抗伊氐锥虫表膜抗原单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其在检测循环抗源(CA)中的应用

本文利用淋巴细胞杂交瘤技术,建立了三株抗伊氏锥虫表膜抗原的McAb杂交瘤细胞系(1C_2、2A_3、5B_7)。鉴定结果:①诱生的腹水效价为1C_2 2×10~(-4)、2A_3 4×10~(-4)、5B_764×10~(-4),培养上清效价为1C_2 1/512、2A_3 1/512、5B_7 1/1024。②三株细胞所产生的McAb均为IgM类免疫球蛋白。③染色体数为1C_2 82、2A_3 96、5B_7 106条。④McAb在伊氏锥虫作抗原定位,均结合于虫体表面。⑤与伊氏锥虫表膜以外的抗原成分反应较弱,与锥虫     

抗人心肌肌球蛋白轻链单克隆抗体的制备及鉴定

用常规方法免疫得到的抗人心肌肌球蛋白轻链(CM-LC)的抗血清,常与骨骼肌及平滑肌肌球蛋白轻链有较强的交叉反应。单克隆抗体因系特异地识别CM-LC上的单一抗原决定簇,因而能克服这一困难。我们应用淋巴细胞杂交瘤技术已经得到四株分泌抗人CM-LC单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对其中三株(1G_6、2B_4、2F_6)进行了克隆。它们与人骨骼肌及平滑肌肌球蛋自轻链的交叉反应分别为2F_6 28.6％及15.6％;2B_4 45％及81％;1G_6对二者的交叉反应均为81％。2F_6属小鼠IgG亚类IgG_3;2B_4及1G_6则均为IgG_1。     

伊氏锥虫分离株对安锥赛抗性的体内、外检测结果的相关性研究

为探讨筛选安锥赛治疗伊氏锥虫病有效剂量的快速方法 ,采用生长繁殖抑制法测定伊氏锥虫XJCA、HBM、ZJB1、JSB1、JSB2和ZJB2分离株对安锥赛的敏感性 ,结果它们的IC50 依次是 0 0 0 15 11、 0 0 0 8436、0 0 15 5 0、 0 0 16 2、 0 0 5 90 6和 0 0 82 6 0 μg mL。采用小白鼠体内试验 ,测定这 6株伊氏锥虫的CD10 0 ,每个分离株伊氏锥虫有安锥赛 3个剂量组和不治疗对照组 ,每个治疗组 10只小白鼠 ,对照组 5只小白鼠 ,每只小白鼠经腹腔接种 1 0× 10 6条锥虫 ,以给药剂量 ,将XJCA株分为 3 5mg kg组、 5 0mg kg组和 7 1mg kg组 ,HBM株分为 3 5mg kg组、 5 0mg kg组和 7 1mg kg组 ,ZJB1分为 5 0mg kg组、 7 0mg kg组和 9 0mg kg组 ,JSB1株分为 5 0mg kg组、 7 1mg kg组和 10 1mg kg组 ,JSB2株分为 7 0mg kg组、 9 0mg kg组和 11 0mg kg组 ,ZJB2株分为 9 0mg kg组、 11 0mg kg组和 13 0mg kg组 ,结果这 6个伊氏锥虫分离株的CD10 0 依次为3 5mg kg、 5 0mg kg、 7 0mg kg、 7 1mg kg、 11 0mg kg和 13 0mg kg。它们的IC50 与CD10 0 的相关系数经计算和检验分析 ,IC50 与CD10 0 之间相关系数为 0 2 2 2 ,这表明它们呈曲线性正相关 ,以IC50 与CD10 0 作出它们的相关“曲线”。     

