健胎液对围着床期小鼠子宫炎性细胞因子IL-1的影响

目的:探讨健胎液对胚胎着床障碍小鼠着床期子宫炎性细胞因子IL-1β及IL-1RⅠ的影响。方法:建立胚胎着床障碍的动物模型,分为三组,观察各组着床率和着床点数,妊娠第5天分别检测各组小鼠子宫内膜IL-1β的蛋白含量,以及子宫内膜IL-1β、IL-1RⅠ的mRNA水平。结果:模型组胚胎着床数、着床位点数与正常组比较显著降低(P0.01);中药组胚胎着床数、着床位点数与模型组比较明显升高(P0.05),但仍低于正常组(P0.05)。模型组子宫内膜IL-1β蛋白量同正常组、中药组比较明显升高,中药组IL-1β蛋白量同正常组比较无显著性差异。模型组IL-1β、IL-1RⅠ的mRNA表达水平同正常组比较显著升高,中药组IL-1RⅠ的mRNA表达水平同模型组比较明显降低,但仍比正常组水平高。结论:围着床期子宫内膜IL-1β、IL-1RⅠ参与胚胎着床的病理生理过程,健胎液可能通过调节IL-1表达,改善子宫内膜微环境,提高子宫内膜胚胎种植容受性,促进着床。     

健胎液对胚胎着床障碍小鼠子宫炎性细胞因子表达的影响

目的探讨中药健胎液对子宫内膜着床微环境改善的可能分子机制。方法 90只受孕小鼠随机分为正常组、模型组、中药组各30只,模型组和中药组采用吲哚美辛皮下注射建立胚胎着床障碍小鼠模型。中药组从妊娠第1天开始用健胎液(144%无菌煎剂)灌胃,每天每只0.5ml;模型组和正常组每天用等量生理盐水灌胃。在妊娠第5天检测各组小鼠(每组10只)子宫内膜白介素-1β(IL-1β)、白介素1受体Ⅰ型(IL-1RⅠ)、白介素-6(IL-6)、白血病抑制因子(LIF)、集落刺激因子-1(CSF-1)mRNA水平,妊娠第8天检查各组小鼠(每组20只)子宫内胚胎发育情况,记录胚胎着床率和着床位点数。结果中药组和模型组的胚胎着床率、着床位点数同正常组比较显著降低(P0.01),中药组胚胎着床率、着床位点数同模型组比较明显升高(P0.05)。与正常组比较,模型组IL-1β、IL-1RⅠ、IL-6、LIF、CSF-1 mRNA含量均显著升高(P0.01);与模型组比较,中药组IL-1β、IL-1RⅠ、IL-6、LIF、CSF-1 mRNA含量均显著降低(P0.05或P0.01)。结论中药健胎液通过降低胚胎着床障碍小鼠子宫内膜IL-1β、IL-1RⅠ、IL-6、LIF、CSF-1细胞因子的基因表达,改善子宫内膜微环境,促进着床。     

健胎液改善胚泡着床障碍模型小鼠实验研究

目的:观察中药健胎液对胚泡着床障碍模型小鼠胚泡着床以及子宫内膜形态学影响。方法:采用吲哚美辛引起的胚泡着床障碍动物模型,将实验动物分为正常组、中药组、模型组,观察妊娠第5天、第8天子宫内膜形态结构变化和妊娠第8天胚泡着床率、着床位点数。结果:中药组胚泡着床率、着床位点数同模型组比较明显升高。中药组妊娠第5天子宫内膜与模型组比较,内膜血管明显比模型组增加,炎性细胞明显减少,基质出现明显蜕膜样变,子宫内膜空泡、脂滴明显少于模型组。模型组妊娠第5天子宫内膜腔上皮受损,妊娠第8天腺上皮受损,中药组子宫内膜腔上皮、腺上皮均未见结构改变。结论:中药健胎液能改善子宫内膜微环境,促进胚泡着床。     

健胎液对小鼠着床期子宫内膜孕激素受体及mRNA的影响

目的:研究健胎液对胚泡着床障碍小鼠着床期子宫孕激素受体(PR)的影响.方法:将受孕小鼠随机分为正常组、模型组和中药组,采用米非司酮诱导小鼠胚泡着床障碍,予健胎液进行干预,于妊娠第8天处死小鼠,观察子宫内膜形态学变化,采用免疫组化技术检测子宫PR的表达,Western印迹和RT-PCR技术检测子宫PR及PR mRNA表达.结果:模型组子宫内膜发育不良,中药组子宫内膜的发育与正常组相似;中药组子宫内膜腺体、间质PR表达范围和强度均较模型组显著增高(P＜0.05),与正常组无显著性差异(P＞0.05);中药组PR蛋白及基因表达均较模型组显著提高(P＜0.05),与正常组无显著性差异(P＞0.05).结论:健胎液通过调节胚泡着床障碍小鼠子宫PR及mRNA的表达,促进子宫内膜发育,改善胚泡着床.     

