脂多糖致急性肺损伤时Tribbles同源蛋白3表达变化

目的 探讨Tribbles同源蛋白3(TRB3)在脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)时的变化及其与p38-MAPK信号通路的关系.方法 体内实验:复制LPS致ALI大鼠模型,分5 ml/kg生理盐水组和5 ml/kg LPS刺激组,免疫组织化学法检测肺组织中TRB3蛋白表达,RT-PCR检测肺组织TRB3 mRNA表达.体外实验:体外培养大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC),随机分为LPS量效组(0、2、4、10 μg/ml LPS分别孵育4 h)、LPS时效组(10 μg/ml LPS分别孵育0、4、8、12 h)和p38抑制剂(SB203580)干预组(分为正常对照组、10 μg/ml LPS组、10 μmol/L SB203580组、10 μmol/L SB203580+10 μg/ml LPS组).Western blot法检测TRB3蛋白、p-p38和 p38-MAPK表达.结果 免疫组织化学法显示大鼠肺泡壁和腺上皮均表达TRB3;RT-PCR法检测大鼠肺组织和大鼠PMVEC均表达TRB3 mRNA;与生理盐水组比较,LPS致ALI大鼠肺组织TRB3 mRNA表达显著增加(t=15.524,P<0.01),LPS刺激的大鼠PMVEC中TRB3 mRNA表达增加(t=7.549,P<0.01);Western blot法显示PMVEC表达TRB3蛋白的表达量随LPS浓度(0、2、4、10 μg/ml)增加逐渐升高,差异有统计学意义(F=12.619,P<0.001);时效组TRB3蛋白表达量于4 h达高峰, 之后下降,8 h时仍高于0 h,差异有统计学意义(F=11.273,P<0.001).干预组:与正常对照组比较,10 μg/ml LPS组诱导大鼠PMVEC的p-p38、TRB3蛋白表达量增高(t=49.121、15.113,P<0.001);10 μmol/L SB203580+10 μg/ml LPS组与10 μg/ml LPS组比较,p-p38、TRB3蛋白表达量下降(t=7.040、11.900,P<0.05、0.001);10 μmol/L SB203580组对大鼠PMVEC表达p-p38及TRB3蛋白无影响,与正常对照组比较,差异无统计学意义.结论 LPS致ALI时TRB3表达增加,TRB3表达受p38-MAPK信号通路调控.     

脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞ACE和ACE2表达的影响及血管紧张素转换酶抑制剂的干预作用

目的 观察脂多糖(LPS)对大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)血管紧张素转换酶(ACE)和血管紧张素转换酶2(ACE2)表达的影响及血管紧张素转换酶抑制剂( ACEI) Captopril的干预作用.方法 组织块法体外培养大鼠PMVECs,观察LPS对PMVECs作用的时间和浓度相关毒性以及Captopril的干预作用;再将PMVECs随机分为4组:对照组(n=6),不加干预措施;Captopril组(n=6),10-5mol/L Captopril孵育细胞8 h;LPS组(n=6),1 mg/mL LPS孵育细胞8 h;Captoril+ LPS组(n=6),10-5 moL/L Captopril孵育细胞30 min后再加入1 mg/mL LPS孵育8h.CCK8检测细胞活性;Western blotting法检测各组细胞ACE和ACE2的表达.结果 LPS可对大鼠PMECs产生明显的毒性作用,并可使细胞ACE表达上调及ACE2表达下降;经Captopril干预后,可明显抑制LPS的细胞毒性作用,并逆转LPS对PMVECs中ACE及ACE2表达的影响,使ACE和ACE2表达水平回调至对照组水平.结论ACEI能减轻LPS所致的PMVECs毒性作用,而ACE及ACE2表达的变化可能在这一过程中起重要作用.     

ACE2及Ang 1-7对大鼠LPS性ALI的影响及机制

目的 研究血管紧张素转化酶2(ACE2)及血管紧张素1-7(Ang 1-7)对大鼠脂多糖(LPS)性急性肺损伤(ALI)的影响及其机制.方法 体外培养大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC),分别予血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)或LPS刺激大鼠PMVEC单层,并予ACE2抑制剂或Ang 1-7受体激动剂预干预,用滤器法检测大鼠PMVEC单层通透系数(Kf)的变化;予LPS建立大鼠ALI模型,分别予ACE2抑制剂、ACE2抑制剂+Ang 1-7受体拮抗剂、Ang 1-7受体激动剂干预,观测肺组织湿/干重比(W/D)及病理变化.结果 LPS、AngⅡ均增加大鼠PMVEC单层Kf(P<0.01),ACE2抑制剂加剧AngⅡ所致大鼠PMVEC单层Kf增高(P<0.01),Ang 1-7受体激动剂则抑制单层Kf增高(P<0.01);在LPS诱导的大鼠ALI体内, ACE2抑制剂和/或Ang 1-7受体拮抗剂均加剧LPS所致肺组织W/D增高(P<0.01)和ALI病理改变,Ang 1-7受体激动剂则抑制LPS诱导的W/D增高(P<0.01)并改善其病理改变.结论 Ang 1-7对LPS致大鼠ALI有直接及间接的保护作用;ACE2可通过促进Ang 1-7的生成对大鼠LPS性ALI发挥保护作用.     

