过表达高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ对胃癌细胞株BGC-823增殖的影响

目的探讨过表达高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgiα-mannosidaseⅡ,GMⅡ)对人胃癌细胞株BGC-823增殖活性的影响。方法构建真核表达载体EX-E2372-M03,通过脂质体Lipofectamine2000转染至人胃癌细胞株BGC-823,筛选稳定细胞株,用免疫荧光观察转染效率。用RT-PCR法检测转染细胞GMⅡ、c-myc、bcl-2 mRNA的表达,用Western blot法检测转染细胞GMⅡ、c-myc、bcl-2蛋白表达的变化,用MTT法及流式细胞仪检测过表达GMⅡ后对细胞增殖活性的影响。结果 GMⅡ真核表达质粒构建成功并成功转染,MTT结果示过表达GMⅡ后胃癌细胞增殖活性明显高于对照组(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,与对照组相比较,GMⅡ过表达组胃癌细胞G1期细胞明显减少,S期细胞比例明显增加。转染后胃癌细胞GMⅡmRNA和蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05),且可明显上调胃癌细胞BGC-823中c-myc的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),但对bcl-2的调节作用不明显。结论过表达GMⅡ能促进胃癌细胞增殖,可能与上调c-myc的表达有关。     

靶向CIP2A的shRNA对人胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的 探讨shRNA介导的蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)基因表达抑制对人胃癌细胞株BGC-823细胞增殖、凋亡及侵袭的影响.方法 用已构建的shRNA-CIP2A重组质粒转染BGC-823细胞,荧光显微镜下观察转染效率;采用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测重组质粒对CIP2A mRNA和蛋白表达的影响;分别用WST-1法、流式细胞术和Transwell小室法测定重组质粒转染对细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响.结果 shRNA-CIP2A转染效率达80％.转染shRNA-CIP2A后,可明显抑制BGC 823细胞内CIP2A mRNA和蛋白的表达(均P＜0.05),与阴性对照组相比,转染shRNA-CIP2A的BGC-823细胞增殖明显受到抑制[(1.880±0.050) vs.(0.794±0.042),P＜0.05],侵袭出的细胞数量明显少于对照组[(378.0±5.6) vs.(206.0±15.6),P＜0.05],BGC-823细胞的增殖和侵袭能力明显下降,凋亡细胞比例增加[(5.33±0.51)％vs.(7.40±0.09)％,P＜0.05].结论 shRNA下调CIP2A mRNA和蛋白的表达,可有效抑制BGC-823细胞的增殖、侵袭,同时诱导细胞发生凋亡,提示CIP2A基因可能成为一个潜在的胃癌治疗靶标.     

短发夹RNA干扰胃癌低氧诱导因子-1α表达及其临床意义

目的 探讨RNA T扰对胃癌细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)转录和蛋白表达的作用以及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建人HIF-1α基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体并转染胄癌细胞BGC-823;采用RT-PCR和Western blot法检测HIF-1α mRNA、蛋白表达水平;MTT法检测转染后对胃癌细胞生长的抑制;TUNEL法观察细胞的凋亡情况;流式细胞术分析转染后胃癌细胞的细胞周期和凋亡率.结果 成功构建了pshRNA-HIF-1α1和pshRNA-HIF-1α2重组质粒;转染BGC-823后,与空质粒组相比,pshRNA-HIF-1α1可有效抑制BGC-823细胞HIF-let基因转录和蛋白质表达,抑制率分别可达93.4%和55.7%;MTT法显示转染后细胞生长明显受到抑制;流式细胞术结果表明转染后,其凋亡率明显高于卒质粒绀(P＜0.05),BGC-823细胞增殖活性显著降低,G0～G1期细胞比例明显增加,S期与G2.～M期细胞比例减少;TUNEL法显爪转染后细胞核固缩,核染色质聚集或断裂;体内实验显示,pshRNA-HIF-1α1的抑瘤率为41.75%.结论 体内、外初步实验证实pshRNA-HIF-1α1能有效抑制胃癌细胞BGC-823 HIF-1α基因表达,抑制胃癌细胞增殖,诱导其凋亡.     

