人类血小板抗原基因分型

本文介绍了5个对人类影响最大且已被国际上公认的血小板抗原系统的分子生物学研究结果及其分型方法,包括最早采用的血清学方法、近几年发展起来的分子生物学方法:DNA序列分析、等位基因特异性寡核苷酸点杂交(PCR-ASO)、聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)及聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)。其中重点介绍了PCR-SSP方法的可靠性及实用性。     

人类血小板抗原基因分型

本文介绍了５个对人类影响最大且已被国际上公认的血小板抗原系统的分子生物学研究结果及其分型方法，包括最早采用的血清学方法，近几年发展起来的分子生物学方法：ＤＮＡ序列分析、等位基因特异性寡核苷酸点杂交（ＰＣＲ－ＡＳＯ）、聚合酶链反应－限制性片断长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）及聚合酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ），其中重点介绍了ＰＣＲ－ＳＳＰ方法的可靠性及实用性。     

人类血小板抗原1～4系统基因分型

目的 :建立人类血小板抗原 1～ 4系统序列特异性引物 (PCR SSP)分型方法。方法 :合成 14条引物 ,采用PCR SSP方法对 2 5名健康献血者的HPA 1～ 4系统进行基因分型 ;分型结果与采用等位基因特异性寡核苷酸点杂交 (PCR ASO)获得的结果进行比较。结果 :以PCR SSP方法对HPA 4个系统进行分型均取得了明确、满意的结果 ,且与PCR ASO方法获得的结果完全一致。结论 :人类血小板抗原PCR SSP基因分型方法具有简便、快速、准确等优点 ,具有广泛的应用前景。     

广州地区汉族人群人类血小板同种抗原及HLA-Ⅰ抗原基因分型库的建立

目的建立广州地区汉族人群人类血小板抗原(HPA)1—6、9及15系统和HLA-Ⅰ抗原基因分型库,探讨其基因多态性的分布,为有效避免血小板输注同种免疫的发生提供实验基础。方法随机抽取广州地区无血缘关系的健康机采血小板无偿献血者(均为汉族)的血样805份,采用PCR-SSP方法做HPA-1—6、9及15系统基因分型,利用Luminex-SSO方法做HLA-A、B、Cw抗原分型。结果HPA的基因频率分别为HPA-1a0.998、1b0.002,2a0.952、2b0.048,3a0.553、3b0.447,4a0.999、4b0.001,5a0.976、5b0.024,6a0.982、6b0.018,9a1.000、9b0.000,15a0.518、15b0.481;HPA-3、15a/b对偶抗原有aa、ab和bb 3种表型,HPA-1、2和4—6未发现bb表型,HPA-9未发现ab、bb表型;HPA-3a、3b,15a、15b的不配合率最高。经χ2检验,实验结果符合Hardy-Weinberg遗传定律。HLA-Ⅰ抗原基因频率较高的表达有A*02 0.286A*240.162A*11 0.323B*46 0.147B*75 0.100C*01 0.177C*03 0.289C*07 0.179。结论广州地区汉族HPA-1—6、9及15系统基因频率分布和HLA-Ⅰ类抗原分布存在明显的多态性,与其它资料相比显示出种族和地域性差异;建立HPA-1—6、9及15系统和HLA-Ⅰ抗原基因分型库对于临床输血有重要意义。     

PCR-SSP在人类血小板抗原1—6、15系统基因分型中的应用

目的探索PCR-SSP技术在人类血小板抗原(HPA)-1、2、3、4、5、6、15系统的基因分型中的应用。方法合成23条序列特异性引物,通过调节引物浓度、Mg2+离子浓度和探索最佳PCR扩增条件,建立HPA-1—6、15系统同步扩增基因分型方法。用该法盲检100名献血者HPA-1—6、15系统的基因分型结果,与用美国G&T公司的HPA-1—6、15系统的基因分型试剂所测试的这100名献血者的基因分型结果进行比较。结果该分型方法和美国G&T公司试剂同时检测100名随机献血者,其HPA-1—6、15分型结果完全一致,符合率达100%,基因频率分别是:HPA-1a和1b为1和0,HPA-2a和2b为0.98和0.02,HPA-3a和3b为0.63和0.37,HPA-4a和4b为0.997和0.003,HPA-5a和5b为0.997和0.003,HPA-6a和6b为1和0,HPA-15a和15b为0.548和0.450。结论该分型方法具有简便、快速、准确的特点,适合常规HPA基因分型。     

血小板抗原基因分型及配型的研究与初步应用

目的 对患者进行血小板抗原基因分型及配型的研究，以探讨临床血小板输注的安全、有效性。方法 应用聚合酶链序列特异性引物技术（PCR－SSP），对南京地区55例患者HPA1－5系统等位基因进行分型，并为其进行血小板基因配型输注。结果 经血小板基因配型的吻合组血小板输注效果明显优于未经配型的对照组。结论 对患者进行血小板抗原基因分型及配型可提高血小板输注的安全、有效性。     

