塞来昔布对小鼠膀胱肿瘤的抑制作用

目的:探讨塞来昔布对小鼠膀胱肿瘤的抑制作用及其机制.方法:用BTT739膀胱癌细胞株和T739小鼠建立膀胱肿瘤动物模型.小鼠随机分为实验组和对照组,每组10只.造模后第2天起实验组用塞来昔布混悬液(20 mgkg-1)灌胃,对照组用0.9%氯化钠液灌胃.观察肿瘤的生长情况.4周后,处死小鼠,取肿瘤,称瘤重,计算抑瘤率.肿瘤组织行病理学检查,观察肿瘤细胞的形态学变化,用免疫组化法观察肿瘤细胞中COX-2表达情况,TUNEL法观察肿瘤细胞凋亡情况.结果:对照组平均瘤重(3.27±1.89)g,实验组平均瘤重(1.10±0.52)g,两组差别有统计学意义(P<0.05);抑瘤率为66.4%.两组肿瘤潜伏期[(7.10±2.28)d比(7.20±2.71)d]无显著差异(P>0.05).自第2周开始两组肿瘤生长有差异,直至第4周实验结束.显微镜下见实验组有大片凝固性坏死区,而对照组仅见局灶性坏死.免疫组化示COX-2表达于肿瘤细胞的细胞浆.TUNEL法见细胞核阳性表达.两组COX-2、凋亡的表达水平均有显著差异(P<0.05),且COX-2与凋亡的表达呈负相关.结论:塞来昔布对小鼠膀胱肿瘤有抑制作用,可能通过抑制COX-2表达促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长.     

塞来昔布衍生物抑制剂CIH01对A549肺癌增殖及血管生成影响的实验研究

目的:探讨选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布衍生物CIH01对A549肺癌移植瘤的抑制作用及其对肺瘤组织血管生成的影响。方法:建立裸鼠肺癌细胞株A549移植瘤模型,连续治疗20 d,于末次给药24 h后处死动物。每周测量2次肿瘤体积及动物体重,以末次各组瘤体积计算抑瘤率。采用Mtrigel Plug实验方法,连续治疗7 d后取出皮下胶块,进行HE染色,计算各组血管数平均值。结果:完成全部治疗后,CIH01组的平均肿瘤体积为(216±25)mm3,塞来昔布组的平均肿瘤体积(391±40)mm3,对照组的平均肿瘤体积为(633±92)mm3。CIH01的抑瘤率为64%,明显优于塞来昔布组,P0.05。各组Matrigel内的平均血管数分别为(2.82±0.71)、(7.90±2.83)、(10.75±3.11),与塞来昔布组及对照组比较,CIH01组的平均血管数均显著减少,P0.01。结论:CIH01对A549移植瘤模型有明显抑制作用,其作用机制之一与抑制肿瘤血管生成有关。     

塞来昔布对肺癌细胞的增殖抑制作用研究

目的研究非甾体类抗炎药塞来昔布对肺癌细胞的体外抑制作用。方法选用肺癌A549细胞系体外培养,在不同塞来昔布浓度作用下,MTT法检测肺癌细胞的增殖抑制,流式细胞仪测定肺癌细胞周期分布以及RTPCR法观察肺癌细胞血管内皮生长因子mRNA(VEGFmRNA)的表达水平。结果塞来昔布对肺癌细胞增殖有抑制作用,且呈剂量依赖关系,IC50为50μmol/L;塞来昔布可将肺癌细胞阻滞在G0/G1期,有剂量依赖性;RTPCR法中,对照组肺癌细胞VEGFmRNA的表达水平高于药物组(P<0.05),药物组中肺癌细胞VEGFmRNA表达水平与塞来昔布浓度相关。结论塞来昔布对肺癌细胞有明显的体外增殖抑制作用,与VEGFmRNA的表达下调和阻滞细胞周期在G/G期有关。     

塞来昔布对小鼠膀胱肿瘤的抑制作用

目的探讨选择性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对膀胱肿瘤的抑制作用及其机制。方法建立小鼠膀胱肿瘤模型并随机分为对照组、实验1组和实验2组,分别给予生理盐水和不同剂量的塞来昔布灌胃,观察肿瘤的生长情况,测量肿瘤体积、质量并计算抑瘤率;免疫组织化学方法检测肿瘤原癌基因bcl-2和半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）的表达情况,并计算其免疫组化评分（HIS）。结果实验1、2组肿瘤的平均质量明显低于对照组,差异有显著性（F=64．99,q=4．52、15．66,P〈0．05）。实验1、2组的抑瘤率分别为43％和58％。3组间bcl-2的HIS比较差异有显著性（F=25．08,q=3．75～9．91,P〈0．05）;3组间caspase-3的HIS比较差异有显著性（F=16．82,q=3．26～8．15,P〈0．05）。结论塞来昔布能抑制小鼠膀胱肿瘤的生长,其机制可能与抑制bcl-2、增强caspase-3的表达有关。     