yrdC靶向RNA干扰抑制BGC-823细胞裸鼠体内成瘤的实验研究

目的检测胃癌组织及癌旁正常组织中的yrdC的mRNA、蛋白表达。构建表达yrdC靶向RNA干扰的重组腺病毒,转染人胃癌细胞株BGC-823,检测干扰后BGC-823细胞yrdC蛋白水平变化,转染后细胞移植裸鼠体内成瘤,观察yrdC沉默后移植瘤生长的变化。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot法,检测7例胃癌组织及癌旁正常组织中的yrdC的mRNA、蛋白表达。构建表达针对人yrdC的si RNA的重组腺病毒,重组腺病毒Ad-shyrdC转染BGC-823细胞,Western blot检测干扰后BGC-823细胞yrdC蛋白水平变化。裸鼠分3组,分别皮下移植转染Ad-shyrdC、空病毒Ad-Null及未转染的BGC-823细胞（1&#215;107/只）,5周后检测裸鼠肿瘤的体积及质量,肿瘤HE染色及yrdC、PCNA、TUNEL免疫组化染色,观察各组yrdC蛋白表达、细胞增殖能力及细胞凋亡的变化。结果胃癌组织中yrdC mRNA及蛋白表达量均比癌旁组织增高。成功构建表达抑制yrdC基因的重组腺病毒Ad-shyrdC,腺病毒介导的yrdC靶向RNA干扰能特异性抑制BGC-823中yrdC蛋白的表达,Ad-shyrdC组肿瘤细胞yrdC蛋白水平明显下降。转染BGC-823细胞后移植裸鼠体内,5周后成瘤体积及质量较Ad-Null组及PBS对照组明显减小（P〈0.05）;yrdC蛋白表达减少,PCNA染色提示肿瘤细胞增殖活性受抑,TUNEL染色显示凋亡明显增多（P〈0.01）。结论腺病毒介导的RNA干扰能有效抑制BGC-823细胞裸鼠体内成瘤,yrdC基因有可能成为胃癌基因治疗的靶点。     

miRNA765高表达对胃癌耐药细胞株BGC-823/CDDP耐药性的影响

目的 观察miRNA765高表达对胃癌顺铂(CDDP)耐药细胞株BGC-823/CDDP耐药性的影响.方法 将PCR扩增的包含miRNA765前体的基因序列克隆至真核表达载体,构建miRNA重组表达载体;阳离子脂质体转染重组质粒到BGC-823/CDDP细胞.转染后48 h,Real-Time PCR和Western blotting法分别检测细胞中miRNA765和细胞因子诱导的凋亡抑制因子1(CIAPIN1)蛋白的相对表达量;采用不同浓度CDDP处理转染后48 h的BGC-823/CDDP细胞,24和48 h后MTT法检测细胞活性并计算细胞对于CDDP的半抑制浓度(IC50).采用终质量浓度为1μg/mL的CDDP处理基因干预后的BGC-823/CDDP细胞,双染法检测细胞凋亡率.结果 BGC-823/CDDP细胞内miRNA765的相对表达量明显低于其亲本细胞BGC-823,CIAPIN1蛋白相对表达量则明显高于其亲本细胞株(均P＜0.01).在BGC-823/CDDP细胞内高表达miRNA765可明显抑制CIAPIN1蛋白的表达,转染后48 h的CIAPIN1蛋白表达量明显低于未转染组(P＜0.01);miRNA765高表达可明显降低BGC-823/CDDP细胞的耐药能力,48 h后IC50值从(18.27 ±3.92) μg/mL降至(1.50 ±0.43) μg/mL(P ＜0.05).转染48 h后,BGC-823/CDDP细胞的凋亡率从(10.1±1.7)％上升至(53.4±7.9)％(P＜0.01).结论 miRNA765高表达可以明显降低胃癌耐药细胞株BGC-823/CDDP的耐药能力.     

