石蒜碱诱导结肠癌HT-29 细胞凋亡机制研究

目的 探讨石蒜碱诱导结肠癌HT-29 细胞凋亡及机制。方法 不同浓度的石蒜碱处理体外结肠癌HT-29 细胞,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪和Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡;Real time PCR实验检测Caspase-3、Bcl-2和Bax的mRNA水平;Western blot方法检测Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的水平。结果 48h时石蒜碱对HT-29 细胞IC50为8.878μmol/L;与对照组比较,1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L石蒜碱能诱导细胞凋亡(P<0.05),上调Caspase-3、Bax的mRNA和Caspase-3、Bax蛋白水平,下调Bcl-2的mRNA和Bcl-2蛋白水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 石蒜碱能通过调节Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达水平,抑制结肠癌HT-29 细胞生长,诱导细胞凋亡,具有明显的体内抗肿瘤作用。     

硒甲基硒代半胱氨酸联合紫杉醇通过内质网应激诱导乳腺癌细胞凋亡的分子机制

目的探讨硒甲基硒代半胱氨酸(Se-MSC)联合紫杉醇通过内质网应激诱导三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡及其分子机制。方法MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期;Western blot法检测蛋白表达水平,实时qRT-PCR法检测mRNA的表达水平。SPSS 19.0软件进行统计分析。结果MTT法显示Se-MSC和紫杉醇抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和人脐静脉内皮细胞HUVEC的增殖;Se-MSC 50μmol/L和紫杉醇10nmol/L作用24h对HUVECs无抑制作用,但对MDA-MB-231细胞具有抑制作用;两种药物联合效果较单独使用增强,Se-MSC联合紫杉醇将MDA-MB-231细胞抑制于G1期(P<0.05)。Se-MSC和紫杉醇联合刺激乳腺癌细胞MDA-MB-231可上调Bax、活化Caspase-9和Caspase-3表达,下调Bcl-2、前体caspase-3表达和Bcl-2/Bax比值(P<0.05),并激活内质网应激,上调GRP78、Caspase-4和CHOP的mRNA表达。结论Se-MSC联合紫杉醇通过抑制MDA-MB-231细胞增殖,上调Bax、Caspase-9和Caspase-3表达,下调Bcl-2、Pro caspase-3并激活内质网应激,可推测Se-MSC联合紫杉醇诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡,但需要进一步验证。     

穿心莲内酯诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及其机制

目的:明确穿心莲内酯诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及其机制.方法:体外培养人宫颈癌HeLa细胞株,经穿心莲内酯处理后MTS法检测细胞的增殖情况,荧光显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡水平变化,蛋白印迹(Western blot)方法检测内质网应激相关蛋白CHOP、凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达变化.结果:穿心莲内酯可以剂量依赖地抑制HeLa细胞的增殖(P＜0.05),引起细胞凋亡相关的形态学变化,诱导细胞凋亡(P＜0.05),引起CHOP蛋白的表达上调,活化Caspase-3和Caspase-9蛋白.结论:穿心莲内酯可以通过内质网应激途径诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡.     

二甲基乙酰胺对人胚肺细胞凋亡及Bcl-2和Caspase-3表达的影响

目的探讨二甲基乙酰胺(DMAC)诱导人胚肺成纤维细胞(HELF凋亡)的可能机制。方法用MTT法检测细胞生长抑制率,用Hoechst染色法检测细胞凋亡,用Western blot法检测Bcl-2、Caspase-3蛋白表达。结果DMAC处理HELF细胞24 h均可诱导细胞发生凋亡,并呈现明显的剂量-效应关系;DMAC诱导HELF细胞凋亡过程中伴随着Bcl-2蛋白表达下降、Caspase-3蛋白表达增加。结论 DMAC可诱导HELF细胞凋亡,其机制可能与Bcl-2蛋白表达下降从而激活Caspase-3的表达有关。     

