NKG5SV基因导入对自然杀伤细胞杀伤肝癌细胞能力的影响及其机制研究

目的研究导入NKG5SV基因对NK细胞肝癌杀伤作用的影响及其机理.方法将NKG5SV和对照基因LacZ基因分别导入肝癌病人的NK细胞,K562细胞杀伤实验检测NK活性,MTT法检测不同NK细胞对肝癌细胞株和正常肝细胞株的杀伤,并进行形态学观察.DAPI荧光染色法和小片段DNA定量法检测和定量细胞凋亡.结果肝癌病人NK细胞、NK-LacZ细胞、NK-NKG5SV细胞,健康人NK细胞的NK活性(%)分别为5.96±0.38、6.03±0.42(P＞0.05)、27.67±0.18(P＜0.05)、30.33±0.83(P＜0.05).作用72?h后肝癌病人NK细胞、NK-LacZ细胞、NK-NKG5SV细胞对SMMC-7721肝癌细胞株的杀伤活性(%)分别为45±5,46±9(P＞0.05)、69±4(P＜0.01).SMMC-7721细胞的凋亡细胞数(个/高倍视野)和凋亡DNA量(μg/板)分别为1.5±0.3、1.4±0.5(P＞0.05)、1.9±0.6(P＞0.05),70±10、72±9(P＞0.05)、76±10(P＞0.05).结论NKG5SV基因导入肝癌病人的NK细胞通过增加其细胞溶解作用而提高其肿瘤杀伤能力.     

经不同途径应用NK-NKG5-SV细胞防治肝细胞肝癌的研究

目的研究NKG5-SV导入肝癌病人NK细胞对其抗肝细胞肝癌作用的影响.方法Percoll不连续密度梯度离心法分离肝癌病人外周血NK细胞,以逆转录病毒为载体将NKG5-SV基因和报告基因LacZ导入NK细胞.将不同NK细胞与LCI-D20裸鼠人肝癌同时皮下接种或待LCI-D20肿瘤成瘤后瘤内注射,观察对肿瘤成瘤和生长的影响.术中经切缘或脾内注射不同的NK细胞,观察其对LCI-D20肝癌切除术后转移复发的影响.结果不同NK细胞与LCI-D20肝癌同时皮下接种NK-NKG5-SV细胞组成瘤率、肿瘤直径(cm)均低于NK-LacZ细胞组(P均小于0.01).肿瘤内注射不同NK细胞,NK-NKG5-SV细胞组的肿瘤生长明显低于NK-LacZ细胞组(P均小于0.05).肝癌切除术中应用NK细胞对照组、NK-LacZ细胞组、NK-NKG5-SV细胞组切缘复发瘤直径、肝内转移灶数目、转移灶累及肝叶数、转移灶累及腹内部位数分别为切缘注射1.51±0.47、0.86±0.49、00±1.76,2.40±1.80、0.80±0.54、0.40±1.18,01),2.60±0.70、1.40±0.54、1.0.50=0.19(P＜0.4.20=2.16、1.80±0.13、0.60±0.54(P＜0.05).脾内注射1.18±0.34、0.86±0.40、0.70±0.35,2.40=1.6 7、0.60±0.89(P＜0.05)、0.40±0.89(P＜0.05),2.2±1.09、0.4±0.54(P＜0.05)、0.2± 0.01(P＜0.01).4.60±1.14、1.20±1.70(P＜0.01)、0.80±1.09(P＜0.01).结论NK细胞具有抑制LCI-D20肝癌生长及防治肝癌切除术后转移复发的作用.NKG5-SV基因转染NK细胞后可提高NK细胞的抗肝癌作用.     

甲胎蛋白启动子驱动的yCDglyTK双自杀基因治疗裸鼠肝癌的机制研究

目的研究携带甲胎蛋白（AFP）启动子的酵母菌胞嘧啶脱氨酶胸苷激酶（yCDglyTK）双自杀基因体内靶向性治疗肝癌的效果和机制。方法构建携带AFP启动子的yCDglyTK双自杀基因表达质粒,通过阳离子脂质体将携带AFP启动子的yCDglyTK双自杀基因转染HepG2和SMMC7721肝癌细胞的裸鼠肝癌皮下种植瘤,观察自杀基因体内杀瘤效果以及细胞凋亡的情况。结果成功构建携带AFP启动子的yCDglyTK双自杀基因,其靶向性地在AFP阳性的HepG2细胞种植瘤上表达,而AFP阴性的SMMC7721细胞种植瘤上无表达,氟胞嘧啶（5-FC）、更昔洛韦（GCV）及两者联合可有效抑制HepG2细胞种植瘤的生长,抑瘤效果GCV＋5-FC〉5-FC〉GCV,而SMMC7721细胞种植瘤的生长未受影响。HepG2细胞种植瘤治疗后有明显的细胞凋亡,而SMMC7721细胞种植瘤内极少凋亡细胞。结论携带AFP启动子的yCDglyTK双自杀基因能有效地靶向性地杀伤AFP阳性的肝癌细胞,细胞凋亡可能是其杀伤的重要机制之一。     

