SSAT2通过抑制HIF-1α表达增强肾癌Caki-1细胞化疗敏感性

目的探讨转染精脒/精胺N1乙酰基转移酶2(spermidine/spermine N1-acetyltransferase 2,SSAT2)在低氧条件下对肾癌Caki-1细胞增殖、凋亡和阿霉素敏感性的影响及机制。方法经X-treme GENE HP介导将真核表达质粒pcDNA3.1(D)/V5-His-SSAT2转入肾癌Caki-1细胞,细胞在1%氧浓度下培养,Western blot法检测SSAT2蛋白和低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)蛋白表达;流式细胞仪检测细胞的凋亡率、死亡率;MTT法检测细胞的增殖,以及不同浓度阿霉素对细胞的抑制率。结果 SSAT2成功转入肾癌Caki-1细胞,与空白细胞组及空载体组比较,转染SSAT2组HIF-1α蛋白表达明显下调(P<0.01),细胞增殖受到明显抑制(P<0.01),细胞凋亡率和死亡率均增加(P<0.05)。阿霉素浓度为2μg/ml时,转染组细胞抑制率可达(67.5±3.7)%,对空白细胞和空载体细胞的抑制率为(54.7±8.4)%、(56.8±7.7)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论转染SSAT2可以通过下调HIF-1α蛋白表达,减少肾癌细胞的增殖,增加肾癌Caki-1细胞的凋亡率、坏死率和对阿霉素的敏感性,针对SSAT2的基因治疗可能成为逆转肾癌耐药的方法之一。     

巨噬细胞移动抑制因子在肾癌中的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在肾癌组织中的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响.方法 以内蒙古自治区人民医院和包头市肿瘤医院2013年3月至2015年3月病理室确诊的49例肾癌患者为研究对象,采用蛋白质印迹法(West-ern blot)及反转录(RT)-PCR法检测肾癌组织及癌旁正常组织、肾癌细胞株及正常肾小管上皮细胞HK 2中MIF蛋白及mRNA表达;利用脂质体将siRNA MIF及siRNA NC转染到肾癌细胞中,Western blot及RT-PCR检测转染效果,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,Transwell法检测细胞侵袭能力,Western blot检测细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达.结果 肾癌组织中MIF蛋白及mRNA表达水平明显高于癌旁正常组织(0.89±0.09 vs.0.18±0.02,1.19±0.04 vs.0.19±0.01,P＜0.05),肾癌细胞株ACHN、769-p、786-O、Caki-1中MIF蛋白及mRNA表达水平明显高于肾小管上皮细胞HK-2(P＜0.05).与siRNA NC组比较,siRNA MIF组中MIF蛋白及mRNA表达水平明显下调(P＜0.05),细胞活力及侵袭能力降低(P＜0.05),HIF-1α及MMP9表达水平下调(P＜0.05).结论 MIF在肾癌中高表达,下调MIF表达能明显抑制肾癌细胞的侵袭能力,可能与抑制HIF-1α/MMP9信号通路有关.     

HIF-2α-VEGF-Notch信号通路在高强度聚焦超声不完全消融后肝癌中的作用

目的 探讨HIF-1α、HIF-2α、VEGF、Notch等基因在高强度聚焦超声不完全消融肝癌血管新生中的表达及其作用.方法 实验共分5组,HIFU残留肝癌细胞亚系为实验组,未处理肝癌细胞为对照组,转染HIF-2α基因沉默重组慢病毒残留肝癌细胞为抑制HIF-2α组,转染VEGF基因沉默重组慢病毒残留肝癌细胞为抑制VEGF组,转染空载慢病毒残留肝癌细胞为空载组.免疫荧光检测实验组与对照组的VEGF表达.低氧(1％O2)处理实验组与对照组细胞0、6、12、24 h,荧光定量PCR和Westernblot检测HIF-1α、HIF-2α、VEGF mRNA和蛋白表达水平.荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞HIF-1α、HIF-2α、VEGF、Notch、DLL4 mRNA和蛋白表达水平.结果 VEGF蛋白在对照组与实验组细胞中均有表达.HIF-1α在低氧处理12 h达到顶峰,随后下降,而HIF-2α、VEGF随着低氧处理时间增加而呈上升趋势,且实验组HIF-2α、VEGF表达较对照组明显增高(P＜0.05).转染慢病毒后,抑制HIF-2α组HIF-2α、VEGF mRNA和蛋白表达均较实验组显著下调(P＜0.05),抑制VEGF组VEGF、Notch、DLL4mRNA和蛋白表达均较实验组显著下调(P＜0.05),实验组HIF-2α、VEGF、Notch、DLL4mRNA和蛋白表达均高于对照组(P＜0.05).结论 HIF-2α-VEGF-Notch信号通路参与调控高强度聚焦超声残余肝癌血管新生.     

