高浓度葡萄糖对人腹膜间皮细胞生长和基质合成的影响

持续性不卧床腹膜透析（ＣＡＰＤ）时腹膜间皮层直接浸泡于含葡萄糖１．５０％～４．２５％的透析液中，为了探讨高浓度葡萄糖对腹膜间皮细胞生长和基质合成的影响，我们建立了人腹膜间皮细胞（ＨＭＣ）培养体系。ＨＭＣ在含葡萄糖浓度≥１．００％的培养基中生长时，￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入量较在０．１０％或不加葡萄糖的培养基中生长时明显降低。当介质中葡萄糖浓度≥０．５０％时ＨＭＣ培养上清的纤维连接蛋白（ＦＮ）水平明显增高。葡萄糖引起的细胞增殖抑制和ＦＮ分泌增加均呈时间与剂量依赖关系。用甘露醇代替葡萄糖进行试验得到相似结果，但其抑制细胞增殖的作用明显弱于相同渗量的葡萄搪。上述结果表明，周围介质中高浓度的葡萄糖对ＨＭＣ生长和基质合成具有直接影响。反复或长期使用高糖透析液引起的ＨＭＣ修复和代谢障碍可能参与了ＣＡＰＤ相关性腹膜硬化的发生。     

腹透液中人腹膜间皮细胞的原代培养

人腹膜间皮细胞 (ＨＰＭＣ)是腹膜表层主要的细胞群体 ,间皮细胞在腹膜透析 (ＰＤ)时对腹膜具有重要的保护功能。长期ＰＤ的患者 ,其腹膜间皮层微绒毛减少、脱落乃至间皮层消失[1] ,最终促进了腹膜纤维化的进展及腹膜失超滤的发生。建立间皮细胞的体外培养体系 ,对于开展ＰＤ领域的基础及临床研究 ,具有非常重要的意义。基于以上的认识 ,本研究建立ＰＤ流出液中原代培养ＨＰＭＣ的培养方法 ,并设法应用扫描电镜动态观察来自不同透龄培养的间皮细胞其形态学上的差异 ,以利用这种无创性的体外培养方法间接地判断ＰＤ患者体内腹膜间皮层的实际…     

从网膜组织法培养人腹膜间皮细胞

腹膜结构与功能的稳定和维持是长期腹膜透析治疗的基础 ,腹膜间皮细胞是构成腹膜最大的细胞群体 ,对保持腹膜结构和功能稳定 ,防止腹腔感染和腹膜硬化等具有重要作用[1～ 4 ] ,腹膜透析时透析液长期与腹膜接触而损伤腹膜间皮细胞。因而探讨人腹膜间皮细胞生理功能及其在腹膜透析时的改变 ,对预防和减少腹膜透析相关性腹膜炎和腹膜硬化的发生 ,延长腹膜的使用寿命等具有重要意义。建立人腹膜间皮细胞培养体系 ,为体外研究人腹膜间皮细胞生理功能及其在腹膜透析时的改变提供了有效手段。早在 2 0世纪 80年代初 ,Ｗｕ等[5] 通过直接从患者腹水…     

腹膜透析液对小鼠腹膜间皮细胞超微结构影响的比较研究

作者通过模拟ＣＡＰＤ动物实验，应用扫描电镜观察比较了不同的腹透液对正常小鼠腹膜超微结构的影响，实验结果发现，随着注药时间延长，实验小鼠腹膜间皮细胞游离面微绒毛与间皮细胞的损害逐渐加重；三组腹透液对腹膜间皮影响是不相同的，Ｂａｘｔｅｒ腹透液对腹膜间皮损伤较严重，其中又以醋酸盐腹膜液为甚，注药后２１ｄ，乳酸盐和醋酸盐组均可见轻至中度的纤维素性粘连形成，停止注药后１０ｄ，腹膜间皮损伤基本恢复正常。本文结     

乳酸盐腹膜透析液对人腹膜间皮细胞功能的影响

目的研究乳酸盐腹膜透析液(L-PDF)对人腹膜间皮细胞(HPMC)功能的影响.方法分离HPMC作体外培养,以MTT试验测定HPMC增殖程度;采用ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素-8(IL-8)和纤维连接蛋白(FN)的蛋白质水平;逆转录多聚酶链反应检测IL-8mRNA的表达;用Lowry方法检测细胞培养液内总蛋白.结果L-PDF抑制HPMC的增殖,且呈时间依赖关系.L-PDF刺激HPMC后,培养液中IL-8和FN蛋白质水平明显增高,并上调IL-8mRNA的表达.在恢复培养期间,若加用脂多糖(10mg/L)、金黄色葡萄球菌肠毒素(10mg/L)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α,10×10     

