重组人肝再生增强因子对肝星状细胞基质分解素-1及其抑制因子基因表达的调节

肝再生增强因子(ALR)是Hagiya等[1]1994年从新生大鼠肝组织中克隆的一种理化性质与肝刺激物( HSS)相似的促肝细胞增殖因子.新近,我国学者克隆了大鼠ALR的人类同源分子[2],并通过构建原核表达载体,获高效表达菌株,进而获得重组hALR.初步研究表明hALR对四氯化碳中毒性及①免疫损伤性大鼠肝纤维化均有明显的防治作用[3、4].本文拟通过观察hALR对肝星状细胞基质分解素-1( MMP3 )及金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP1) 基因表达的影响,从细胞外基质降解代谢的角度探讨hALR抗肝纤维化的机制.     

重组人肝再生增强因子对实验性肝纤维化血清透明质酸浓度的影响

为了解重组人肝再生增强因子（hALR)对大鼠实验性肝纤维化形成过程中血清透明质酸浓度的影响，建立了四氯化碳中毒性及人血白蛋白免疫损伤性两种大鼠肝纤维化模型，在造模的同时给予不同剂量hALR治疗，并在不同的时间点留取大量血清标本，测定透明质酸浓度。结果表明，在两种模型中hALR两组大鼠血清透明质酸浓度在造模过程中的不同阶段均明显低于模型组，高剂量hALR组大鼠血清透明质酸浓度均明显低于低剂量组，上述结果提示，重组人肝再生增强因子可降低实验性肝纤维化大鼠血清透明质酸含量。     

重组人肝再生增强因子对肝星状细胞基质分解素—1及其抑制因子 …

肝再生增强因子 (ＡＬＲ)是Ｈａｇｉｙａ等〔1〕1 994年从新生大鼠肝组织中克隆的一种理化性质与肝刺激物 (ＨＳＳ)相似的促肝细胞增殖因子。新近 ,我国学者克隆了大鼠ＡＬＲ的人类同源分子〔2〕,并通过构建原核表达载体 ,获高效表达菌株 ,进而获得重组ｈＡＬＲ。初步研究表明ｈＡＬＲ对四氯化碳中毒性及免疫损伤性大鼠肝纤维化均有明显的防治作用〔3、4〕。本文拟通过观察ｈＡＬＲ对肝星状细胞基质分解素 1 (ＭＭＰ3)及金属蛋白酶组织抑制因子 1(ＴＩＭＰ1)基因表达的影响 ,从细胞外基质降解代谢的角度探讨ｈＡＬＲ抗肝纤维化的机制。1　材…     

基质分解素—1基因表达增强对原发性肝癌的诊断价值

目的 了解基质降解在原发性肝癌口的作用。方法 33例原发性肝细胞癌患术中取癌组织及癌旁组织;提取组织总RNA;用逆转录共扩增定量PCR方法测定基质分解素-1(MMP,)基因表达水平。结果 肝癌组织基质分解素-1基因表达水平明显高于癌旁的肝硬化组织及正常肝组织。肝癌患MMP,基因表达水平与血清AFP浓度、肿瘤大小无关。结论 基质分解素-1在原发性肝癌的进展中可能起重要作用。     

重组人肝再生增强因子可抑制肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的基因表达

在培养的肝星状细胞系中加入不同浓度的重组人肝再生增强因子(hALR),于不同的时间点收集细胞,提取总RNA,用逆转录定量PCR方法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原的基因表达水平.结果表明,高(0.2ng/L)、中(0.02 ng/L)、低(0.002ng/L)浓度的hALR 3组肝星状细胞Ⅰ型胶原基因表达水平在8、24、48、72h 4个时间点均明显低于对照组;大剂量组较中、低剂量组Ⅰ型胶原基因表达水平亦明显为低.中、低剂量hALR组肝星状细胞Ⅲ型胶原基因表达水平在24、48、72h 3个时间点明显低于对照组;大剂量hALR组肝星状细胞Ⅲ型胶原基因表达水平在8、24、48、72h 4个时间点均明显低于对照组,较中、小剂量组亦显著降低. 提示重组人肝再生增强因子对肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达有明显的抑制作用.     