氢醌对人白血病细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响

目的 研究氢醌对白血病细胞株U937细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响。方法 用不同浓度的氢醌处理U937细胞24 h、48 h后,采用MTT法来检测细胞增殖抑制率;经瑞-吉染色后,观察细胞形态变化;采用流式细胞仪检测细胞凋亡;采用免疫印迹法检测Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达。结果 (1)U937细胞的增殖抑制率随氢醌作用时间及浓度的增加而增加,呈时间-剂量依赖性(P<0.05);(2)氢醌作用后,部分细胞体积增大,胞浆中有空泡,胞核发生畸形;(3)流式细胞术结果显示,细胞凋亡率随着氢醌作用时间及浓度的增加而增加,呈时间-剂量依赖性(P<0.05);(4)免疫印迹结果显示,与空白组相比较,染毒48h时,细胞Bax蛋白的表达量增加(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达量减少(P<0.05),Bcl-2/Bax比值下降(P<0.05),染毒24 h时,细胞Caspase-3蛋白的表达量增加(P<0.05);与染毒24 h各组相比较,染毒48 h时细胞Caspase-3蛋白的表达量随时间延长呈增加趋势(P<0.05)。结论 氢醌可以诱导U937细胞凋亡,其机制可能与调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达有关。     

沉默信息调节因子1小干扰RNA诱导前列腺癌细胞PC3细胞凋亡

摘要:目的　观察沉默信息调节因子1（SIRT1）小干扰RNA（siRNA）对前列腺癌细胞PC3细胞生长增殖、DNA合成、细胞凋亡和Bcl-2和Bax蛋白的表达变化,探讨SIRT1在前列腺癌发生中的可能机制。方法　体外培养PC3细胞,分空白对照组（mock组）,转染阴性对照组（scramble siRNA组）和SIRT1 siRNA转染组;Western blot检测PC3细胞中SIRT1的干涉效能;MTT法测定PC3细胞的增殖率;BrdU掺入法测定DNA合成;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测PC3细胞中细胞凋亡关键调控因子Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果　与对照组比较,SIRT1 siRNA组SIRT1蛋白表达降低（P＜0.01）,PC3细胞的增殖和DNA合成明显受抑制（P＜0.01）,细胞凋亡比例增加（P＜0.01）,Bcl-2蛋白表达减少,Bax的表达增加。结论　下调SIRT1的表达抑制细胞增殖和DNA合成,诱导前列腺癌PC3细胞发生凋亡,其机制可能与改变细胞凋亡关键调控因子Bcl-2和Bax的蛋白表达相关。     

小檗碱对金黄色葡萄球菌诱导的ECV-304细胞凋亡相关基因的影响

目的：研究小檗碱对金黄色葡萄球菌（S.aureus）诱导ECV-304细胞内凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的调节作用。方法：小檗碱（Berberine,BBR）预处理ECV-304细胞2h后,用S.aureus感染细胞,采用半定量RT-PCR及Western-blot法检测金黄色葡萄球菌感染后ECV-304细胞内Bcl-2、Bax和Caspase-3的mRNA及蛋白表达水平。结果：小檗碱预处理ECV-304后再感染S.aureus可显著性增加凋亡相关细胞因子Bcl-2mRNA水平及蛋白表达量,而Bax和Caspase-3表达下调。结论：小檗碱可以调节S.aureus诱导的ECV-304细胞内凋亡相关基因的表达,抑制ECV-304细胞凋亡。     

上调HCCR-2基因表达对乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的利用细胞转基因技术探讨人宫颈癌癌基因-2(HCCR-2)对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能的分子机制。方法经脂质体介导将含有HCCR-2真核表达质粒转染人乳腺癌MCF-7细胞株,采用G418筛选阳性细胞克隆及Western blot鉴定;Western blot检测阳性细胞克隆Bcl-2、Bax蛋白表达改变;流式细胞仪检测细胞凋亡率;噻唑盐(MTT)比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性。结果成功建立高表达HCCR-2的阳性MCF-7细胞克隆(M-23),并证实其Bcl-2蛋白表达与细胞增殖活性均显著增高,而Bax蛋白表达与细胞凋亡显著降低。结论上调MCF-7细胞HCCR-2基因后,细胞增殖活性增加,细胞凋亡降低,其作用机制与Bcl-2表达增加而Bax表达降低。     