EGCG对低氧诱导下胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对低氧培养下人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 将人胃癌细胞株SGC7901进行传代培养,并采用氯化钴（CoCl2）建立低氧模型,实验设空白对照组（常氧组）、低氧对照组及低氧加不同浓度的EGCG组.分别采用MTT法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting检测细胞低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子-A（VEGF-A）的表达.结果 低氧条件下,低浓度EGCG短时间内（24 h）对SGC7901细胞生长无明显抑制作用（P〉0.05）;但随着浓度的升高和作用时间的延长,EGCG可抑制低氧SGC7901细胞的增殖（P〈0.01）,100 μg/mL EGCG作用72 h后,其抑制率可达（76.3±2.9）%.流式细胞仪检测显示,EGCG在低氧环境下可呈时间-剂量依赖性地诱导胃癌细胞凋亡（P〈0.05或P〈0.01）.EGCG可明显抑制低氧诱导的HIF-1α和VEGF-A蛋白的表达（P〈0.05或P〈0.01）,并下调VEGF-A mRNA表达（P〈0.05或P〈0.01）,但对HIF-1α mRNA的转录无明显影响（P〉0.05）.结论 低氧条件下,EGCG可抑制胃癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调低氧诱导的HIF-1α和VEGF-A的表达有关.     

姜黄素对肾癌786-O细胞增殖及凋亡的实验研究

目的观察姜黄素对肾癌786-O细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP蛋白)表达水平以及细胞凋亡的影响,研究姜黄素对肾癌细胞的生长抑制作用并探讨其分子机制,进一步揭示姜黄素对肾癌的治疗作用。方法不同浓度姜黄素作用人肾癌786-O细胞24、48、72 h后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测姜黄素对人肾癌786-O细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测姜黄素诱导细胞的凋亡率;免疫细胞化学检测姜黄素对786-O细胞HIF-1α和XIAP表达的影响。结果姜黄素对人肾癌786-O细胞有明显的抑制作用,可引起细胞凋亡,并且存在剂量和时间依赖;不同浓度姜黄素作用细胞48 h后,HIF-1α和XIAP蛋白表达量下降。结论姜黄素通过下调HIF-1α和XIAP的表达抑制人肾癌786-O细胞的增殖,诱导人肾癌786-O细胞的凋亡。     

HIF-1α基因沉默后对SW480人结肠癌细胞生物学特性的影响

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α）基因沉默对SW480人结肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法 利用脂质体法转染介导的siRNA干扰技术转染人结肠癌细胞SW480,设立干扰组：转染HIF-1α干扰序列;阴性对照组：转染无关序列;空载体组：为空白质粒;空白对照组：未转染。用Real-time PCR及Western blot、MTT比色法、流式细胞仪(FCM) 检测各组HIF-1α mRNA及蛋白的表达、SW480细胞增殖及凋亡。结果 干扰组在各时间点对HIF-1α mRNA表达的沉默效率均在80％以上,高于其他3组(P均＜0.05);与其余3组相比,干扰组HIF-1α蛋白相对表达量降低(P<0.05),增殖曲线表明其增殖受抑;凋亡率显著升高(P<0.01)。结论 HIF-1α基因沉默可促进人结肠癌细胞SW480凋亡,抑制肿瘤细胞生长。     