塞来昔布对戊四氮点燃小鼠脑神经细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:观察塞来昔布对戊四氮点燃小鼠癫癎发作及脑神经细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:C57BL/6小鼠30只随机分为对照组、模型组和给药组各10只,给药组予塞来昔布灌胃,对照组和模型组予生理盐水灌胃,模型组和给药组以戊四氮点燃法制备小鼠癫癎模型,通过行为学检测观察塞来昔布对小鼠癫癎发作的影响,免疫组织化学法测定塞来昔布对小鼠脑神经细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。结果:模型组小鼠脑组织Bcl-2和Bax蛋白阳性细胞数显著高于对照组(P0.01),Bcl-2/Bax比值显著低于对照组(P0.01);给药组Bax蛋白阳性细胞数显著低于模型组(P0.01),Bcl-2蛋白阳性细胞数及Bcl-2/Bax比值显著高于模型组(P0.01)。结论:塞来昔布能下调戊四氮点燃小鼠脑组织Bax蛋白表达水平,上调Bcl-2蛋白表达水平,提高Bcl-2/Bax比值。     

齐留通及塞来昔布对小鼠肿瘤组织血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶2表达影响

目的 观察本噻羟脲(齐留通)、塞来昔布单独及联合应用时对荷瘤小鼠肿瘤血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase,MMP-2)基因及蛋白表达的影响.方法 用小鼠结肠癌CT26细胞建立荷瘤小鼠模型,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤组织中VEGF和MMP-2的基因表达;蛋白质印迹法(Western Blot)检测肿瘤组织中VEGF和MMP-2蛋白的表达.结果 联合用药治疗组、塞来昔布治疗组和齐留通治疗组及相应的干预组VEGF和MMP-2基因、蛋白表达水平均低于其各自对照组(P ＜0.05),两组联合用药组与各单独应用塞来昔布及齐留通组相比VEGF、MMP-2的基因、蛋白表达水平降低(P ＜0.05).联合用药、单独应用塞来昔布及齐留通3组干预组与各自治疗组相比VEGF、MMP-2的基因表达下降(P ＜0.05).结论 齐留通与塞来昔布都可以抑制肿瘤组织VEGF与MMP-2基因及蛋白的表达,且齐留通与塞来昔布各自的剂量减半联合应用抑制效果优于单用任意一种全剂量药物;无论联合用药还是单用任意一种药物,其干预组对VEGF、MMP-2的基因及蛋白表达的抑制作用均优于治疗组.     

益气养阴方对小鼠肝癌淋巴道转移的影响

目的观察益气养阴方对小鼠肝癌淋巴道转移的影响。方法以腹水型肝癌H22瘤株在小鼠右下肢爪垫内侧皮下注射接种,复制淋巴道转移模型,观察小鼠实体瘤的瘤重量抑瘤率、肺部转移率、淋巴结转移情况等的指标变化。结果益气养阴方组的肺部转移结节较模型组明显减少,抑瘤率明显增加,并且淋巴结转移显著减少。结论益气养阴方对H22肝癌淋巴道转移有一定的抑制作用。     

塞来昔布对重型颅脑创伤后运动功能的影响

目的 探讨选择性环氧合酶( cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布对重型颅脑创伤后神经元保护作用及可能作用机制.方法 72只健康成年雄性Wistar大鼠随机分为颅脑创伤组、塞来昔布治疗组、模型组及对照组,每组18只.颅脑创伤组、塞来普布治疗组采用Marmarou方法建立大鼠重型闭合性颅脑创伤模型,模型组仅于麻醉后切开头皮、缝合,但不致伤,对照组不做任何处理.每组12只应用蛋白印迹Western blot法及免疫组织化学SP法检测COX-2表达,6只进行神经功能损害评分测试.结果 颅脑创伤组COX-2蛋白表达较对照组及模型组明显增加(P＜0.05),塞来昔布治疗组COX-2蛋白表达较颅脑创伤组下降(P＜0.05);对照组神经功能损伤评分与模型组比较差异无统计学意义(P＞0.05),塞来昔布治疗组神经功能损伤评分较颅脑创伤组明显降低(P＜0.05).结论 COX-2抑制剂塞来昔布对重型颅脑创伤大鼠有脑保护作用,可降低COX-2的表达,抑制脑创伤后的炎症反应,改善其伤后运动障碍.     