可溶性人TRAIL诱导胃癌细胞BGC-823凋亡的研究

目的 通过构建pBud-EGFP-TRAIL质粒体外观察可溶性人TRAIL蛋白(sTRAIL)对胃癌细胞BGC-823的作用.方法 以EFGP基因为报告基因,sTRAIL为目的基因,构建pBud-EGFP-TRAIL双表达质粒,鉴定酶切和测序重组体.经脂质体转染法转染体外培养的胃癌细胞BGC-823,用荧光显微镜观察EGFP的表达,RT-PCR及Western blot进一步检测sTRAIL mRNA及其蛋白的表达,MTT法检测转染后对胃癌细胞的生长抑制率,TUNEL法观察细胞的凋亡情况,流式细胞仪分析转染后胃癌细胞的凋亡率.结果 测序结果证实pBud-EGFP-TRAIL载体构建成功,质粒经脂质体转染后,通过表达sTRAIL蛋白对胃癌细胞发挥作用.MTT法显示转染该质粒的细胞的生长抑制率明显高于对照组,TUNEL法显示细胞核固缩,核染色质聚集或断裂,形成凋亡小体.流式细胞仪结果表明转染该质粒的细胞的的凋亡率明显高于对照组.结论 在体外初步证实TRAIL能诱导胃癌细胞BGC-823凋亡.     

HES1对胃癌细胞株增殖､凋亡及迁移能力的影响

目的:探讨siRNA靶向HES1对胃癌细胞株BGC-823和SGC-7901增殖?凋亡及迁移能力的影响?方法:采用荧光实时定量PCR(qPCR)法检测胃癌组织及胃癌细胞株BGC-823和SGC-7901的HES1水平,采用脂质体法将2条靶向HES1的siRNA片段(siHES1-1和siHES1-2)高效转染至BGC-823和SGC-7901细胞,经qPCR法检测后选取抑制效率最高的siRNA进行后续功能学研究;分别采用MTT?流式细胞术及Transwell法检测转染后BGC-823和SGC-7901细胞的增殖?凋亡及迁移能力的改变?结果:71例胃癌组织的HES1 mRNA水平高于59例癌旁组织,BGC-823和SGC-7901细胞的HES1 mRNA水平明显高于正常胃黏膜细胞株GES-1(P < 0.05);转染HES1 siRNA可降低BGC-823和SGC-7901细胞的HES1水平,此外,较转染对照组细胞,其存活率及穿膜细胞数目明显降低,凋亡率明显升高(P < 0.05)?结论:胃癌组织及细胞株中的HES1高表达,靶向沉默HES1可抑制胃癌细胞增殖及迁移并诱导细胞凋亡?     

RNAi沉默中期因子基因表达对胃癌细胞黏附和侵袭力的影响

目的:探讨中期因子(midkine,MK)基因小干扰RNA对胃癌细胞生物学行为的影响.方法:培养人胃癌BGC-823、HGC-27、MGC-803及SGC-7901细胞株,以荧光实时定量PCR方法检测中期因子基因mRNA表达;筛选出中期因子表达最高者.采用中期因子基因小干扰RNA转染胃癌细胞株,分别以荧光实时定量PCR和免疫荧光方法观察中期因子基因mRNA和蛋白水平,然后以四唑蓝(MTT)比色法检测细胞黏附性,以Boyden方法检测癌细胞侵袭力.结果:4株胃癌细胞中,中期因子均有不同程度的表达,以胃癌BGC-823细胞最高;以MK siRNA转染胃癌BGC-823细胞后,癌细胞中期因子基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性;转染组细胞黏附数量明显下降,细胞侵袭力明显下降.结论:中期因子基因在胃癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染胃癌细胞,可抑制胃癌细胞黏附和侵袭能力.     

