固相血细胞吸附试验检测流行性出血热患者血清中IgM抗体

<正> 主要步骤: 取羊抗人μ链IgG抗体(5μg/ml)包被96孔聚氯乙烯U形软板,100μl/孔,4℃孵育过夜。在各孔内加入被检血清和对照血清(阳性、阴性血清均经IFAT、RPHI证实)100μl/孔,37℃孵育2小时。每孔加入32u/50μl的EHFV血凝素25μl,37℃孵育2小时。上述每次孵育后,均用0.05M、pH7.4的PBS(含0.5‰吐温20)洗涤三次,每次5分钟。     

ELISA一步法检测轮状病毒抗原

用牛轮状病毒(NCDV株,A组)抗原免疫家兔,制备兔抗牛NCDV多克隆抗体。用该抗体与辣根过氧化物酶联结,建立了检测轮状病毒(RV)的ELISA一步法。该法实验过程为: 40孔酶标板用兔抗RV包被,4℃过夜后加入50μl处理过的待测标本和50μl HRP-     

一种检测循环免疫复合物的快速固相分析法

<正> 当前,定量检测循环免疫复合物(CIC)的方法已有许多种,其中最常用的是C1q、Raji细胞和胶固素分析法。本文作者利用聚乙二醇(PEG)能吸附固相支持物表面并能使免疫复合物(IC)沉淀的两方面特性,建立了另一种检测CIC的快速固相ELISA技术—EICA~(TM)。作者对包被塑料微孔的PEG浓度进行了选择,并证明微孔表面吸附的PEG能与人工IC(BSA—抗BSA)结合,用热凝IgG(AHG)作为CIC的替代物测制了定量检测的参考曲线。EICA~(AM)法试验步骤如下:于微孔中加入200μl9％的PEG(MW=6000,溶于0.01MTrispH7.8缓冲液),置37℃保温18—24小时;弃去包被液,加入25μl1:4稀释的待检血清或AHG(溶于1:4正常血清中),置37℃保温1.5小时;     

耳血法铁蛋白放射免疫测定

血清铁蛋白的放射免疫测定,越来越普遍地应用于缺铁性贫血的诊治。目前,此测定大多采用静脉采血法。为了减少患者的痛苦,特别是方便婴、幼儿患者的标本采集,我们对37例患者应用塑料管进行耳垂采血,分离血清后仅用25μl血清,按放射免疫顺序饱和加样程序,使待测血清先同铁蛋白抗体工作液在没有竞争的标记抗原存在下,经一定时间充分反应     

血清铁蛋白基质液变色后对铁蛋白检测结果的影响及措施

目的:研究基质液变色后对铁蛋白检测造成的影响及应采取的措施。方法:同一批号均未过期的铁蛋白试剂(其中试剂一基质液变为淡红色,试剂二基质液为原来的浅黄色),在同一实验条件下用磁性分离酶联免疫测定法检测血清铁蛋白,对所得的结果进行对比分析。结果:试剂一因基质液变色,测定时如按说明书中的空白管(90μl基质液+300μl终止液)调零,标准液吸光度太小,工作自动停止,结果测不出来;如用蒸馏水调零,所得结果与用试剂二检测所得的结果比较接近,相关性好。结论:如遇基质液变色时,不能再用空白管(90μl基质液+300μl终止液)调零,而应该用蒸馏水调零。     

1220名献血员乙肝病毒血清学标志的酶联法检测

<正> 材料与方法 待检血清样品为我院常规献血员,梅毒螺旋体试验均为阴性,肝动能正常。①表面抗原的测定方法,采用的酶联试剂EIA诊断试剂盒为厦门新创科技有限公司配制。该试剂盒为干包被微孔条,献血员血清不同稀释直接加样,每孔加样100μl每孔加酶联试剂1滴(50μl)置45℃40min,取出后甩去孔内液体,用PBST洗涤液充分洗涤,每次洗后均需拭干,共洗5次,然后每孔加Color A、Color B液各1滴,避光置室温15～20min,凡待测样品中有明显蓝色者为酶际反应阳性。②核心抗体(抗—HBC)的测定方法,抗—HBC     