腹膜上皮-间皮细胞转分化与腹膜纤维化

腹膜透析（PD）治疗终末期肾脏疾病（ESRD）已有30余年，现代PD史的前20年主要致力于PD管道的设计、手术技术及腹膜炎的预防，近10年则主要研究PD液的生物相容性，以减少其对腹膜形态及功能的影响。生物不相容性的PD液、腹膜炎症及腹腔积血可导致急慢性腹膜炎症并损伤腹膜，导致腹膜逐渐纤维化及血管再生，最后失去超滤功能。     

法舒地尔对腹膜透析大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响

目的:观察Rho激酶(Rho-kinase)抑制剂法舒地尔对腹膜透析大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响.方法:通过每日腹腔注射4.25％腹膜透析液建立腹膜透析大鼠模型.大鼠随机分为4组:正常对照组;腹膜透析模型组;法舒地尔5 mg组;法舒地尔10 mg组.4周后杀检大鼠,取脏层腹膜组织,分别用RT-PCR、Western杂交或免疫荧光方法检测转化生长因子β1(TGF-β1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)的表达,同时用Western杂交检测Rho-kinase活性. 结果:法舒地尔呈剂量依赖模式显著抑制Rho-kinase活性.与正常组比较,腹膜透析模型组TGF-β1蛋白及mRNA表达显著上调,转分化指标α-SMA蛋白及mRNA表达明显上调(P＜0.01),E-cadherin蛋白及mRNA显著下调(P＜0.01),腹膜超滤量显著降低.法舒地尔干预后,TGF-β1蛋白及mRNA表达呈剂量依赖模式下调,α-SMA蛋白及mRNA表达呈剂量依赖模式下调,E-cadherin蛋白及mRNA表达呈剂量依赖模式上调,腹膜超滤量显著改善. 结论:Rho-kinase激活在腹膜透析大鼠腹膜间皮细胞转分化中起重要作用.法舒地尔可通过抑制TGF-β1信号通路,阻止腹膜间皮细胞转分化,从而改善腹膜透析大鼠模型腹膜结构和功能.     

高糖对人腹膜间皮细胞间粘合连接复合体的影响

目的 :研究高糖对人腹膜间皮细胞 (HPMC)间粘合连接复合体表达的影响 ,探讨腹膜透析 (PD)中腹膜间皮层完整性损伤的机制。　 方法 :采用人腹膜间皮细胞株HMrSV 5为研究对象。细胞分为 3组 :①正常对照组 (含 5 5mmol/LD 葡萄糖 ) ;②高糖组 (含 140mmol/LD 葡萄糖 ) ;③高渗组 (含 5 5mmol/LD 葡萄糖及 134 5mmol/L甘露醇 ) ,各组分别于 6、12、2 4、48h进行实验。采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)、Westernblot及免疫荧光等方法检测粘合连接复合体主要成分E Cadherin、β Catenin基因及蛋白水平表达 ,采用免疫荧光技术观察高糖对细胞Actin微丝骨架的影响。　 结果 :①高糖致细胞脱落呈时间依赖效应 ;②高糖引起E Cadherin、β CateninmRNA及蛋白表达下降 ,免疫荧光显示二者在HPMC细胞膜上的表达明显减低 ,呈不连续分布 ;③高糖使Actin微丝骨架解体 ;④高渗透压组未见上述效应。　 结论 :高糖使HPMCE Cadherin、β Catenin基因及蛋白表达下降 ,微丝骨架解体 ,从而损害细胞间粘合连接复合体的形成 ,造成腹膜间皮完整性的损害。     