二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫血管生成相关因子表达的影响

目的：探讨二补助育汤对胚胎着床障碍模型小鼠子宫内膜形态及血管生成素-1（Ang-1）mRNA、血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达和定位的影响。方法：24只ICR雌性小鼠随机分为空白组、模型组、戊酸雌二醇组、二补助育汤组,每组6只,用米非司酮建立胚胎着床障碍动物模型,各组给予相应药物灌胃,妊娠第5天处死小鼠后,检测各组妊娠率、平均着床位点数、子宫内膜Ang-1和VEGF mRNA表达量及其蛋白定位。结果：模型组小鼠平均胚胎着床位点数、Ang-1 mRNA、VEGF mRNA表达量明显低于空白组（均P<0.05）;与模型组比较,二补助育汤组平均胚胎着床位点数、Ang-1 mRNA、VEGF mRNA表达量显著提高（均P<0.05）。结论：二补助育汤可提高子宫内膜Ang-1和VEGF蛋白表达量,促进子宫内膜血管生成,从而提高子宫内膜容受性。     

健胎液对小鼠子宫内膜LIF表达的影响

目的 :探讨小鼠围着床期子宫内膜LIF的表达规律及健胎液对小鼠子宫内膜LIF表达的影响。方法 :小鼠胚胎着床障碍模型诱导方法及对各组小鼠干预处理同第一部分 ,取正常组、中药组、模型组小鼠妊娠第 5天子宫内膜 ,应用超敏免疫吸附法检测内膜LIF的表达情况。比较 3组小鼠子宫内膜LIF的表达情况 ,结合整合素α4,β3 亚基的表达情况 ,分析 3者在围着床期中表达的联系。结果 :中药组LIF的表达较模型组明显升高 (P <0 .0 5 ) ,模型组水平最低 ,明显低于正常组 (P <0 .0 1)。中药组LIF的表达水平与正常组相近 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 0 )。结论 :健胎液对小鼠围着床期子宫内膜的LIF的表达有促进作用 ,与健胎液对α4,β3 的表达影响相同。     

健胎液对胚泡着床障碍小鼠胚泡着床作用的研究

探讨健胎液(药物:桑寄生、丹参、当归、黄芪、川芎)对胚泡着床障碍小鼠胚泡着床及子宫内膜发育的影响.采用米非司酮诱导的小鼠胚泡着床障碍模型,予健胎液治疗,于妊娠第8天处死小鼠,观察胚泡着床率、平均着床胚泡数以及子宫内膜和卵巢的形态结构变化.结果:中药组着床率和平均着床胚泡数较模型组显著提高,与正常组无显著差异;模型组子宫内膜发育不良,中药组子宫内膜的发育与正常组相似;三组小鼠卵巢的形态结构变化无显著差异.提示健胎液能促进胚泡着床障碍小鼠胚泡着床,改善子宫内膜的发育.     

二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫内膜自噬作用的影响

目的 观察二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫内膜自噬作用的影响.方法 将24只ICR妊娠小鼠随机分为空白组、模型组、补佳乐组、二补助育汤组,每组小鼠6只.胚胎着床障碍小鼠模型采用米非司酮制备,每组予以相应药物灌胃,妊娠第5天脱颈处死.计算各组小鼠平均胚胎着床位点数,检测自噬标志物微管相关轻链蛋白3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin-1表达,透射电镜观察子宫内膜细胞中自噬小体的表达.结果 模型组平均着床位点数低于空白组(P<0.05),补佳乐、二补助育汤组高于模型组(P>0.05).各组小鼠子宫内膜细胞中均见自噬小体,空白组见少量自噬小体表达;模型组部分细胞有破坏、坏死,内膜发育不良,细胞内自噬小体多于其他组;补佳乐组和二补助育汤组子宫内膜腺体和血管较模型组丰富,细胞内自噬小体表达虽多于空白组,但较模型组少.模型组LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白水平均低于空白组,其中LC3-Ⅱ有显著差异(P<0.05);补佳乐组和二补助育汤组LC3-Ⅱ表达高于模型组(P>0.05);二补助育汤组Beclin-1表达高于模型组和补佳乐组(P<0.05).结论 二补助育汤能够通过调节子宫内膜自噬作用,维持细胞稳态,从而利于胚胎着床.     