蛋白激酶CK2α对喉癌细胞凋亡和超微结构的影响

目的 探讨蛋白激酶CK2α对人喉癌细胞凋亡和超微结构的影响及其可能机制.方法 用脂质体转染法分别将蛋白激酶CK2α特异性siRNA表达质粒psiRNA-hH1neo-CK2α及非特异性siRNA表达质粒psiRNA-hH1neo-cont转染人喉癌Hep-2细胞.Western印迹法检测转染细胞蛋白激酶CK2α蛋白表达,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和碘化丙啶(PI)双染色法检测转染细胞凋亡率的变化,透射电镜观察转染细胞形态学变化,Western印迹法检测转染细胞bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 转染psiRNA-hH1neo-CK2α质粒后,Hep-2细胞蛋白激酶CK2α蛋白表达明显下降(P＜0.01).和未转染细胞组和psiRNA-hH1neo-cont转染细胞组比较,psiRNA-hH1neo-CK2α转染组细胞出现典型的凋亡征象,如核固缩、染色质凝集靠近核膜和凋亡小体形成.psiRNA-hH1neo-CK2α转染细胞凋亡率明显高于未转染细胞组和psiRNA-hH1neo-cont转染细胞组(25.66%±0.83%比3.66%±0.43%、5.18%±0.22%,均P＜0.05);与其他2组比较,psiRNA-hH1neo-CK2α转染组细胞bcl-2蛋白表达较低(相对吸光度比值为0.20±0.09 vs 0.72±0.16、0.56±0.11,均P＜0.01),Bax蛋白表达较高(相对吸光度比值为0.81±0.17 vs 0.26±0.12、0.33±0.17,均P＜0.01),bcl-2/Bax较低(0.25±0.05 vs 2.76±0.21、1.70±0.22,均P＜0.01).结论 蛋白激酶CK2α与喉癌细胞凋亡密切相关,该作用可能与bcl-2/Bax降低有关,蛋白激酶CK2α可能是一个有潜力的喉癌治疗靶点.     

腺病毒介导突变体HIF-1α基因对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察突变体HIF-1α基因在体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)内的表达以及对其增殖的影响.方法 以LacZ为对照,用野生型HIF-1α、单突变体HIF-1α564和双突变体HIF-1α564 803转染体外培养的大鼠VSMCs,Western blot测定HIF-1α蛋白表达:MTS/PES法确定大鼠VSMCs的增殖状态.结果 Western blot结果显示以LacZ组的密度扫描结果为1,HIF-1α564(3.284±0.582),HIF-1α564 803(4.026±0.445)与野生型HIF-1α(2.429±0.765)相比差异有显著性(P＜0.05),HIF-1α564与HIF-1α564 803组之间差异无显著性(P＞0.05).MTS/PMS比色结果显示:转染的第1天HIF-1α(0.242±0.020),HIF-1α564(0.234±0.021),HIF-1α564 803(0.223±0.020)3组均可抑制VSMCs增殖,与对照LacZ组(0.256±0.020)相比差异有显著性(P＜0.05),但是各组间差异无显著性(P＞0.05).转染第3,5,7天HIF-1α564,HIF-1α564 803组较HIF-1α组相比,差异有显著性(P＜0.05),尤以HIF-1α564 803组抑制大鼠VSMCs增殖能力最显著(P＜0.05).第7天HIF-1α564 803组Hoechst 33258与TUNEL双重荧光染色提示大鼠VSMCs发生了凋亡.结论 腺病毒介导的突变体HIF-1α基因能抑制大鼠VSMCs的增殖,突变体较野生型HIF-1α抑制作用更强,且双突变体HIF-1α564 803能诱导大鼠VSMCs发生凋亡.     