STAR-FAME全自动血液筛查仪器在检验中的应用研究

目的:引进STAR-FAME国外先进设备,使HBsAg、抗-HCV、抗-HIV以及梅毒四项检测由手工向自动化操作的转变,提高血站整体检测水平,保证临床输血安全。方法:通过正交试验设计的方法,优化最佳试验参数,并对仪器的吸液加样液体参数、洗板及进板模式进行选择。结果:①加高粘稠液体优化参数:吸液速度、分配速度、分配传输空气体积、吹吸空气体积、停留时间、预湿体积、止停流速、液面探测下降深度、前舍、后弃体积、针距微孔底部的高度、针距试剂槽底部的高度优选结果依次为:200μl/s、300μl/s、15μl、0μl、3 s、0μl、300μl/s、5 mm、50μl、30μl、13 mm、45 mm。②针尖不挂液体参数:分配样品时针尖距抗-TP、抗-HIV、抗-HCV、HBsAg微孔板底的距离依次为2、4、4、2 mm;将分配过程中液面跟随设置由开改为关。③加样拖带污染情况:STAR钢针拖带污染率为0.079%。④引起整排污染的克服办法:将加HBsAg酶的加样尖距板底的高度设定为13 mm,同时取消液面感应;调整抗-HCV加液顺序。⑤实现不等距离阴阳对照加样。通过序列的编辑,序列定义了工作平台上容器架中容器的加样顺序,实现了加样针不等距离吸入和分配不同量的液体。⑥实施再检单项双孔分配:在Excel工作表中对再检样本信息进行编辑,并通过仪器软件的自动读取,实现了再检样品呈单项双孔分配。⑦缩短FAME处理时间:通过调整进板顺序、进板间隔时间,加液洗液位置,12块免疫试验总的完成时间由原来的191 min减少到138 min。⑧将校正曲线的数值10μl修改为13、16、19μl。结论:完成了STAR-FAME全自动筛查仪器在血站系统4项检测项目由手工向自动化操作,不仅降低了劳动强度,而且克服人为因素,提高血站检验的整体检测水平,保证临床输血安全。     

钙调素ELISA定量检测方法的建立与实验条件优化

目的：研究ELISA法定量测定钙调素(CaM)的最优条件。方法：用重组人CaM、兔抗CaM，通过对聚苯乙烯反应板进行紫外辐照处理，改善抗原固相化条件；通过对抗原包被液、包被时间等条件优化，建立简便、快速、准确的ELISA定量技术。结果：以PH7．40．01mool/L的PB为包被液，包被及后续封闭时间为4℃，静置72h，CaM包被浓度为5μg/m1，抗原抗体反应时间为37℃60min，可获最佳CaM定量结果。结论：建立检测CaM的ELISA测定方法，敏感性、重复性均在临床检测可接受的范围内，标准曲线的线性也较好，可用于CaM的定量研究。     

尿素氮的耳血测定法

本文对60例仅用30μl 耳血血清进行尿素氨(BuN)测定并与原法对比获得满意结果,现报告如下;材料和方法 一、用虹吸采血管(内径20mm)。长约6cm透明聚乙稀塑料管,采集患者耳垂血液大约70μl,将塑料管一端用橡皮泥封口,然后将塑料管血液离心,上层血清备用。     

乙肝抗体阳性血清中HBV—DNA的检测

常规HBV血清标记物检查，只能间接反映HBV在体内的复制。我们在工作中发现有些慢性乙肝患者抗体（抗-HBs、抗-HBc和抗-HBe）阳性而抗原（HB－sAg、HBeAg）阴性。为了解这部分人体内是否存在HBV复制，我们用套式PCR方法对他们进行了HBV－DNA的检测，结果报告如下。1材料和方法1．1检测对象收集本科门诊和住院慢性乙肝病人抗体阳性血清86份。其中男性49人，女性37人；年龄最大58岁，最小21岁，平均年龄32岁。1．2试验方法取血清50μl，加20μl蛋白酶K（10mg/ml）、缓冲液20μl、去离子水120μl，混句后68℃水浴消化2小时。用等体…     

K-562白血病细胞株肾包膜下移植的实验方法研究

K-562白血病细胞株肾包膜下移植(SRC)是一种体内测量非实体肿瘤对化疗药物敏感性的方法.本研究用牛纤维蛋白原(F)和牛凝血酶原(T)建立了纤维蛋白凝块法,用于K-562细胞株取得成功.为临床应用白血病和肿瘤性胸腹水的SRC选定最佳条件. (1)K-562细胞纤维蛋白凝块法制备,吸出细胞个数分别为1×10~7和2×10~7K-562细胞RPMI培养液各8管,离心沉淀后弃去上清液.不同管中分别加入F400μl、200μl.20μl、15μl,T 20μl或     

