日本血吸虫成虫67kD蛋白的分离与鉴定

目的 :分离日本血吸虫感染及免疫血清识别的成虫抗原 (AWA)中的特异蛋白带 ,为血吸虫病免疫诊断提供新的抗原分子。方法 :免疫印迹法分析AWA的特异蛋白带 ,电泳层析法分离靶抗原。结果 :获得了感染血清和免疫血清识别的 6 7kD蛋白。结论 :电泳层析法是一种分离血吸虫抗原的有效方法     

日本血吸虫成虫67kD蛋白的分离与鉴定

目的：分离日本血吸虫感染及免疫血清识别的成虫抗原（AWA）中的特异蛋白带，为血吸虫病免疫诊断提供新的抗原分子。方法：免疫印迹法分析AWA的特异蛋白带，电泳层析法分离靶抗原。结果：获得了感染血清和免疫血清识别的67kD蛋白。结论：电泳层析法是一种分离血吸虫抗原的有效方法。     

Identification of excreted and metabolic antigens from adult worms of Schistosoma japonicum

目的 制备日本血吸虫成虫分泌代谢抗原,对其免疫原性以及免疫反应性进行初步鉴定.方法 日本血吸虫尾蚴感染家兔,42 d后剖杀获取成虫,将虫体置无血清DMEM培养基中,5% CO2孵箱37℃培养4 h,得到成虫分泌代谢抗原;用该抗原免疫小鼠,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体反应;用该抗原包板,ELISA法检测血吸虫感染人血清抗体效价;采用十二烷基硫酸钠聚丙酰烯胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对其组分进行分析,然后用Western blot分析其对抗成虫分泌代谢抗原单抗发生反应的蛋白条带.结果 成功制备日本血吸虫成虫分泌代谢抗原;免疫小鼠可产生较高滴度(1:16 000)抗体反应;急性血吸虫病患者、慢性血吸虫病患者、晚期血吸虫病患者和钩虫病患者血清抗该抗原的抗体效价分别为1:800、1:400、1:800和1:100,华支睾吸虫患者和正常人血清均为阴性;SDS-PAGE显示其具有4条蛋白条带,分子量分别是13、40、60和180 ku左右;Western blot结果 表明该抗原能够被抗成虫分泌代谢抗原单抗在5 ku左右处识别.结论 制备的日本血吸虫成虫分泌代谢抗原具有较强的免疫原性和免疫反应性.     

日本本血吸虫患者尿液中32kD循环抗原的免疫生物学特征

目的研究日本血吸虫感染者尿液中特异性的诊断抗原，以尿液为样本诊断日本血吸虫病。方法用IgG的亲和层析柱分离和纯化抗日本血吸虫循环抗原抗体并用生物素标记分离纯化的IgG抗体；Western blot检测日本血吸虫虫卵可溶性抗原和日本血吸虫感染者尿液中存在的日本血吸虫主要的循环抗原分子。结果日本血吸虫患者尿液中存在日本血吸虫的特异性循环抗原，Western blot显示其尿液中主要循环抗原分子与虫卵可溶性32kD抗原分子相同。结论日本血吸虫感染者尿液中的32kD循环抗原分子可能来自日本血吸虫虫卵可溶性抗原，可作为血吸虫感染的诊断。     

日本血吸虫成虫67kD抗原模拟表位的筛选及其免疫原性

目的：筛选日本血吸虫成虫67kD抗原的模拟表位，对其免疫学活性予以鉴定。方法：用粗提日本血吸虫成虫67kD抗原的抗体IgG作配体筛选噬菌体12肽库，随机挑取三轮筛选后的噬菌体克隆，Dot-ELISA检测其特异性：用混和阳性噬菌体克隆免疫小鼠3次，攻击感染后45d剖杀，计数虫荷。结果：经三轮筛选，特异噬菌体得到富集，挑取的11个噬菌体克隆经Dot-ELISA鉴定均与67kD抗原免疫血清呈阳性反应。混合噬菌体克隆的免疫血清可识别67kD抗原，并具有一定的抗血吸虫的免疫保护效果。结论：利用噬菌体随机肽库技术获得了日本血吸虫成虫67kD抗原的模拟表位，这些表位具有良好的免疫原性。     

