LHRH-PE40与Hela细胞表面LHRH受体结合的特异性及其细胞毒性

目的:研究重组免疫毒素LHRH-PE40与Hela细胞表面LHRH受体结合的特异性,并观察由此产生的细胞毒性作用.方法:ELISA方法检测LHRH-PE40与Hela细胞表面LHRH受体结合的高度特异性、饱合性及其与时间的关系;LHRH-PE40由LHRH受体介导对Hela细胞产生细胞毒作用进行光、电镜观察.结果:LHRH-PF40与Hela细胞表面受体的结合与正常鸡胚成纤维细胞的结合相比有显著意义(P＜0.01);LHRH-PE40与LHRH竞争LHRHR的OD值和TSH相比有显著意义(P＜0.01);光镜观察,LHRH-PE40对Hela细胞作用明显而对正常鸡胚成纤维细胞几乎没有作用;电镜观察,LHRH-PE40使Hela细胞表面出现凋亡征象.结论:与其他正常组织的细胞相比,Hela细胞膜表面LHRH受体分布呈过表达状;LHRH-PE40与细胞表面LHRH受体的结合具有高度特异性、饱和性;LHRH-PE40对细胞的作用由LHRHR介导,并且只对LHRHR阳性细胞产生毒性作用.     

人成骨细胞瘦素受体放射配基结合分析研究

骨质疏松是以骨量减少、骨组织微结构被破坏为特征的系统性骨病。研究表明 ,无论是否是负重骨 ,血清雌激素水平经校正后 ,体脂和骨量直接相关 ,因此肥胖被认为是骨量的保护因子[1～ 3 ] 。瘦素(leptin)是肥胖基因 (ob)的蛋白质表达产物 ,主要由脂肪细胞分泌 [4 ] 。已有的研究表明 ,瘦素不仅是降低食欲、调节能耗和体重的重要体脂激素 ,而且还与机体多种代谢功能密切相关。有研究提出 ,瘦素可能是骨形成的合成因子 ,介导肥胖对骨量的影响 [5,6]。本研究拟通过培养成人成骨细胞 (osteoblast,OB) ,采用受体放射分析方法探讨 OB瘦素受体蛋白 …     

新合成的阿片受体配基对稳定转染μ阿片受体的CHO细胞的受体结合特性

目的：研究新合成的阿片受体配基对稳定表达于CHO细胞的μ阿片受体的结合特性。方法：采用细胞生物学和放射性配基结合的方法,以能稳定表达μ阿片受体的CHO细胞为模型,检测阿片受体配基[^3H]diprenorphine(^3H-dip)与μ阿片受体的饱和性结合特征及一系列新合成阿片配基的竞争性结合特征。结果：(^3H-dip)结合μ阿片受体的平衡解离常数Kd值为1.06nmol/L;受体最大容量Bmax为930fmol/mg蛋白。竞争性结合实验表明3^#和12^#配基对μ阿片受体的亲和力高于BAMGO和吗啡。2^#、6^#、8^#和9^#配基对μ受体的亲和力低于BAMGO和吗啡。结论：新配基3^#和12^#对μ亚型的阿片受体有良好的亲和力。2^#、6^#、8^#和9^#配基对μ受体的亲和力较低。     

vMIP对细胞膜上趋化因子受体亲和力的结合特性研究

目的通过病毒巨噬细胞炎性蛋白(vMIP)对外周血中单个核细胞(PBMC)膜上趋化因子受体结合的比较性研究,阐明vMIP与受体的结合能力。方法通过放射性配体受体结合实验,利用饱和实验、动力学实验和特异性分析,鉴定vMIP的受体结合能力。结果vMIP与人、食蟹猴PBMC膜上受体结合的Kd分别为11.1、14.3nmol/L,对趋化因子受体CCR5和CXCR4竞争结合的IC50分别为3.4、4.5nmol/L。结论提示了vMIP与膜上受体有较高的亲和力,并对CCR5和CXCR4具有高度特异性,可能对防治炎症及HIV1感染等具有重要意义。     

vMIP对细胞膜上趋化因子受体亲和力的结合特性研究

目的通过病毒巨噬细胞炎性蛋白(vMIP)对外周血中单个核细胞(PBMC)膜上趋化因子受体结合的比较性研究,阐明vMIP与受体的结合能力.方法通过放射性配体受体结合实验,利用饱和实验、动力学实验和特异性分析,鉴定vMIP的受体结合能力.结果 vMIP与人、食蟹猴PBMC膜上受体结合的Kd分别为11.1、14.3 nmol/L,对趋化因子受体CCR5和CXCR4竞争结合的IC50分别为3.4、4.5 nmoL/L.结论提示了vMIP与膜上受体有较高的亲和力,并对CCR5和CXCR4具有高度特异性,可能对防治炎症及HIV-1感染等具有重要意义.     