五子衍宗丸对GnRHa控制性超促排卵小鼠着床期S100A11基因的调控

目的:研究中药五子衍宗丸对GnRHa长方案控制性超促排卵(COH)小鼠着床期S100A11表达的影响,探讨COH影响胚胎着床的机制,寻求有效改善COH低妊娠率的中药方剂。方法:将60只小鼠随机分成3组:模型组(GnRHa+HMG+HCG),中药组(五子衍宗丸+GnRHa+HMG+HCG),对照组(生理盐水)。观察小鼠阴栓率和着床期子宫胚胎着床数及着床率;应用免疫组化法、RT-PCR和Western blot方法分别检测小鼠着床期子宫内膜S100A11 mRNA及蛋白的表达。结果:模型组胚胎着床数高于对照组和中药组(P0.01),但胚胎着床率和妊娠率均明显降低(P0.05)。模型组着床期子宫内膜S100A11mRNA及蛋白表达下降,与对照组和中药组比较均有明显差异(P0.05)。结论:中药五子衍宗丸可上调因GnRHa长方案COH所致下降的S100A11基因的表达,提高子宫内膜容受性,改善小鼠妊娠率和胚胎着床率。     

补肾法、疏肝法对超促排卵大鼠子宫内膜组织形态及血管生成的影响

目的观察补肾法、疏肝法对超促排卵大鼠妊娠结局的影响及可能作用机制。方法将80只动情周期正常的雌鼠随机分为正常组、模型组、补肾组、疏肝组各20只。除正常组外,各组大鼠建立控制性超促排卵模型。造模第1天始补肾组给予补肾调经方混悬液(浓度2.78 g/ml),疏肝组给予逍遥丸混悬液(浓度0.162g/ml),均1 ml/(200 g·d)灌胃,模型组及正常组给予同等剂量蒸馏水灌胃,连续11天。比较各组大鼠血清雌二醇(E2)、孕酮(P)含量及子宫内膜雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)水平,HE染色测量子宫内膜厚度并观察子宫内膜形态,观察大鼠内膜胞饮突表达,检测子宫内膜血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及其mRNA表达,统计各组大鼠妊娠数、胚胎着床数。结果与正常组比较,模型组大鼠妊娠数、胚胎着床数减少,血清P含量及子宫内膜ER、PR蛋白表达,VEGF蛋白及其mRNA表达,子宫内膜厚度及螺旋动脉数量降低(P0.05或P0.01);与模型组比较,补肾组、疏肝组大鼠妊娠数及胚胎着床数增加,血清P含量及子宫内膜ER、PR蛋白表达,VEGF蛋白及其mRNA表达,子宫内膜厚度及螺旋动脉数量升高(P0.05),而补肾组和疏肝组大鼠组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论补肾法、疏肝法均能够增加超促排卵大鼠妊娠率及胚胎着床数,其作用机制可能与调节性激素水平及雌、孕激素受体,改善大鼠子宫内膜组织形态及血管生成有关。     

补肾助孕方、逍遥丸对超促排卵小鼠围着床期妊娠结局和子宫内膜容受性的影响

目的研究补肾助孕方、逍遥丸对超促排卵小鼠妊娠结局和子宫内膜容受性的影响及可能作用机制。方法将240只动情周期正常的昆明系雌性小鼠随机分为正常组、模型组、补肾组、疏肝组,每组各60只。除正常组,其余各组小鼠建立控制性超促排卵模型。造模第1天始补肾组、疏肝组分别给予补肾助孕方混悬液(浓度1.5 g/mL)和逍遥丸混悬液(浓度0. 09 g/mL),均0.4 mL/(30 g·d)灌胃,模型组及正常组给予同等剂量蒸馏水灌胃,连续11天。比较各组小鼠围着床期血清雌二醇(E_2)、孕酮(P)、NO含量及子宫内膜雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、血管内皮生长因子(VEGF)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白及其mRNA表达,测量子宫内膜厚度,观察小鼠内膜胞饮突表达,统计各组小鼠妊娠数、胚胎着床数。结果与正常组比较,模型组小鼠妊娠数、胚胎着床数减少(P0.05),同时模型组血清E_2、P降低,子宫内膜ER、PR蛋白,VEGF、eNOS蛋白及其mRNA表达,子宫组织匀浆内NO含量均降低(P0.05),子宫内膜厚度变薄,胞饮突发育不良;与模型组比较,补肾组、疏肝组小鼠妊娠数及胚胎着床数增加,血清E_2、P含量及子宫内膜ER、PR蛋白,VEGF、eNOS蛋白及其mRNA表达,子宫组织匀浆内NO含量均升高(P0.05),子宫内膜厚度增加,胞饮突发育接近正常组。结论补肾法、疏肝法均能够增加超促排卵小鼠妊娠率及胚胎着床数,其作用机制可能与调节雌、孕激素水平及其受体,影响VEGF、eNOS表达,调控NO释放,改善小鼠子宫内膜组织形态及血管通透性有关。     