EGR-1的表达对乳腺癌细胞株耐药的调节作用

目的 探讨转录因子EGR-1对人乳腺癌阿霉素耐药细胞MCF-7/Adr耐药的调节作用.方法 采用脂质体转染法将EGR-1质粒转入细胞,Annexin V-FITC/PI双标流式细胞术、MTT法和Western印迹分别检测MCF-7/Adr细胞早晚期凋亡、细胞增殖活性.结果 细胞稳定转染EGR-1质粒后,与阴性对照组和空载体组比较,细胞凋亡率(41.43±2.34)%高于阴性对照组(4.32±0.87)%及pcDNA3.1空载体转染(5.28±1.46)%(P＜0.05);在一定阿霉素药物浓度范围内,MCF-7/Adr细胞存活率抑制率明显下降(P＜0.05);Western印迹检测见MCF-7/Adr-EGR-1细胞中Caspase-3蛋白均较转染前明显增加,而p-gp蛋白质水平较转染前明显下降(P＜0.05).结论 上调EGR-1表达能有效逆转乳腺癌细胞阿霉素耐药性,其作用机制可能与EGR-1上调耐药细胞中Caspase-3的水平、诱导细胞发生凋亡相关.     

模拟低氧对舌鳞癌SCC-15细胞系中SOX2和OCT4表达的影响

目的 研究模拟低氧条件对舌鳞癌SCC-15细胞增殖、周期、凋亡的影响,及SOX2和OCT4蛋白、mRNA的表达变化.方法 体外培养舌鳞癌SCC-15细胞,加入模拟低氧物去铁胺(desferrioxamine,DFO)模拟低氧环境,为模拟低氧组,同时设置不加DFO的常氧组为对照,采用CCK-8法检测SCC-15细胞的增殖率;流式细胞技术检测SCC-15细胞的周期和细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测常氧组和模拟低氧组SCC-15细胞中低氧诱导因子1α(HIF-1α)、SOX2及OCT4蛋白的表达;qPCR检测常氧组和模拟低氧组SCC-15细胞中HIF-1α、SOX2及OCT4mRNA的表达.结果 与常氧组相比,模拟低氧组SCC-15细胞的增殖受到抑制(P＜0.05),G1期细胞所占比例上升、S+G2期细胞所占比例下降(P＜0.05),细胞凋亡率未见明显变化(P＞0.05);蛋白质印迹法结果显示,与常氧组比较,模拟低氧组SCC-15细胞中HIF-1α、SOX2、OCT4蛋白的表达均升高,且HIF-1α、OCT4蛋白的升高幅度大于SOX2蛋白,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜o.01);qPCR结果显示,两组SCC-15细胞中HIF-1α mRNA水平差异无统计学意义(P＞0.05),而模拟低氧组SCC-15细胞中SOX2、OCT4 mRNA的表达水平高于常氧组(P＜0.05).结论 DFO可以有效模拟低氧环境,促进SOX2和OCT4的蛋白和mRNA表达水平升高.     

HIF-lα在胶质瘤中的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系

目的 (1)探讨缺氧诱导因子(HIF-1α)在不同级别胶质瘤组织中的表达情况.(2)明确肿瘤组织微血管表达情况与HIF-1α表达的关系.(3)明确HIF-1α表达与细胞增殖和凋亡的关系. 方法搜集我院1990～2008年手术治疗的胶质瘤标本68例,所有患者均有完整的病历、影像和病理资料.采用免疫组化方法检测肿瘤组织的HIF-1α、CD105、PCNA表达情况,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况.应用SPSS11.0软件对不同级别胶质瘤表达情况进行比较,了解其表达差异,并将其表达情况与CD105、PCNA和肿瘤细胞凋亡结果进行相关性分析,计算出P值(取P＜0.05为差异有显著性意义). 结果 (1)HIF-1α在低级别胶质瘤中的阳性表达率为38.5%,高级别胶质瘤中阳性表达率为95.2%,两者相比统计学差异明显,P＜0.01.(2)PCNA LI在高级别胶质瘤中为3.33±1.12,低级别胶质瘤组为2.04±0.87,两者相比统计学差异明显,P＜0.01.(3)AI在高级别胶质瘤组为19.15±3.37,摘要阳性组37.14±7.60,HIF-1α阴性组为16.85±4.99,两组相比统计学差异明显,P＜0.01.(5)HIF-1α阳性组PCNA LI为3.35±1.77,HIF-1α阴性组为2.23 ±0.77,P＜0.05.HIF-1α阳性组AI为20.3±3.5,HIF-1α阴性组为10.7±1.9,两者相比统计学差异不明显,P>0.05.结论 (1)HIF-1α的表达对肿瘤细胞的增殖能力有明显的促进作用,并且其量的积累与肿瘤细胞的增殖能力关系密切.(2)PCNA的高表达与肿瘤的恶性程度存在正相关关系,但低增殖并不能排除高级别胶质瘤.(3)低级别胶质瘤细胞凋亡水平较高级别胶质瘤低,但无统计学意义.(4)肿瘤细胞的增殖和凋亡的相对值与肿瘤的级别存在明显的正相关关系.(5)CD105在不同级别胶质瘤中的表达与HIF-1α的表达呈明显的正相关关系,HIF-1α可能通过促进新生血管形成促进胶质瘤细胞的增殖而导致肿瘤恶性程度增高.     