重组人肝再生增强因子可预防免疫损伤性肝纤维化的形成

观察重组人肝再生增强因子（ｒｈＡＬＲ）对免疫 务性肝纤维化的预防作用。建立人血白蛋白免疫损伤性大鼠肝纤维化模型。在造模的同时子ｒｈＡＬＲ腹腔注射。观察大鼠存活率,观察大鼠存活率,血清ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ水平,肝组织胶原蛋白含量及肝脏病理学改变。结果：ｒｈＡＬＲ可提高人血白蛋白损伤生肝纤维化大鼠存活率氏肝纤维化大 ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ水平,病理检查显示ｒｈＡＬＲ有明显减轻大鼠肝纤维化形成的作用;     

重组人肝再生增强因子可抑制肝星状细胞I、Ⅲ型胶原的基因表达

在培养在肝星状细胞系中加入不同浓度的重组人肝再生增强因子（hALR）,于不同的时间点收集细胞,提取总RNA,用逆转录定量PCR方法测定I、Ⅲ型胶原的基因表达水平。结果表明,高（0.2ng/L）、中（0.02ng/L）、低(0.002ng/L）浓度的hALR3组肝星状细胞I型胶原基因表达水平在3、24、48、72h4个时间点均明显低于对照组;大剂量组较中、低剂量组I型胶原基因表达水平亦明显为低。中、低剂量hALR组肝星状细胞Ⅲ型胶原基因表达水平在24、48、72h3个时间点明显低于对照组;大剂量hALR组肝星状细胞Ⅲ型胶原基因表达水平在8、24、48、72h4个时间点均明显低于对照组,,较中、小剂量组亦显著降低。提示重组人肝再生增强因子对肝星状细胞I、Ⅲ型胶原基因表达有明显的抑制作用。     

大鼠肝再生增强因子的基因克隆

目的 克隆大鼠再生增强因子（ALR）编码序列,并在原核细胞表达。方法 按文献报道大鼠再生增强因子核苷酸序列合成引物,从2周龄大鼠肝组织提取RNA,利用RT－PCR扩增大鼠肝再生增强因子基因编码区;将PCR扩增片断亚克隆到pBV221质粒,构建原核表达重组载体,导入到大肠杆菌后热诱导表达目的的蛋白。结果 从大鼠肝脏的RNA中扩增到长约400bp的ALRcDNA编码区基因,序列分析表明与文献报道一致;重组克隆经热诱导表面出分子量约15kD大小的蛋白质,与预期值一致。结论 从2周龄大鼠肝组织中成功克隆再生增强因子基因,并获得了原核细胞高效表达。     

实验性肝纤维化形成及逆转过程中膜性基质金属蛋白酶—1mRNA表达的动态研究

应用原位杂交观察基质金属蛋白酶（MT1－MMP）mRNA在肝纤维化形成及逆转过程中的动态表达。采用CCl4皮下注射Wistar大鼠建立肝纤维化模型,并让其自然恢复以使以纤维化逆转。结果显示,MT1MMPmRNA主要表达在间质细胞（肝星状细胞等）,部分肝细胞也有表达,随着肝纤维化的进展,MT1－MMPmRNA表达逐渐增强,而在肝纤维化的逆转过程中,MT1－MMPmRNA表达逐渐减弱,提示MT1－MMP在肝纤维化形成及逆转中可能具有较重要的作用.     

维生素E对肝纤维化大鼠肝内转化生长因子β1基质金属蛋白酶-1mRNA表达的影响

目的：研究维生素E（VE）防治肝纤维化可能存在的作用机制。方法：用40％CCl4皮下注射9周制作大鼠肝纤维化模型，在肝纤维化形成后，治疗组用5％VE乳剂静脉注射（100mg/kg,2次／周）连续10周。于治疗后10周取各组肝组织作病理检查，并用原位杂交技术检测肝组织转化生长因子β1（TGF－β1）、基质金属蛋白酶－1（MMP－1）mPNA表达，对检测结果进行图像分析。结果：治疗组肝脏纤维组织沉积较对照组减少，TGF－β1mRNA表达明显低于对照组，经图像分析与对照组差异有显著性（P＜0．01）。MMP－1mRNA的表达两组之间未见显著差异。结论：维生素E可能通过下调TGF－β1mRNA表达，减缓大鼠肝纤维化。     

HA表位标记的人Axud1基因的构建及在肺腺癌SPC-A1细胞中的表达

构建在哺乳动物细胞中表达的血凝素HA表位标记的人Axud1融合蛋白表达载体。RT PCR从人外周血淋巴细胞中扩增Axud1全长cDNA ,用含HA序列的特异引物PCR扩增HA Axud1,经BamHⅠ、XbaⅠ酶切后插入到经BamHⅠ、XbaⅠ酶切的真核表达载体pcDNA3 .1( ) 中 ,重组质粒PCR、酶切和测序鉴定正确 ,最后将该质粒转染入肺腺癌SPC A1细胞中 ,Westernblot检测HA Axud1融合蛋白的表达。结果显示 ,筛选的G418抗性克隆SPC A1细胞中均有HA Axud1融合蛋白的表达 ,为进一步研究Axud1蛋白在肿瘤细胞中的功能提供了一个重要工具     