槲皮素对BGC-823胃癌细胞caspase-3、Bcl-2表达影响与抑癌作用研究

目的:研究槲皮素(quercetin,QUE)抑制人胃癌BGC-823细胞增殖和诱导凋亡的作用。方法:采用四甲基噻唑氮蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测不同终浓度的QUE对BGC-823细胞增殖的影响及其细胞毒活性,流式细胞术(FCM)对不同浓度的QUE作用24 h的BGC-823细胞进行凋亡检测及其周期分析,用免疫组化法测定Bcl-2、caspase-3的表达率。结果:QUE对体外培养的BGC-823细胞具有明显的增殖抑制作用,在30~120μmol/L范围内可显著抑制BGC-823细胞增殖,且呈剂量-时间依赖性。FCM检测后,BGC-823细胞周期阻滞于S期,药物浓度呈正相关。经QUE处理后BGC-823细胞株caspase-3蛋白表达明显增加,Bcl-2蛋白表达降低。免疫组化检测表明,用药组Bcl-2蛋白的表达下降,caspase-3蛋白的表达率增强,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:QUE诱导BGC-823细胞发生凋亡,使细胞周期阻滞于S期,抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调Bcl-2、上调caspase-3蛋白的表达有关。     

ω-3多不饱和脂肪酸对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响

目的 利用人胃癌BGC-823细胞体外培养实验,观察不同含量ω-3多不饱和脂肪酸合成的二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid,EPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoc acid,DHA）对肿瘤细胞凋亡的影响。方法采用MTT法、凋亡形态学检查和流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡情况。结果 30和45mg／L的EPA或DHA可显著降低肿瘤细胞存活率（P＜0.01）。透射电镜可见细胞凋亡现象,流式细胞检测bcl-2和Ga基因蛋白表达明显下降（P＜0.05,P＜0.01）。结论ω-3多不饱和脂肪酸可诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡,细胞增殖受到抑制。     

RNAi沉默survivin和HIF-1α基因对胃癌BGC-823细胞体外增殖和凋亡的影响

目的：应用RNA干扰（RNAi）技术抑制胃癌BGC-823细胞中survivin和HIF-1α基因的表达,探讨其对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响。方法：分别设计并合成经过化学修饰的靶向survivin和HIF1α mRNA的小干扰RNA （siRNAs）,同时合成错义RNA （SCR）,采用HifectinⅡ真核体外转染胃癌BGC-823细胞,将转染siRNA-survivin、siRNA-HIF-1α和SCR的各组细胞分别命名为sis组、siH组和SCR组,同时设空白对照组（无血清培养基）,RT-PCR法检测各组细胞中survivin和HIF-1αmRNA表达水平。将胃癌BGC-823细胞分为单干扰组（survivin-siRNA,sis组）、联合干扰组（survivin-siRNA+HIF1α-siRNA,sis+siH组）、非靶向特异性组（SCR组）和空白对照组（无血清培养基）,MTT法检测各组细胞增殖活性,Western blotting法检测各组细胞中survivin和HIF-1α蛋白表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果：与空白对照组比较,sis组细胞中survivin mRNA表达水平和siH组细胞中HIF-1αmRNA表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）。与空白对照组比较,SCR组细胞增殖活性无明显变化（P>0.05）,sis组和sis+siH组细胞增殖活性明显降低（P<0.05）;与sis组比较,sis+siH组细胞增殖活性明显降低（P<0.05）。与空白对照组比较,sis+siH组细胞中surviving和HIF-1α蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,细胞凋亡率明显升高（P<0.01）。结论：联合靶向沉默survivin和HIF-1α基因可下调靶基因的表达,抑制胃癌BGC-823细胞增殖,促进细胞凋亡,RNAi基因沉默技术有望成为治疗胃癌的新方法。     