高浓度葡萄糖对人胰岛β细胞凋亡影响的分子机制

目的　初步探讨高浓度葡萄糖对人胰岛 β细胞凋亡的影响及其分子机制。　 方法　分离培养人胰岛细胞 ,并分为对照组、高糖组和高糖 氨基胍组 ,3 7℃ ,5 %CO2 培养 72h ,测定培养液上清液中胰岛素、一氧化氮 (NO)、还原性谷胱甘肽 (GSH)水平。原位末端核苷酸标记法 (TUNEL)和胰岛素免疫组化双染色法及ELISA法检测胰岛 β细胞凋亡 ,RT PCR检测胰岛细胞p5 3、Bcl 2和胰岛素基因启动转录因子 1 (PDX 1 )mRNA表达水平。　结果　高糖组胰岛 β细胞凋亡小体富计因子(1 91± 0 6 9)、β细胞凋亡率 (1 4 8% )、NO〔(1 82 3± 1 5 5 ) μmol/L〕和 p5 3mRNA(0 3 0 6± 0 0 3 9)表达水平均显著高于高糖 氨基胍组〔分别为 1 1 9± 0 3 3、6 8%、(1 5 4 2± 1 9 7) μmol/L、0 1 3 9±0 0 6 9,P <0 0 1〕和对照组〔分别为 1 0 6± 0 2 6、4 2 %、(1 1 7 3± 2 1 7) μmol/L、0 1 2 5± 0 0 1 5 ,P <0 0 5〕 ,而胰岛素释放量、GSH、bcl 2mRNA和PDX 1mRNA表达水平则显著低于高糖 氨基胍组(P <0 0 5 )和对照组 (P <0 0 5 )。　结论　高浓度葡萄糖可通过诱导人胰岛 β细胞凋亡及PDX 1表达降低使胰岛素分泌减少 ,其机制与高糖状态下胰岛 β细胞抗氧化能力降低引起NO介导的p5 3高表达和PDX 1低表     

不同浓度钙离子对人腹膜间皮细胞E-钙黏蛋白、成纤维细胞特异蛋白、波形蛋白表达的影响

目的:观察钙浓度变化对人腹膜间皮细胞上皮细胞-间充质细胞转分化的影响,探讨腹膜透析中腹膜纤维化的可能机制.方法:以人腹膜间皮细胞永生化细胞株(HMrSV5)为研究对象,予不同浓度钙(0.25、0.75、1.25、1.75、2.25 mmol/L)处理细胞48h,以不含钙处理组为对照.采用蛋白免疫印迹和间接免疫荧光染色方法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、成纤维细胞特异蛋白(fibroblast specific protein,FSP1)和波形蛋白(Vimentin)的表达.结果:不含钙组HMrSV5细胞基本不表达E-cadherin,极低水平表达Vimentin和FSP1;而予含不同浓度钙离子处理48h后,HMrSV5中E-cadherin先呈剂量依赖性上调,1.25mmol/L组至顶峰,再呈剂量依赖性下降;而Vimentin和FSP1均在1.75mmol/L组HMrSV5中明显升高(P<0.05)并呈剂量依赖性上调.间接免疫荧光染色结果也显示,高钙组Vimentin和FSP1荧光强度比低钙组显著增强. 结论:钙离子浓度的变化能诱导人腹膜间皮细胞E-cadherin、FSP1、Vimentin蛋白表达发生变化,提示钙离子可能是参与调控间皮细胞间充质转分化的一个重要因素.     

葡萄糖诱导人血管内皮细胞凋亡及其对bax和bcl-2表达的影响

目的　探讨糖尿病 (DM)状态下葡萄糖 (Glu)对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)凋亡的影响及其分子机制。　方法　细胞凋亡用吖啶橙 (AO)荧光染色、原位末端标记 (TUNEL)法、流式细胞仪分析检测。同时行bcl 2和bax免疫细胞化学染色和定量分析。　结果　高浓度Glu( 2 0mmol/L、4 0mmol/L)能够诱导HUVEC凋亡 ,且呈浓度和时间依赖性。高糖 ( 2 0mmol/L)培养HUVEC 72h后bax表达的MOD×area值由 387± 97升至 136 9± 2 2 5 (P <0 .0 1) ,对照组和高糖组bcl 2染色的MOD×area分别为 15 0± 36和 186± 76 ,两者间差异无显著意义 (P >0 .0 5 )。　结论　DM状态下高血糖能诱导内皮细胞凋亡 ,其机制可能与bax基因表达上调有关。     

高糖与活性氧对人腹膜间皮细胞p21^Wafl表达的影响

目的：研究不同浓度葡萄糖、活性氧（过氧化氢）、抗氧化剂（丙酮酸等）对体外培养人腹膜间皮细胞（HPMC）细胞周期的影响及其机制。方法：以体外培养的HPMC作为研究对象，分别给予不同浓度的葡萄糖、过氧化氢、丙酮酸作为刺激因素，观察细胞形态，用流式细胞仪检测细胞周期改变，测定C1期细胞比例。用半定量逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）检测细胞周期调控蛋白kp21^Wafl mRNA水平，用细胞免疫组化方法检测p21^Wafl蛋白水平，分析细胞周期改变机制。结果：高糖、过氧化氢可以引起细胞形态呈肥大、衰老改变，细胞周期分析提示G1期细胞比例升高，即细胞停滞于G1期；加入抗氧化剂（丙酮酸）后，G1期细胞比例下降。高糖、外源性过氧化氢可以使p21表达增加（基因与蛋白水平），在高糖培养液中加入抗氧化剂，可以使p21表达下降。结论：高糖、外源性过氧化氢皆可使细胞周期发生停滞，且高糖增加外源性过氧化氢的毒性作用；高糖的这种作用与内源性活性氧致p21^Walf的表达增加有关，使用抗氧化剂可使之减轻。     

