IL-6协同PHA对静止T淋巴细胞增殖的影响

本文研究了IL-6协同PHA对静止T淋巴细胞增殖的影响。PHA单独不能刺激处于静止期的T淋巴细胞发生增殖反应,但联合IL-6后能引起静止T淋巴细胞发生明显的增殖反应。此增殖反应不为抗IL-2aR的单克隆抗体anti-Tac所抑制,却被免疫抑制剂Cyclosporin A(CsA)所阻断,Cs A能抑制T淋巴细胞内同Ca~(2+)有关的信号传递以及后续的淋巴因子mRNA的表达。这表明在IL-6对T淋巴细胞的作用过程中,有一个Ca~(2+)参与的信号传递以及某种淋巴因子mRNA表达的过程。提示IL-6可能是通过诱导其它的生长因子的产生而作用于T淋巴细胞,而且这条作用途径可能是独立于传统的IL-2途径的。     

IL-1和TNF对PHA刺激T细胞增殖反应的协同作用

在PHA(1μg/ml)刺激下,IL-1或TNF均能诱发静止T细胞发生增殖反应,其最适浓度为IL-1(50U/ml)和TNF(200U/ml)。利用其最适浓度,联合作用于PHA刺激T细胞,其增殖反应增强了25％,但仍低于PHA联合10％的Mφm所诱发的增殖反应。单克隆抗体anti-Tac(p55)完全阻断了由PHA联合IL-1所诱发的增殖反应,但对PHA联合TNF所诱发的增殖反应只能部份地抑制。这些结果表明,TNF除了同IL-1一样具有通过IL-2途径来诱导T细胞活化外,还有着其他的途径,提示T细胞活化增殖的第二信号可由多种单核因子提供,而最大的增殖反应的发生,则是多种单核因子和其他因素协同作用的结果。     

正常人同活动性SLE患者的PHA刺激T细胞对IL-2/IL-4/IL-6/PMA反应性的比较

在PHA刺激下,IL-2/IL-4/IL-6诱发了正常人和活动性SLE患者的静止T细胞的增殖反应,而且两者的增殖反应的强度相同.然而,PHA联合PMA只能诱导正常人的静止T细胞发生增殖反应,对活动性SLE患者的静止T细胞却无作用。PMA是细胞内PKC的直接激活剂,由它提供的信号协同PHA提供的信号可以使T细胞活化增殖。因此,这些结果提示:活动性SLE患者在接受PHA刺激后其表达淋巴因子受体无异常,而在接受PMA提供的刺激信号方面有障碍,这可能与其细胞内PKC的活性化功能失调有关。     

丁酸钠及其G蛋白偶联受体对T淋巴细胞的调节作用

短链脂肪酸通常由肠道微生物对食物纤维的发酵而产生,已有报道其在免疫和炎症中起重要作用。本文研究丁酸钠通过其受体GPR43对T淋巴细胞的调节作用,探讨丁酸钠在T细胞水平的抗炎作用和机制。以Hut78和Jurkat细胞株为模型,用RT-PCR检测T细胞中GPR41和GPR43的表达情况。用实时荧光定量PCR检测PMA/Ionomycin诱导的T淋巴细胞经丁酸钠处理后IL-2和IL-4水平变化,并以ELISA等方法验证。通过RT-PCR以及胞内钙离子检测探究丁酸钠对T细胞的具体作用机制及作用靶标。结果显示,GPR41和GPR43在T细胞中存在表达且在PMA刺激后表达显著上升。丁酸钠能刺激胞内钙离子的释放,抑制IL-2、促进IL-4的产生,且这种调节作用不受Gαi抑制剂PTX影响。另外,丁酸钠可以显著抑制MOG诱导EAE小鼠脾脏淋巴细胞的体外增殖。这些结果说明,在T淋巴细胞中丁酸钠主要通过GPR43受体调节其细胞因子的产生,抑制炎症性T淋巴细胞的增殖从而发挥其抗炎功能。     