日本血吸虫成虫分泌抗原的鉴定

目的制备日本血吸虫成虫分泌代谢抗原,对其免疫原性以及免疫反应性进行初步鉴定。方法日本血吸虫尾蚴感染家兔,42 d后剖杀获取成虫,将虫体置无血清DMEM培养基中,5%CO2孵箱37℃培养4 h,得到成虫分泌代谢抗原;用该抗原免疫小鼠,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体反应;用该抗原包板,ELISA法检测血吸虫感染人血清抗体效价;采用十二烷基硫酸钠聚丙酰烯胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对其组分进行分析,然后用Western blot分析其对抗成虫分泌代谢抗原单抗发生反应的蛋白条带。结果成功制备日本血吸虫成虫分泌代谢抗原;免疫小鼠可产生较高滴度(1∶16 000)抗体反应;急性血吸虫病患者、慢性血吸虫病患者、晚期血吸虫病患者和钩虫病患者血清抗该抗原的抗体效价分别为1∶800、1∶400、1∶800和1∶100,华支睾吸虫患者和正常人血清均为阴性;SDS-PAGE显示其具有4条蛋白条带,分子量分别是13、40、60和180 ku左右;Westernblot结果表明该抗原能够被抗成虫分泌代谢抗原单抗在5ku左右处识别。结论制备的日本血吸虫成虫分泌代谢抗原具有较强的免疫原性和免疫反应性。     

日本血吸虫成虫31/32KD 诊断蛋白—与血吸虫单克隆抗体和病人血清的免疫印斑反应

有关血吸虫抗原的分离和纯化已有不少报道和综述。本研究应用免疫印斑技术观察日本血吸虫成虫蛋白与感染日本血吸虫病人和病鼠血清的反应,证实日本血吸虫成虫31/32KD诊断蛋白的存在,并进一步研究了其特性和诊断价值,以期为日本血吸虫病的诊断提供特异的抗原。采用免疫印斑试验进行比较观察,发现日本血吸虫和曼氏血吸虫具有相同的31/32诊断蛋白;应用成虫冰冻切片进行间接免疫荧光抗体试验,检查31/32KD诊断蛋白的形态学定位,证实两者均来源于成虫肠管;与抗血吸虫单克隆抗     

日本血吸虫重组32kD抗原的纯化和诊断应用

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结合电渗洗脱的方法分离、纯化日本血吸虫重组３２ｋＤ抗原（ｒＳｊ３２）；用酶联免疫印迹技术（ＥＩＴＢ）分析纯化抗原的免疫活性。用纯化抗原、日本血吸虫成虫抗原（ＡＷＡ）和可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ）分别检测慢性血吸虫病人、肺吸虫病人、肝吸虫病人、钩虫病人和健康人血清抗体。结果表明：纯化的ｒＳｊ３２分子量为３７ｋＤ，有较好的免疫活性；用其检测日本血吸虫病的敏感性和特异性与虫源性抗原（ＡＷＡ和ＳＥＡ）无显著性差异。提示ｒＳｊ３２可代替ＡＷＡ和ＳＥＡ用于日本血吸虫病诊断     

日本血吸虫成虫31/32KD抗原的纯化及其免疫化学特性

本文采用超凝胶柱层析法分离纯化日本血吸虫成虫31/32KD抗原。分离的抗原经银染色及免疫印迹法分析证明已达免疫纯及生化纯级。该抗原PAS染色呈阴性,经过碘酸钠处理后不失去活性,在琼脂糖凝胶电泳中趋向阳极。鉴于血吸虫成虫31/32KD组分是一种主要血清学抗原,它的分离纯化为改进和标化血吸虫病的诊断提供了条件。     

日本血吸虫成虫31／32KD蛋白的纯化及其免疫化学特性

本支采用制备型SDS-PAGE和电渗析法分离纯化日本血吸虫成虫31／32KD蛋白，分离纯化的血吸虫31／32KID蛋白经SDS--PAGE、EITB和ELlSA检测证明纯度高，活性不量影响．鉴于血吸虫成虫31／32KD蛋白是一种主要血清学抗原，它的分离纯化为改进和标化血吸虫病的诊断及分子疫苗的研制提供了条件。     

日本血吸虫天然抗原分子的柱层析分离纯化与鉴定

目的分离纯化日本血吸虫成虫(AWA)和未成熟虫卵(SIEA)可溶性抗原中的单一蛋白,为血吸虫病免疫诊断、预防提供新的抗原分子。方法柱层析分离纯化成虫和未成熟虫卵可溶性抗原,SDS—PAGE及银染色进行分析鉴定。结果得到了三种不同大小血吸虫分子抗原AwA18000u,SIEA42000u,SIEA130000u。结论实验证明柱层析法是一种快速分离纯化血吸虫单一组分抗原简单而有效的方法。     

Schistosoma japonicum: construction of phage display antibody library and its application in the immunodiagnosis of infection