全氟化碳对脂多糖诱导肺微血管内皮细胞表达ICAM-1的影响

目的 观察全氟化碳(PFC)对脂多糖(LPS)诱导肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells, PMVEC)表达细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)的影响,探讨PFC的抗炎作用及其对PMVEC的保护机制.方法 采用组织块法培养大鼠PMVEC,将细胞接种于Transwell小室,按随机数字表法分为空白对照组(C)、PFC干预组(F)、LPS刺激组(L)、LPS刺激 PFC干预组(LF),以处理0 h为空白对照,各处理组分别给予PFC或100 μg/L LPS共孵育3、8、24 h,通过MTT法观测PFC作用后正常大鼠PMVEC细胞活力变化,应用逆转录PCR(RT-PCR)和流式细胞术(FCM)分别检测各组各时相点大鼠PMVEC ICAM-1 mRNA和蛋白表达量.结果 PFC作用后,正常大鼠PMVEC的细胞活力未见明显改变.各组各时相点ICAM-1 mRNA表达的变化规律与蛋白质水平基本一致,F组各时相点ICAM-1的表达量与C组比较均无显著性差异(P＞0.05);L组各时相点细胞的ICAM-1表达均较C组显著增强(P＜0.05,P＜0.01);LF组与L组同时相点比较,3 h组ICAM-1表达量无明显差异(P＞0.05),但8 h和24 h组均有显著降低(P＜0.01,P＜0.05).结论 PFC通过抗炎效应直接下调LPS诱导PMVEC表达ICAM-1,发挥PMVEC保护作用.     

LPS对培养大鼠肺微血管内皮细胞AQP-1表达的影响

目的通过观察脂多糖(LPS)刺激下对肺微血管内皮细胞水通道蛋白-1(AQP-1)表达的影响,为进一步研究急性肺损伤时肺水异常代谢的机制提供实验依据.方法采用体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞,使用浓度为100ng、1、10 μg/ml的LPS与之孵育2、4、6、8 h,应用免疫细胞化学方法以及RT-PCR法检测AQP-1的表达.结果LPS刺激组AQP-1表达显著低于正常对照组(P＜0.01);AQP-1表达下降与LPS刺激浓度有关.结论LPS刺激下AQP-1表达下降,提示AQP-1在急性肺损伤时可能与肺水代谢异常有关.     

右美托咪定对LPS诱导星形胶质细胞MCP-1分泌的影响

目的 研究右美托咪定对脂多糖(LPS)诱导大鼠星形胶质细胞MCP-1 mRNA分泌的影响.方法 培养原代大鼠星形胶质细胞,待诱导分化成熟,免疫组化检测α-2A肾上腺受体的表达;不同浓度LPS刺激星形胶质细胞,观察LPS浓度与MCP-1 mRNA表达的量效关系;随后将细胞随机分为6组:对照组(control组)、LPS(200 ng/ml)刺激组(LPS组)、右美托咪定(DEX)500 ng/ml孵育组(DEX组)、DEX(10、100、500 ng/ml)+LPS(200 ng/ml)组[DEX(10、100、500 ng/ml)+LPS组],荧光实时定量PCR检测各组MCP-1 mRNA的表达.结果 α-2A肾上腺受体在星形胶质细胞表达,与细胞标志物GFAP完全共标;不同浓度LPS刺激可引起MCP-1剂量依赖性的表达增加(F(6,41)=289.35,P<0.001),LPS刺激引起MCP-1 mRNA表达量增加的ED50为150.8 ng/ml,ED95为344.1 ng/ml,r=0.86;与LPS组相比,不同浓度右美托咪定均可抑制LPS刺激引起的星形胶质细胞MCP-1 mRNA升高(F(5,21)=454.15,P<0.001).结论右美托咪定可抑制LPS刺激大鼠星形胶质细胞MCP-1 mR-NA的表达,该作用可能是其减轻疼痛的机制之一.     