IL-12(细胞毒淋巴细胞成熟因子)对人淋巴细胞增殖的调节作用

IL-12是一种异二聚体细胞因子,它在诱导细胞毒效应细胞上与IL-2有协同作用。最初称之为细胞毒淋巴细胞成熟因子(CLMF),它能刺激PHA 活化的淋巴细胞增殖。此文进一步证实了IL-12在调节静止的和活化的PBMC 的增生作用,用有丝分裂原(mitogen)或IL-2活化PBMC 作试验证明了IL-12是活化的T 细胞和NK 细胞的生长因子,它可使活化的CD_4~+或CD_8~+T 细胞增殖,且不依赖于IL-2。     

IL-7是成熟T细胞的生长因子

T 细胞的增殖是正常与异常免疫应答的轴心之一。确定T 细胞生长因子活性的分子是必要的,因为调节T 细胞的生长在自身免疫或移殖中有实际意义。Namen 最早发现IL-7为原B 细胞生长因子,后来相继观察到它是胸腺细胞、小鼠成熟T 细胞及人B、T 前体细胞的生长因子。本文研究了IL-7对不同表型和功能T 细胞克隆生长增殖的影响,全部克隆(CD_8~+、CD_4~+、CD_4~-CD_8~-TCRαβ或TcRγδ)均与IL-7反应,但这些克隆对IL-7增殖活性通常低于IL-2,而与IL-4相近。IL-7也能诱导静止的新鲜PBMC 和T 细胞(E~+)增殖,其增殖方式与IL-2诱     

SEB活化的人外周血T细胞CD25,CD69的表达

本文用超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)诱导外周血淋巴细胞增殖。结果显示出微量超抗原能诱导外周血淋巴细胞的增殖,大量的增殖反应发生在SEB刺激后的第5天,增殖的细胞是CD4~+T细胞,它们由刺激前的27％增加到42％。外周血活化的T细胞不依赖外源性IL-2:大量内源性IL-2的存在抑制T细胞的增殖反应。伴随CD4~+T细胞的增殖,CD25和CD69分子表达明显增加。提示SEB能改变外周血T细胞表面的分子表达。     

IL_2,IL—4和IL—6对T细胞活化增殖的影响途径比较

单一的 PHA/PMA/OKT3不能诱导纯化的静止 T 细胞发生增殖反应,这为我们比较外加 IL—2/IL—4/IL—6对 T 细胞活化增殖的影响途径提供了条件.PHA 诱发了静止 T 细胞对 IL—2/IL—4/IL—6的增殖反应,而 anti—Tac 单抗只能抑制由 IL-2介导的增殖反应.PMA 能够诱导静止 T 细胞对 IL—2/IL—4发生增殖反应,而不对 IL—6发生增殖反应.OKT3单抗只能诱导静止 T 细胞对 IL—2发生增殖反应.免疫抑制剂环孢霉素 A(C_(?)A)均能抑制 PHA 联合 IL—2/IL—4/IL—6所诱发的 T 细胞增殖反应,但其抑制作用的动力学观察却得到三种完全不同形式的抑制结果.这些结果表明,这三种淋巴因子各有其独自的途径使T 细胞活化增殖.     

小儿单纯性肾病白细胞介素6探讨

<正> 白细胞介素6(IL—6)是由T细胞等免疫活性细胞产生的多功能淋巴因子,具有诱导B细胞增殖、分化并产生抗体,刺激肝细胞产生急性期蛋白,诱导T细胞表达IL-2受体等多种作用。本文观察单纯性肾病(INS)患儿外周血淋巴细胞体外产生IL-6活性水平,并分析IL-6与患儿免疫球蛋白G的关系,以探讨INS低IgG血症的可能机理。     