高糖与活性氧对人腹膜间皮细胞p21Waf1表达的影响

目的 :研究不同浓度葡萄糖、活性氧 (过氧化氢 )、抗氧化剂 (丙酮酸等 )对体外培养人腹膜间皮细胞(HPMC)细胞周期的影响及其机制。　 方法 :以体外培养的HPMC作为研究对象 ,分别给予不同浓度的葡萄糖、过氧化氢、丙酮酸作为刺激因素 ,观察细胞形态 ,用流式细胞仪检测细胞周期改变 ,测定G1期细胞比例。用半定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)检测细胞周期调控蛋白p2 1Waf1mRNA水平 ,用细胞免疫组化方法检测p2 1Waf1蛋白水平 ,分析细胞周期改变机制。　 结果 :高糖、过氧化氢可以引起细胞形态呈肥大、衰老改变 ,细胞周期分析提示G1期细胞比例升高 ,即细胞停滞于G1期 ;加入抗氧化剂 (丙酮酸 )后 ,G1期细胞比例下降。高糖、外源性过氧化氢可以使p2 1表达增加 (基因与蛋白水平 ) ,在高糖培养液中加入抗氧化剂 ,可以使p2 1表达下降。　 结论 :高糖、外源性过氧化氢皆可使细胞周期发生停滞 ,且高糖增加外源性过氧化氢的毒性作用 ;高糖的这种作用与内源性活性氧致p2 1Waf1的表达增加有关 ,使用抗氧化剂可使之减弱     

TGF-β1通过肾素(前体)受体和V-ATP 酶诱导人腹膜间皮细胞转分化

目的观察转化生长因子(TGF)-β1对人腹膜间皮细胞(HPMCs)肾素(前体)受体(P) RR和V-ATP酶的mRNA和蛋白表达影响。方法取健康成年人大网膜进行原代培养。用5 ng/ml TGF-β1刺激第三代培养细胞,采用免疫组织化学染色、Western印迹、酶联免疫吸附试验(ELISA)及RT-PCR等方法,分别观察肾素(前体)受体和V-ATP酶的mRNA和蛋白表达。结果 (P)RR和V-ATPase mRNA表达水平随TGF-β1浓度增加和孵育时间的延长而上调,且均显著高于Con组(均P<0.05)。TGF-β1组(4.23±0.98)、TGF-β1+si-N组(3.42±1.05)、TGF-β1+si-(P)RR组(2.48±0.56)组V-ATPase mRNA水平均显著高于Con组(1.00±0.00,P<0.05),且TGF-β1+si-(P)RR组V-ATPase mRNA水平显著低于TGF-β1+si-N组(P<0.05)。结论 TGF-β1在致腹膜纤维化过程中诱导了HPMCs内(P)RR和V-ATPase的转录与蛋白表达,(P)RR介导了TGF-β...     

细胞内活性氧在糖基化终末产物促人腹膜间皮细胞分泌血管内皮生长因子中的作用

目的:观察糖基化终末产物(AGEs)对人腹膜间皮细胞(HPMC)分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响及细胞内活性氧(ROS)在其中的作用。方法:分别用不同浓度的AGE-HSA及抗氧化剂N-酰-L-半胱氨酸(NAC)作用于细胞,用RT-PCR和ELISA方法测定HPMC中VEGF的表达;再以氧化敏感的荧光染料2、7-二氢二氯荧光素(DCFH)染色,流式细胞仪测定细胞内活性氧强度。结果:AGE-HSA能使细胞内ROS水平明显升高,呈现浓度依赖效应;AGE-HSA同时以时效和量效方式促进HPMC中VEGF的表达;而NAC能够明显抑制AGE-HSA所导致的细胞内ROS升高,同时抑制HPMC中VEGF的分泌。结论:AGE-HSA可能部分通过诱导细胞内ROS,促进HPMC表达VEGF,从而引起腹膜新生血管的增加,最终导致腹膜失超滤现象。     