Background A monoclonal antibody would be an effective tool for the detection of circulating antigens in the serum of patients with schistosomiasis, but the traditional way of producing monoclonal antibodies is not cost-effective. The objective of this study was to find a new method for the large-scale production of monoclonal antibodies against Schistosoma japonicum (Sj).Methods A phage display antibody library for Sj was constructed. To obtain a single-chain variable fragment antibody (scFv) against Sj, the library was screened with metabolic antigens from adult Sj worms (Sj-MAg) using enzyme-linked immunosorbent assay. The soluble scFvs selected were used to detect Sj antigens in the serum of acute and chronic schistosomiasis patients.Results Six positive clones with good reactivity to Sj-MAg were obtained from the phage display antibody library of about 1.07 x 106 individual clones. Only two of these six clones bound specifically to Sj-MAg and were chosen for further analysis. Specific soluble anti-Sj-MAg scFvs were produced by inducing the 2 clones with isopropyI-D-thiogalactopyranoside. The characteristics of the scFvs were then determined. The results of Western blot showed that these scFvs could bind to Sj-MAg specifically and had a molecular weight of about 31 kD. When testing serum from schistosomiasis patients with one of the two specific scFvs, its sensitivity was found to be 60% and 37% in acute and chronic patients, respectively, with a specificity of 90%. When the two specific scFvs were combined,their sensitivity was found to be 75% and 57% in acute and chronic patients, respectively, with a specificity of 85%.Conclusions The results indicate that the scFvs are potentially useful for the diagnosis of schistosomiasis. The library construction also provides a useful tool for the further screening of other antibodies for both diagnostic and immunotherapeutic applications and for epitope analysis and vaccine design.     

日本血吸虫尾蚴66~68 kD单特异性血清对尾蚴cDNA文库的免疫学筛选

目的：获得日本血吸虫（Schistosoma japonicum，Sj）尾蚴66～68kD抗原的编码基因，为日本血吸虫疫苗和诊断研究提供材料。方法：以Sj尾蚴66～68kD抗原免疫家免获得的单特异性血清为探针，对Sj尾蚴cDNA文库进行免疫筛选，将所获阳性克隆的插入片断进行PCR扩增、琼脂糖电泳初步鉴定，并挑选出4个强阳性克隆进行测序，通过互联网NCBI／BLAST进行核苷酸序列分析。结果：共获得21个持续阳性克隆，其中10个阳性克隆初步鉴定显示为单一扩增条带，且插入的cDNA片段大小分布于0．5—3．0kb之间；4个强阳性克隆分别与日本血吸虫SJCHGC05187，SJCHGC05173，SJCHGC06989，SJCHGC01894显著同源。结论：获得了4种日本血吸虫相关的编码基因。     

日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶在虫卵阶段的定位

目的探讨谷胱甘肽-S-转移酶(Sj26GST)在虫卵阶段的表达、定位和重组蛋白(rSj26GST)的免疫诊断价值。方法从感染日本血吸虫尾蚴6周的兔肝脏中分离虫卵,分别用RT-PCR和免疫印迹(Western blotting)法检测Sj26GST基因在虫卵阶段的转录和翻译;同时用兔肝做免疫组化观察Sj26GST在虫卵内的分布。利用纯化的rSj26GST和日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA),采用间接ELISA法检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清。结果RT-PCR从血吸虫虫卵中扩增670bp的基因片断,Western blotting证明在虫卵阶段Sj26GST的表达;同时免疫组化显示Sj26GST主要分布在虫卵内毛蚴两边的侧腺。rSj26GST检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清的阳性率分别为92%、80%和0;用SEA检测以上标本,阳性率分别为96%、84%和2%。结论Sj26GST是SEA的主要组分之一,能刺激机体产生高滴度的抗体;rSj26GST为抗原诊断日本血吸虫病显示出高度的敏感性和特异性,具有实用价值。     

用日本血吸虫成虫抗原ELISA检测血吸虫病抗体的现场应用

用日本血吸虫成虫抗原(AAg)和虫卵抗原(EAg)ELISA检测血吸虫病疫区粪检阳性病人134例,其阳性率分别为99.25％和98.51％。134例中45例儿童和89例成人用AAg检测,其阳性率分别为100％和98.88％,而用EAg检测的阳性率分别为97.78％和98.88％。AAg和EAg检测26例正常人均为阴性。结果表明:AAg与EAg的检出率以及儿童与成人的检出率均相似。     

紫外线致弱尾蚴免疫兔血清筛选血吸虫成虫cDNA文库

目的 :寻找照射致弱尾蚴中起免疫保护作用的抗原分子 ,为血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原。方法 :用紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)成虫cDNA文库 ,并对阳性克隆的插入基因片段进行PCR扩增及测序分析。结果 :经三轮筛选 ,获 10个阳性克隆 ,其插入的SjcDNA片段大小为 1 5～1.8kb。初步测序获 5个部分序列 ,其中 2个序列分别与Sj动力蛋白轻链 5 (DLC 5 )及Sj线粒体基因明显同源 ,其余 3个序列为未知的新基因片段。结论 :获得的阳性克隆插入基因片段可能为编码抗日本血吸虫感染的抗原基因