上海地区汉族人群人类血小板抗原基因的多态性研究

目的研究上海地区汉族人群人类血小板抗原HPA-1～16系统基因多态性分布,为快速寻找更合适的血小板输注提供实验依据。方法采用PCR-SSP方法对137名上海地区汉族健康成年人进行HPA-1～16系统基因分型。结果HPA-1～6和HPA-15的基因频率分别为HPA-1a 0．9854,HPA-1b 0．0146,HPA-2a 0.9453,HPA-2b 0．0547,HPA-3a 0．5511．HPA-3b 0．4489,HPA-4a 0．9964,HPA-4b 0．0036,HPA-5a 0．9891,HPA-5 b0．0109,HPA-6a 0．9781,HPA-6b 0．0219,HPA-15a 0．5292,HPA-15b 0．4708;其余HPA系统只检测到a等位基因,其基因频率均为1．0000。经χ^2检验,符合Hardy-Weinberg遗传定律。结论HPA基因多态性分布存在明显的种族和地域性差异。HPA-1～6和HPA-15系统基因频率分布具有多态性,其中HPA-3和HPA-15系统杂合度最高,抗原分布不配合比例相对高,在临床配合性血小板输注中必须加以重视。HPA-3基因多态性分布更具有上海地区特点。     

人类血小板抗原HPA-15系统PCR-SSP基因分型技术的建立

本研究目的是采用PCR-SSP技术建立人类血小板抗原HPA-15系统的基因分型方法,并应用于血小板供者库的HPA基因定型。采用第11届国际输血协会（ISBT）血小板血清学与基因分型协作组推荐的序列特异性引物,调节引物浓度、Mg2＋离子浓度和探索最佳PCR扩增条件,建立HPA-15系统基因分型技术。该分型技术的准确性和可靠性,采用第11届ISBT血小板协作组提供的质控样本进行验证,同时采用本研究合成的引物及商品化试剂盒,对50名随机的汉族血小板捐献者进行HPA-15系统基因分型,作为平行对照。应用本研究的方法,对第11届ISBT送检的10份考核样本进行基因分型。结果表明：基因分型结果与ISBT公布的结果完全一致。50名随机的血小板志愿捐献者,经本研究的方法及美国G＆T公司的试剂检测,基因分型的结果相符合;观察到的基因频率：HPA-15a和-15b分别为0.5100和0.4900。结论：本研究建立的HPA基因分型技术具有简便、快速、准确的特点,适合于常规HPA基因分型,具有广泛的应用前景。     

应用PCR-SSP方法进行人类血小板抗原1～6系统的基因分型

目的研究采用PCR-SSP技术,建立人类血小板抗原1～6系统(HPA-1,2,3,4,5,6)的基因分型方法.方法合成18条序列特异性引物,通过调节引物浓度、Mg2+离子浓度和探索最佳PCR扩增条件,建立HPA-1～6系统同步基因分型技术.对第10届及第11届国际输血协会(ISBT)血小板基因定型协作组送检的考核样本进行盲检来验证.并应用该技术对198名深圳地区健康的血小板志愿捐献者进行基因分型.结果应用本研究的方法,对第10届及第11届ISBT送检的考核样本进行基因分型,结果与ISBT公布的结果完全一致,符合率达100%.对198名随机的血小板志愿捐献者观察到的基因频率分别是:HPA-1a和1b为0.9924和0.0076,HPA-2a和2b为0.9545和0.0455,HPA-3a和3b为0.5556和0.4444,HPA-4a和4b为0.9975和0.0025,HPA-5a和5b为0.9848和0.0152,HPA-6a和6b为0.9798和0.0202.结论本研究建立的HPA基因分型技术具有简便、快速、准确的特点,适合于常规HPA基因分型,具有广泛的应用前景.     

人类血小板抗原-15系统PCR-SBT分型技术的建立

目的建立人类血小板抗原(HPA)-15系统的分型方法,并应用于血小板供者库的HPA基因定型。方法采用本研究合成的引物及G&T公司的商品化试剂盒,应用PCR-SBT技术对200名随机的汉族血小板捐献者进行HPA-15系统基因分型,采用第l4届ISBT血小板协作组提供的l0份质控标本以及德国Inno-train公司提供的质控样品作为平行对照,进行验证。结果 200名汉族血小板志愿捐献者HPA基因频率为HPA-15a 0.430、HPA-15b 0.570;基因分型结果与ISBT公布的结果及Inno-train公司提供的质控样品的结果完全一致。结论所建立的HPA基因PCR-SBT分型技术具有高分辨率、高通量、高精确度、能直接发现新的等位基因等特点,具有广泛的应用前景。     