长期高浓度葡萄糖对胰岛细胞凋亡和功能相关基因表达的影响

目的　探明长期高浓度葡萄糖对体外胰岛细胞功能和凋亡相关基因表达的影响。方法应用放免法检测不同浓度葡萄糖培养后大鼠胰岛细胞和小鼠 βTc3细胞在葡萄糖刺激时培育上清液和细胞内的胰岛素水平 ;应用半定量多重RT PCR和Northern印迹法检测培养后IDX 1(Isletduodenalhomeobox 1) ,葡萄糖激酶 (GK ) ,葡萄糖转运子 2 (GLUT2 ) ,C/EBPβ和Bcl xmRNA的表达情况 ;应用TUNEL法检测培养后的细胞凋亡百分率。结果　 ( 1)长期高浓度葡萄糖培养导致大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞对葡萄糖刺激的胰岛素分泌反应降低和细胞内胰岛素含量的减少 ;( 2 )高糖培养 14天可以使大鼠胰岛细胞IDX 1和GLUT2mRNA表达明显减少 (P <0 .0 5 ) ,C/EBPβmRNA表达明显增加 ,GKmRNA表达无明显变化 ;( 3 )高糖培养可以明显增加大鼠胰岛细胞和小鼠 βTc3细胞凋亡百分率 ;( 4 )大鼠胰岛细胞高糖培养 14天后Bcl xSmRNA水平明显增加 ,Bcl xLmRNA水平无明显变化 ,Bcl xL/Bcl xSmRNA比率明显减少 (P <0 .0 5 )。结论　 ( 1)长期高糖培养可以诱导大鼠胰岛细胞和小鼠 βTc3细胞凋亡和功能缺陷 ;( 2 )IDX 1表达的变化在大鼠胰岛细胞功能缺陷中起重要作用 ;( 3 )大鼠胰岛细胞的Bcl xL/Bcl xS比率变化在高糖所致的胰岛细胞凋亡中起重要作用。     

DPI抑制高浓度葡萄糖诱导的人脐静脉内皮细胞活性氧升高及对NOX亚单位表达的影响

背景和目的动脉粥样硬化是糖尿病的严重及常见并发症。糖尿病的主要临床特点是血糖升高，而高糖可以刺激血管产生氧化应激，损伤内皮细胞，诱发动脉粥样硬化。探讨氧化应激产生的机制，抑制活性氧的产生．对于防止糖尿病并发动脉粥样硬化有十分重要的作用。     

环氧化酶-2抑制剂对人腹膜间皮细胞转化生长因子-β1表达的影响

目的:研究环氧化酶-2(COX-2)抑制剂对人腹膜间皮细胞(HPMC)转化生长因子-1(TGF-1)表达的影响。 方法:采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型。用COX-2抑制剂干预高糖(4.25%D-葡萄糖)和细菌脂多糖(LPS)刺激下的HPMC。采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)半定量分析HPMC中TGF-1 mRNA的表达。采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMC培养液中TGF-1蛋白质水平。 结果:HPMC在高糖和LPS的刺激下可明显上调TGF-1的表达(P<0.01),COX-2抑制剂干预组(20nmol/L,40nmol/L, 60nmol/L)明显下调TGF-1的表达(P<0.05)。 结论:COX-2抑制剂能够明显抑制在高糖和LPS的刺激下的HPMC TGF-1的基因表达,为临床用COX-2抑制剂防治腹膜透析患者的腹膜纤维化提供实验和理论依据。     

不同浓度葡萄糖对小鼠胰岛β细胞株NIT-1增殖、分泌功能和凋亡的影响

目的探讨小鼠胰岛β细胞株NIT-1呈最佳增殖和分泌功能培养环境的葡萄糖浓度。方法将NIT-1细胞随机分为1、2、3、4、5、6组,分别用含5.6、7.8、11.1、16.7、22.5、27.6 mmol/L葡萄糖浓度的10%胎牛血清RP-MI1640培养基培养5 d。MTT法检测各组NIT-1细胞增殖情况;放射免疫分析法检测各组NIT-1细胞胰岛素分泌水平;免疫荧光染色法检测细胞凋亡率。结果 3组细胞呈最高增殖状态,之后4组～6组呈浓度依赖性抑制细胞增殖并促进细胞凋亡,且呈时间依赖性;3组胰岛素呈最高分泌状态,之后4组～6组呈浓度依赖性抑制细胞分泌,且呈时间依赖性。结论 11.1 mmol/L葡萄糖浓度是小鼠NIT-1细胞具有最佳增殖和分泌功能的培养环境;葡萄糖浓度〉11.1 mmol/L可抑制小鼠NIT-1细胞的增殖和分泌功能,并呈时间浓度依赖效应诱导细胞凋亡。