂量均可显著减少AS模型家兔斑块形成面积,降低最大内膜厚度值(MIT)和中膜层平滑肌细胞数;参莲提取物1.12、4.48 g/kg剂量组家兔股动脉MIT值明显低于模型组。辛伐他汀和参莲提取物各剂量组可明显降低AS模型家兔血清总胆固醇(TC);参莲提取物2.24、4.48 g/kg剂量组血清三酰甘油(TG)水平明显低于模型组。辛伐他汀可显著提高AS模型家兔高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),参莲提取物无明显作用。辛伐他汀及参莲提取物各剂量组均可明显降低AS模型家兔低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),与模型组比较具有显著差异(P<0.01、0.05)。结论参莲提取物对AS斑块形成具有显著的预防和治疗作用,其作用与改善脂质代谢有关。     

参莲提取物对兔颈总动脉低剪应力模型血流及血管病理形态的影响

血流动力学的改变对脂质沉积和血管内皮的影响与动脉粥样硬化(artherosclerosis,As)的发生密切相关.本实验以颈总动脉套管和高脂饵食法建立家兔局部低剪切应力As模型,通过检测造模2 4,8周的血流量、切应力、血脂水平及血管病理形态,发现颈总动脉套管法在近心端可形成局部低剪应力;阿托伐他汀和参莲提取物呈时间依赖性和剂量依赖性地增加近心端血流量(P＜0.05),降低血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(lowdensity lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平(P＜0.05),减少As模型家兔近心端血管病变程度.本研究首次证实了参莲提取物(丹参和穿心莲组成)对As斑块形成的抑制作用与改善血流有关.     

参莲提取物对LPS诱导的巨噬细胞炎症反应的影响

目的:探讨参莲(SL)提取物在炎症调节中发挥的治疗性作用及其机制。方法:分别以小鼠巨噬细胞Raw264.7和小鼠腹腔巨噬细胞为实验对象,利用脂多糖(LPS)诱导炎症模型,SL提取物低、中、高剂量(5,10,20 mg·L~(-1))药物处理24 h,另设空白组,使用酶联免疫吸附测定(ELISA)法及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测小鼠Raw264.7及腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)含量及mRNA表达;使用蛋白质免疫印迹法(Western blot)对小鼠Raw264.7核转录因子-κB(NF-κB)信号通路中的p65及磷酸化p65(p-p65)蛋白表达情况进行检测,采用免疫荧光法对小鼠Raw264.7及腹腔巨噬细胞NF-κB p65分子进行亚细胞定位观察SL提取物是否能够影响其入核。结果:与空白组比较,模型组小鼠Raw264.7及腹腔巨噬细胞TNF-α,IL-1β含量及mRNA表达均显著升高,小鼠Raw264.7 p-p65/p65蛋白表达显著升高(P0.01),免疫荧光观察显示模型组Raw264.7及腹腔巨噬细胞均可见明显入核行为;与模型组比较,SL提取物低、中、高剂量组明显降低小鼠Raw264.7及腹腔巨噬细胞TNF-α,IL-1β含量及mRNA表达(P0.05,P0.01),显著降低小鼠Raw264.7及p-p65蛋白(P0.01),SL提取物中剂量组可明显减弱Raw264.7及腹腔巨噬细胞入核行为。结论:SL提取物能够抑制巨噬细胞的炎症反应,其机制可能与影响巨噬细胞炎性因子的分泌及NF-κB信号通路有关。     

