HepG2、Hep3B细胞中肿瘤干细胞相关标志分子的表达

目的富集培养肝癌干细胞,研究肝癌干细胞相关标志物CD90、CD133、八聚体4(Oct4)和ATP结合盒转运蛋白ABCG2在肝癌细胞HepG2、Hep3B中的表达,并初步分析其意义。方法使用流式细胞仪从肝癌细胞(检测HepG2、Hep3B两种细胞系)中分选肝癌干细胞并行无血清成球培养。设肝癌细胞组为对照组。单细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力。分别给予肝癌细胞及肝癌干细胞阿霉素处理,MTT法测阿霉素处理后各组细胞的存活率,Real-time PCR及Western blot分别检测各组细胞CD90、CD133、Oct4和ABCG2 mRNA及蛋白水平的表达。结果肝癌干细胞单个细胞增殖能力强于肝癌细胞,克隆形成分析显示培养第14天克隆形成率Hep3B细胞组低于Hep3B CSCs组[8/27(30%)vs 12/23(52%),P<0.05];HepG2细胞组克隆形成率也低于HepG2 CSCs组[7/38(18%)vs 9/26(35%),P<0.05]。用阿霉素处理肝癌细胞及肝癌干细胞48 h后,MTT法测定结果显示肝癌干细胞组细胞活性显著高于对照组(P<0.05):HepG2细胞组细胞活性为(38.17±6.92)%、HepG2 CSCs组为(69.88±5.43)%;Hep3B细胞组(50.16±4.89)%,Hep3B CSCs组为(78.53±7.86)%。Real-time PCR结果显示肝癌干细胞组中CD90、CD133、Oct4及ABCG2基因mRNA表达较亲代细胞组显著上调(P<0.05)。Western blot结果显示肝癌干细胞组Oct4及ABCG2蛋白水平显著上调,与亲代细胞组间表达差异有显著性(P<0.05)。结论肝癌干细胞相关标志CD90、CD133、Oct4及ABCG2均高表达于肝癌干细胞,并且Oct4及ABCG2基因的高表达有可能与肝癌干细胞耐药性相关。     

17-DMAG对肝癌HepG2细胞的作用研究

目的研究HSP90新型抑制剂17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-dimethy-laminoethylamino-17-demethoxygeldanamycin,17-DMAG)对肝癌细胞株HepG2增殖及凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨。方法 MTT比色法检测不同浓度的17-DMAG及5 mg/L的DDP对HepG2细胞的生长抑制率;Annexin V-FITC/PI双染法检测经17-DMAG及DDP作用后HepG2细胞凋亡率的变化。结果 MTT法显示17-DMAG能抑制肝癌HepG2细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖性。250 nmol/L的17-DMAG低浓度水平较DDP组对HepG2细胞的抑制率明显增高(P<0.05)。光学显微镜观察17-DMAG作用48 h后HepG2细胞密度减低,细胞体积变小,随着药物浓度增大,细胞数目明显减少。Annexin-FITC/PI双染法检测结果显示,400 nmol/L 17-DMAG干预48 h后细胞早期凋亡率为(22.42±1.83)%,5 mg/L顺铂干预48 h后细胞早期凋亡率为(6.50±1.20)%,未干预组48 h后细胞早期凋亡率为(0.58±0.49)%,表明17-DMAG能诱导HepG2细胞凋亡,且17-DMAG组凋亡率明显高于5 mg/L顺铂组及未干预组(P<0.05)。结论热休克蛋白90抑制剂17-DMAG呈时间-剂量依赖性抑制肝癌HepG2细胞增殖,随着药物浓度的加大,作用时间的延长,细胞增殖能力逐渐下降,并且能诱导HepG2肝癌细胞的凋亡。17-DMAG抑制肝癌细胞的作用较DDP强。     