用抗IgM和抗μ链ELISA检测IgM抗-HBc—五种不同包被抗体的对比研究

本文报道用五种不同的包被抗体(抗-IgM,Dako 抗μ、Cappel 抗μ,本所抗μ和抗μ链单克隆抗体).经 IgM 捕捉免疫测定法对104份乙型肝炎血清学标志不同的血清和36份正常人血清作了 IgM 抗-HBc 的对比检测,结果揭示本所自制的抗μ具有较高的特异性。用本所抗μ仅在 HBeAg 阳性和 HBsAg 单独阳性血清标本中测到IgM 抗-HBc(与其他几种包被抗体无区别);而在抗-HBe 阳性的血清标本中检出率却很低,与用抗μ链单克隆抗体检测结果相似。其结果与其他几种包被抗体有着明显的差异.     

噬菌体变色法检测结核分枝杆菌

目的建立一种结核分枝杆菌快速检测方法。方法痰标本常规处理,离心集菌,取100μl于试管中,另一支加入标准株H37Rv结核分枝杆菌作阳性对照。两支试管分别加入噬菌体D29,37℃培养,用硫酸亚铁铵杀死结核分枝杆菌菌体外的噬菌体,柠檬酸三钠和氯化钙混和液中和硫酸亚铁铵。加入耻垢分枝杆菌和硝酸钾,37℃培养过夜,加入显色剂显色。同时用罗氏培养方法对照检测。结果临床标本的噬菌体变色法和罗氏培养法表明两方法结果具有一致性(P0.05)。结论噬菌体变色法可作为结核分枝杆菌的快速检测方法之一。     

普鲁卡因胺对家兔和豚鼠血小板聚集的影响(摘要)

本文观察了不同浓度的普鲁卡因胺对家兔和豚鼠血小板聚集的影响。 体外实验 家兔6只,心脏取血;豚鼠16只,分成8组(每2只一组),颈动脉放血。分别制备PRP(富含血小板血浆)和PPP(去血小板血浆)。取7只比浊管,各加入0.5mlPRP和搅拌棒;第一管加入50μl生理盐水,另6支试管分别加入不同浓度的普鲁卡因胺50μl,最终浓度(μg/ml)为2、8、32、128、512和2048。同时每组都取0.5mlPPP放入另一支比浊管内置于血小板聚集仪的恒温孔内37℃温育10分钟,描记光密度曲线;待基线平稳后向PRP管加入50μl ADP液(最终浓度为0.01mM),描记出光密度下降曲线,以曲线的下降值(mm)来衡量血小板聚集强度,进行t测     

健康人和肿瘤患者血液化学发光初步观察(简报)

选健康献血者55例,其中男32例,女23例;良性肿瘤20例,恶性肿瘤36例(均为本院住院患者),入院后次日清晨取静脉血50μl,加入0.95ml、0.15M PBS(pH7.4),37℃水浴10min。加入0.1m鲁米诺(2×10~(-4)mol/L),移至发光仪暗室内,37℃放置10min。测定静息化学发光(CL)。加入酵母多糖(10mg/ml)测定刺激CL,记录峰值和峰时。CL以cpm/50μl全血表示。健康男性血静息CL1521.5±482.7(5min积分值,x±s),酵母多糖刺激CL的峰时20.1±3.5分,峰值2146.5±3767.6cpm。女性血CL分别为1641.2±576.4、19.7±4.4分和2501.9±1857.0cpm.两组无统计学差     

抗人胎盘酸性同功铁蛋白单克隆抗体制备及对原发性肝癌诊断的研究

从人胎盘组织中提取纯化出酸性同功铁蛋白（ＡＩＦ），应用杂交瘤技术，获得５株能稳定和抗人胎盘酸性同功铁蛋白单克隆的细胞。５株单抗能识别不同抗原表面，用其中两株单抗４ｇ７和２ｆ８分别作为包被抗体和酶标抗体，建立了测定血清ＡＩＦ的夹心ＥＬＩＳＡ。该法上限为１０μｇ／Ｌ，在１０－２５０μｇ／Ｌ之间，标准曲线有较发的线性关系。临床检测结果：健康献血员、良性肝病和原发性肝癌（ＰＨＣ）患者血清ＡＩＦ分别为３６．     