湖北株旋毛虫不同时期ES抗原的表达

目的　完成旋毛虫 (Trichinellaspiralis,Ts)湖北株排泄分泌抗原 (excretory secretoryantigen ,ES抗原 )中 4 3ku ,4 9ku及 5 3ku抗原的不同虫期的基因表达 ,并与旋毛虫昆明株中相对应的ES抗原进行对比 ,分析不同虫期、虫株对这 3类抗原基因表达的影响。方法　根据已知的 3类抗原的基因序列设计合成 3对特异性引物 ,运用RT PCR技术检测抗原基因的表达 ,并以旋毛虫 18sRNA为标准进行对比。结果　RT PCR得到了湖北株两个虫期中的 4 3ku,4 9ku及 5 3ku的ES抗原mRNA产物 ,并与昆明株进行对比后发现 3类抗原在不同虫期表达有明显差异。结论　通过研究发现不同虫期的同类ES抗原的表达量有显著性差异。     

甲型肝炎病毒的单克隆抗体

三株抗甲型型炎病毒(HAV)的单克隆抗体(以下简称单抗)(K_2—4F_2,K_3—2F_2及K_3—4C_8)为IgG_2a型。这些抗体的特异性曾被免疫电镜、固相放免及体外细胞培养中和试验所证实,结合力的研究说明它们所有识别都与抗原决定簇密切相关,这些单抗将会证明作为诊断和研究用的试剂有着重大的价值。     

家畜伊氏锥虫灭活苗制备及免疫研究观察

4种佐剂制备的伊氏锥虫灭活苗 ,通过小鼠免疫筛选试验 ,发现 号佐剂苗安全性好 ,免疫原性强 ,ES抗原在免疫保护中起重要作用。用 号佐剂制备的湖北、江苏、广西株伊氏锥虫灭活苗 ,通过小鼠和家兔 2次免疫 ,对同株虫体的攻击小鼠分别获得 2 0 /2 0、 1 2 /1 2和 2 0 /2 0的保护 ,并耐受第 2、第 3次攻击 ,免疫期长达3～ 5个月以上。家兔获得 7/8保护 ,体重明显增加 ,中和凝集抗体效价 1 :1 0～ 80倍。对照小鼠、家兔全部发病死亡。     

抗人B因子单克隆抗体的制备及其特性的初步研究

本文以人B因子免疫BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,获得六株(A_2、B_2、B_7、C_9、F_9、F_(10))分泌抗人B因子单克隆抗体(单抗)的杂交瘤细胞系。用ELISA检测细胞培养上清和小鼠腹水的特异性抗体效价,分别为10~(-2)—10~(-3)和10~(-4)—10~(-5)。抗原阻断试验结果,说明这些单抗是B因子特异的。经取代试验和ACH_(50)抑制试验,提示B因子具有耐热和不耐热二组抗原决定基。A_2和B_2针对不耐热抗原决定基,能抑制补体旁路途径活化;B_7和C_9针对耐热抗原决定基,不影响补体旁路途径活化;F_9和F_(10)则既能与耐热决定基发生反应,也具有抑制补体旁路活化的功能。用固相抗原竞争抑制试验,分析B因子的抗原表位,发现6株单抗可识别4个抗原决定基。这些单抗对B因子结构与功能的研究,B因子在补体旁路活化过程中与有关补体成分之间的相互关系的研究,都是很有意义的。     

家畜伊氏锥虫可溶性抗原理化性质分析

<正> 国外对布氏锥虫和刚果锥虫的抗原研究分析表明,其组成均主要为糖蛋白,但在理化性质上两者仍存在一定差异。我国家畜伊氏锥虫病流行甚为严重,而关于伊氏锥虫抗原的研究较少。本文报告,通过Sephadex G-150柱层析分离得到纯化的可溶性伊氏锥虫抗原,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、等     

肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体的研制与鉴定

本文报道,从肾综合征出血热病毒(HFRSV)感染乳鼠鼠脑中提取高滴度的血凝素(HAN),以该血凝素免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合。融合率为60％和78％,阳性孔率为15％和44％。IFA筛选后共获得56株分泌抗HFRSV McAb的杂交瘤细胞系。对其中1A_3,2A_(11),1B_3,3D_8,2F_7,1G_4,1G_9,3G_1,3G_(11),2H_1十株细胞系用有限稀释法进行了3～4次克隆化,阳性克隆率达到100％。杂交瘤细胞系经连续传代培养巳6个多月,仍能稳定地分泌单克隆抗体。冻存的细胞系经复苏后仍能稳定地分泌McAb。应用血凝抑制(Hl)试验证明其中9株为特异性分泌抗HFRSVHHAN McAb 的杂交瘤细胞系,1株(2A_(11))是抗HFRSV McAb的杂交瘤细胞系,其中(1:81920)和3G_1(1:40960)具有高滴度的血凝抑制活性。应用微量细胞培养中和试验(NT)证明其中6抗1A_8,1B_3,3D_8,1G_4,3G_1,3G_(11))具有中和活性.尤其3D_8(1:5120)和3G_1(>1:10240)有较高的中和效价。IFA测定了10株杂交瘤细胞的McAb与HFRSV陈株抗原片反应的抗体效价,其中培养上清为1:40～1:320,杂交瘤腹水为1:1万～1:8万。10种单克隆抗体与JEV、HSV-I和正常Vero-E_6细胞抗原片均无交叉反应。但均能与不同疫区、不同宿主分离的HFRSV陈株81-14A,A9和R_(22)抗原片反应,说明HFRSV血凝素McAb具     

分泌鼠疫F_1单克隆抗体的杂交瘤细胞系建立

<正> 鼠疫 F_1抗原是鼠疫菌的特异性抗原成分,抗鼠疫 F_1抗体广泛应用于鼠疫的诊断和防治研究。鼠疫 EV菌免疫 BALB/c 小鼠,间隔两个多月,再用鼠疫 F_1抗原免疫一次,于鼠疫 F_1抗原免疫后第4天,取脾与小鼠骨髓瘤细胞 SP2/0融合。35%PEG 1,200为促融剂。用间接血凝和金葡菌 A 蛋白酶联免疫吸附试验检测F_1抗原单克隆抗体。选取单克隆抗体阳性细胞株增殖后冻存,复苏其中5株,经有限稀释法克隆2～5次,5株细胞分泌的单克隆抗体经鉴定,1株属 IgM,2株属 IgG_1,2株属 IgG_3。5株细胞分泌的单克隆抗体间接血凝滴度:培养上清液为2~(-2)～2~(-5),诱生小鼠腹水为2~(-10)～2~(-16)。5株细胞经连续体外培养2个月,反复冻存复苏培养3次,均稳定分泌鼠疫 F_1单克隆抗体。     

伊氏锥虫微管结合蛋白p15基因的分子克隆与表达

根据报道的布氏锥虫(Trypanosoma brucei)微管结合蛋白p15(Tb-MAPp15)基因及其3′非翻译区保守序列设计引物,采用PCR法从伊氏锥虫云南水牛株(Trypanosoma evansi stock YNB)基因组DNA中克隆得到伊氏锥虫微管结合蛋白p15(Te-MAP p15)基因。克隆片段长273bp,编码90个氨基酸,预测分子量9.0kDa。经同源性比较,所得基因与Tb-MAP p15基因同源率达到94%。抗原性分析Te-MAP p15基因表达的氨基酸序列比T.brucei微管结合蛋白p15多5个,均参与组成其中1个抗原决定簇,并且此抗原决定簇序列形成在蛋白中常作为识别位点的α螺旋。将该基因亚克隆到pGEX-6P-1原核表达载体,转化大肠杆菌E.coli RS21宿主菌,经IPTG诱导,可成功表达。重组融合蛋白大小为35kDa,与预期大小一致,经SDS-PAGE和Western-blot鉴定为重组伊氏锥虫微管结合p15蛋白。     