脂质过氧化炎症损伤模型中参莲提取物对巨噬细胞功能的药效与机制探讨

目的:研究参莲(SL)提取物在脂质过氧化炎症损伤模型中,对巨噬细胞功能的作用和促进炎症消散的药效和药理机制。方法:利用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)体外诱导小鼠巨噬细胞RAW264. 7细胞和人单核细胞THP-1造成脂质过氧化损伤模型,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测不同质量浓度的SL提取物(2. 5,5. 0,10. 0,20. 0 mg·L~(-1))对巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的含量;流式细胞术检测巨噬细胞泡沫化形成;transwell实验检测SL提取物对THP-1趋化功能的影响;以及用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测诱导型一氧化氮合酶(i NOS),炎症消散因子5脂氧合酶(ALOX5)以及对核转录因子-κB(NF-κB)信号通路中的磷酸化p65(p-p65)和磷酸化IκK(p-IκK)蛋白表达情况。结果:与正常组比较,ox-LDL提高M1型巨噬细胞标志物TNF-α,IL-1β,i NOS的表达(P 0. 01),抑制M2型标志物IL-10的表达,促进泡沫细胞形成(P 0. 01),诱导THP-1向ox-LDL趋化,提高MCP-1分泌量(P 0. 01),抑制ALOX5的表达。与模型组比较,SL提取物可以降低TNF-α,IL-1β,i NOS的表达(P 0. 01),提高IL-10的表达(P 0. 05);能显著降低巨噬细胞吞噬脂质后泡沫化的形成(P 0. 01);能降低THP-1细胞MCP-1的分泌(P 0. 01),减少趋化的细胞数目(P 0. 01);促进炎症消散因子ALOX5的升高(P 0. 05),同时抑制p65和IκK磷酸化表达(P 0. 01)。结论:在脂质过氧化炎症损伤模型中,SL提取物具有诱导巨噬细胞M2极化,抑制巨噬细胞对ox-LDL的趋化和泡沫化的形成,提高ALOX5表达,促进炎症消散,从而改善脂质过氧化炎症损伤状态,上述功能与抑制NF-κB信号通路中p65和IκK磷酸化水平有关。     

参莲提取物抗炎药理活性评价

目的 评价参莲提取物的抗炎作用.方法 采用巴豆油诱导小鼠急性耳肿胀模型、大鼠慢性肉芽肿模型、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠急性肺炎性损伤模型、家兔内皮剥脱复合高脂诱导动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)早期炎症损伤模型等,对中药复方制剂参莲提取物进行抗炎药理作用评价.结果 参莲提取物可抑制大鼠肉芽肿生成,降低家兔AS早期炎症反应,对小鼠急性肺炎症损伤反应有一定的抑制作用,对巴豆油诱导小鼠急性耳肿胀无明显治疗作用.结论 参莲提取物具有明显的抗炎作用,对慢性、亚急性炎症的治疗作用优于急性炎症.     

参莲提取物对大鼠腹腔肥大细胞释放活性物质的干预作用

目的:探讨参莲提取物对大鼠腹腔肥大细胞释放活性物质的干预作用。方法:提取原代大鼠腹腔肥大细胞,纯化后以5×106个/mL浓度接种于培养板中,加参莲提取物预处理2 h后,用C48/80刺激肥大细胞脱颗粒,ELISA法检测细胞上清液以及细胞裂解液中组胺(histamine),类胰蛋白酶(tryptase),以及5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)的含量,计算活性物质释放率。结果:模型组较对照组组胺释放率由32.36%升至61.71%(P<0.01),参莲提取物各剂量(100,50,25,12.5 mg.L-1)作用后,组胺释放率分别降至16.24%,26.25%,27.81%,31.50%(P<0.01);模型组较对照组类胰蛋白酶释放率由13.19%升至21.72%(P<0.01),参莲提取物各剂量(100,50,25,12.5 mg.L-1)作用后,类胰蛋白酶释放率分别降至8.60%,15.78%,8.80%,12.15%(100,25,12.5 mg.L-1组P<0.01,50 mg.L-1组P<0.05);模型组较对照组5-HT释放率没有明显变化,但参莲提取物100,50,25 mg.L-1组显著增加5-HT释放率(P<0.01,P<0.05)。结论:参莲提取物对大鼠腹腔肥大细胞有一定的稳定作用。     