心肺复苏后大鼠脑组织精脒/精胺-N1-乙酰基转移酶2与HIF-1α表达的动态变化规律

目的研究心肺复苏后大鼠脑组织中精脒/精胺-N1-乙酰基转移酶2(spermidine/spermine-N1-acetyltrans-ferase2,SSAT2)与缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)表达的动态变化规律,分析二者相关性。方法 88只成年SD大鼠随机数字表法分为正常对照组(n=8)、假手术组(n=40)和心肺复苏组(n=40)。其中假手术组和心肺复苏组再分为1、8、24、48、72 h 5个亚组,每亚组8只。采用RT-PCR、Western blot法分别检测脑组织中HIF-1αmRNA和HIF-1α、SSAT2蛋白的表达。结果 SSAT2的表达在复苏后明显降低,1 h[(0.314±0.027),P<0.01]表达最低,随后逐渐升高(P<0.01),至72 h[(0.731±0.024),P>0.05]时回升到正常对照组水平(0.736±0.02),而假手术组SSAT2的表达与正常对照组相比无显著变化(P>0.05)。HIF-1αmRNA的表达在复苏后1 h[(0.245±0.021),P<0.05]时降低,但8 h[(0.430±0.019),P<0.05]时明显增强,后24 h[(0.387±0.018),P<0.05]、48 h[(0.385±0.019),P<0.05]下降,至72 h时回落到正常对照组水平(0.343±0.022);但HIF-1α蛋白在复苏后1 h[(0.755±0.012),P<0.01]显著增高,随后逐渐下降(P<0.01),至72 h[(0.033±0.002),P<0.01]时仅轻度增高,而在正常对照组和假手术组未能检测出HIF-1α表达。SSAT2表达与HIF-1α表达在复苏后72 h内呈负性相关(r=-0.945,P<0.01),SSAT2表达与HIF-1αmRNA表达在复苏后8～48 h呈负相关(r=-0.614,P=0.01)。结论在心肺复苏后一定时间内,大鼠脑组织SSAT2表达减弱,HIF-1αmRNA及蛋白表达增加,两者呈负相关表达,提示SSAT2对HIF-1α蛋白、HIF-1αmRNA可能起负性调节作用。     