幽门螺杆菌对胃癌BGC-823细胞中Bcl-xl基因表达的影响及作用

目的探讨幽门螺杆菌超声裂解液对胃癌BGC-823细胞中Bcl-xl基因表达的影响,以及Bcl-xl基因在胃癌BGC-823细胞增殖中所起的作用。方法分别用东亚型和西方型幽门螺杆菌超声裂解液处理胃癌BGC-823细胞24h,MTT法检测细胞增殖情况,荧光定量PCR法检测胃癌BGC-823细胞中Bcl-xl基因mRNA水平的表达情况。设计特异的Bcl-xl shRNA阻断Bcl-xl基因的表达,抑制胃癌BGC-823细胞增殖。结果螺杆菌超声裂解液处理胃癌BGC-823细胞24h后,与对照组相比,处理组BGC-823细胞出现增殖(P<0.01),BGC-823细胞中Bcl-xl基因mRNA水平的表达也出现上调;并且东亚型螺杆菌超声裂解液处理组的促增殖作用强于西方型处理组(P<0.01),东亚型螺杆菌超声裂解液处理组细胞中Bcl-xl基因mRNA的表达水平也高于西方型处理组(P<0.01)。Bcl-xl shRNA可以下调Bcl-xl基因mRNA及蛋白水平的表达,同时抑制胃癌BGC-823细胞的增殖。结论 Bcl-xl基因对幽门杆菌感染相关性胃癌中癌细胞的增殖起了促进作用。     

COL1A1-shRNA表达载体的构建及对胃癌细胞增殖迁移的影响

目的:构建COL1A1特异小干扰RNA(siRNA)表达载体,体外评价其对胃癌细胞BGC-823增殖迁移的影响.方法:根据文献获得3个COL1A1的siRNA靶序列,设计能转录短发夹状RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与pSilencerTM 4.1- CMV neo线性质粒载体连接,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,筛选获得重组质粒;经DNA测序鉴定重组体DNA序列正确后转染胃癌BGC-823细胞,利用G418筛选稳定表达COL1A1-shRNA的BGC-823细胞株.通过实时荧光定量RT-PCR及Western blot检测转染后细胞COL1A1在mRNA及蛋白质水平的表达;MTT法及Transwell法检测COL1A1干扰后胃癌细胞增殖及迁移能力的变化.结果:序列测定表明成功构建3个COL1A1-shRNA表达载体.实时荧光定量RT-PCR及Western blot检测显示,COL1A1-shRNA转染胃癌BGC-823细胞的COL1A1 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05);MTT试验及Transwell迁移试验显示,转染后细胞增殖及迁移能力明显降低(P<0.05).结论:COL1A1-shRNA转染胃癌BGC-823细胞能有效抑制细胞COL1A1的表达及癌细胞的增殖迁移.     

shRNA抑制p115表达对胃癌体外血管形成的影响

目的初步探讨胃癌BGC-823细胞高尔基体囊泡转运蛋白(golgi-vesicular transport protein,p115)对胃癌血管形成的影响及其可能机制。方法采用脂质体介导法将p115 shRNA-1318转染入胃癌BGC-823细胞株,经G418筛选出稳定转染的细胞株。利用Western blot、RT-PCR和细胞免疫荧光方法检测转染后的p115抑制效应及其对MIF、p-Akt、VEGF-A的调控情况;采用细胞活性检测实验、Transwell体外侵袭实验和血管形成实验方法分别检测转染p115 shRNA的胃癌BGC-823细胞对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖,迁移和血管形成的影响。结果 p115 shRNA-1318转染后胃癌BGC-823细胞p115、MIF、p-Akt和VEGF-A的蛋白及mRNA表达明显抑制(P<0.01);细胞免疫荧光:与对照组相比,p115 shRNA组p115、MIF及VEGF-A的色泽暗红且抑制率分别为63%、65%、68%;细胞活性检测:与对照组相比,p115 shRNA组...     

