血卟啉单甲醚脂质体的制备及其体外光触发释放的研究

目的:研究血卟啉单甲醚脂质体的制备及其体外光触发释放性能,以及对细胞毒性的影响,评价其体外光动力抗肿瘤的效果。方法:采用逆向蒸发法制备负载光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)的脂质体(Lipo-HMME),以实现HMME的光触发释放;并利用激光粒径仪等手段对Lipo-HMME进行表征,考察其体外光触发释放性能和脂质体对HMME暗毒性及细胞摄取的影响。结果:所制备的脂质体粒径分布均一,并具有明显的光触发释放性能,在光照及无光照条件下,1 h释放百分率分别为67.36%和21.3%;Lipo-HMME可有效降低HMME的暗毒性,提高其光动力治疗效果。结论:Lipo-HMME具有良好的光触发释放功能及其光动力治疗效果,可作为载体使用于肿瘤患者的特异性治疗。     

共载多西他赛和IR820的化疗/光热/光动纳米粒的抗肿瘤增殖及转移作用考察

本课题采用改进的乳化溶剂蒸发法制备聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)-聚乙烯亚胺(PEI)纳米粒,并通过亲疏水作用力和电性吸附原理分别将多西他赛(1)和光敏剂IR820共同装载于PLGA内核和PEI阳离子亲水外壳中。为使纳米粒具有长循环功能,选用负电性肝素(heparin,H)修饰在纳米粒表面使电荷翻转,得到共载药纳米粒(1@IR820/H NPs),从而实现将化疗/光热/光动3种肿瘤治疗相结合,达到理想的抗乳腺癌细胞增殖和转移的治疗效果。制备并表征了所得纳米粒的物理化学性质,并考察了其在体外经近红外光(808 nm)照射处理后对乳腺癌细胞4T1增殖和转移的影响。结果显示,所得的1@IR820/H NPs的粒径为(192.7±4.1)nm,ζ电位为(-22.6±1.9)mV。细胞摄取试验表明,与1@IR820/H NPs共孵育的4T1细胞经近红外光照射处理后,明显增强了摄取能力。体外活性氧试验表明,细胞摄取的增强可提高光动治疗效果。另外,共载药纳米粒的细胞毒性明显高于游离药物。抗肿瘤转移试验表明IR820及共载药纳米粒可抑制肿瘤细胞转移,并且Western Blot技术表征显示抗转移作用与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达减少有关。     

乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物及其pH敏感型脂质体的制备

目的:合成乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物,并制备其pH敏感型脂质体。方法:将乳糖化-去甲斑蝥素与磷脂聚合成药物磷脂复合物,并采用FT-IR、DSC和1H-NMR对其进行表征。逆向蒸发法制备药物磷脂复合物脂质体;利用羧甲基壳聚糖与脂质体表面的静电吸附作用,使羧甲基壳聚糖吸附在脂质体表面,制备乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物pH敏感型脂质体;考察了药物与磷脂的复合率,磷脂复合物脂质体的包封率,粒径大小和分布,以及体外释药特性。结果:药物磷脂复合率为(97.2±2.01)%,磷脂复合物脂质体的平均包封率为(70.00±1.30)%,平均粒径为(47.18±4.16)nm,粒径跨距为(0.70±0.07),电镜显示其形态圆整,体外释药符合Weibull方程。结论:乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合率高,制成的pH敏感型脂质体性质稳定,且具有缓释特性。     

新型阿霉素热敏脂质体的研制

目的:探讨以二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)和单棕榈酰磷脂酰胆碱(MPPC)为原料制备的温度敏感阿霉素脂质体的制备工艺和理化性质.方法:采用膜过滤挤压法和pH梯度法制备阿霉素脂质体,以紫外分光光度法检测样本中阿霉素含量,计算阿霉素热敏脂质体在不同温度下的药物释放特性,并对其包裹率、粒径,pH值进行研究.结果:阿霉素热敏脂质体在39℃下迅速释放,前20 s内释放药物50%,42℃下药物释放达到60%以上.包封率99.5%,平均粒径90.8 nm,pH值为6.5.结论:制备的热敏感阿霉素脂质体优于常规脂质体,具有良好的温度控释特性.     