国产甘油三酯液体试剂在全自动生化分析仪上的使用

<正> 在全自动生化分析仪上血清甘油三酯(简称TG)常采用甘油磷酸氧化酶法。该法使用进口干粉试剂,需复溶方可使用,因此试剂质量受到蒸馏水的质量和实验室条件限制,故浪费较大。且进口试剂较昂贵。我们采用国产的TG液体试剂来测定血清TG,获得了较为理想的结果。 1.材料与方法 仪器:VITALAB Selectra、全自动生化分析仪。 试剂:(1)TG液体试剂,东瓯公司产品;(2)TG干粉试剂(酶法),长征公司产品。 测定方法,自动分析参数:波长505nm,反应温度37℃,标准2.0mmol/L,试剂空白是,样品空白否,标本3l;试剂300l;稀释重做标本2l;试剂30l,测定方法终点法。     

金振口服液对SARS病毒抑制作用的实验研究

目的 观察金振口服液对Vero E6细胞内SARS相关冠状病毒的抑制作用.方法 取一定量的SARS相关冠状病毒BJ-01株加入培养好的Vero E6细胞中,置37℃、5%CO2培养箱吸附2 h,吸出病毒液,再分别加入不同浓度的药物稀释液,在同样条件下培养4～5 d,观察细胞病变情况.结果 金振口服液抑制冠状病毒半数有效浓度(IC50)为2.0μg/mL,治疗指数(TI)为35,,结论金振口服液对SARS病毒有较好的抑制作用.     

脂血对血液分析仪测定血常规指标的影响

目的:分析脂血对血液分析仪测定血常规指标的影响。方法:将体检中心收集的40例健康体检者的无溶血、黄疸、脂血标本均分为4管,作为A、B、C、D四组,A组不作任何处理,作为对照,B、C、D三组分别以1 000 r/min速率离心10 min,B组吸出上层血浆5μl,并加入同等剂量的脂肪乳剂,C组吸出上层血浆10μl,并加入10μl脂肪乳剂,D组吸出上层血浆50μl,加50μl脂肪乳剂。并测定每组三酰甘油水平,按脂血水平分级,并测定每组血常规指标,对A组进行对照。结果:轻度脂血组血常规指标有一定程度的上升,但与加脂前对比差异无统计学意义(P>0.05);而中度脂血组MCH与MCHC分别为(30.64±1.72)pg、(340.06±10.00)g/L,显著高于对照B组,组间对比差异有统计学意义(P<0.05),且重度脂血组Hb、MCH与MCHC分别为(137.03±20.01)g/L、(33.46±2.62)pg、(383.03±7.00)g/L,与加脂前对比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:为避免脂血对血液分析仪检测患者血常规指标的影响,若放置后血浆标本有乳白色浑浊表现,或血涂片中提示沉溺在不着色脂肪球,必须确认其是否为脂血标本。并离心后去上层血浆,加入稀释液,混合均匀后作血常规测定,以降低脂血对标本测定结果的影响。     

一种新型血小板交叉配型试剂盒的研发

目的研发一种基于固相凝集技术的血小板交叉配型试剂盒。方法采用聚乙烯亚胺进行包被制备固相凝集反应微孔板;用IgG抗-D致敏O型红细胞后与抗人免疫球蛋白桥接,构建包被抗人免疫球蛋白的一步法指示细胞系统;评估自制试剂盒的各项检测性能指标。结果 0.1%的聚乙烯亚胺包被96孔微孔板对血小板具有较好的吸附作用,IgG抗-D和抗人免疫球蛋白制备的一步法指示细胞系统具有较好的指示效果,试剂盒中的固相反应微孔板可在37℃保存1周、4℃保存12个月,指示细胞系统可在4℃保存60 d,自制试剂盒与进口的MASPAT试剂盒在血小板交叉配型中的阳性一致率98.13%、阴性一致率98.98%、总一致率为98.80%。结论所研制的血小板交叉配型试剂盒具有稳定性好、准确度高等优势,与进口同类试剂盒质量相当,可用于不同临床机构的血小板快速交叉配型。