Survivin ASODN诱导胃癌细胞凋亡并增强OPT化疗敏感性的研究

目的 探讨转染survivin反义寡核苷酸(ASODN)对BGC-823细胞survivin mRNA表达及细胞增殖,凋亡和对羟基喜树碱(OPT)化疗敏感性的影响.方法 脂质体转染survivin ASODN,MTT检测生长抑制率,流式细胞术(FCM)及电镜检测细胞凋亡,RT-PCR检测survivin mRNA表达.结果 Survivin ASODN能抑制BGC-823细胞生长,促进其凋亡,并呈剂量依赖性.电镜下见BCC-823细胞呈早期凋亡改变.OFT处理组survivin mRNA表达明显高于对照组和ASODN OPT组(P<0.05).结论 Survivin ASODN可以抑制BGC-823细胞Survivin表达,诱导癌细胞凋亡并抑制其增殖.Survivin ASODN对OPT化疗有增敏作用,即使是多次给予OFF者仍可增敏.     

香加皮水提取物诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡及其作用机制

目的研究香加皮水提取物(CPE)诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡及其作用机制。方法采用G iem sa染色观察细胞凋亡形态学变化;电子显微镜观察凋亡细胞的超微结构变化;流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳方法检测BGC-823细胞凋亡率、细胞周期和细胞凋亡的DNA水平变化;RT-PCR方法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax和surv iv in mRNA表达水平变化;免疫细胞化学方法检测bcl-2、bax和surv iv in蛋白表达的变化。结果经CPE作用后,人胃癌细胞BGC-823出现明显的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变,细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈现梯形图。经250μg/mL CPE处理48 h后,多数BGC-823细胞被阻滞在G2/M期,而且细胞发生明显的凋亡变化,BGC-823细胞凋亡率可达18.9%。CPE可抑制BGC-823细胞bcl和surv iv in mRNA及蛋白的表达,促进baxmRNA及蛋白的表达。CPE可明显延长S180荷瘤小鼠生存期,且具有剂量依赖性。结论CPE通过阻滞BGC-823细胞于G2/M期及诱导BGC-823细胞凋亡发挥抗肿瘤作用,其作用机制与抑制细胞的bcl-2和surv iv in基因mRNA及蛋白表达、促进bax基因和蛋白的表达有关。     

MIF抑制剂HA对胃癌细胞株BGC-823增殖和凋亡的影响

目的 体外观察透明质酸(HA)抑制巨噬细胞移动抑制因子(MIF)后对人胃癌细胞株BGC-823增殖与凋亡的影响. 方法以体外培养的人胃癌细胞株BGC-823为研究对象.采用MTT比色法研究HA抑制MIF后对BGC-823细胞增殖的影响;流式细胞术和AO-EB荧光染色研究HA抑制MIF后对BGC-823细胞凋亡的影响;流式细胞术分析HA抑制MIF后对BGC-823细胞周期的影响. 结果 MTT试验显示100～400 μg/mL HA抑制MIF后对BGC-823细胞增殖具有抑制作用,呈浓度和时间依赖性.AO-EB染色和流式细胞术显示BGC-823细胞的凋亡率、破膜率随HA浓度的升高对MIF抑制作用的增强而增加.流式细胞术检测发现,HA作用细胞48 h后能将细胞阻滞于G0/G1期,呈浓度依赖性. 结论 MIF促进人胃癌BGC-823细胞增殖,抑制其凋亡,HA可抑制其作用.     