参莲提取物对ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化和凋亡的药效学研究及提取部位活性比较

目的:研究参莲(SL)提取物对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的腹腔巨噬细胞泡沫化和凋亡的药效及SL不同提取部位的活性比较。方法:从C57BL/6J雌性小鼠腹腔中收集腹腔巨噬细胞,体外培养72 h后,分为7组,阴性对照组(NC),模型组(Model,ox-LDL,20 mg·L~(-1)),丹参水溶性提取物组(DS,4.32 mg·L~(-1)+20 mg·L~(-1) ox-LDL),丹参脂溶性提取物组(DZ,2.5 mg·L~(-1)+20 mg·L~(-1) ox-LDL),穿心莲脂溶性提取物组(C,3.18 mg·L~(-1)+20 mg·L~(-1) ox-LDL),SL提取物组(10 mg·L~(-1)+20 mg·L~(-1) ox-LDL),内质网应激诱导剂衣霉素组(TM,1 mg·L~(-1)),药物处理24 h。油红O染色观察脂质积累的情况;钙离子荧光染色联合流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化;Annexin V-FITC/PI染色观察细胞的凋亡情况;比色法检测Caspase-3的酶活性;Western blot检测Caspase-12的表达。结果:与NC组相比,Model组和TM组腹腔巨噬细胞内脂质蓄积,凋亡率增加,Caspase-3的酶活性增加,钙离子浓度增加,Caspase-12的活化水平上调。与Model组相比,SL组和C组显著改善细胞内脂质积累的情况;SL组和DZ组显著降低细胞的凋亡率,降低Caspase-3的酶活性,有效降低细胞内钙离子的浓度,显著降低Caspase-12的活化水平。结论:综上所述,以巨噬细胞为靶点,SL提取物可能通过缓解ox-LDL诱导的内质网应激,抑制巨噬细胞源泡沫细胞的凋亡。     

山葵提取物对小鼠巨噬细胞的体外活化作用

目的:探讨山葵使巨噬细胞活化的机制。方法:将山葵粉(头)提取物按1∶20、1∶200、1∶2000浓度稀释后分别加入体外培养的小鼠巨噬细胞中,于6hr、12hr、24hr、36hr后分别收集细胞培养上清,采用ELISA方法检测细胞因子NO、IL-6、IL-12及TNF-α的含量。结果:山葵提取物(浓度≥5mg/ml)作用于小鼠巨噬细胞后6hr、12hr、24hr、36hr培养上清NO的含量显著高于对照组(P<0.05),而IL-6、IL-12及TNF-α的含量与对照组之间无显著差异(P>0.05)。结论:山葵提取物可使小鼠巨噬细胞大量产生NO,而对IL-6、IL-12及TNF-α影响较小。     

二妙散对大鼠骨髓来源的巨噬细胞M1/M2极化的影响

目的:探索二妙散(EMS)对脂多糖(LPS)+干扰素(IFN)-γ诱导大鼠骨髓来源巨噬细胞(Macrophage)M1极化及白细胞介素(IL)-4+IL-13诱导M2极化的影响。方法:体外提取大鼠骨髓来源的单核细胞,加巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF),诱导成巨噬细胞(F4/80标记),加入LPS+IFN-γ,诱导其向M1型巨噬细胞极化;加入IL-4和IL-13,诱导其向M2型巨噬细胞极化;加入不同浓度二妙散(0.2,0.4,0.8 g·L^-1)作用后,采用免疫荧光分别检测M1(CD68及iNOS标记)及M2(CD206及Arginase标记)表型,检测二妙散对大鼠骨髓来源的巨噬细胞M1/M2极化的影响。结果:与空白组比较,LPS+IFN-γ能显著增加M1的极化(P<0.01),IL-4+IL-13能显著增加M2的极化(P<0.01);与LPS+IFN-γ/IL-4+IL-13组比较,二妙散(0.2,0.4,0.8 g·L^-1)作用24 h对LPS+IFN-γ诱导的M1极化具有明显抑制作用(P<0.05),对IL-4+IL-13诱导的M2极化没有明显影响。结论:二妙散可抑制LPS+IFN-γ诱导的M1极化,而对IL-4+IL-13诱导的M2极化没有影响。     