肝纤维化大鼠血清四种糖苷酶的变化及意义

目的：探讨肝纤维化模型大鼠血清四种糖苷酶（β－NAG、BDGP、NAGS、AFU）活性的变化及其与传统的血清纤维化指标、肝组织病理学变化的相关性，为肝纤维化的非创伤性诊断提供新的简便的血清指标。方法：用CCL皮下注射法诱导SD大鼠肝纤维化模型，观察大鼠血清肝纤维化指标、四种糖苷酶活性以及肝脏组织病理学的变化。结果：肝纤维化模型大鼠血清β－NAG、BDGP水平明显增加，其敏感性分别为82．4％、47．1％，特异性分别为80．8％、70．0％，准确率分别为81．5％、55．6％，并与PCⅢ、CⅣ、HA的增加及肝纤维化程度正相关，而血清NAGS、AFU水平无显著变化。结论：CCL4诱导的肝纤维化大鼠血清β－NAG、BDGP活性明显增加，其检测有助于肝纤维化的无创诊断，并为临床应用提供了可靠的实验依据。     

用Atlas^TM人表达阵列技术鉴定子宫内膜癌差异基因的表达

为了鉴定正常子宫内膜与子宫内膜癌组织之间差异基因的表达,采用Atlas^TM人表达阵列技术,首先从正常子宫内膜和子宫内膜癌组织获得以α^-32P标记dATP的cDNA,然后与两个相同的Atlas^TM人表达阵列膜（含588个已知基因）杂交。结果发现：（1）与细胞死亡和增殖有关的基因IRP、Wnt-5A及癌胚抗原前体表达明显增高;（2）与浸润有关的调节因子基因CD147表达异常增高。提示Atlas^TM人表达阵列膜杂交技术可同时鉴定正常子宫内膜和子宫内膜癌组织多个基因表达差异。     

4例老年男性肺老化相关基因谱的研究

为了解老化过程中人类肺部基因表达谱改变，作者从老年和成年人正常肺组织提取总RNA，用基因芯片技术比较基因表达差异。结果显示，研究的8192条基因中有87（1．06％）条差异在1．6倍以上，47（0．57％）条上调，40（0．49％）条下调。上调为主的有：细胞骨架和胞外基质，炎性应激反应，肿瘤相关，信号转导等；下调为诉有：DNA／RNA合成修复，蛋白质合成修饰，能量代谢等；细胞周期与增殖相关基因上下调比例相当，提示老年人肺部基因表达谱发生了明显改变，与肺老化改变特征相符。     

环氧合酶-2在大鼠酒精性肝损伤中的作用

为探讨环氧合酶-2(COX—2)在大鼠酒精性肝损伤中的作用，将大鼠随机分为3组。正常组：予以玉米油 葡萄糖液灌胃；模型组：玉米油 酒精灌胃；处理组：玉米油 酒精 塞莱昔布(celecoxib，为COX—2选择性抑制剂)灌胃。3周后处死大鼠，然后进行大鼠肝组织切片HE染色、脂肪染色及COX—2免疫组化染色；血清AST、ALT水平、血浆及肝组织匀浆谷胱甘肽—S转移酶(GST)活性测定。结果发现，模型组脂肪染色明显加重，AST升高，肝GST活性降低，COX—2表达增加；而处理组比模型组脂肪染色减轻，AST下降，GST活性上升，肝组织中COX—2表达明显减少。提示使用选择性COX—2抑制剂能减轻大鼠酒精性肝损伤，证实COX—2参与了大鼠酒精性肝损伤过程。     

慢性肾衰大鼠IL－2基因表达的改变及淫羊藿的调节作用

采用ＭＴＴ掺入法及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术探讨了慢性肾衰大鼠脾细胞ＩＬ－２水平及其ｍＲＮＡ的表达，以及中药淫羊藿对其影响。结果显示，慢性肾衰大鼠ＩＬ－２ｍＲＮＡ表达量及脾细胞培养上清中ＩＬ－２的水平均低于正常对照组（Ｐ＜０．０５），经中药淫羊羹调节后ＩＬ－２水平及ＩＬ－２ｍＲＮＡ表达可恢复至正常水平。