健胎液对胚泡着床障碍小鼠雌、孕激素及其受体的影响

目的探讨健胎液促进胚泡着床障碍小鼠子宫内膜发育的机制。方法采用米非司酮诱导的小鼠胚泡着床障碍模型,予健胎液进行干预,于妊娠第8天处死小鼠,留取血清及子宫标本,采用放免法检测血清和子宫局部雌二醇(E₂),孕酮(P)含量,采用免疫组化技术检测子宫雌,孕激素受体(ER,PR)表达。结果各组血清和子宫组织E₂,P含量无显著差异(P>0.05);中药组子宫内膜腺体、间质ER,PR表达范围和强度均较模型组显著增高(P<0.05),与正常组无差异(P>0.05)。结论健胎液通过促进胚泡着床障碍小鼠子宫内膜腺体、间质的ER,PR表达,改善子宫内膜的发育,利于胚泡着床。     

补肾安胎中药对着床障碍小鼠炎性因子含量的影响

目的:研究补肾安胎中药对着床障碍小鼠炎性因子含量的影响。方法:将受孕大鼠随机分为正常组、模型组、保胎灵组和坤元汤组,从妊娠第1天开始,保胎灵组和坤元汤组分别用保胎灵和坤元汤灌胃0.3mL,连续灌胃6天,正常组和模型组予0.3mL生理盐水,第3、4天小鼠注射吲哚美辛油剂复制小鼠着床障碍模型,第6天末次给药后收集小鼠血清及子宫组织,使用试剂盒检测小鼠血清及子宫组织血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-10(IL-10)和一氧化氮(NO)的含量。结果:与模型组比较,坤元汤组小鼠子宫重量、子宫指数及着床位点数均提高(P<0.05);坤元汤明显降低着床障碍小鼠IFN-γ和NO含量(P<0.05),显著升高IL-10含量(P<0.05)。结论:补肾安胎中药坤元汤可能通过调节炎性因子IFN-γ、IL-10及NO的含量促进胚胎着床。     

益肾填精助孕法对肾虚胚胎着床障碍小鼠子宫内膜表面胞饮突表达的影响

目的:观察益肾填精助孕方药对肾虚胚胎着床障碍模型小鼠子宫内膜表面胞饮突表达的影响,探讨益肾填精助孕法对肾虚胚胎着床障碍改善的可能作用机制。方法:制作肾虚胚胎着床障碍小鼠病证结合模型,分别予益肾填精助孕中药低剂量、中剂量、高剂量、戊酸雌二醇及生理盐水灌胃,扫描电镜下观察子宫内膜表面胞饮突情况。结果:中药组中剂量及高剂量组小鼠子宫内膜细胞表面有大量发育中的胞饮突表达,而西药组表达胞饮突大小不一,略低于正常对照组。结论:益肾填精助孕中药能够改善肾虚胚胎着床障碍小鼠子宫内膜表面胞饮突的发育,有助于提高子宫内膜容受性。     

益肾填精助孕方药对肾虚胚胎着床障碍小鼠子宫内膜MMP-9及TIMP-3蛋白表达的影响

目的:观察益肾填精助孕方药仙子益真胶囊对肾虚胚胎着床障碍模型小鼠子宫内膜腺上皮细胞、腔上皮细胞和基质细胞MMP-9及TIMP-3的蛋白表达影响,探讨其可能作用机制。方法:建立肾虚胚胎着床障碍小鼠模型,分别予仙子益真胶囊低剂量、中剂量、高剂量、戊酸雌二醇片及生理盐水灌胃,免疫组化法检测MMP-9和TIMP-3的蛋白表达。结果:MMP-9蛋白及TIMP-3蛋白在模型组与正常组的子宫内膜腺上皮细胞、腔上皮细胞中表达有显著性差异(P<0.05)。MMP-9蛋白及TIMP-3蛋白在模型组与仙子益真胶囊各组的子宫内膜腺上皮细胞、腔上皮细胞中表达有显著性差异(P<0.05)。MMP-9蛋白及TIMP-3蛋白在仙子益真胶囊低、中剂量组小鼠子宫内膜腺上皮、腔上皮表达与戊酸雌二醇片组比较无显著性差异。TIMP-3蛋白在仙子益真高剂量组小鼠子宫内膜腺上皮、腔上皮表达与戊酸雌二醇片组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:益肾填精助孕方药可以改善着床障碍小鼠子宫内膜MMP-9、TIMP-3的表达,从而调节滋养细胞对子宫内膜的侵入程度,促进胚胎着床。     