慢病毒介导HIF-1α沉默对缺氧肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的:构建缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,观察慢病毒介导的HIF-1α基因沉默对体外模拟缺氧条件下的肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及其机制。方法:设计合成1条针对HIF-1α基因的shRNA干扰序列,构建于慢病毒载体质粒GV248中,转染293T细胞包装产生慢病毒,转染人肝癌细胞株HepG2细胞,嘌呤霉素筛选出稳定转染的细胞株。将HepG2细胞分为正常对照组、干扰对照组(转染NC-shRNA)、干扰组(转染HIF-1α-shRNA),应用化学缺氧法(150μmol/L CoCl2)模拟肿瘤细胞缺氧微环境,应用Western Blot检测HepG2细胞中HIF-1α蛋白表达证实基因沉默效果,CCK-8检测沉默HIF-1α基因对HepG2细胞增殖的影响,Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒和流式细胞仪检测沉默HIF-1α基因对细胞凋亡的影响。Western Blot检测HepG2细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9和细胞质细胞色素C(Cyt-C)表达的变化。结果:①成功构建HIF1α-shRNA慢病毒载体并转染HepG2细胞,缺氧培养细胞24h后,与正常对照组及干扰对照组相比,干扰组细胞内HIF-1α蛋白表达明显降低(P<0.01),证实慢病毒载体能够有效沉默HIF-1α基因。②沉默HIF-1α基因后缺氧培养的HepG2细胞增殖率下降(P<0.05),而细胞凋亡比例升高(P<0.01)。③Western Blot结果显示,与正常对照组及干扰对照组相比,沉默HIF-1α基因后细胞内凋亡相关蛋白Bax、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9和细胞质Cyt-C表达上调(P<0.05或P<0.01),而抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调(P<0.01),Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高。结论:通过shRNA慢病毒载体途径可有效沉默缺氧HepG2肝癌细胞HIF-1α基因,HIF-1α沉默能显著抑制缺氧HepG2细胞增殖活性,促进细胞凋亡,其凋亡途径可能与激活内源性线粒体凋亡通路有关。     

短发夹RNA干扰胃癌低氧诱导因子-1α表达及其临床意义

目的 探讨RNA T扰对胃癌细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)转录和蛋白表达的作用以及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建人HIF-1α基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体并转染胄癌细胞BGC-823;采用RT-PCR和Western blot法检测HIF-1α mRNA、蛋白表达水平;MTT法检测转染后对胃癌细胞生长的抑制;TUNEL法观察细胞的凋亡情况;流式细胞术分析转染后胃癌细胞的细胞周期和凋亡率.结果 成功构建了pshRNA-HIF-1α1和pshRNA-HIF-1α2重组质粒;转染BGC-823后,与空质粒组相比,pshRNA-HIF-1α1可有效抑制BGC-823细胞HIF-let基因转录和蛋白质表达,抑制率分别可达93.4%和55.7%;MTT法显示转染后细胞生长明显受到抑制;流式细胞术结果表明转染后,其凋亡率明显高于卒质粒绀(P＜0.05),BGC-823细胞增殖活性显著降低,G0～G1期细胞比例明显增加,S期与G2.～M期细胞比例减少;TUNEL法显爪转染后细胞核固缩,核染色质聚集或断裂;体内实验显示,pshRNA-HIF-1α1的抑瘤率为41.75%.结论 体内、外初步实验证实pshRNA-HIF-1α1能有效抑制胃癌细胞BGC-823 HIF-1α基因表达,抑制胃癌细胞增殖,诱导其凋亡.     

低氧条件下HIF-1α及P-gp在结肠癌组织及多种细胞系中的表达

目的 探讨肿瘤低氧环境对低氧诱导因子1α(HIF-1α)及P-糖蛋白(P-gp)表达的影响及二者的相关性.方法 选取2013年6月至2015年6月邢台市人民医院58例结肠癌患者手术切除后标本,采用免疫组织化学法检测HIF-1α与P-gp在结肠癌组织中的表达情况,分析其与患者临床病理特征的关系;采用细胞爬片法检测常氧与低氧条件下HIF-1α与P-gp在结肠癌细胞株中的表达情况,并分析HIF-1α与P-gp表达的相关性.结果 58例患者结肠癌组织标本HIF-1α蛋白阳性表达率为58.62％,P-gp阳性表达率为46.55％;HIF-1α与P-gp阳性表达率在Dukes分期C+D期者均明显高于A+B期者,且有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者,差异均有统计学意义(P＜0.05);HIF-1α与P-gp的表达呈正相关(r=0.574,P＜0.01).同一细胞株中,低氧下HIF-1α及P-gp表达水平均高于常氧,差异均有统计学意义(P＜0.01);而相同氧环境下不同结肠癌细胞株间HIF-1α及P-gp表达水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 HIF-1α与P-gp在结肠癌组织中存在过表达和共表达现象,在不同Dukes分期和是否伴随淋巴结转移等因素中二者阳性表达率存在明显差异,且HIF-1α与P-gp表达呈明显正相关;低氧可诱导结肠癌细胞中HIF-1α与P-gp蛋白表达水平的升高.     