阿霉素-五味子乙素pH敏感聚合物胶束的制备与制剂学性质

目的以p H敏感聚合物聚乙二醇-聚乳酸-聚组氨酸[poly(ethyleneglyco1)-poly(D,L-lactide)-poly(L-histidine),m PEG-PLA-PHis]胶束为载体,联合包载抗肿瘤药物阿霉素与多药耐药逆转剂五味子乙素制备聚合物胶束,并对其制剂学性质进行研究。方法采用薄膜分散法制备阿霉素-五味子乙素p H敏感聚合物胶束,以包封率、载药量和稳定性(载药胶束24 h的包封率和载药量变化)为评价指标,采用单因素试验及Box-Behnken效应面法筛选最优处方;应用透射电子显微镜观察载药胶束的外观形态,动态光散射法测定载药胶束的粒径及zeta电位;透析法考察载药胶束在不同p H条件下的释药行为。结果制备的阿霉素-五味子乙素p H敏感聚合物胶束平均粒径为64.73 nm,zeta电位为-8.7 m V。最优处方中阿霉素包封率为95.3%,载药量为8.7%,五味子乙素包封率为76.1%,载药量为3.4%,载药胶束稳定性较好。体外释放结果表明,所制备的阿霉素-五味子乙素p H敏感聚合物胶束在弱酸性条件下,药物释放速率明显加快。结论采用星点设计-效应面法优化处方与制备工艺,所制备的阿霉素-五味子乙素p H敏感聚合物胶束粒径分布均匀,包封率和载药量良好,具有明显的p H响应行为。     

7-乙基-10-羟基喜树碱长循环脂质体的制备及药动学研究

目的:研究7-乙基-10-羟基喜树碱长循环脂质体(Lip-SN38)的制备方法以及在大鼠体内的药动学.方法:采用两步合成法制备脂质体空间稳定膜材甲氧基聚乙二醇.磷脂酰乙醇胺(mPEG-PE);同时采用薄膜分散法制备Lip-SN38;用阳离子交换树脂微型小柱层析法分离游离药物和脂质体,紫外分光光度法测定包封率;HPLC法测定大鼠血浆中药物浓度.结果:Lip-SN38平均粒径<200 nm,药物包封率>90%;48 h只有<30%的药物体外释放;大鼠尾静脉注射Lip-SN38,剂量为10 mg·kg-1,与SN3.8溶液剂相比,t1/2β增加4.61倍.结论:采用薄膜分散法可制得包封率高、粒径小的脂质体,mPEG-PE修饰磷脂膜可增加Lip-SN38的t1/2β,延长药物在血中的循环时间.     

基于TiO_2@Fe_3O_4纳米材料的盐酸阿霉素磁性热敏脂质体制备及其理化特性、磁效应和光热效应考察

目的:制备一种包载盐酸阿霉素(DOX)的磁性热敏脂质体(MTSL),考察其理化性质、磁效应和光热效应,为肿瘤的化疗及光热/光动力治疗提供基础。方法:以DOX为模型药物,以纳米二氧化钛-纳米四氧化三铁复合材料(TiO_2@Fe_3O_4)作为光敏剂和磁性材料,采用薄膜分散法制备DOX-TiO_2@Fe_3O_4-MTSL。观察该脂质体的形态和分散性、粒径及Zeta电位,采用超滤-离心法结合高效液相色谱法考察其包封率;采用磁强针考察其顺磁性。与DOX溶液比较,采用透析法考察该脂质体的体外释放行为,并比较在不同温度(37、43℃)下的释放曲线。采用808 nm近红外激光照射,考察该脂质体的光热转换效应以及对人乳腺癌MCF-7细胞中活性氧(ROS)产生的影响。结果:制备的DOX-TiO_2@Fe_3O_4-MTSL为棕黑色,水分散性好;电镜下呈类圆球形,大小较均匀;平均粒径为250.6 nm,多分散性指数为0.107,Zeta电位为(-7.76±3.41)mV;包封率为(92.3±3.2)%;在外加磁场下可定向移动,具有明显的顺磁性。与DOX溶液比较,该脂质体释药速度较慢,具有明显的缓释特性;与37℃条件比较,该脂质体在43℃条件下的释药速度明显加快。随激光(808 nm)照射时间的增加,该脂质体的温度持续升高,具有明显的光热转换效应,并可使MCF-7细胞中ROS的产生明显增加。结论:成功制备了DOX-TiO_2@Fe_3O_4-MTSL,其外观形态均匀、理化性质良好;具有明显的顺磁性、缓释作用和光热转换性能,能在808 nm近红外激光照射下增加MCF-7细胞中ROS的含量。     