B7-H1协同刺激淋巴细胞增殖并诱导产生抑制性T细胞

目的：探讨B7-H1分子在抗原诱导的免疫反应中的作用。方法：在可溶性抗原PPD诱导淋巴细胞增殖体系中,加入中和抗体检测B7-H1的协同刺激作用。转染表达B7-H1的ECV304细胞,观测其对PPD诱导的淋巴细胞增殖、细胞因子分泌及淋巴细胞亚群比例的影响。将刺激后的淋巴细胞过继至自体或同种异体增殖体系中,检测其功能。结果：抗B7-H1中和抗体可降低PPD诱导的淋巴细胞增殖反应和细胞因子分泌;转染B7-H1的ECV304细胞可协同刺激抗原诱导的淋巴细胞增殖,促进细胞因子IL-10的表达,并改变T细胞亚群分布,增加CD4^＋T细胞亚群比例;自体或同种异体过继实验显示,B7-H1刺激后的淋巴细胞具有显著的免疫抑制功能。结论：B7-H1分子可协同刺激淋巴细胞增殖并诱导产生具有免疫抑制功能的T细胞亚群。     

卡介苗刺激后CD8~+T细胞活化、增殖及其调节

目的:探讨卡介苗(BCG)刺激后,结核菌素试验阳性(PPD+)正常人外周血单个核细胞(PBMCs)中CD8+T细胞的活化、增殖、细胞因子产生及调节性T细胞(Treg)对其调节作用。方法:体外用BCG刺激PPD+正常人PBMCs,检测CD8+T细胞的细胞因子产生、活化和增殖。纯化后获得调节性T细胞(Treg)和CD25-细胞,检测Treg对CD8+T细胞增殖的调节作用。结果:BCG诱导CD8+T细胞表达CD69和CD25等活化分子。在低剂量IL-2存在的条件下,BCG诱导CD8+T细胞发生增殖,且增殖的CD8+T细胞大部分表达Granzyme-B。体外BCG短期刺激PBMCs后,CD8+T细胞几乎不产生IFN-γ、IL-2和TNF-α。此外,调节性T细胞抑制CD8+T细胞增殖。结论:BCG诱导CD8+T细胞活化、增殖和表达颗粒酶,Treg抑制CD8+T细胞增殖。     

R848协同CD3抗体诱导C57BL/6小鼠脾脏淋巴细胞功能改变

目的观察并初步分析1-[4-amino-2-(ethoxymethyl)imidazo[4,5-c]quinolin-1-yl]-2-methylpropan-2-ol(R848)协同CD3抗体诱导C57BL/6小鼠脾脏中淋巴细胞发生的功能改变。方法分离正常C57BL/6小鼠脾脏的淋巴细胞,分别在anti-CD3、R848及anti-CD3+R848的作用下培养72 h。通过MTT法观察淋巴细胞的增殖情况;采用ELISA的方法检测脾脏淋巴细胞的IFN-γ和IL-4的产生情况;使用细胞内细胞因子染色的方法检测CD4+T和CD8+T细胞的IFN-γ和IL-4的产生情况;再用细胞表面分子染色的方法检测R848诱导不同淋巴细胞群活化的情况。结果单独使用R848对淋巴细胞的增殖作用不明显,但anti-CD3+R848可促进淋巴细胞的增殖;R848能辅助anti-CD3明显诱导脾CD4+T和CD8+T细胞分泌IFN-γ和IL-4;R848能够使淋巴细胞活化,且以B细胞亚群为主。结论 R848能够协助CD3抗体促进脾脏淋巴细胞的增殖,分泌IFN-γ和IL-4,其机制与R848能明显促进B淋巴细胞活化有关。     

用无血清培养基生产IL-2

无血清培养基中的Wistar大白鼠脾细胞在ConA的刺激下可以产生IL-2.以T淋巴母细胞的增殖为指标,作者对含FCS的培养基和无血清培养基作了比较;证明在适宜的条件下,两种方法得到的IL-2滴度在峰值及动力学等方面都相同,唯一的差别是前者所需细胞浓度为1×10~7细胞/ml,而后者则为5×10~6细胞/ml.因此,从单一细胞的角度来看,有血清培养基比无血清培养基的效果好.以往以为,PMA(Phorbol Myristic Acetate)的刺激以及细胞的期前孵育都可增强丝裂原诱导的人和大白鼠淋巴细胞产生IL-2.但作者在ConA刺激的同时使用了PMA,却发现在一般情况下PMA对IL-2的产生无增强效应;而将淋巴细胞在无血清培养基中期前孵育则可大大提高IL-2的滴度.     