饥饿诱导DRAM介导的自噬与HepG2和Hep3B细胞凋亡的关系

目的探讨饥饿诱导损伤调节自噬调控基因(DRAM)介导的自噬在HepG2细胞和Hep3B细胞凋亡中的作用。方法 HepG2细胞和Hep3B细胞经饥饿处理后,观察DRAM的表达和自噬的发生;利用DRAM小干扰RNA(siRNA)阻断DRAM,观察饥饿诱导的自噬水平;采用Calcein AM/PI染色,观察DRAM siRNA对饥饿引起的细胞凋亡的影响。结果经饥饿处理后12、24、36h,HepG2细胞和Hep3B细胞内DRAMmRNA均显著高于处理前(P﹤0.001),细胞凋亡明显增加(P﹤0.01),但两种细胞系间细胞凋亡计数的差异无统计学意义。DRAM siRNA阻断DRAM的功能后,HepG2和Hep3B细胞自噬减少,但对饥饿引起的细胞凋亡没有明显影响。结论 DRAM参与了饥饿诱导的自噬,可能不是饥饿引起肝癌细胞凋亡的机制。     

三氧化二砷诱导肝癌细胞HepG2凋亡作用

目的 探讨三氧化二胂（As2O3)诱导肝癌细胞HepG2凋亡作用。方法 应用普通光学显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪观察As2O3对HepG2细胞株的形态学改变和诱导凋亡率。结果 As2O3作用于细胞后,可看到较典型的细胞凋亡形态学改变,细胞体积缩小、染色质固缩成斑块状、呈半月型紧贴于核膜周边、核碎裂、凋亡小体形成等。AO／EB荧光染色法显示,细胞凋亡率为3．1％－9．1％。As2O3诱导HepG2细胞凋亡作用呈时间依赖性,最佳浓度为2μmol／L。流式细胞仪DNA直方图上呈现典型的亚二倍体凋亡峰。As2O3主要作用于细胞周期的G2／M期。结论 As2O3具有诱导HepG2细胞凋亡作用,具有治疗肝癌的潜在价值。     

三氧化二砷对肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3)对肝癌细胞的增殖抑制作用 .方法　应用台盼蓝拒染法、MTT比色法及细胞克隆形成试验 ,研究 As2 O3对肝癌 Hep G2细胞的增殖抑制和细胞毒作用 .结果　 As2 O3 能显著抑制肝癌细胞的生长 ,5μmol· L- 1 As2 O3 抑制程度明显强于 1μmol· L- 1 . 5和 1μmol· L- 1 As2 O3 作用后细胞克隆形成率分别为 (1.5±1.2 ) %和 (12 .3± 2 .2 ) % ,明显低于对照组的 (30 .0± 4.2 ) %(P<0 .0 1) .As2 O3对肝癌细胞有较强的细胞毒作用 ,且呈明显剂量和时间依赖性 ,其对肝癌细胞的杀伤率高于 5 -氟脲嘧啶 (5 - FU )和丝裂霉素 (MMC) ,但无显著性差异 ,As2 O3与 5 -FU及 MMC存在协同效应 ,联合应用杀伤率明显升高 .结论　 As2 O3具有明显的抑制肝癌细胞增殖作用 ,有必要进一步探讨其对肝癌的治疗价值     

Expression of Cyclooxygenase-2 in Ovarian Cancer Cell Lines

Summary： To investigate the expression of cyclooxygenase-2 （COX-2） in ovarian cancer cell lines, RT-PCR and immunocytochemistry were used to detect the expression of COX-2 in 5 ovarian cancer cell lines. The expression of COX-2 mRNA and protein was detected in all 5 cell lines. It is suggested that COX-2 is expressed in ovarian cancer cell lines, which provides a Basis for the chemoprevention of ovarian cancer.     

白头翁皂苷B4体外抑制人肝癌细胞HepG2增殖并诱导其凋亡

目的筛查中药白头翁抗肝癌有效成分,探索其抗癌机制。方法分离白头翁皂苷成分,以人肝癌细胞HepG2为作用靶细胞,MTT法测定其对细胞增殖的抑制,流式细胞术检测细胞周期阻滞,DNA片断化方法检测细胞凋亡情况,检测半胱氨酸蛋白酶3酶活性,从信号通路的角度探寻其诱导凋亡的机制。结果白头翁药材含量较高的成分白头翁皂苷B4对HepG2具有显著的抑制作用,最大抑制率达到71.5%;通过细胞周期分布分析,发现最多有83.2%的细胞被阻滞在G2期;用流式细胞仪研究其凋亡情况发现,在40 mg/mL药物浓度作用下,细胞凋亡与孵育时间呈现依赖关系,随着时间从0到48 h,初期凋亡比例从接近于零最高增长到14.3%,并且发生了DNA片段化;进一步研究发现,白头翁皂苷B4处理后的HepG2细胞半胱氨酸蛋白酶3活性显著升高。结论白头翁皂苷B4调控肝癌细胞周期,阻滞G2/M期更替,诱导细胞凋亡,是肝癌治疗的潜在候选分子,奠定了白头翁药材用于肝癌治疗的理论基础。     