低氧状态下血管内皮细胞HIF-1α表达及与细胞凋亡的关系

目的探讨低氧对人脐静脉内皮细胞ECV304凋亡及低氧诱导因子-1α表达的影响及意义。方法人脐静脉内皮ECV304细胞分为低氧处理组和对照组,处理后MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术和TUNEL染色检测细胞凋亡;应用荧光实时定量PCR(QPCR)和Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和HIF-1α的mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,低氧处理能明显抑制细胞的增殖,且抑制作用随着低氧处理时间的延长而增强(P<0.05);低氧处理细胞后凋亡率明显增加,且呈时间依赖性(P<0.05);QPCR和Western blot结果显示,低氧处理组细胞Caspase-3、Bax的mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.05),Bcl-2则明显下降(P<0.05),Bcl-2/Bax比值显著降低,且呈时间依赖性(P<0.05)。低氧呈时间依赖性上调HIF-1α的mRNA和蛋白水平(P<0.05)。结论低氧能促进人脐静脉内皮细胞ECV304细胞凋亡,其机制可能与HIF-1α表达上调及Bcl-2的表达降低、Caspase-3和Bax的表达升高有关。     

dn HIF-1对宫颈癌细胞生物学行为的影响

目的研究抑制性缺氧诱导因子-1α(dn HIF-1α)对人宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响,探讨HIF-1α在SiHa细胞的血管生成、缺氧保护、凋亡、增殖过程中的作用。方法将表达dn HIF-1α的重组质粒pcDNA3.1-dn HIF-1α转染入SiHa细胞,采用免疫细胞化学法和Western Blotting检测dn HIF-1α转染SiHa细胞后其HIF-1α与血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的变化;CoCl2化学缺氧法处理细胞,MTT法测定细胞增殖情况,原位缺口末端标记法检测细胞凋亡情况,同时与pcDNA3.1组和未转染组进行比较。结果重组质粒pcDNA3.1-dn HIF-1α转染SiHa细胞后,其HIF-1α蛋白表达水平与其它两组相比差异无统计学意义,而VEGF蛋白表达水平有较明显的降低(P<0.05)。转染dn HIF-1α的细胞,常氧培养和CoCl2诱导的化学缺氧条件下其增殖能力均低于其他两组(P<0.05),CoCl2处理后细胞凋亡增加,与其他两组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论dn HIF-1α抑制SiHa细胞的增殖并促进CoCl2化学缺氧引起的细胞凋亡,同时能降低VEGF蛋白的表达。提示dn HIF-1α可望在宫颈癌治疗中发挥作用。     

dn HIF-1α对宫颈癌细胞生物学行为的影响

目的 研究抑制性缺氧诱导因子-1α(dn HIF-1α)对人宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响,探讨HIF-1α在SiHa细胞的血管生成、缺氧保护、凋亡、增殖过程中的作用.方法 将表达dn HIF-1α的重组质粒pcDNA3.1-dn HIF-1α转染入SiHa细胞,采用免疫细胞化学法和Western Blotting检测dn HIF-1α转染SiHa细胞后其HIF-1α与血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的变化;CoCl2化学缺氧法处理细胞,MTT法测定细胞增殖情况,原位缺口末端标记法检测细胞凋亡情况.同时与pcDNA3.1组和未转染组进行比较.结果 重组质粒pcDNA3.1-dn HIF-1α转染SiHa细胞后,其HIF-1α蛋白表达水平与其它两组相比差异无统计学意义,而VEGF蛋白表达水平有较明显的降低(P<0.05).转染dn HIF-1α的细胞,常氧培养和CoCl2诱导的化学缺氧条件下其增殖能力均低于其他两组(P<0.05),CoCl2处理后细胞凋亡增加,与其他两组相比,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 dn HIF-1α抑制SiHa细胞的增殖并促进CoCl2化学缺氧引起的细胞凋亡,同时能降低VEGF蛋白的表达.提示dn HIF-1α可望在宫颈癌治疗中发挥作用.     