抗鸡巴氐杆菌荚膜抗原及菌体表面抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用美国标准菌株×75(5:A)、P1059(8:A)制备荚膜A型抗原及×75和P1059菌体抗原,分别免疫BALB/c小鼠,取脾细胞分别与Sp 2/O、NS-1、NS-0骨髓瘤细胞融合,用ELISA检测建立了抗荚膜A型杂交瘤细胞系2株(1B_1、2B_7),抗×75菌体表面抗原的杂交瘤细胞株13株(1A_7、1A_6、1D_4、1D_(10)、2B_5、2A_3、3C_1、5C_3、2C_2、1B_5、1A_4、3D_6、4A_7),抗P1059菌体表面抗原的杂交瘤细胞株1株(3B_7)。     

伊氏锥虫在兔和豚鼠体内抗原变异研究

为了解伊氏锥虫在动物体内抗原变异情况,用伊氏锥虫安徽株单虫克隆ＳｈＴａｔｌ分别感染兔和豚鼠。在兔体３０ｄ中,每三天分离兔血中锥虫并克隆,获得１０个克隆锥虫,经间接免疫荧光试验和生物素抗生物素酶标试验鉴定,为９个抗原性互不相同的抗原变异体ＳｈＴａｔ１．１～１．９。同种方法在４只兔体内３０ｄ获得同样９个变异体,并且出现顺序一致。该克隆在豚鼠体内１５ｄ所获得的５个变异体,经鉴定均在兔体出现过,但变异顺序不同,显示克隆锥虫在兔和豚鼠体内均发生抗原变异。在感染早期,同种不同个体宿主体内,抗原变异体出现顺序一致,而不同种宿主体内变异体出现顺序不同。     

旋毛虫抗原分子克隆及其T细胞和B细胞表位预测

目的 克隆旋毛虫肌幼虫Mr21 000抗原蛋白基因(Ts21),预测其T细胞和B细胞表位.方法 旋毛虫(河南地理株)感染小鼠后收集肌幼虫,提取肌幼虫总RNA,应用RT-PCR技术获取目的基因Ts21,构建重组质粒pUC18-Ts21并测序,应用生物信息分析软件预测其T细胞和B细胞表位.结果 成功构建克隆载体pUC18-Ts21.旋毛虫Mr21 000抗原的T细胞表位位于第9～23、135～150位氨基酸位点;B细胞表位位于第31～35、53～56、98～104、124～130、133～157、160～172位氨基酸位点.结论 成功克隆了旋毛虫河南地理株肌幼虫Mr21 000抗原的编码基因,T细胞和B细胞表位预测结果表明该抗原蛋白具有较好的抗原性,可作为旋毛虫病免疫诊断和预防的候选抗原.     

狂犬病病毒人单克隆抗体的生物学特征

本文报道应用体细胞杂交技术制备了9株抗狂犬病病毒糖蛋白(G蛋白)、核糖核蛋白(RNP)或基质蛋白的人单克隆抗体(McAb)。4株属IgM,1株属JgA_1,1株属IgG_1,3株属IgG_2。     

旋毛虫Ts87抗原单克隆抗体的制备及其识别肽段的研究

将原核系统成功表达的Ts87重组蛋白纯化后免疫动物,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗Ts87抗原的单克隆抗体.通过ElISA、免疫印迹、免疫组化等方法筛选出能分泌抗Ts87御抗原的抗体的阳性克隆,在1000个融合的杂交瘤细胞中,有3株融合细胞分泌的单克隆抗体(2A2,5A3,6G12)鉴定结果为阳性.这3株融合细胞分泌的抗体均能识别Ts87重组蛋白、旋毛虫成虫和幼虫的Ts87抗原以及旋毛虫幼虫组织切片.获得的抗Ts87抗原的单克隆抗体在将来的研究中可作为旋毛虫病的诊断试剂.为了进一步鉴定抗体识别的相应抗原表位和模拟抗原表位,选择了其中一株单克隆抗体5A3筛选噬菌体十二肽库.噬菌体M7展示的肽段是抗体识别Ts87抗原的线性表位,其他的噬菌体克隆展示的肽段是Ts87抗原的模拟表位.该技术为旋毛虫病多表位疫苗的构建奠定了基础.     