下调肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达对人肝癌Hep3B细胞增殖及凋亡的影响

目的  观察肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2在人肝细胞癌细胞中的表达及下调后对增殖生存的影响并探讨其机制。方法  以蛋白免疫印迹法（Western blot）及实时定量逆转录聚合酶链反应法（qRT-PCR）检测肝细胞癌细胞株中肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达,并采用小干扰RNA转染Hep3B细胞株对肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达进行下调,Western blot和qRT-PCR检测转染效率、增殖凋亡相关基因表达;甲基噻唑基四唑检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果  肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2蛋白及mRNA在肝癌细胞株Hep3B、Huh7、HepG2、MHCC97H中均有表达,在Hep3B细胞株中表达量最高（F=5.742,P <0.01;F=3.452,P <0.05）;与空白对照（siNC）组比较,si肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2组中P-P21及磷酸化的蛋白激酶B蛋白表达下调（t =8.462,P <0.01;t =9.742,P <0.01）,P21、蛋白激酶B及Cleaved Capase-9蛋白表达上调（t =12.247,P < 0.001;t =6.452,P <0.01;t =11.634,P <0.001;t =12.273,P < 0.001）;与siNC组比较,在72 h和96 h,si肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达下调后Hep3B细胞增殖能力下降（t =8.176,P <0.01;t =2.246,P <0.05）,Hep3B停留在G1期比例增高,G2及S期比例减少（t =4.23,P <0.05;t =2.13,P <0.05;t =5.72,P <0.05）,凋亡率升高（t =8.633,P <0.01）。结论  下调肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达通过P21磷酸化及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路抑制肝细胞癌细胞增值及生存,可作为肝细胞癌治疗的靶向候选基因。

     

SEMA3B基因在不同病理类型肺癌细胞株中的表达及意义

目的:探讨SEMA3B基因在不同病理类型来源肺癌细胞株中的表达及意义.方法:采用实时定量逆转录聚合酶链反应(Real Time RT- PCR)和琼脂糖凝胶电泳方法,检测来源于不同病理类型肺癌细胞株中SEMA3B基因的表达水平.结果:在不同病理类型的细胞株中SEMA3B - mRNA均较正常肺癌组织显著低表达；在大细胞肺癌细胞株H 1 299、腺癌细胞株PC7、鳞癌细胞株LK2或LC/Sq1细胞中SEMA3B均表达缺失.结论:SEMA3B低表达或表达缺失可能是肺癌发生的机制之一,深入分析SEMA3B在肺癌细胞中与其它信号通路间的相互作用,将有利于我们阐明肺癌的发生.     

Cytohesin-2在肝癌细胞株中的表达及调控Hep3B细胞增殖作用的研究

目的探讨Cytohesin-2在肝癌细胞株中的表达情况以及对肝癌细胞增殖的影响.方法应用western blot法检测6种细胞株中Cytohesin-2的表达情况,筛选出高表达细胞株后,给予Cytohesin-2的特异性抑制剂SecinH3了解Cytohesin-2对Hep3B细胞增殖的影响.结果Cytohesin-2蛋白在Hep3B、HepG2、SMCC-7721、BEL-7402、Huh-7中的表达均高于人正常肝细胞系HL-7702中的表达.应用Cytohesin-2抑制剂SecinH3后,Hep3B细胞的增殖能力受到显著抑制,并且Hep3B细胞的凋亡数量明显增加.结论 Cytohesin-2在多种肝癌细胞系中均具有显著地高表达,并可以通过抑制Hep3B细胞凋亡的方式促进Hep3B细胞的增殖.Cytohesin-2可能作为肝细胞肝癌生物治疗的新的靶点.     