聚(2-乙基丙烯酸)脂质体的制体及其热敏性研究

采用插入法以脂肪酰胺修饰的聚(2-乙基丙烯酸)衍生物构建热敏递药的高分子脂质体.用荧光分析法,借助荧光分光光度仪和粒径仪系统地研究了高分子脂质体的热敏特性.结果发现,采用脂肪胺修饰的聚(2-乙基丙烯酸)制备的脂质体具有明显的热敏释药特性,其释药特性与插入的高分子结构有关,还与制备脂质体的磷脂组成有关,同时采用聚(2-乙基丙烯酸)制备的脂质体还具有显著的酸敏释药特性.以聚(2-乙基丙烯酸)为热敏诱导介质制备的脂质体在体外实验中呈现出良好的热敏释药特性,且制剂制备方法简便、可靠.     

聚(2-乙基丙烯酸)脂质体的制体及其热敏性研究

采用插入法以脂肪酰胺修饰的聚(2-乙基丙烯酸)衍生物构建热敏递药的高分子脂质体。用荧光分析法，借助荧光分光光度仪和粒径仪系统地研究了高分子脂质体的热敏特性。结果发现，采用脂肪胺修饰的聚(2-乙基丙烯酸)制备的脂质体具有明显的热敏释药特性，其释药特性与插入的高分子结构有关，还与制备脂质体的磷脂组成有关，同时采用聚(2-乙基丙烯酸)制备的脂质体还具有显著的酸敏释药特性。以聚(2-乙基丙烯酸)为热敏诱导介质制备的脂质体在体外实验中呈现出良好的热敏释药特性，且制剂制备方法简便、可靠。     

pH敏感聚(2-乙基-2-噁唑啉)-壳聚糖-阿霉素共聚物胶束的制备及性质考察

目的合成pH敏感两亲性接枝共聚物聚(2-乙基-2-噁唑啉)-壳聚糖-阿霉素(PEOz-g-CS-HyzDOX),采用透析法制备阿霉素pH敏感两亲性共聚物胶束并对其相关的制剂学性质、细胞抑制及细胞摄取行为进行考察。方法分别利用透射电镜(TEM)、动态光散射法(DLS)和zeta电位分析仪对胶束的形态、粒径和表面电位进行表征;采用透析法考察载药聚合物胶束的体外释放行为;采用MTT法考察聚合物胶束的细胞抑制作用。结果反应产物使用红外及核磁表征,确定为目标产物;PEOz-g-CS-Hyz-DOX聚合物胶束载药量为4.2%。采用透析法制备的载阿霉素聚(2-乙基-2-噁唑啉)-壳聚糖丁二酸单甲酯胶束(PEOz-g-CSMS/DOX)载药量可达5.62%,包封率为59.35%;两种胶束的粒径均较小且粒径分布很窄,胶束粒子为类球形且分散良好;两种胶束释药行为体现pH敏感性;PEOz-g-CS-Hyz-DOX聚合物胶束体外细胞毒作用及细胞摄取均优于PEOz-g-CSMS/DOX胶束和阿霉素溶液。结论以壳聚糖为载体的化学腙键释药胶束作为抗肿瘤药物的药物传递系统具有可行性及良好的应用前景。     

6-羧基荧光素脂质体的肺吸收

本文通过测定荧光标记6-羧基荧光素(CF),比较包裹在中性双肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)/胆固醇(分子比1∶1)和负电荷DMPC/胆固醇/联十六烷基磷酸酯(DCP)(分子比1∶1∶0.2)脂质体中水相标记物的肺生物利用度。脂质体采用薄膜法制备,以0.25mol/L CF水溶液水化,再用超声波将多层脂质体分散制成以上两种脂质体,用凝胶层析和超滤除去未包裹的CF,平均粒径分别     