健肾助孕方对着床障碍小鼠雌孕激素及子宫HOXA10表达的影响

目的:观察健肾助孕方对着床障碍小鼠血清雌孕激素浓度和子宫HOXA10表达的影响。方法:将30只孕鼠随机分为模型组3只、健肾助孕方低剂量组6只、健肾助孕方高剂量组6只、黄体酮组7只和正常对照组8只。从妊娠第1天开始,模型组、正常对照组每日给予生理盐水0.2 m L·只-1灌胃,黄体酮组皮下注射黄体酮溶液0.1 m L·只-1,健肾助孕方低剂量组、高剂量组每日灌胃0.2 m L·只-1。妊娠第4天皮下注射米非司酮诱导着床障碍小鼠模型。妊娠第8天处死小鼠,ELISA法检测血清中雌孕激素浓度,免疫组织化学法和Western blot法对子宫中HOXA10的表达和蛋白含量进行检测。结果:健肾助孕方低剂量组、高剂量组血清雌孕激素浓度较模型组明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。健肾助孕方高剂量组、黄体酮组子宫中HOXA10的表达显著增多,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05);健肾助孕方低剂量组、高剂量组、黄体酮组子宫中HOXA10的蛋白含量明显高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:健肾助孕方可以升调着床障碍小鼠血清雌孕激素水平,提高子宫中HOXA10的表达量,从而改善着床障碍小鼠的子宫内膜容受性,促进胚胎着床。     

补肾安胎方对胚泡着床障碍模型小鼠着床局部PGI2及其核受体的影响

目的 观察补肾安胎方对胚泡着床障碍小鼠着床局部前列环素I2（PGI2）及其核受体过氧化物酶体增殖激活因子受体δ（PPARδ）表达的影响。方法 将妊娠小鼠随机分为正常组、模型组和中药组(每天灌服补肾安胎液12.4 g/kg）,在妊娠第4、5、6、8天取3组小鼠妊娠子宫,采用放射免疫法测定PGI2含量,RT-PCR和免疫组织化学方法检测PPARδ mRNA及蛋白的表达。结果 模型组小鼠子宫内膜着床点PGI2含量明显低于正常组（P＜0.01）,而中药组PGI2含量较模型组显著增高（P＜0.01）。模型组小鼠子宫内膜中PPARδ的表达均滞后于正常组（P＜0.05）;小鼠子宫内膜中PGI2含量和PPARδ的表达正常组和中药组组间比较,差异无统计学意义。结论 补肾安胎方可能通过促进胚泡着床局部的PGI2及其核受体PPARδ的表达来改善胚泡着床障碍小鼠的胚泡着床。     

电针对COH小鼠子宫内膜IGF-1-MAPK/ERK1/2信号转导及胚胎着床的影响

目的观察电针对COH小鼠子宫内膜IGF-1-MAPK/ERK1/2信号转导的影响,探讨电针改善胚胎着床的作用机制。方法将昆明纯种性成熟雌性小鼠随机分成自然周期组、COH组、电针组、电针+BMS-536924组、电针+LY-294002组,每组20只,每组又分为供体鼠和受体鼠。采用控制性超促排长方案制备动物模型,并行胚胎移植,电针组、电针+BMS-536924组、电针+LY-294002组于HCG注射日行电针治疗,观察临床妊娠率和胚胎着床位点数,检测子宫内膜IGF-1mRNA、IGF-1R mRNA及p-IGF-1R、p-ERK1/2蛋白表达。结果 COH组妊娠率、平均着床位点数和子宫内膜IGF-1mRNA、IGF-1R mRNA及p-IGF-1R、p-ERK1/2蛋白表达均低于自然周期组,经电针治疗后,电针组、电针+LY-294002组各项指标均显著性增高。电针+BMS-536924组p-IGF-1R和p-ERK1/2蛋白表达虽较COH组增加,但仍显著性低于其他电针治疗组,且妊娠率、平均着床位点数未见改善。结论电针调控IGF-1改善COH小鼠胚胎着床可能与上调p-IGF-1R蛋白表达,激活MAPK/ERK1/2信号转导通路有关。