细胞分化诱导剂防治裸鼠肝癌转移复发的疗效

目的研究ＣＤＡ－Ⅱ对裸鼠早期（转移前）和晚期（转移后）肝癌切除术后转移复发的防治效果。方法裸鼠人肝癌高转移模型肿瘤接种后,于转移发生前后分别行肝癌切除术,术后皮下注射ＣＤＡ－Ⅱ。肿瘤接种后３５天处死动物,记录动物体重、切缘复发、肝内转移、和远处转移情况。结果早、晚期肝癌切除术后应用ＣＤＡ－Ⅱ组动物体重较高,肝内转移和远处转移累及脏器数均少于对照组,局部复发灶也小于对照组。结论ＣＤＡ－Ⅱ对裸鼠早期和晚期肝癌切除术后的转移复发有防治作用。     

短发卡状RNA抑制AKT2对肝癌细胞增殖及侵袭的影响

目的 探讨短发卡状RNA(siRNA)抑制AKT2对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭转移的影响.方法 设计并合成特异性靶向AKT2的siRNA片段并构建SMMC7721AKT2 siRNA表达质粒,将其转染SMMC7721细胞,通过G418筛选出稳定株.MTT法检测肝癌SMMC7721细胞的生存率变化;流式细胞术检测细胞周期;Western- blot检测P27、CyclinD1;Transwell实验和划痕实验分析细胞侵袭、转移能力的改变.结果 MTT检测显示AKT2干扰可抑制SMMC7721细胞的生长,与其他组比较差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术显示AKT2干扰组细胞周期阻滞于G1期,G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降.Western- blot检测显示CyclinD1表达下降,P27的表达上升.Transwell试验和划痕试验显示AKT2干扰组的侵袭和转移能力受到抑制.结论 AKT2基因沉默可明显抑制肝癌SMMC7721细胞的生长并阻滞细胞周期.AKT2基因沉默可抑制肝癌SMMC7721细胞的侵袭和转移能力.     

增殖性腺病毒CNHK600-p53可增强肝癌细胞株SMMC7721对化疗药物的敏感性

目的构建携带p53基因新型增殖性腺病毒CNHK600-p53,研究其是否增加肝癌细胞株对化疗药物的敏感性。方法采用四甲基偶氮唑盐(m ethylth iazolyl tetrazolium assay,MTT),观察化疗药物5-氟尿嘧啶(F luorourac il,5-Fu)、丝裂霉素(M itomyc in,MMC)和表阿霉素(Ep irub ic in,EPI)组与携带p53基因的重组腺病毒CNHK600-p53联合上述化疗药物组对肝癌细胞株SMMC7721的杀伤效应,同时观察其是否优于Ad-p53。结果单用CNHK600-p53或Ad-p53对肝癌细胞SMMC7721的杀伤效果无明显差别;肝癌细胞株SMMC7721在5-Fu浓度为100 ug/m l时细胞抑制率为58%,MMC浓度为2.5 ug/m l时细胞抑制率为50%,EPI浓度为1.25ug/m l时细胞抑制率为57%,但转入CNHK600-p53(MO I=10)后再使用上述浓度的化疗药物,细胞抑制率分别为76%、60%和62%。结论单用CNHK600-p53或Ad-p53对肝癌细胞SMMC7721的杀伤效果无明显差别,携带p53基因的CNHK600-p53能提高肝癌细胞株SMMC7721对化疗药物的敏感性,CNHK600-p53联合化疗药物治疗可望开辟克服肝癌耐药的新途径。     

抗粘附药物防治早期肝癌切除术后转移复发的实验研究

目的 研究ＣＤＡ－Ⅱ，β肽，丹参，蛇毒抗ＬＣＩ－Ｄ２０裸鼠人肝癌模型肿瘤早期切除术后复发及转移的疗效。方法 以ＬＬＣＩ－Ｄ２０模型肿瘤接种裸鼠后１６天，在肿瘤转移发生前行肝癌切除，术后皮下分别注射以上４种制剂，对照组注射等体积的生理盐水，每组５只裸鼠，接种后３５天处死动物，观察动物体重，切缘复发瘤直径，肝内转移和远处转移情况。     