正交试验优化硫酸长春新碱脂质体的制备工艺

目的制备性质稳定的硫酸长春新碱脂质体。方法采用单因素试验考察磷脂与胆固醇比例、药脂比、脂质浓度、载药温度、载药时间、外水相p H值对硫酸长春新碱脂质体包封率的影响。以包封率为指标,分别以氢化磷脂(SPC-3)和二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)为磷脂材料,通过正交试验考察载药温度、药脂比和载药时间对制备工艺的影响,优化出硫酸长春新碱脂质体的最佳制备工艺。结果硫酸长春新碱脂质体的最佳制备工艺为:将药物溶液(按照药物含量计)和空白脂质体溶液(按照脂质含量计)按照1∶20的比例混合,用Na2HPO4直接调节外水相p H值至7.2。SPC-3脂质体在65℃条件下载药,载药时间30 min。DSPC脂质体在60℃条件下载药,载药时间10 min。结论优选出的硫酸长春新碱脂质体的处方工艺稳定可行。     

姜黄素-3单体脂质体的研制及评价

目的制备包封率高、粒径均匀、稳定性好的姜黄素-3(双脱甲氧基姜黄素,demethoxycurcumin)单体脂质体。方法通过均匀设计筛选工艺,以乙醇注入法等制备姜黄素-3脂质体。结果制备姜黄素-3脂质体平均粒径为130.5nm,分布均匀,平均包封率为87.89%,稳定性好。结论以脂质体技术包裹姜黄素-3单体形成脂质体制剂可行,为进一步研究在肿瘤治疗中的应用提供了基础。     

β-榄香烯脂质体的制备及其在大鼠体内的组织分布

目的:研制β-榄香烯脂质体并考察其在大鼠体内的组织分布。方法:采用薄膜分散法制备β-榄香烯脂质体,考察其形态、粒径、Zeta电位、药物含量及包封率。并以榄香烯注射液为对照,大鼠尾静脉注射给药,考察β-榄香烯脂质体在血浆及心、肝、脾、肺、肾的分布特征。结果:制备的β-榄香烯脂质体均匀圆整,粒径为(158±s 37)nm,Zeta电位为(-67±4)mV,药物含量为(5.76±0.21)g·L~(-1),包封率为(45.08±0.15)%(n=3)。大鼠尾静脉注射β-榄香烯脂质体和榄香烯注射液后,2种制剂在心、肝、脾、肾中的AUC_(0-t)均有显著差异,其中β-榄香烯脂质体在肝、脾、肾组织中分布相对较多,在心脏中分布较少。结论:薄膜分散法制备β-榄香烯脂质体方法可行,β-榄香烯脂质体在大鼠体内的分布特性有不同程度的改变,可提高疗效,降低心脏毒性。     

麦胚凝集素修饰的长春瑞滨阳离子脂质体的处方优选及细胞毒性试验

目的:制备麦胚凝集素(WGA)修饰的长春瑞滨(VRB)阳离子脂质体(WGA-VRB阳离子脂质体),优化处方并进行细胞毒性试验。方法:以磷脂、胆固醇为辅料,以3β-[N-(N′-N′-二甲基氨基乙烷)-氨基甲酰基]胆固醇盐酸盐(DC-Chol)为阳离子材料,以二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000)为长循环链,采用薄膜分散法及硫酸铵梯度法制备WGA-VRB阳离子脂质体。以包封率为指标,采用星点设计-响应面法优化处方中DC-Chol、胆固醇和VRB用量。测定所制VRB脂质体和WGA-VRB阳离子脂质体中VRB含量,比较二者和空白阳离子脂质体作用于人乳腺癌细胞MCF-7和人非小细胞肺癌细胞A549后对细胞存活率的影响。结果:5 m L WGA-VRB阳离子脂质体的最优处方为磷脂22 mg、胆固醇12 mg、DC-Chol 8 mg、VRB 0.5 mg,其包封率为(92.24±1.21)%(n=3),与预测值的相对误差为5.3%。VRB脂质体和WGA-VRB阳离子脂质体中VRB含量分别为(96.01±3.26)、(93.39±1.59)μg/m L(n=3);与空白阳离子脂质体和VRB脂质体比较,WGA-VRB阳离子脂质体可明显降低MCF-7、A549细胞的存活率(P<0.05)。结论:成功制得WGA-VRB阳离子脂质体,其对MCF-7、A549细胞存活的抑制作用强于VRB脂质体。     