脂多糖直接诱导对肺微血管内皮细胞IL-8表达的影响及通过NF-κΒ调控机理的研究

目的　探讨脂多糖 (LPS)的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞 (PMVEC)IL 8表达的影响及通过核因子κB(NF κB)的调控机理。方法　以 10 0ng/mlLPS刺激PMVEC 0 ,0 .5 ,1,2 ,4,6,8h或 1ng/ml、10ng/ml、10 0ng/mlLPS刺激 1h或6h为检测时相点 ,ELISA、原位杂交试验分别检测的培养液上清中分泌的IL 8及PMVEC内IL 8mRNA的表达 ;凝胶电泳迁移率分析 (EMSA)检验NF κΒ的活化 ;并观察NF κΒ活化抑制对IL 8表达的影响。结果　LPS能显著促进PMVEC表达IL 8,包括促进IL 8mRNA的表达及IL 8的分泌。在时间上mRNA的表达先于IL 8分泌。且LPS的直接诱导能迅速活化NF κΒ ,1h达到高峰 ,后逐渐下降。PDTC能显著抑制NF κΒ的活化及IL 8的表达 (P <0 .0 1)。结论　表明细菌致病因子LPS的直接诱导确能通过促进NF κΒ的活化 ,从而启动IL 8的高效表达和分泌 ,为多形核中性粒细胞 (PMN)的迁移提供必需的物质条件 ,导致肺损伤。     

LPS直接诱导的肺微血管内皮细胞与PMN的粘附作用及核因子κB调控机理的实验研究

目的：研究细菌脂多糖（LPS）诱导的肺微血管内皮细胞（PMVEC）与多形核中性粒细胞（PMN）的粘附作用及调控机制。方法：100ng/ml LPS刺激PMVEC0h,2h,4h,6h,8h或10ng/ml,50ng/ml,100ng/ml LPS刺激6h，检测PMVEC－PMN粘附率，PMVEC细胞间粘附分子－1（ICAM－1）的表达，凝胶电泳迁移率变化分析（EMSA）方法检测核因子kB（NF－kB）的活化，并通过加入Anti-ICAM-1抗体或活化阻断剂观察对PMVEC－PMN粘附率的影响。结果：PMVEC ICAM－1的表达及与PMN的粘附与LPS的刺激呈时相－剂量依赖方式，LPS的刺激迅速活化NF－kB，60min达到高峰，后逐渐下降，Anti-ICAM-1抗体、PDTC能显著降低PMVEC－PMN粘附（P＜0．001）；结论：LPS刺激诱导NF－kB的活化，启动ICAM－1的合成表达，从而导致PMVEC－PMN的粘附增加。     

白头翁体外对TNF、IL-1、IL-6产生的影响

目的 :观察白头翁对抑制脂多糖(LPS)刺激肝枯否氏细胞(KC)分泌肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素1(IL 1)和白细胞介素6(IL 6)的影响。方法:大鼠KC培养24h后,加入24孔板内(细胞终浓度为1×106 个/ml)静置4h。分4组:空白对照组:KC培养液 RPMI1640。LPS组:KS培养液 LPS(终浓度为20μg/ml) RPMI1640。白头翁Ⅰ组:KC培养液 LPS(终浓度为20μg/ml) 白头翁(终浓度为100μg/ml)。置37℃、5 %CO2 孵育箱中培养2、4、6、8、12、24h后取上清液,分别测定TNF、IL 1、IL 6的活性。结果:白头翁能明显抑制LPS刺激肝KC分泌TNF、IL 1和IL 6,且这种抑制作用随培养时间的延长而增强,并与药物浓度有关。结论:白头翁可能通过抑制LPS刺激肝KC分泌TNF、IL 1和IL 6而发挥抗炎作用     

氟西汀对体外培养星形胶质细胞活性及脂多糖诱导的肿瘤坏死因子-α释放的影响

目的 通过体外培养星形胶质细胞,观察氟西汀对星形胶质细胞的活性及对脂多糖(LPS)诱导星形胶质细胞释放肿瘤坏死因子-α( TNF-α)的影响.方法 体外分离、纯化大鼠星形胶质细胞.星形胶质细胞接种到96孔板中,以浓度为(5,10,20,40)μM的氟西汀孵育24h,用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测星形胶质细胞增殖活性;星形胶质细胞接种至48孔板,经(5,10,20,40) μM氟西汀预处理后再用1μg/ml LPS刺激,酶联免疫吸附(Elisa)法检测各组上清TNF-α的水平.结果 氟西汀浓度为20 μM,40μM时星形胶质细胞的增殖活性(OD值:0.23±0.014,0.24 ±0.012)与对照组(OD值:0.20±0.017)相比明显增加(P＜0.05),经LPS刺激24h星形胶质细胞释放TNF-α水平(53.84±24.84) pg/ml与对照组(8.00±10.87) pg/ml相比明显增加(P＜0.01),氟西汀浓度为10μM明显抑制LPS刺激星形胶质细胞释放TNF-α(28.85±3.36) pg/ml(P＜0.05).结论 氟西汀在一定浓度范围内可促进星形胶质细胞的增殖活性,氟西汀浓度为10μM时可抑制LPS诱导的星形胶质细胞对TNF-α的释放.