探讨血小板输注中血小板抗原基因分型与配型的应用效果

目的探讨血小板输注中血小板抗原基因分型与配型的应用效果。方法选取我站2011年8月~2014年8月收集的262例无偿献血者和70例血小板输注患者的血小板,采用聚合酶链序列特异性引物技术对供血者和患者的HPA1-5系统进行等位基因分型,同时采集与患者ABO血型及HPA基因型相同的血小板制剂并加以固相凝集法配型,配型结果相合后给予输注。结果 70例需输注血小板患者经血小板基因配合后,相吻合的血小板有31例(吻合组),未配型者39例(对照组),其中吻合组血小板输注后CCI1h和CCI24h效果明显优于对照组,两组差异对比有意义(P<0.05)。结论在血小板输注中应用血小板抗原基因分型与配型可防止血小板免疫性抗体的产生及输注无效的发生,从而有效提高输血疗效和安全性,安全便捷,值得推广和应用。     

应用PCR—SSP方法进行人类血小板抗原1～6系统的基因分型

目的研究采用PCR—SSP技术，建立人类血小板抗原1．6系统（HPA—1，2，3，4，5，6）的基因分型方法。方法合成18条序列特异性引物，通过调节引物浓度、Mg^2＋离子浓度和探索最佳PCR扩增条件．建立HPA—1．6系统同步基因分型技术。对第10届及第11届国际输血协会（ISBT）血小板基因定型协作组送检的考核样本进行盲检来验证。并应用该技术对198名深圳地区健康的血小板志愿捐献者进行基因分型。结果应用本研究的方法，对第10届及第11届ISBT送检的考核样本进行基因分型，结果与ISBT公布的结果完全一致，符合率达100％。对198名随机的血小板志愿捐献者观察到的基因频率分别是：HPA—1a和1b为0．9924和0．0076，HPA-2a和2b为0．9545和0．0455，HPA-3a和3b为0．5556和0．4444，HPA-4a和4b为0．9975和0．0025，HPA-5a和5b为0．9848和0．0152，HPA-6a和6b为0．9798和0．0202。结论本研究建立的HPA基因分型技术具有简便、快速、准确的特点，适合于常规HPA基因分型，具有广泛的应用前景。     

南京地区汉族人群中人类血小板抗原基因多态性及分析

人类血小板抗原(Ｈｕｍａｎｐｌａｔｅｌｅｔａｎｔｉｇｅｎ,ＨＰＡ)分型对临床上一些因血小板同种免疫反应导致的同种免疫性疾病,如新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜(ＮＡＩＴＰ),输血后紫癜(ＰＴＰ)及血小板输注无效(ＰＴＲ)等的诊断和治疗有重要意义[13]。长时期来,人们一直沿用传统的血清学方法进行ＨＰＡ分型,但由于难以获得高质量、特异性抗血清等多种因素的制约,ＨＰＡ分型工作始终无法深入下去。随着对ＨＰＡ基因研究的深入,近年来国外陆续报道将基因检测技术用于血小板分型研究中。本文应用聚合酶链序列特异性引物(ＰＣＲＳＳＰ)…     

分子生物学技术在血小板特异性抗原基因分型中的应用

血小板特异性抗原（human platelet antigens，HPA）位于血小板膜糖蛋白上。目前，通过血清学方法已确认了24个HPA，其中的12个被分成6个HPA系统（HPA-1-5、15）。迄今，24个HPA中的22个HPA的分子基础已经得到了阐明，除了HPA-14bw是由于编码相应糖蛋白基因的1901-1911位置上AAG3个碱基缺失外，     

南昌地区机采血小板捐献人群中人类血小板抗原基因多态性初步分析

人类血小板抗原(HPA)在临床与输血实践中具有非常重要的意义.HPA不合可致同种免疫反应,导致输血后紫癜、血小板输注无效、新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜等[1].我们应用序列特异性引物聚合酶链式反应(PCRSSP)技术,对本中心机采捐献血小板者的血小板抗原(HPA)基因多态性进行了初步分析,现报告如下.     