膜型B7-H1分子诱导产生的T抑制细胞及其免疫学特性的初步研究

为了探讨B7-H1分子诱导产生的T抑制细胞免疫生物学特性,我们首先构建了人B7-H1基因,筛选出细胞膜表面稳定表达B7-H1蛋白的人ECV304细胞系,并在体外建立了由这种非专职抗原提呈细胞系刺激诱导纯化的CD4+T细胞,并使其具有抑制功能的新方法。通过检测其增殖效应和上清细胞因子水平的变化,观察到这群细胞对同种异体混合淋巴细胞反应(MLC),具有明显抑制作用,该作用与大量产生IL-10、TGF-β细胞因子有关。实验表明,ECV304/B7-H1可有效诱导具有免疫抑制的功能T细胞,为其进一步应用于临床治疗打下基础。     

未成熟树突状细胞对T细胞功能及其IL-10和TGF-β1表达的影响

目的探讨未成熟树突状细胞(DC)对T细胞功能及其IL-10和TGF-β1表达的影响。方法通过诱导大鼠骨髓前体细胞,获取未成熟(iDC)和成熟(mDC)2种状态的DC;将2种DC用乙酰胆碱受体(AChR)负载后进行T细胞重复刺激、交叉刺激和无关抗原刺激试验,采用MTT法观察T细胞增殖情况,采用RT-PCR方法测定T细胞IL-10 mRNA的表达水平,采用Western blot方法检测T细胞TGF-β1的表达水平。结果①AChR负载的iDC可明显抑制T细胞增殖,且这种被抑制的T细胞对AChR负载的mDC的交叉刺激也不引起增殖,但对无关抗原OVA负载的mDC的刺激可产生明显增殖。②与mDC组比较,AChR负载的iDC初次和重复刺激均明显增强T细胞IL-10和TGF-β1的表达。结论 iDC可诱导抗原特异性T细胞耐受,耐受机制可能与IL-10和TGF-β1的表达增强有关。     

未成熟树突状细胞对T细胞活化及其IFN-γ和IL-12表达的影响

目的:探讨未成熟树突状细胞(DC)对T细胞活化及其IFN-γ和IL-12表达的影响。方法:通过诱导Lewis大鼠骨髓前体细胞,获取未成熟(iDC)和成熟(mDC)两种状态的DC;将两种DC用乙酰胆碱受体(AChR)负载后进行T细胞重复刺激、交叉刺激和无关抗原刺激试验,观察T细胞增殖情况并测定T细胞IFN-γ、IL-12的表达水平。结果:(1)AChR负载的iDC可明显抑制T细胞增殖,且这种被抑制的T细胞对AChR负载的mDC的交叉刺激也不引起增殖,但对无关抗原OVA负载的mDC的刺激可产生明显增殖。(2)与mDC组比较,AChR负载的iDC初次和重复刺激均明显抑制T细胞IFN-γ和IL-12的表达。结论:iDC可诱导抗原特异性T细胞耐受,耐受机制可能与Th1细胞因子IFN-γ和IL-12的抑制有关。     