RNA干扰沉默缺氧诱导因子-1α对胃癌细胞生物学行为的影响

目的:观察RNA干扰沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对胃癌细胞增殖﹑凋亡﹑侵袭性的影响并探讨其可能的分子机制。方法:将HIF-1α短发夹RNA(shRNA)重组质粒pGCsi-shHIF-1α稳定转染人胃癌细胞SGC-7901;采用RT-PCR和Western blot法检测HIF-1α mRNA、蛋白表达水平,Western blot法检测葡萄糖转运蛋白1(Glut-1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及趋化因子受体CXCR4蛋白表达;MTT法、流式细胞仪、transwell试验分别检测转染细胞的增殖、凋亡及侵袭迁移能力。结果:稳定转染pGCsi-shHIF-1α后,SGC-7901细胞HIF-1α表达在mRNA及蛋白水平均受到明显抑制,Glut-1﹑MMP-2﹑CXCR4蛋白表达较对照组降低;细胞增殖能力较对照组明显降低,细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05);细胞体外侵袭迁移能力受到明显抑制(P<0.01)。结论:pGCsi-shHIF-1α能有效沉默胃癌细胞SGC-7901 HIF-1α基因表达,抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭并诱导其凋亡,提示HIF-1α可能通过上调Glut-1﹑MMP-2和C...     

miR-155-5p mimic靶向HIF-1α对非小细胞肺癌A549细胞生长和运动能力的调节作用和机制

【摘要】 目的 探讨miR-155-5p mimic靶向缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）对非小细胞肺癌A549细胞生长和运动能力的调节作用和机制。 方法 取对数期生长的A549细胞,将未经转染的细胞设为Control组,miR-155 mimic及HIF-1α分别转染至A549细胞,设为miR 155 mimic组和HIF-1α组;再将两者共同转染于A549细胞,设为mimic+HIF-1α组。采用荧光素酶报告基因检测miR 375与SLC7A11的靶向关系,利用RT PCR检测各组细胞miR 155-5p及HIF-1α mRNA表达水平,Edu染色检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室实验检测细胞侵袭,Western blot检测细胞中各蛋白表达。结果 HIF-1α是miR 155-5p-mimic的靶向基因。与Control组相比,miR-155-mimic组HIF-1α-mRNA水平、HIF-1α和Ki67蛋白表达量及增殖细胞数、侵袭细胞数及划痕愈合率均降低（P＜0.05）,HIF-1α组HIF-1α mRNA水平、HIF-1α和Ki67蛋白表达量及增殖细胞数、侵袭细胞数及划痕愈合率均升高（P＜0.05）。与HIF-1α组相比,mimic+HIF-1α组HIF-1α mRNA水平、HIF-1α和Ki67蛋白表达量及增殖细胞数、侵袭细胞数及划痕愈合率均降低（P＜0.05）。与Control组相比,miR-155-mimic组N cadherin、VEGF、VEGFR2、P38蛋白表达量降低,E cadherin蛋白表达量升高（P＜0.05）,HIF-1α组N cadherin、VEGF、VEGFR2、P38蛋白表达量升高,E cadherin蛋白表达量降低（P＜0.05）。与HIF-1α组相比,mimic+HIF-1α组N cadherin、VEGF、VEGFR2、P38蛋白表达量降低,E cadherin蛋白表达量升高（P＜0.05）。结论 miR-155-5p可通过靶向抑制HIF-1α表达抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭及迁移,其作用机制可能与抑制上皮间质转化及VEGF/P38通路相关。