原花青素对硫酸镍染毒大鼠肝脏细胞Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的观察原花青素对硫酸镍染毒大鼠肝脏细胞凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,探讨原花青素在拮抗镍诱导肝细胞凋亡中发挥的作用及可能的调控机制。方法选择健康Wistar雄性大鼠40只,每组8只,硫酸镍模型组给予硫酸镍2.50mg/kg腹腔注射染毒及生理盐水灌胃处理,原花青素干预组在用硫酸镍2.50mg/kg腹腔注射染毒的同时,给予原花青素水溶液1.25、2.50、5.00mg/kg等容积灌胃处理,1次/d,连续30d。采用Western Blot技术检测各组大鼠肝脏细胞中Caspase-3、Bcl-2及Bax的蛋白表达水平。结果原花青素可拮抗硫酸镍染毒大鼠肝脏细胞中Caspase-3的活化,并引起Bcl-2蛋白表达量的增强及Bax蛋白表达量的减弱,且Bax/Bcl-2比值随着原花青素干预剂量的增加呈下降趋势,其中原花青素1.25mg/kg剂量组Pro-Caspase-3活性、5.00mg/kg剂量组Cleaved-Caspase-3活性与硫酸镍模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05);原花青素1.25mg/kg剂量组Bcl-2蛋白表达量、1.25和5.00mg/kg剂量组Bax/Bcl-2比值与硫酸镍模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论原花青素可拮抗硫酸镍诱导的大鼠肝脏细胞凋亡,其机制可能与拮抗Caspase-3蛋白活化、并抑制Bcl-2蛋白表达的下调和Bax蛋白表达上调有关。     

铜绿假单胞菌制剂经由甘露糖依赖方式影响人宫颈癌Hela细胞株的生长研究

目的 研究铜绿假单胞菌制剂(pseudomonas aeruginosa with mannose sensitive hemagglutination pili,PAMSHA)由甘露糖依赖方式影响Bad、Bax及Bcl-2的表达进而影响癌细胞的增殖和细胞周期进程,为治疗宫颈癌的新的生物制剂提供依据. 方法 采用单独处理PA-MSHA或甘露糖与PA-MSHA联合处理宫颈癌Hela细胞,随后采用MTT法检测细胞增殖,流式检测细胞周期,荧光定量PCR和western blot检测凋亡抑制蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bad、Bax的表达变化. 结果 PA-MSHA单独处理宫颈癌Hela后细胞增殖减慢,细胞周期阻滞在G0/G1期,同时荧光定量PCR和western blot检测显示促凋亡蛋白Bad、Bax的表达增加而凋亡抑制蛋白Bcl-2表达减少.而甘露糖与PAMSHA共培育组与空白组对比在细胞增殖、细胞周期及凋亡蛋白表达上差异无统计学意义. 结论 PA-MSHA可以影响Bad、Bax及Bcl-2的表达进而影响癌细胞的增殖和细胞周期进程,且这种作用为甘露糖敏感型,该结果为其成为治疗宫颈癌的新的生物制剂提供了可靠依据.     