COX2抑制剂对大鼠肺泡巨噬细胞生长及炎症反应的影响及机制研究

目的探讨环氧合酶2(COX2)抑制剂塞来昔布对肺泡巨噬细胞凋亡、炎症反应及吞噬能力的影响。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测0. 1μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L塞来昔布对大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383的细胞毒性,选择合适的塞来昔布浓度。将NR8383细胞随机分为3组,即对照组、LPS组和LPS+塞来昔布组。对照组:细胞培养板加等体积磷酸盐缓冲液(PBS); LPS处理组:细胞用终浓度为1μg/ml的脂多糖(LPS)处理; LPS+塞来昔布组:10μmol/L的塞来昔布处理细胞1 h后,加1μg/ml的LPS处理细胞24 h。流式细胞术检测细胞凋亡率; Western blotting检测NF-κBp65、IκBα、Bax和Bcl-2蛋白表达; qRT-PCR检测炎症因子TNF-αmRNA表达;激光共聚焦技术检测巨噬细胞的吞噬能力。结果 0. 1～10μmol/L塞来昔布处理对NR8383细胞无细胞毒性,20μmol/L塞来昔布处理可抑制NR8383细胞活力。LPS组与对照组比较,细胞凋亡率升高,NF-κBp65和Bax蛋白表达升高,IκBα和Bcl-2蛋白表达降低,TNF-αmRNA表达升高,细胞吞噬能力降低(P 0. 05),LPS+塞来昔布组与LPS组比较,细胞凋亡率降低,NF-κBp65和Bax蛋白表达降低,IκBα和Bcl-2蛋白表达升高,TNF-αmRNA表达降低,细胞吞噬能力升高(P 0. 05)。结论塞来昔布可通过下调NF-κB信号抑制LPS诱导的NR8383细胞凋亡及炎症反应,并维持吞噬功能,从而对肺损伤起保护作用。     

中国红树科植物角果木中Dolabrane型二萜的抗肿瘤作用

目的探讨中国红树植物角果木中Dolabrane型二萜Tagalsins A的抗肿瘤作用及其初步作用机制。方法建立小鼠H22肝癌实体瘤及H22肝癌腹水瘤模型,随机分为Tagalsins A高、中、低剂量组（20、10、5 mg.kg-1）、生理盐水组（空白对照）、环磷酰胺组（CTX 10 mg.kg-1）,每组小鼠各10只。建模24 h后开始给药,Tagalsins A各剂量组给予Tagalsins A连续灌胃7 d,对照组灌胃给予同体积生理盐水,CTX组连续腹腔给予CTX7 d。末次给药24 h后处死动物,计算抑瘤率、生命延长率、脏器指数;流式细胞术测细胞凋亡率。结果 TagalsinsA各剂量组小鼠H22实体瘤生长较空白对照组明显减慢（F=8.90,q=3.31~6.52,P〈0.01）。Tagalsins A低、中、高剂量组的抑瘤率分别为24.49%、35.37%、48.30%,其中Tagalsins A中、高剂量组抑瘤作用与CTX组比较差异无显著性（q=2.85、1.01,P〉0.05）。Tagalsins A明显延长H22腹水瘤小鼠生存时间（F=17.06,q=5.45~11.26,P〈0.01）;降低小鼠的胸腺指数（F=21.82,P〈0.01）,而升高肝脏指数（F=121.84,P〈0.01）。Tagalsins A各组肿瘤细胞的凋亡率较空白对照组明显升高（F=127 7.68,q=51.11~82.02,P〈0.01）。结论 Dolabrane型二萜Tagalsins A对小鼠H22移植瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

健脾复方对人大肠癌移植瘤裸小鼠肿瘤细胞凋亡的影响

目的研究健脾复方对人大肠癌移植瘤裸小鼠肿瘤细胞凋亡的影响。方法将50只BALB/C裸小鼠建立人大肠癌原位移植瘤模型,并按1∶1∶1∶1∶1随机分入健脾复方组、塞来昔布组、氟尿嘧啶(5-Fu)组、模型对照组和空白对照组,分别治疗8周。采用免疫组化法检测凋亡相关的因子信号转导与转录激活因子-3(Stat-3)、B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl-2)、存活素(Survivin)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8和Caspase-9的表达。结果大肠癌肿瘤组织中Stat-3、Bcl-2、Caspase-9和Caspase-3的表达均存在异常。健脾复方能下调Stat-3、Bcl-2的表达,上调Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3的表达,但对于Survivin的调节作用有待进一步确定。结论健脾复方能够调控大肠癌裸小鼠移植瘤的细胞凋亡,是其抑制大肠癌发生发展的可能机制。     

绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯对人肝癌细胞株HepG2裸鼠移植瘤新生血管生成的影响

目的通过复制人肝癌细胞株HepG2裸鼠皮下移植瘤模型,观察绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)干预对HepG2移植瘤新生血管生成的影响。方法瘤体接种复制HepG2移植瘤模型,荷瘤裸鼠20只随机分组,实验组给予EGCG溶液每日20 mg/(kg.只),腹腔注射3周,对照组给予等量灭菌注射用水3周,末次用药24 h,后处死裸鼠,剥离移植瘤。常规病理切片观察移植瘤组织结构;逆转录-聚合酶链式反应和免疫组织化学法检测移植瘤缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA及蛋白表达,并通过检测CD34表达计数瘤组织微血管密度(MVD)。结果组织病理学观察实验组移植瘤见大量坏死区,瘤体内血管数量明显少于对照组;实验组HIF-1α、VEGF mRNA及蛋白表达水平比对照组均明显下调(P<0.05),实验组MVD比对照组明显下降(P<0.05)。结论 EGCG可抑制荷瘤裸鼠HepG2移植瘤新生血管生成。     

SHP2在难治性肝细胞癌中的水平变化及作用

目的探讨SHP2在难治性肝细胞癌中的水平变化及作用。方法建立裸鼠难治性肝细胞癌模型,随机分为对照组和顺铂组,每组8只,顺铂组给予顺铂瘤内注射治疗,对照组给予等量磷酸盐缓冲盐水替代,比较2组第0、3、6、9天的肿瘤体积和SHP2的相对表达水平。取在该院就诊的2例难治性肝细胞癌患者的癌组织,切片后移植至裸鼠,每位患者的肿瘤组织移植8只裸鼠。随机选取4只裸鼠给予索拉非尼治疗,分别列为索拉非尼1组和索拉非尼2组,其余给予等量磷酸盐缓冲盐水替代,分别列空白组1组和空白2组。采用PCR检测裸鼠癌组织SHP2的相对表达水平。观察表达SHP2的慢病毒感染肝细胞癌细胞株中肝细胞癌干细胞的比例。并将被慢病毒感染的细胞接种于NOD/SCID鼠,观察致肿瘤率。结果随着饲养时间增加,对照组裸鼠肿瘤体积明显增加(F=30.964,P<0.001),且明显高于同时间段顺铂组;而顺铂组肿瘤体积随着时间增加无明显变化(F=1.194,P=0.330)。顺铂组SHP2蛋白水平和mRNA的相对表达水平均明显高于对照组(P<0.001),空白1组、空白2组SHP2蛋白水平和mRNA的相对表达水平均明显低于索拉非尼1组和索拉非尼2组,差异有统计学意义(P<0.001)。在肝细胞癌细胞株SMMC-7721、LM3、HepG2和Huh7中,相较于贴壁细胞,肝细胞癌干细胞中SHP2的相对表达水平明显增加(P<0.001)。与RNA序列置乱的对照相比,shSHP2稳定转染的肝细胞癌细胞中球状体的比例降低,差异有统计学意义(P<0.01)。接种于NOD/SCID鼠后,相较于SMMC-7721对照组,SMMC-7721 shSHP2组致肿瘤数更少,但2组数据差异无统计学意义(P>0.05)。结论SHP2在难治性肝细胞癌中表达明显增加,同时SHP2的表达能够增强肝细胞癌干细胞的扩增,临床上可通过检测SHP2预测患者的治疗效果。     