胰岛素-MTX受体的结合特性

目的　通过体外受体结合实验评价胰岛素 - MTX(甲氨喋呤 )的受体结合特性 ,探讨胰岛素作为受体介导靶向治疗肝癌载体的可行性。方法　将 MTX与胰岛素共价连接 ,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化 ,高效液相层析鉴定。通过受体结合实验 ,测定胰岛素、胰岛素 - MTX的 IC50 及 Ki值 ,比较两者 IC50 及 Ki值的差异 ,以评价 MTX与胰岛素共价连接后的偶联物的受体结合特性。结果　胰岛素 - MTX能同 1 2 5I-胰岛素竞争性与肝癌细胞膜结合。胰岛素的 IC50 为 5 .0 1± 1.2 4nmol/L,Ki值为 4.85± 1.12 nm ol/L;胰岛素 - MTX的 IC50 为 93.82±19.32 nmol/L,Ki值为 91.88± 16 .86 nm ol/L。结论　胰岛素与 MTX共价偶联后 ,仍具有与胰岛素受体结合的生物学活性     

胰岛素—MTX受体的结合特性

OBJECTIVE: It has been reported that several kinds of tumors express increased insulin receptor and the molecules of insulin can be internalized in cells and may thence enter into the nuclei mediated by insulin receptor. In this study, we investigated the receptor binding characteristics of insulin-MTX for the possibility of using insulin as a carrier for carcinoma targeted therapy by receptor mediation. METHODS: MTX(methotrexate) was covalently linked to insulin directly. The insulin-MTX conjugate was purified by polyacrylamine agarose gel electrophoresis and analysed by high performance liquid chromatography and SDS- polyacrylamine agarose gel electrophoresis. Histologically confirmed human hepatocellular carcinoma specimens were obtained from patients at surgery and immediately frozen under -80 degrees C. Cell membrane fractions were isolated by sucrose density gradient centrifugation. Competitive displacement of 125I-insulin with insulin and insulin-MTX binding to insulin receptor were carried out and the values of IC50 and Ki were calculated so as to observe the characteristics of insulin-MTX binding to insulin receptor. RESULTS: Insulin-MTX competed as effectively as insulin with 125I-insulin for insulin receptor. The values of IC50 and Ki for insulin-MTX were 93.82 +/- 19.32 nmol/L and 91.88 +/- 16.86 nmol/L respectively, while the values of IC50 and Ki for insulin were 5.01 +/- 1.24 nmol/L and 4.85 +/- 1.12 nmol/L respectively. CONCLUSION: Insulin-MTX could bind with insulin receptor with high affinity. The result demonstrates us that there is a possibility of using insulin as a carrier for carcinoma targeted therapy by receptor mediation.     

睾丸的绒毛膜促性腺激素受体的放射性配体结合分析

作者建立了大鼠睾丸细胞膜的绒毛膜促性腺激素受体的放射性配体结合分析。睾丸经匀浆、蔗糖密度梯度离心及高速离心制成膜制剂。~(125)I-HCG与膜制剂于30℃反应1小时半,测得膜受体容量为0.36×10~(-12)mol/μg蛋白,K_D值为0.45×10~(-10)mol/L,Hill系数为0.976,k_1为0.41×10~(-3)pmol/min,k_2为2.12×10~(-3)pmol/min。解离图不成直线,分快相和慢相。     

LHRH-PE40对人结肠癌细胞增殖抑制和凋亡的影响

目的：探讨一种新型免疫毒素LHRH-PE40与人结肠癌细胞系Lovo表面LHRH受体结合的特性,观察其对细胞增殖产生的抑制作用及检测细胞凋亡。 方法：用125Ⅰ标记法检测LHRH-PE40与Lovo结合的特异性; MTT比色法检测LHRH-PE40对胃癌细胞的杀伤活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。 结果：人结肠癌细胞系Lovo细胞表面可见配基-受体特异性结合,LHRH-PE40对Lovo细胞的半数致死量为0.24 mg·L^-1,0.1～10.0 mg·L^-1LHRH-PE40作用于Lovo细胞,其凋亡明显（P<0.01）。 结论：结肠癌细胞Lovo细胞表面存在LHRH受体,LHRH-PE40对结肠癌细胞的增殖状态有明显的抑制作用及促凋亡作用。 LHRH-PE40,结肠肿瘤,细胞凋亡,受体;LHRH     

应用细胞芯片捕获人正常胃细胞系、胃癌细胞系细胞并检测其细胞表面CD表型的差异

目的 构建一种细胞芯片,根据芯片表面固定的CD抗体与细胞膜表面CD抗原免疫结合原理捕获细胞,检测人正常胃黏膜细胞系GES-1、胃腺癌细胞系7901细胞表面CD抗原表达的差异.方法 将64种CD抗体蛋白固定在化学修饰醛基玻片上制成抗体阵列,将GES-1、7901细胞用胶原酶消化制成单个细胞悬液,用吖啶橙荧光标记后与芯片进行孵育,洗去芯片上游离的细胞,激光扫描仪检测芯片上CD抗体各点捕获到细胞的荧光信号,以此判定GES-1、7901细胞膜表面CD表型情况.结果 发现CD9、CD13、CD29、CD44、CD49、CD55、CD71、CD95抗体点均捕获到GES-1、7901细胞;CD15、CD24抗体点仅捕获到GES-1细胞;CD77、CD133、CD103、CD64抗体点仅捕获到7901细胞.结论 CD15和CD24可能是人正常胃黏膜细胞系GES-1细胞的表面标志物,CD77、CD133、CD103、CD64可能是人胃癌细胞系7901细胞的标志物.     