钙离子载体在诱导人外周血单核细胞分化为树突状细胞中的作用

目的研究钙离子载体(CI)能否诱导人外周血单核细胞(PBMC)分化为树突状细胞(DC)，并初步探讨其信号转导途径。方法分离健康献血者的PBMC，在体外用CI(A23187)或人重组粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子(rhGM—CSF)和CI培养40h，或rhGM-CSF和白细胞介素4(IL-4)培养7d，部分PBMC预先用W-7或CsA或K35926处理30min后，再加入上述细胞因子或CI。相差显微镜下观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞表面CD14、CD80、CD86、CD83等分子的表达，MTT比色法检测其对同种异体混合T淋巴细胞的刺激增殖作用。结果健康献血者的PBMC经CI培养40h，或rhGM—CSF与CI培养40h，或rhGM-CSF与IL-4培养7d，均可获得DC的典型形态和表面分子的表达，包括CD14表达下调、共刺激分子(CD80、CD86)表达上调，以及较强刺激同种异体混合T淋巴细胞增殖的作用；CI诱导的DC其CD14分子的下调及CD83分子的上调更明显，刺激混合T淋巴细胞的增殖能力更强；rhGM-CSF可协同CI诱导PBMC向DC的分化。经rhGM—CSF及CI处理的PBMC，其形态、表面标志物及对T细胞的刺激增殖能力，均受到W-7或CsA或KT5926不同程度的抑制；而rhGM-CSF及IL-4所诱导的PBMC其形态、表面分子的表达以及刺激T细胞增殖的作用却不受上述抑制剂的影响。结论CI可快速诱导PBMC向DC分化，其分化过程可能受控于Ca^2 /钙调蛋白及其下游的多个细胞信号转导途径的调节。     

异源双体细胞因子IL-12(细胞毒性淋巴细胞成熟因子)对人淋巴细胞增殖的调节作用

IL-12主要是由B 淋巴细胞分泌的异源双体细胞因子。cDNA 克隆和表达已获成功。最初发现IL-12能与亚适剂量IL-2协同诱导细胞毒性效应细胞产生,因而被命名为细胞毒性淋巴细胞成熟因子(CLMF)。随后又发现IL-12能刺激PHA 活化的90%以上CD_3~+T 淋巴母细胞增殖。本文作者主要研究了IL-12在调节静止及活化的外周血单个核细胞(PBMC)增殖中作用。常规分离PBMC,阴性选择贴附法分离T,B,NK 细胞及CD_4,CD_8亚群,免疫荧光染色和流式细胞仪分析细胞表型,~3H—TdR 掺入法检测细胞增殖水平。     

三磷酸肌醇在IL—2诱导的T细胞增殖分化中的信息传递作用

用不同浓度的IL-2刺激静息T淋巴细胞,其细胞内IP_3无明显改变,但ConA刺激则使IP_3增加45%。在IL-2依赖性T细胞,IL-2R表达率达83%,IL-2刺激时IP_3的变化依浓度不同而异,10u—50u/ml的IL-2使IP_3增高,以50u/ml最为显著,增加60%,但100u/ml IL-2及ConA不改变胞内IP_3的浓度。IL-2R封闭后的T淋巴细胞在IL-2刺激时IP_3的增加明显减弱。这些结果提示:IP_3作为细胞内的第二信使介导了IL-2诱导的T细胞的增殖反应,这种作用与IL-2的剂量及IL-2R表达有密切的关系。     

Jagged-1对骨髓来源树突状细胞生成细胞因子的影响

目的:探讨可溶性Jagged-1/Fe嵌合蛋白(Jagged-1)对重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和白细胞介素4(rmIL-4)体外诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)产生细胞凶子的影响.方法:建立rmCM-CSF和rmIL-4体外诱导DC的模型,观察Jagged-1/Fc对DC分化的形态学影响.通过Luminex蛋白液相芯片技术和ELlSA检测其细胞因子的表达水平,藉MTT法测定可溶性Jagged-1/Fc诱导的DC对同种异基因淋巴细胞增殖的刺激能力.结果:除了TGF-β,Jag-ged-1/Fc诱导的DC与细菌脂多糖(LPS)或酵母聚糖A诱导的DC不同,表现为生成TNF-α的水平明显降低,IL-4显著增高,而IL-10、IL-6、IL-2、IL-12和IFN-γ的水平与对照组无明显差异.γ分泌酶抑制剂DAFT能逆转Jagged-1/Fc抑制DC生成TNF-α.混合淋巴细胞反应显示Jagged-1/Fc诱导的DC对T细胞增殖的刺激能力最弱,LPS诱导的DC的刺激能力最强.结论:Jagged-1/Fc诱导的DC倾向介导免疫耐受,指导初始T细胞向Th2细胞偏离.