丙型肝炎病毒NS5B在Hep3B细胞的表达及活性分析

目的丙型肝炎病毒NS5B基因转染人肝癌细胞系Hep3B细胞,检测NS5B的表达与细胞内RNA聚合酶活性。方法使用脂质体把包含全长丙型肝炎病毒NS5B基因的重组载体pcDNA-5B转染到Hep3B细胞。RT-PCR和Wes-tern blot鉴定NS5B基因的表达,荧光素酶检测NS5B的细胞内RNA依赖的RNA聚合酶活性。结果RT-PCR和Westernblot发现转染NS5B基因的Hep3B细胞产生NS5B mRNA和NS5B蛋白,荧光素酶分析表明Hep3B细胞表达的NS5B蛋白具有细胞内RNA依赖的RNA聚合酶活性。结论人肝癌细胞系Hep3B细胞可以成功表达NS5B基因,且表达的NS5B蛋白具备细胞内RNA依赖的RNA聚合酶活性。     

卵巢癌肿瘤干细胞标记物及其靶向治疗

卵巢癌由于肿瘤干细胞的耐药性和增强肿瘤再生能力的特性,很难达到彻底治愈。随着卵巢癌肿瘤干细胞成功的分离和鉴定,如何识别卵巢癌肿瘤干细胞并对其进行靶向治疗显得尤为重要。本文将集中就卵巢癌肿瘤干细胞标记物及其新的治疗策略进行综述。     

MRP3在胰腺癌及胰腺癌细胞系的表达及意义

目的探讨多药耐药相关蛋白3（MRP3）在胰腺癌标本及多种肿瘤细胞中的表达及意义。方法利用免疫组织化学的方法检测30例胰腺癌与癌旁组织中MRP3的表达,同时通过RT—PCR检测7种肿瘤细胞及人胚肾293T细胞在mRNA水平的表达情况,采用抗MRP3的单克隆抗体通过流式细胞仪检测MRP3蛋白的表达。结果在各种胰腺癌标本中,MRP3在细胞核中的表达阳性细胞较正常组织明显增多（尸=0．03）,表达强度明显增强（P=0．015）,而在胞浆上二者表达差异无统计学意义（P=0．472）;MRP3mRNA在3种人胰腺癌细胞中皆有表达,在其他5种细胞无表达,MRP3蛋白在胰腺癌细胞系BxPC-3及AsPC-1中阳性率较高（分别为68．5％和33．6％）,而在PANC-1细胞中仅有5．4％表现为MRP3阳性。结论MRP3在胰腺癌中的表达与正常胰腺组织的差别主要在细胞核,而在培养细胞中可能以组织特异性的方式表达不同,BxPC-3细胞系是体外胰腺癌耐药研究的一种选择。     

苦参碱抑制人肝癌HepG2细胞增殖及其对VEGF、MMP-9表达的影响

目的研究苦参碱(matrine,Ma)抑制人肝癌HepG2细胞增殖及其对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶-9(matrix meta-lloproteinase-9,MMP-9)表达的影响,探讨其抗肝癌作用可能的分子机制。方法设Ma组和阴性对照组,Ma组设5个药物梯度,采用0.2 mg/ml、0.4 mg/ml、0.8 mg/ml、1.6mg/ml、3.2mg/ml浓度的苦参碱分别作用于对数生长期的HepG2细胞,MTT法检测苦参碱对细胞生长的抑制作用,Real-time PCR检测VEGF mRNA表达,蛋白质印迹法(Western Blot,WB)检测VEGF和MMP-9蛋白的表达。结果苦参碱能抑制人肝癌HepG2细胞增殖,呈时间和剂量依赖性。苦参碱能下调VEGF mRNA表达(P<0.05)和VEGF、MMP-9蛋白的表达(P<0.05)。结论苦参碱在体外能抑制肝癌细胞增殖,呈时间和剂量依赖性,其可能的分子机制是通过下调VEGF和MMP-9蛋白表达,抑制肝癌血管生成,进而起到抗肝癌作用。     

头颈部癌肿瘤干细胞候选标志物的研究进展

确定特异性的肿瘤干细胞标志物是筛选与鉴定肿瘤干细胞的首要工作.近年来利用肿瘤干细胞标志物已从多种上皮来源实体瘤中筛选出了肿瘤干细胞,但头颈部癌干细胞尚缺乏特异性表面标志物.本文就近年来头颈部癌肿瘤干细胞候选标志物的研究现状作一综述.     