人肝癌裸鼠NKG2D受体的表达及对NK细胞毒活性的影响

目的 通过研究原发性肝癌中NK细胞的细胞毒活性变化及其活化性受体NKG2D的表达,观察肝脏和脾脏组织病理变化,探讨NK细胞免疫抑制机制,为原发性肝癌的免疫治疗提供理论依据。方法 ①建立人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型：先用人肝癌细胞株Hep3B接种于裸鼠皮下,形成皮下移植瘤,然后用此移植瘤组织再接种于裸鼠肝内,建立肝原位移植瘤模型（间接肝原位移植瘤模型）;②检测裸鼠原发性肝癌对NK细胞免疫活性的影响：分离裸鼠外周血、肝脏及脾脏组织NK细胞,LDH方法检测NK细胞的细胞毒活性,流式细胞技术检测不同组织NK细胞NKG2D表达百分率,H-E染色观察肝脏移植瘤对肝脏和脾脏淋巴细胞的影响。结果 ①外周血、肝脏及脾脏的NK细胞毒活性及NKG2D受体表达随着肿瘤生长逐渐下降,其中肝脏NK细胞毒活性及NKG2D表达下降明显;②荷瘤裸鼠肝脏癌组织与皮下瘤相同,癌组织异型性与时间呈正相关,脾脏淋巴小结在第4周增生明显,第8周小梁结构增多。结论 原发性肝癌通过下调NKG2D的表达,对NK细胞有免疫抑制作用,这种作用主要发生在肝脏,但对外周血和脾脏也有影响。     

稳定表达Angiopoietin-1基因肝癌细胞株的建立及其意义

目的 通过将Angipoietin-1基因转染培养人肝癌细胞SMMC－7721,建立长期表达Angipoietin-1基因的肝癌细胞模型。方法 基因重组构建Angipoietin-1真核表达质粒pcDNA3/Angipoietin-1,经脂质体将pcDNA3/Angipoietin-1质粒转染培养人肝癌细胞株SMMC－7721,G418筛选阳性细胞克隆,逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）检测转染后25-30d细胞Angipoietin-1基因mRNA表达水平。结果 （1）限制酶切和凝胶电泳证明成功构建表达质粒pcDNA3／Angipoietin-1;（2）通过脂质体Dosper将质粒pcDNA3／Angipoietin-1转染SMMC－7721,经G418筛选后获得阳性细胞克隆;（3）RT－PCR证明经脂质体转染的人肝 癌细胞株SMMC－7721可较稳定表达Angipoietin-1基因。结论 成功建立稳定表达Angipoietin-1基因的肝癌细胞株SMMC－7721／Angipoietin-1,为通过在体途径探讨Angipoietin-1对肿瘤血管生成的调节作用奠定了基础。     

抑制自噬对5-氟尿嘧啶治疗肝癌疗效的影响及机制研究

目的研究自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）对5-氟尿嘧啶（5-FU）诱导肝癌细胞系SMMC7721凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法利用单丹（磺）酰戊二胺（MDC）染色技术,在荧光显微镜下对细胞自噬进行定性观察;以CCK8法检测3-MA抑制细胞自噬前后经5-FU诱导SMMC7721细胞的存活,凋亡以AnnexinⅤ/PI流式细胞分析法检测;以Western blot法分别检测自噬特异性蛋白LC3及凋亡蛋白caspase-3活化片段和PARP裂解片段的表达。结果 5-FU处理肝癌SMMC7721细胞48 h后,可诱导其发生自噬,细胞存活率为（60.73±2.65）%,凋亡率为（40.42±2.34）%;联合应用3-MA处理48 h后,可使肝癌SMMC7721细胞存活率明显降低（P〈0.01）,为（42.31±1.32）%,而细胞凋亡率显著增加（P〈0.01）,为（60.92±2.99）%,同时引起自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ及凋亡蛋白caspase-3活化片段和PARP裂解片段表达增加,其灰度值比较差异均有统计学意义（均P〈0.01）。结论自噬在5-FU诱导肝癌细胞系SMMC7721凋亡过程中起保护性作用,抑制自噬可提高肝癌SMMC7721细胞对5-FU的敏感性,其可能主要通过激活caspase-3及剪切PARP来实现的。因此,自噬特异性抑制剂3-MA可能为提高肝癌对5-FU的敏感性提供新思路。     

Y to V instead of Z to N

A multiple Y to V plasty is easier to perform than a multiple Z-plasty, it permits further elongation and does not tend to provoke flap necrosis.     