hTERT反义寡核苷酸对HL-60细胞致瘤性的影响及其诱导凋亡作用

目的研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因反义寡核苷酸(ASODN)对 HL-60细胞致瘤性的影响及其诱导凋亡作用。方法用流式细胞术检测 hTERT ASODN 转染 HL-60细胞72 h 后细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞 DNA 梯带;将转染及未转染寡核苷酸的 HL-60细胞分别接种BALB/c 裸鼠,观察成瘤情况,切片观察移植瘤组织形态;另取10只 BALB/c 裸鼠,改进成瘤方法使其均匀成瘤后分成两组,在瘤体局部分别注射 ASODN、磷酸盐缓冲液(PBS),经7d 治疗后测量瘤体并切片观察其细胞形态变化,采用 TUNEL 方法检测细胞凋亡。结果 hTERT ASODN 作用于 HL-60细胞72 h 后,流式细胞术检测出早期凋亡峰,琼脂糖凝胶电泳显示 DNA 梯形条带,SODN 组及空白对照组未检测出凋亡峰及 DNA 梯形条带 ASODN 转染的 HL-60细胞组 BALB/c 裸鼠接种后第16～17天成瘤,5只中2只成瘤,未转染组在第12～13天成瘤,5只中4只成瘤,成瘤后 ASODN 治疗组瘤组织间质及血管较少,PBS 治疗对照组瘤组织间质发达,血管丰富。成瘤后 ASODN 治疗前肿瘤体积为(100.9±24.6)mm~3,治疗后肿瘤与 PBS 对照组比较,生长明显减缓[瘤体积分别为(422.7±326.4)mm~3和(786.4±357.6)mm~3](P<0.05) 组织切片显示,ASODN 治疗组瘤组织中可见大量细胞呈现凋亡形态,PBS 治疗组则少见凋亡细胞 TUNEL 检测显示,ASODN 治疗组瘤组织中阳性细胞数较 PBS 治疗组明显增多(P<0.05)。结论 hTERT 基因 ASODN 能够诱导 HL-60细胞凋亡并降低其在 BALB/c 裸鼠体内的致瘤性,抑制移植瘤增长速度。     

三氧化二砷对人胆囊癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其机制

目的：观察三氧化二砷（As2O3）对人胆囊癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用并探讨其机制。方法：20只体质量相似的BALB/c裸鼠,皮下接种胆囊癌移植瘤随机分为0.9%氯化钠液（NS）组（n=10）和As2O3组（n=10）。尾静脉注射NS0.2mL（NS组）或As2O310mg.kg-1（As2O3组）,每日1次,连续7d。21d时处死所有裸鼠,测量肿瘤的质量和体积,同时分别用免疫组织化学法和Western blot法检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）的表达。结果：NS组瘤质量0.992±0.401g、体积1.50±0.57mm3,As2O3组瘤质量0.526±0.269g、体积0.83±0.39mm3,两组间均有显著差异（P〈0.01）;免疫组织化学和West-ern blot检测结果显示As2O3组肿瘤组织Cyclin D1的表达明显下降。结论：As2O3能明显抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤的生长,可能通过下调Cyclin D1的表达来实现抑瘤生长。     

黄芩苷对高致瘤HL-60细胞裸鼠移植瘤模型的体内抑瘤作用和机制探讨

本研究旨在探讨黄芩苷对高致瘤人白血病HL-60细胞裸鼠异种移植瘤的体内抑瘤作用及其作用机制。制备高致瘤HL-60细胞裸鼠异种移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为6组:阴性对照组(注射5%NaHCO3),黄芩苷25、50和100 mg/kg剂量组,联合用药组(黄芩苷50 mg/kg+VP16 2 mg/kg)和VP16 4 mg/kg阳性对照组,每组10只裸鼠。采用腹腔注射方式给药,14 d后每组处死5只裸鼠,对剥取的瘤块称重计算抑瘤率;通过电子显微镜观察瘤组织超微结构,病理组织学观察裸鼠各主要脏器结构改变,瘤块组织蛋白检测信号转导通路指标。观察裸鼠生存时间。结果表明,黄芩苷可抑制裸鼠HL-60细胞皮下移植瘤的生长,呈剂量依赖性。瘤组织病理组织学和透射电子显微镜检查结果显示,黄芩苷组和联合用药组的肿瘤坏死和细胞凋亡现象较阴性对照组多见。黄芩苷可能通过抑制Akt活性,下调p-Akt、mTOR和p-mTOR的表达来抑制裸鼠异种移植瘤的增长。联合用药组裸鼠中位生存时间明显长于阴性对照组(P<0.05)。结论:黄芩苷可抑制高致瘤HL-60细胞裸鼠异种移植瘤的生长,诱导瘤组织中HL-60细胞的凋亡,其机制之一可能与抑制Akt活性并下调PI3K/Akt/mTOR信号通路有关;黄芩苷与VP16联用可明显提高荷瘤裸鼠的中位生存期,具有协同抗高致瘤HL-60细胞裸鼠异种移植瘤的作用。