星点设计-效应面法进行蛇床子素脂质体处方优化的研究

目的:以包封率为指标进行蛇床子素脂质体的处方优化研究,并对其质量进行考察。方法:以薄膜蒸发法制备蛇床子素脂质体。采用星点设计-效应面法优化处方,以包封率为因变量,大豆卵磷脂浓度、脂药比、表面活性剂含量为自变量建立多元二次回归方程,用效应面法预测较优处方并进行验证。结果:蛇床子素脂质体的多元二次回归方程为:Y1=0.935 69+0.010 124X1+0.038 691X3-0.024 32X21+0.025 741X1X2-0.054 236X22-0.026 579X2X3-0.109 707X23(r=0.953 7,P<0.05),最佳处方分别为大豆卵磷脂浓度为24.93mg·m L-1,脂药比为22.66∶1(mg·mg-1),表面活性剂含量1.67%,该处方条件下,3批蛇床子素脂质体样品的平均包封率94.98%。结论:用星点设计-效应面法优选蛇床子素脂质体的制备工艺预测性好,制备的脂质体包封率高。     

Box-Behnken效应面法优化牛蒡苷pH敏感脂质体处方

目的以牛蒡苷(arctiin,AC)为模拟药,通过Box-Behnken效应面法优化制备AC-pH敏感脂质体。方法采用薄膜分散法制备脂质体,分别以磷脂-胆固醇比(X1)、磷脂-药质量比(X2)、pH敏感材料含量(X3)为考察对象,以包封率(Y1)、载药量(Y2)和粒径(Y3)为评价指标,利用三因素三水平Box-Behnken效应面设计法筛选牛蒡苷pH敏感脂质体的最佳处方;并考察该制剂的稳定性。结果牛蒡苷pH敏感脂质体的平均包封率为(93.25±1.5)%;平均载药量(94.10±1.8)%;平均粒径为(208.55±2.8)nm。室温下,AC脂质体为乳白色细腻乳液,对室温条件稳定,但对光照和60℃不稳定。结论采用Box-Behnken实验设计法优化牛蒡苷pH敏感脂质体处方可得到较高包封率、稳定性优良且pH敏感性良好的产品,并为今后进行体内剂型研究奠定基础。     

脒修饰的包载荧光探针香豆素-6脂质体的制备

目的研究3,5-二-十五烷氧基苯甲脒(DBH)修饰的香豆素-6脂质体的制备工艺,并初步考察该脂质体的体外释放性能和肾小球靶向性。方法首先合成DBH。再以其为配基,胆固醇、大豆磷脂为载体材料,采用薄膜分散-超声法制备脒修饰的载香豆素-6荧光探针脂质体,考察其粒径分布、Zeta电位、包封率及体外累积释药率。结果脒基修饰的香豆素-6脂质体形态圆整,粒径分布为120.7±2.4 nm,Zeta电位为12.6±1.6 m V,包封率为99.7%±1.8%,体外的48 h累积释药量小于2%。结论脒基修饰的香豆素-6脂质体的制备工艺简便易操作,包封率高,性质稳定。     

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定莕菜中白桦脂酸的含量

目的:建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD法)测定莕菜中白桦脂酸的含量。方法:采用Hypersil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.2%甲酸(V∶V=80∶20),体积流量为1.0 ml/min;柱温为30℃;蒸发光散射检测器参数:漂移管温度为40℃,氮气流速为2.0 L/min。结果:白桦脂酸在0.130~0.650μg,线性关系良好,平均回收率为99.17%。结论:HPLC-ELSD法简便、准确、重现性好,可用于莕菜的质量控制。     

中心复合效应面设计法优化7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)前体脂质体处方

目的通过中心复合效应面设计法筛选最佳处方,制备7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)前体脂质体。方法分别以药脂质量比(md∶ml)、磷脂质量分数(w)、Tween80质量浓度(ρ)为实验考察对象,以包封率(Y1∶wEE)、粒径(Y2∶d)为效应,利用中心复合效应面设计法筛选SN-38前体脂质体的最佳处方。结果前体脂质体的包封率为88.43%,粒径为239.00 nm,与模型预测值相比偏差均小于10%。结论使用中心复合效应面设计法可以很好的优化SN-38前体脂质体的处方。