茶多酚对ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用

目的:探讨茶多酚(teapolyphenols,TP)对氧化型低密度脂蛋白(oxidizedlowdensitylipoprotein,ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcell,HUVEC)凋亡的抑制作用及其机制。方法:实验分为四组:TP(25μg/ml)组、ox-LDL(200μg/ml)+TP(25μg/ml)组、ox-LDL(200μg/ml)组、对照组(等体积溶剂)。采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞活性、吖啶橙荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化,Westernblotting分析Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白的表达。结果:ox-LDL可明显抑制HUVEC细胞增殖,TP与ox-LDL共同加入后,细胞增殖率明显上升,与ox-LDL组相比差异显著(P<0.05)。ox-LDL可诱导细胞发生凋亡,而TP能减弱其作用。Westernblotting结果:ox-LDL下调HUVEC细胞Bcl-2表达、上调Bax和caspase-3表达,TP与ox-LDL共同加入后,Bcl-2表达升高,Bax和caspase-3表达下降。结论:茶多酚对ox-LDL诱导的HUVEC凋亡具有抑制作用,且与上调Bcl-2蛋白和下调Bax和caspase-3蛋白表达有关。     

卵巢颗粒细胞高尔基体磷酸化蛋白3表达对颗粒细胞凋亡及卵母细胞发育潜能的影响

目的:探讨卵巢颗粒细胞高尔基体磷酸化蛋白3(Golgi phosphoprotein 3,GOLPH3)表达对颗粒细胞凋亡及卵母细胞发育潜能的影响。方法:收集2016年5月—2017年4月因输卵管性不孕行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕的80例患者的卵巢颗粒细胞,根据妊娠结局分为临床妊娠组40例、未妊娠组40例。采用免疫细胞化学、蛋白质印迹(Western blotting)方法检测2组患者颗粒细胞GOLPH3、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达,采用实时聚合酶链反应(real-time PCR)方法检测2组患者GOLPH3、Bcl-2、Bax、Caspase-3基因表达,并进行相关性分析。结果:GOLPH3、Bcl-2、Bax、Caspase-3在2组颗粒细胞中均有表达,其中临床妊娠组GOLPH3、Bcl-2的表达高于未妊娠组(P0.05),而Bax、Caspase-3的表达低于未妊娠组(P0.05)。相关性分析显示,GOLPH3表达与Bcl-2表达呈显著正相关(P0.001),与Bax、Caspase-3表达呈显著负相关(均P0.001),与优质胚胎数、优质囊胚数、可利用胚胎数呈显著正相关(均P0.001)。结论:卵巢颗粒细胞中GOLPH3表达水平可能通过Bcl-2、Bax、Caspase-3凋亡信号转导通路调控颗粒细胞凋亡作用,并进而对卵母细胞的发育潜能产生影响。     

COX-2及凋亡基因表达在二十二碳六烯酸抑制人胰腺癌细胞体外增殖中的变化

目的研究COX-2和凋亡相关基因Bcl-2、Bax在二十二碳六烯酸(DHA)抑制人胰腺癌细胞体外增殖中表达的变化,探讨DHA抑制肿瘤细胞的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验、流式细胞技术对细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期以及肿瘤相关蛋白COX-2和凋亡基因Bcl-2、Bax进行分析。结果DHA能以时间-剂量依赖关系抑制人胰腺癌细胞增殖,同时诱导细胞凋亡。DHA对正常人成纤维细胞的增殖无明显影响。流式细胞仪检测显示:G0-G1期细胞比例增高,S期细胞比例下降。DHA作用24h后,胰腺癌细胞的COX-2、Bcl-2、Bax蛋白表达下降。结论DHA下凋COX-2、Bcl-2、Bax的表达可能是其抑制胰腺癌细胞增殖的作用机制之一。     

The role of dietary fatty acids in predicting myocardial structure in fat-fed rats

Background

The purpose of this study was to identify the affect on the proliferation Eca-109 cells treated with oxidized low-density lipoprotein (ox-LDL) combined with adriamycin (ADM).

Methods

Eca-109 cell were cultured in the presence of oxLDL/ADM, and cell proliferation tested by MTT and cell apoptosis was monitored by the proportion of apoptosis and cell cycle by flow cytomester. We simultaneously evaluated the level of associated- apoptosis Bcl-2, Bax, and Caspase-3 gene mRNA and protein.