抑制组织蛋白酶B表达对胃癌BGC-823细胞黏附、增殖和侵袭的影响

目的 探讨抑制组织蛋白酶B表达对胃癌BGC-823细胞黏附、增殖和侵袭的影响.方法 构建针对CB的siRNA表达载体,脂质体LipofectAmineTM2000转染胃癌细胞株BGC-823.荧光定量RT-PCR和免疫印迹检测CB在各组胃癌细胞中的表达水平;细胞黏附实验检测各组胃癌细胞的黏附能力;细胞侵袭性实验检测各组胃癌细胞的侵袭能力;细胞增殖实验检测各组胃癌细胞的增殖能力.结果 与空白对照组和无关siRNA对照组相比,沉默1组和沉默2组细胞中,CB mRNA的相对表达量显著降低(P ＜0.01);CB蛋白表达被显著抑制;纤维粘连蛋白和基质胶黏附的胃癌细胞数目以及穿透基质胶的胃癌细胞数显著降低(P＜0.05);并且在2d、3d、4d及5d细胞孔内的吸光度值亦显著减少,差异有显著性(P＜0.05).而在无关siRNA对照组和空白对照组之间,CB mRNA的相对表达量、两组的黏附细胞数目以及两组穿透基质胶的细胞数都无显著性差异(P＞0.05).结论 设计针对CB基因的siRNA片段构建的siRNA载体能够有效干扰胃癌BGC-823细胞中CB mRNA和蛋白的表达.抑制胃癌BGC-823细胞CB基因表达,可以降低胃癌细胞的生长速度、降低胃癌细胞与基质黏附能力、降低胃癌细胞侵袭和转移的能力.     

薏苡仁酯对胃癌BGC-823细胞侵袭迁移能力的影响及其机制

目的:研究不同浓度薏苡仁酯对胃癌BGC-823细胞株的侵袭、迁移能力及CD44、CD133表达的影响。方法:以不同浓度薏苡仁酯作用于BGC-823细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,黏附试验、Transwell小室侵袭迁移实验检测细胞黏附、侵袭、迁移能力,RT-PCR法检测细胞CD44、CD133 mRNA表达水平。结果:薏苡仁酯可抑制BGC-823细胞增殖,其抑制效应呈剂量-时间依赖性;经薏苡仁酯作用后BGC-823细胞的侵袭、迁移及黏附能力降低;CD44、CD133 mRNA的表达与薏苡仁酯浓度亦呈负相关。结论:薏苡仁酯能降低胃癌BGC-823细胞株的侵袭、迁移、黏附能力,其机制可能与通过下调CD44、CD133表达有关。     

长链非编码RNA MEG3对胃癌细胞增殖的影响研究

目的:探讨长链非编码RNA MEG3在胃癌组织及细胞系中的表达水平,以及过表达MEG3对胃癌细胞增殖能力的影响,并探索其可能的作用机制。方法:用定量PCR（qRT-PCR）技术检测胃癌组织及细胞系中MEG3的表达水平;通过转染pCDNA-MEG3上调MEG3的表达水平,并通过qRT-PCR检测转染效率。用MTT和克隆形成实验检测上调MEG3的水平对BGC-823细胞和MGC-803细胞的增殖能力的影响,用Western blot实验检测这两种细胞中上调MEG3的水平对p53蛋白的表达水平的影响。结果:相比正常胃组织及细胞,在胃癌组织和细胞中MEG3的表达出现显著下调,SGC7901、MGC-803和BGC-823细胞中MEG3的表达水平分别是正常胃上皮细胞GES-1中的73.6 %、42.0 %和27.1 % （p<0.05）。BGC-823细胞和MGC-803细胞中转染pCDNA-MEG3能显著上调MEG3的表达,MEG3的表达水平分别为对照组的252倍和311倍（p<0.05）;MTT和克隆形成实验显示,上调MEG3的表达能降低BGC-823细胞和MGC-803细胞的增殖能力。Western blot实验显示,转染了pCDNA-MEG3的MGC-803和BGC-823细胞中p53的表达相较对照组中显著增加。结论:胃癌组织及细胞中MEG3的表达下调,且这可能通过抑制p53蛋白的激活从而促进胃癌细胞增殖,影响胃癌的发生和发展。