参莲方对大鼠动脉粥样硬化病变形成过程影响的动态观察

目的:建立大鼠动脉粥样硬化(AS)模型,观察动脉粥样硬化早期病变的动态变化过程和参莲方的干预作用.方法:240只大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性药组(阿司匹林0.027 g·kg-1)、参莲方高、中、低剂量组(0.675,1.35,2.70 g·kg-1).采用球囊损伤法+半量高脂饲料建立AS模型,并给予参莲方治疗.HE法观察血管病理学变化,采用酶比色法、清除法、硝酸还原酶法测定TC,TG,LDL-C,HDL-C,NO水平的变化,放免法观察ET,TXB2,6-keto-PGF1α,TNF-α,IL-6及IL-8水平的变化.结果:参莲方各剂量组和同阶段模型组相比血管损伤均有明显改善,内膜炎细胞浸润、中膜增厚和平滑肌增殖减轻,第8周末参莲方组无明显脂质条纹出现.参莲方各剂量组血清TC,NO,TXB2的含量明显降低(P<0.05);高剂量组可明显降低血清TNF-α,IL-6,IL-8水平(P<0.05).结论:参莲方能够通过调节血脂,改善血管内皮功能,减少血液循环中炎症介质的释放,抑制AS病变的形成和发展.     

薄层扫描法测定参莲颗粒中苦参碱含量

目的建立参莲颗粒中苦参碱含量的测定方法。方法采用双波长反射法锯齿扫描,λs=505nm,λR=650nm,SX=3,狭缝0.4mm×0.4mm。结果本法结果稳定、准确、重现性好,苦参碱在1.05~5.25μg(r=0.9995)范围内线性关系良好,平均加样回收率为98.8%(n=6),RSD为1.6%。结论本法能有效的控制参莲颗粒中苦参碱的含量。     

参莲提取物对PM2.5染毒RAW264.7细胞损伤的保护作用

观察中药参莲(SL)提取物对PM_2.5染毒RAW264.7细胞损伤的保护作用。建立PM_2.5染毒致RAW264.7细胞损伤模型。以细胞生长、细胞损伤标记物、氧化应激相关因子及炎性细胞因子为观察指标,评价SL提取物对PM_2.5染毒RAW264.7细胞损伤的保护作用。结果表明,PM_2.5 50 mg·L^-1作用4,24 h时可致细胞颗粒沉积,抑制细胞生长,可显著增加细胞上清中LDH,NO释放量及细胞内活性氧(ROS)水平。在SL提取物50,25,10 mg·L^-1干预作用下,RAW264.7细胞颗粒沉积减轻,细胞上清中LDH,NO,IL-1β,MCP-1释放量显著下降,SOD活性显著有所增加。表明SL提取物对PM_2.5染毒RAW264.7细胞损伤有明显保护作用,其作用可能与对细胞的直接保护作用、减少氧化应激及炎症损伤有关。     

参莲方对颗粒物暴露致大鼠急性肺损伤的保护作用

目的：观察参莲方对颗粒物(PM)暴露致大鼠急性肺损伤的保护作用并初步探究其保护机制。方法：雄性SD大鼠50只,随机分为正常组、模型组、参莲方低、高剂量组(4.32、8.64 g·kg^-1)、罗氟斯特组(3.46 mg·kg^-1),每组10只。预给药灌胃1周后,于第8天和第11天除正常组滴注生理盐水外,其余组气管滴注PM混悬液建立PM暴露致大鼠急性肺损伤模型。造模后继续给药至实验结束。末次染毒48 h后检测大鼠肺功能。随后处死大鼠,观察肺部形态学变化,苏木素-伊红(HE)染色检测肺组织病理变化;免疫组化观察肺部CD68表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清肺损伤标志物肺表面活性物质A(SP-A)、克拉氏细胞分泌蛋白16(CC16)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肺组织炎症因子白细胞介素-1α(IL-1α)、IL-6、IL-18和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达。结果：与正常组比较,模型组大鼠肺功能下降,肺组织出现明显组织结构损伤,并有明显的PM沉积和CD68阳性细胞浸润,肺组织炎症因子IL...     

参连滴耳液治疗慢性化脓性中耳炎的临床和实验研究

目的：探讨中药复方参连滴耳液治疗慢性化脓性中耳炎的疗效和机制。方法：选择２０１例慢性化脓性中耳炎患者，随机分为治疗组（用参连滴耳液滴耳，每日３次）和对照组（用氧氟沙星滴耳滴液耳，每日３次），观察其各症状和体征以及细菌培养等方面的变化；进行抗炎消肿、皮肤粘膜刺激试验等动物实验以及抑菌试验。结果：治疗组在疗效、平均用药时间、改善患者症状、体征方面均明显优于对照组（Ｐ〈０．０５或Ｐ〈０．０１），且参连滴