盐城地区汉族人血小板抗原HPA-1～17，Caba基因多态性分析

目的：研究盐城地区汉族人群血小板特异性抗原人类血小板同种抗原1～17（HPA1～17）,Caba的基因分布,建立本地区固定机采血小板供者 HPA数据库。方法应用序列特异性引物聚合酶链式反应（PCR‐SSP）技术,对盐城市中心血站200名汉族固定血小板献血者的血液进行HPA1～17,Caba基因分型。用χ2检验统计分析各 HPA血型系统基因分布的期望值与观察值,验证其是否符合 Hardy‐Weinberg平衡定律,并与国内外人群相比较。结果盐城地区200名汉族血小板献血者的HPA‐1a、2a、3a、4a、5a、6a、15a的基因频率分别为0．9950、0．9375、0．5725、0．9925、0．9850、0．9875、0．5425,呈多态性分布,HPA7～14、16～17及Caba呈单线性分布;不配合率大于10％的HPA系统有HPA‐2～3、15。结论本研究已确认盐城地区200名固定血小板供者 HPA基因分布特征,与国内其他地区、其他国家相比有本地区人群特点;在此基础上建立本地区已知 H PA基因型固定机采血小板供者数据库,为临床血小板HPA血型配合性输注提供可能。     

广西地区壮族 瑶族人群人类血小板抗原基因的多态性分析

目的研究广西地区壮族、瑶族人群人类血小板抗原(HPA)1～17bw基因的表达差异。方法采用序列特异引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)方法对广西地区100例壮族和100例瑶族健康个体进行HPA 1～17bw系统基因分型,比较壮族和瑶族的HPA基因频率。结果等位基因a是广西地区壮族、瑶族健康个体主要的HPA1～17bw基因型别。在H-W平衡检验中,瑶族健康人群HPA1～17bw基因多态性中除HPA1、2、6外,其他均符合H-W群体遗传平衡法则(P>0.05);壮族健康个体中,所有HPA各系统符合H-W群体遗传平衡法则(P>0.05)。瑶族和壮族HPA系统抗原不配合率分析中,HPA3和HPA15不配合率最高,皆超过30%。比较两个民族的基因频率,发现瑶族的HPA-3和HPA-15的基因多态性明显低于壮族(χ2=12.242,P=0.002;χ2=6.209,P=0.045)。结论广西地区壮族和瑶族HPA基因多态性分布存在明显的种族差异,特别是HPA-3和HPA-15系统杂合度最高,抗原分布不配合比例相对高,在临床配合性血小板输注中必须加以重视。     

长沙地区固定血小板献血者血小板抗原1～5、15系统基因多态性及分析

目的了解长沙地区100名固定单采血小板献血者血小板抗原(HPA)1~5、15系统基因多态性。方法采用PCR-SSP法对样本进行HPA1~5、15系统的基因分型。结果HPA1~5、15系统基因在长沙地区血小板固定供者中的分布频率分别为1a:0.9900,1b:0.0100;2a:0.9600,2b:0.0400;3a:0.5050,3b:0.4950;4a:1.0000,4b:0.0000;5a:0.9900,5b:0.0100;15a:0.4750,15b:0.5250。结论HPA-3,15系统最具有多态性。     

微量聚合酶链反应对人类白细胞抗原的基因分型

目的 探讨应用于移植的人类白细胞抗原（ＨＬＡ）二类基因（ＤＲＢ／ＤＱＢ）快速分型新技术。方法 采用快速ＤＮＡ抽提技术,建立了ＨＬＡ＿ＤＲＢ／ＤＱＢ微量序列特异性引物聚合酶链反应基因分型方法,对１４２份供受者ＤＮＡ进行ＨＬＡ－ＤＲＢ／ＤＱＢ基因分型,并与单克隆抗体一叔法ＨＬＡ血清学分型技术进行对比研究。结果 应用微量ＰＣＲ－ＳＳＰ方法共检出１３种ＤＲＢ１等位基因和 ＤＱＢ１等位基因,与血清学分型结果     

深圳地区汉族人类血小板抗原1-6系统基因多态性分析

目的 研究人类血小板抗原基因多态性,为人类学研究及临床输血实践提供依据。方法 采用PCR-SSP方法对深圳地区222名汉族随机献血者HPA1-6系统进行基因分型研究,对其基因及基因型频率进行统计,并与HPA在不同人群中的分布进行对比分析。结果 在6个HPA系统中,HPA-3基因型的杂合程度最高,HPA-3a/3a、HPA-3a/3b、HPA-3b/3b的频率分别为0.265 8,0.518 0,0.216 2;其余5个HPA系统均以a/a纯合子为主,a基因的频率范围为0.997 7～0.955 0,且均未发现b/b纯合子。1b、4b的基因频率很低,分别为0.009 O和0.002 3。结论 深圳汉族人群HPA1-6系统的基因频率与中国台湾人及中国香港人均很相似(P>0.05)。HPA-1、HPA-5与美国黑人、白人及荷兰人差异显著(P<0.05);HPA-2、HPA-3与日本人、韩国人、美国黑人、白人差异显著(P<0.05);HPA-4与日本人差异显著(P<0.05)。在未来的临床实践中要警惕HPA-2,3,5,6系统同种抗体导致的同种免疫血小板减少综合征的可能。