Results

OxLDL were cytotoxic and activate apoptosis. OxLDL combined with ADM significant enhanced the proportion rate of apoptosis on a time and dose dependency. The expressions of the inhibiting apoptosis Bcl-2 gene mRNA and protein were down regulated, whereas, the expressions of the promoting apoptosis Bax, and Caspase-3 genes mRNA and protein were up regulation.

Conclusion

These results suggested that oxLDL have cytotoxicity and activate apoptosis on the Eca-109 cells. OxLDL combined with ADM have a synergistic effect on the apoptosis induced Eca-109 cells. Furthermore, oxLDL may contribute to the improvement of clinical chemotherapy of cancer need to make further investigation.     

维生素C对脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导的单个核细胞凋亡及增殖抑制作用的影响

目的探讨维生素 C(vitamin C,VC)预处理对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)诱导的人外周血单个核细胞(human peripheral blood mononuclear cells,HPBMC)凋亡及其相关基因表达和增殖抑制作用的影响。方法采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)和蛋白印迹(Western blotting)方法研究不同剂量 VC 预处理后,DON 对 HPBMC 凋亡及相关基因 Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达影响的变化,同时观察 VC 预处理对 DON 引起的增殖抑制作用的影响。结果FCM 检测结果表明,终浓度为2000μg/L 的 DON 可诱导体外培养的 HPBMC 凋亡,其凋亡率为(28.82±1.67)%,25μmol/L VC 预处理可明显抑制 DON 诱导的体外培养 HPBMC 凋亡(22.39±1.05)%,P<0.05,而100μmol/L VC 预处理则可明显增高 DON 诱导的 HPBMC 凋亡(36.07±2.92)%,P<0.05。Western blotting 分析结果表明,25μmol/L VC 预处理可明显降低 DON 诱导的HPBMC Bax 和 caspase-3蛋白高表达,同时使 DON 抑制的 Bcl-2蛋白表达明显升高。100μmol/L VC预处理可明显促进 DON 诱导的 Bax 和 Caspase-3蛋白的高表达,但对 DON 抑制的 Bcl-2表达无明显影响。不同剂量 VC(25μmol/L 和100μmol/L)预处理均可降低 DON 对 HPBMC 增殖的抑制作用(P<0.05),但不同剂量 VC 之间没有显著差异。结论 25μmol/L VC 预处理可一定程度地抑制DON 诱导的 HPBMC 亡及凋亡相关基因的异常表达,而100μmol/L VC 则促进 DON 诱导的HPBMC 凋亡。不同剂量 VC 预处理可以明显降低 DON 对 HPBMC 的增殖抑制作用。     

DIM联合顺铂诱导人卵巢癌细胞SK-OV-3凋亡机制的研究

目的:探讨顺铂(cis-diamminedichlorop latinum DDP)和3,3-二吲哚基甲烷(3,3-diindolylmethane,DIM)联合应用诱导人卵巢癌细胞SK-OV-3凋亡的机制。方法:采用免疫组化技术观察细胞内caspase3蛋白的表达,利用RT-PCR和western blot检测bcl-2、caspase3和caspase9基因和蛋白表达变化。结果:细胞培养及免疫化学染色可见各给药组与对照组比较均有不同程度抑SK-OV-3细胞增殖并诱导其凋亡作用;RT-PCR结果显示各给药组均能使caspase3和caspase9基因表达上调,bcl-2表达下调;westernblot结果表明各给药组与对照组相比caspase3和caspase9蛋白表达上调,bcl-2表达下调,且0.4mg.L-1DDP+60μmol.L-1DIM联合应用与10倍剂量DDP(4mg/L-1)单独应用效果相同。结论:DIM与DDP均可抑制PC-3细胞增殖并诱导其凋亡;其细胞凋亡机制可能与上调caspase3、caspase9基因表达,下调bcl-2表达有关;DIM与DDP联合抗瘤具有明显的减毒增效作用。