抗口腔支原体单克隆抗体的制备研究

本研究通过BALB/c小鼠免疫脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞(Sp 2/0)融合,融合率为100％(72/72),抗体阳性率为77.79％,并经筛选、克隆、建立37株分泌抗口腔支原体单克隆抗体的 杂交瘤细胞株(2A_(10)、2A_(11)、3C_8、2C_(10)、3G_3、2H_7和2H_(12)),抗体滴度介于4000～64000之间。同时,建立了检测抗体的BA法。该抗体与相应的口腔支原体以及人肺炎支原体、牛     

抗恶性疟单抗独特型决定簇的第二单克隆抗体的制备和鉴定

本文以分泌抗恶性疟疾红内期抗体的小鼠杂交瘤细胞系94D1诱生的腹水,通过Protein A-Sepharose cL-4B亲和层析法,纯化IgG,并以此作为免疫原皮下多点免疫Wistar大鼠。加强免疫后3天取脾与小鼠Sp2/0瘤细胞进行异种间的细胞融合,经间接ELISA法检测筛选和5次克隆化,最终得到一株生长稳定,连续分泌特异抗体的异种杂交瘤细胞系41RF5。经过多次冷冻和复苏以及体外连续传代培养6个月,其稳定性与小鼠×小鼠杂交瘤细胞相近。选择8株单抗和Sp2/0 IgG作为包被抗原,即6株抗恶性疟单抗:21E3、92D4(IgG2b)、93A3(IgG_1)、94B5(IgG_1)、94C_3(IgG_1)和94D1(IgG2b),1株抗猪尾猴疟原虫(Plas mc-dium inui)红内期单抗32A12(IgG_1)和1株抗登革热Ⅲ型病毒单抗215D3(Ig-G2b),用间接ELISA法对41RF5特异性进行鉴定,结果显示,41RF5单抗只与94D1呈阳性反应,与其余各种包被抗原均呈阴性反应,表明41RF5具有良好的抗94D1单抗独特型决定簇的特异性,41RF5培养上清中特异的抗体效价为1:1,28O。     

从噬菌体12肽库筛选旋毛虫抗原模拟表位

为研究和开发新的旋毛虫病诊断抗原和疫苗 ,以纯化旋毛虫病患者血清免疫球蛋白 (Ts Ig)对噬菌体1 2肽库进行 5轮筛选获得旋毛虫抗原模拟表位 ,随机挑选 2 4个克隆 ,通过ELISA选取吸光度 (A)较高的 6个克隆 (T1～T6 )并检测其灵敏性和特异性。结果显示 :T1～T6灵敏性与旋毛虫幼虫抗原 (TsA)相同 (阳性反应率 :1 0 0 % ,P >0 0 5 ) ,特异性与TsA无明显差异 (阳性反应率 :0～ 4 0 % ,P >0 0 5 ) ,其中T3,T6与肺吸虫病患者血清无交叉反应 ,特异性高于TsA(P <0 0 5 ) ,T6与日本血吸虫病患者血清无交叉反应 ,特异性亦高于TsA(P<0 0 5 ) ,证实利用噬菌体 1 2肽库可以成功地筛选到旋毛虫抗原模拟表位 ,为旋毛虫病诊断抗原和疫苗的研究和开发提供了新的研究途径     

分泌抗斯氏肺吸虫代谢抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

<正> 本文用斯氏肺吸虫代谢抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,首次成功地获得了2株分泌抗斯氏肺吸虫代谢抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞D_1—3B_4和G_2—3C_4。 在培养皿中收集斯氏肺吸虫代谢产物,经透析、浓缩,测蛋白含量为2.4mg/ml。用此抗原(0.1ml)与等量福氏完全佐剂经腹腔及皮下免疫BALB/c小鼠,每隔3周一次,共三次。末次免疫后10天用单纯代谢抗原0.1ml注入尾静脉一次,融合前3天再从尾静脉加强免疫一次。取对数生长期的SP2/0小鼠骨髓瘤细胞和免疫小鼠脾细胞以1:5比例混合,用