Expression of cyclooxygenase-2 mRNA in drug-sensitive cell and drugresistant strains of ovarian cancer cell lines

Objective： To investigate the expression of cyclooxygenase-2 （COX-2） mRNA in drug-sensitive cell and drugresistant clones of ovarian cancer cell lines. Methods： RT-PCR and immunocytochemistry were used to investigate the expression of cyclooxygenase-2 in 3 clones drug-sensitive and 5 clones drug-resistant ovarian cancer cell. Results： Strong COX-2 mRNA expressions were detected in 3 clones of drug-sensitive cell and weak expressions were detected in 5 clones of drug-resistant cell. The protein expression of COX-2 in drug-sensitive cell was strongly positive reaction in immunocytochemistry stain and there was a weak positive reaction in 5 clones of drug-resistant cell. Conclusion： The expression of COX-2 mRNA in drug-sensitive cell strains is much higher than that in drugresistant strains of ovarian cancer cell lines, providing a basis of the chemoprevention for ovarian cancer.     

和厚朴酚对人肝癌HepG2细胞增殖及NF-kB mRNA表达的影响

目的探讨和厚朴酚对体外培养的人肝癌细胞HepG2的增殖抑制作用及其对NF-kB基因mRNA水平的影响。方法采用MTT法检测和厚朴酚对HepG2细胞增殖的影响。以RT-PCR方法研究和厚朴酚对NF-kB基因mRNA表达的影响。结果和厚朴酚使人HepG2细胞增殖率明显下降,且呈剂量依赖效应;NF-kB基因mRNA水平随和厚朴酚浓度升高而降低。结论和厚朴酚对人HepG2细胞增殖有抑制作用,并能下调NF-kB的表达,从而起到抗肿瘤的治疗作用。     

得力生对肝癌HepG2细胞株凋亡的影响及机制

目的：探讨中药得力生对肝癌HepG2细胞株凋亡率的影响及可能的分子机制．方法：以MTT法检测不同浓度得力生作用不同时间后肝癌HepG2细胞的增殖抑制率的变化,用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,用免疫细胞化学法、Western Blot法分别观察细胞凋亡相关因子Caspase-3,Caspase-9及Bcl-2（B细胞淋巴瘤2）的表达．结果：得力生对肝癌HepG2细胞株的增殖抑制作用随药物作用时间和浓度增大而增加;主要使HepG2细胞株阻滞于S期;与对照组比较,实验组细胞凋亡率增高（P〈0．01）;Caspase-3和Caspase-9在实验组表达增加,Bcl-2表达减少．结论：得力生可以增加HepG2细胞株凋亡率,其作用机制可能与线粒体凋亡通路有关．     

Effect and mechanism of Honokiol on proliferation of human liver cancer cell line HepG2

目的 探讨和厚朴酚对体外培养的人肝癌细胞HepG2的增殖抑制作用及其对NF-kB基因mRNA水平的影响.方法 采用MTT法检测和厚朴酚对HepG2细胞增殖的影响.以RT-PCR方法研究和厚朴酚对NF-kB基因mRNA表达的影响.结果 和厚朴酚使人HepG2细胞增殖率明显下降,且呈剂量依赖效应;NF-kB基因mRNA水平随和厚朴酚浓度升高而降低.结论 和厚朴酚对人HepG2细胞增殖有抑制作用,并能下调NF-kB的表达,从而起到抗肿瘤的治疗作用.     

3种膀胱癌细胞系CXCR4蛋白及mRNA的表达

目的:了解3株不同组织来源的膀胱癌细胞系中趋化因子受体CXCR4蛋白和mRNA的表达情况.方法:选取膀胱鳞状细胞癌细胞系SCaBER、移行细胞癌细胞系T24和5637,将细胞接种在鸡蛋膜上制成蜡块,用免疫细胞化学染色方法检测细胞中的CXCR4蛋白,用二步法半定量RT-PCR检测CXCR4 mRNA.结果:不同组织来源的膀胱癌细胞系中均有CXCR4蛋白和mRNA的表达.SCaBER、5637、T24中CXCR4蛋白分别呈强阳性、阳性、弱阳性表达;3种细胞中mRNA表达量分别为1.64±0.22、0.99±0.35、0.46±0.11,依次降低(P<0.05).结论:CXCR4在不同组织来源的膀胱癌细胞中都有表达,但表达强度不同.Expression of CXCR4 protein and mRNA in 3 bladder cancer cell lines in vitroFAN Changhui1,WEN Jianguo1,ZHU Zhiqiang1,ZHENG Xiangyu2,SUO Zhenhe1,LI Zhenzhen1