对氯苯丙氨酸对大鼠海马胞液皮质酮受体数量的影响

本实验以(~3H)皮质酮为配体,建立了去肾上腺大鼠海马胞液皮质酮受体的放射配体结合测定法,并对海马胞液皮质酮受体的结合特性以及对氯苯丙氨酸(pCPA)对皮质酮受体数量的影响进行了研究。测得的皮质酮受体具有可饱和性、有限的结合能力、高亲和力和高特异性的特征。Scatchard分析为一直线,表明测得的皮质酮受体是一个或一组kd值十分接近的受体。侧脑室注射pCPA 1mg4天后,海马5-HT含量明显降低,同时海马胞液皮质酮受体的最大结合客量(Bmax)显著升高,提示海马5-HT能神经元的功能性活动在控制海马胞液皮质酮受体数量的相对恒定中具有重要作用。     

CD40信号对肺癌细胞化疗敏感性影响的实验研究

目的　观察激发CD4 0分子对肺癌细胞的化疗敏感性影响。方法　以肺癌细胞株A5 4 9和SPC A 1为研究对象 ,以可溶性CD4 0配体 (sCD4 0L)及激发型CD4 0单克隆抗体 5C11处理A5 4 9和SPC A 1细胞 ,采用四氮唑盐(MTT)比色法比较CD4 0激发前后化疗药物顺铂 (DDP)或丝裂霉素 (MMC)对细胞增殖的影响 ,免疫荧光标记和流式细胞术测定激发CD4 0分子前后化疗药物对肺癌细胞的杀伤作用。结果　激发CD4 0分子可增强DDP及MMC对CD4 0表达肺癌细胞株A5 4 9增殖的抑制率 (P <0 .0 5 )以及增强DDP及MMC对该细胞株的杀伤效应 (P <0 .0 5 ) ;而CD4 0不表达细胞株SPC A 1经sCD4 0L或 5C11处理不能产生类似的作用。结论　激发CD4 0信号可引起CD4 0表达肺癌细胞A5 4 9对化疗药物DDP及MMC的敏感性增加 ,可能在肺癌的治疗中具有潜在的应用价值。     

玉竹提取物B对人结肠癌CL-187细胞的抑制作用

目的：研究中药玉竹提取物B（EB－PAOA）对人结肠癌CL－187细胞株的抑制作用。方法：体外培养结肠癌CL－187细胞，绘制生长曲线，然后将其与不同浓度的EB－PAOA共育，用MTT比色分析法测定EB－PAOA对CL－187细胞的抑制率，结果：EB－PAOA抑制了CL－187细胞的增殖，且呈时间－剂量依赖性，结论：EB－PAOA有一定的抗肿瘤作用。     

知母皂甙元对大鼠脑内总M及M_1受体的影响

目的观察知母皂甙元对青年和老年大鼠脑M及M1受体的不同影响。　方法以对M1受体有相对选择性的哌仑西平为非标记竞争剂 ,3H -QNB为非选择性标记配基 ,建立M和M1受体的放射配基竞争结合分析方法 ,观察知母皂甙元对青年大鼠和老年大鼠脑M和M1受体的影响。　结果与青年大鼠相比 ,老年大鼠脑M及M1受体减少 ,知母皂甙元能上调M和M1受体 ;对正常青年大鼠脑M及M1受体的密度 ,知母皂甙元没有影响。结论知母皂甙元对下降的M及M1受体密度有明显的上调作用 ,但不超过正常值 ,对正常水平的M及M1受体密度 ,知母皂甙元不会造成密度过高     

透明质酸结合蛋白抑制肿瘤细胞增殖的研究

目的：从人脑中克隆透明质酸结合蛋白（hbHABP）基因，研究其对各种肿瘤细胞体外增殖的影响。方法：根据已知透明质酸结合蛋白（HABP）DNA序列，设计引物，从人脑cDNA文库中克隆，构建真核细胞表达载体（pcDNA3-hbHABP），转染到人前列腺癌、乳腺癌、肺癌及黑色素细胞中，观察体外细胞生长变化。结果：所有转染pcDNA3-hbHABP的肿瘤细胞相对于转染空载体pcDNA3的对照组细胞，出现生长受抑制现象，在软琼脂上的克隆形成数量也明显减少。结论：hbHABP可能是一种新的抑制肿瘤细胞生长的物质。     

过氧化物酶体增殖物激活受体及其调控脂肪细胞分化的研究进展

过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)是具有特色的核激素受体超家族,能被配体激活,激活的PPARs与另一种核受体树脂样X受体(RXR)结合成异二聚体,作用于特异的过氧化物增生反应元件上,改变很多靶基因的调控。最近研究表明,PPARs对于调控脂肪细胞分化起重要作用,现综述如下。