Treatment of complete rectal prolapse: To narrow,to wrap,to suspend,to fix,to encircle,to plicate or to resect?

Selection of the best surgical procedure for the treatment of complete rectal prolapse is difficult amid the many different techniques for which excellent results are reported. A critical review is given. It is concluded that any surgical procedure with rectal mobilization and fixation as a standard maneuver will lead to a recurrence rate of 2% to 4%. Advocacy of additional maneuvers to make the procedure easier is acceptable if it does not lead to a higher complication rate. But to obtain a better result its benefit has to be proven, either by a large prospective double-blind study, or by tests from the colorectal laboratory. New surgical techniques for rectal prolapse should therefore be based, not only on a low recurrence and complication rate, but also on tests that evaluate the effect of the procedure on fecal continence.

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Resumen Seleccionar el mejor procedimiento quirúrgico para el tratamiento del prolapso rectal completo es difícil, frente a las numerosas y diversas técnicas, cada una de las cuales reclama excelentes resultados. Se presenta una revisión crítica y se plantea la conclusión de que cualquier procedimiento quirúrgico que implique la movilización y fijación como maniobra estándar, da lugar a una tasa de recurrencia de 2–4%. Es aceptable preconizar maniobras adicionales para una más fácil realización del procedimiento mientras no resulten en incremento de la tasa de complicaciones. Para reclamar un mejor resultado, es necesario comprobar el beneficio mediante un estudio prospectivo y doble ciego mayor o por medio de pruebas funcionales en la laboratorio colorrectal. Las nuevas técnicas quirúrgicas para el tratamiento del prolapso rectal deben fundamentarse no sólo en bajas tasas de recurrencia y de complicaciones, sino también en pruebas funcionales que valoren objetivamente el efecto del procedimiento sobre la continencia fecal.

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Résumé Choisir le meilleur procédé chirurgical pour traiter le prolapsus total du rectum est d'autant plus difficile qu'il existe de nombreuses méthodes thérapeutiques, toutes vantées dans la litérature pour être la meilleure. Une revue critique des ces procédés est faite. On conclue que toute méthode comportant une mobilisation et une fixation du rectum est suivie de récidive dans 2 à 4% des cas. Recommander des gestes supplémentaires pour faciliter la technique n'est acceptable que si le taux des complications n'augmente pas. Pour prouver que les résultats sont meilleurs, cependant, il faudrait soit réaliser une grande étude prosective à double insu, soit faire des comparaisons par des tests de laboratoire de physiologie colorectale. Des techniques nouvelles de chirurgie du prolapsus rectal devraient être basées non pas sur le taux de récidive ou de complication, mais aussi sur le résultats des tests qui démontrent son efficacité sur la continence fécale.

     

A case of shock due to hypersensitivity to dextran

An examination is made of the relevant literature in the light of a case of shock due to serious hypersensitivity to high molecular weight (70,000) dextran. It is shown that similar cases occur with a certain frequency when dextran is used in situations other than surgery and frank shock. The reaction explodes in response to the first drops of the first administration. The ready availability of resuscitation equipment is a fundamental requisite for the satisfactory outcome of treatment.     

Relation of precurarization to suxamethonium to provide ease of intubation and to prevent post-suxamethonium muscle pains.

Tubocurarine 0.05 and 0.07 mg.kg-1, gallamine 0.1 and 0.2 mg.kg-1 and pancuronium 0.01 and 0.02 mg.kg-1 given three minutes before suxamethonium 1.0, 1.5 and 2 mg.kg-1 in groups of 10 patients each (total 210 patients) to compare ease of tracheal intubation and incidence of post-suxamethonium muscle pain. These were compared with a control group of suxamethonium 1.0, 1.5 and 2 mg.kg-1 given alone after thiopentone 5 mg.kg-1. On analysis, tubocurarine 0.07 mg.kg-1 and suxamethonium 2 mg.kg-1 was the ideal combination with the best intubation conditions and the lowest incidence of post-suxamethonium muscle pains. The second best combination was gallamine 0.2 mg.kg-1 and suxamethonium 2 mg.kg-1. Pancuronium 0.01 mg.kg-1 and 0.02 mg.kg-1 in combination with suxamethonium 2 mg.kg-1 were satisfactory, although less efficient than the combination with either tubocurarine or gallamine.