双膦酸盐诱导骨巨细胞瘤细胞凋亡的实验研究

目的　探讨双膦酸盐（唑来膦酸）对骨巨细胞瘤多核巨细胞和基质细胞的诱导凋亡作用。方法　对我院收治的７例唑来膦酸治疗前后患者的肿瘤组织切片进行透射电镜观察和ＴＵＮＥＬ凋亡染色及图像分析。另１０例未予唑来膦酸治疗的患者,取术中切除的骨巨细胞瘤新鲜组织进行细胞原代培养,分别给予５、３０、１５０μｍｏｌ／Ｌ唑来膦酸诱导肿瘤细胞凋亡４８ｈ,倒置相差显微镜观察细胞形态,Ａｎｎｅｘｉｎ-ＶＦＩＴＣ凋亡染色及流式细胞仪定量分析。结果　唑来膦酸治疗后的肿瘤组织切片透射电镜观察到多核巨细胞和基质细胞呈明显的凋亡表现;ＴＵＮＥＬ染色呈强阳性;基质细胞凋亡率治疗前为１.３１％,治疗后３３.４２％（Ｐ＝０.０１８）;多核巨细胞凋亡率治疗前为８.４１％,治疗后５６.８３％（Ｐ＝０.０１８）。在原代培养的骨巨细胞瘤基质细胞中予不同浓度的唑来膦酸诱导凋亡４８ｈ后,细胞数量减少,部分细胞形态有显著变化;Ａｎｎｅｘｉｎ-ＶＦＩＴＣ凋亡染色及流式细胞仪定量分析结果显示,对照组以及５、３０、１５０μｍｏｌ／Ｌ唑来膦酸诱导组的凋亡率分别为（１０.６７±２.１５）％、（２０.４７±３.７７）％、（４４.２１±８.３４）％和（５６.９６±９.６８）％,各诱导组显著高于对照组（Ｐ＜０.０５）,且凋亡率呈剂量依赖性（ｒ＝０.７７５,Ｐ＝０.０００）。结论　双膦酸盐能够诱导骨巨细胞瘤基质细胞和多核巨细胞的凋亡,且骨巨细胞瘤基质细胞的凋亡率呈剂量依赖性,因此,双膦酸盐可以作为骨巨细胞瘤辅助治疗的方法之一。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体对胰腺癌细胞抗肿瘤作用的研究

Objective To investigate the antitumor effect of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL)gene transfection mediated by adenovirus into human pancreatic carcinoma cell line Panc-1, and the mechanisms involved in this effect. Methods TRAIL gene was transfected into pancreatic cancer cell line Panc-1 by an adenovirus vector (Ad-TRAIL).Level of TRAIL mRNA expression was determined using RT-PCR, and TRAIL protein synthesis was evaluated with Western blot. Cell-growth activities were determined by MTT assay. The bystander effect was observed by co-culturing the Panc-1cells with the transfected TRAIL gene at different ratios. Apoptosis in pancreatic cancer cells was detected by flow cytometry.Procaspase-8 and procaspase-3 were determined by Western blot. Results The stable overexpression of TRAIL was detected in Panc-1 cells transfected by Ad-TRAIL. Ad-TRAIL significantly inhibited of cell viability of Panc-1 cells. Furthermore,co-culture of cancer cells transfected with TRAIL with that nontransfected resulted in the cell death of both cells by bystander effect. Moreover, the percentage of apoptotic cells was significantly higher in the Ad-TRAIL-treatment group compared to the control groups (P ＜ 0.01). And there was a diminished amount of procaspase-8 and procaspase-3 after infection with Ad-TRAIL. Conclusion The overexpression of TRAIL gene in Panc-1 cells by Ad-TRAIL exerts its antitumor effects, and themechanisms involved in this effect may be proapoptosis and bystander effect.     

喷他脒增强K562细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导凋亡敏感性

背景与目的：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）是一种理想的抗肿瘤药物，但许多肿瘤细胞常对TRAIL。诱导凋亡耐受。本研究探讨了喷他脒增强白血病K562细胞对TRAIL。诱导凋亡敏感性方法：利用光镜彤态学和Annexin V FITC／PI双标记凋亡细胞的流式细胞仪（FACS）测定两种方法观察喷他脒预处胛K562细胞并继用TRAIL后凋亡的发生，应用蛋白印迹方法观察此过程中半胱氯酸一天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3，-8和聚ADP核糖聚合酶（PARP）等3种蛋白的蛋白剪切与X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）蛋白表达的改变，结果：在10μg／ml喷他脒作用K562细胞20h，K562细胞未发生凋亡，继用200ng／ml TRAIL。作用4h后，光镜和Annexin V FITC／PI双标记流式细胞仪方法均观察到细胞发生明显凋亡，井出现了Caspase-3，-8和PARP蛋白剪切．两者单独作用则无明显细胞凋亡发生．另外，喷他脒明显降低了XlAP表达结论：喷他眯联合TRAIL可能成为肿瘤治疗的一种新策略。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对非小细胞肺癌细胞凋亡诱导的基础研究

目的:观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对非小细胞肺癌小鼠模型肿瘤细胞凋亡诱导的作用。方法:30只小鼠接种浓度为5×106/ml非小细胞肺癌细胞Tc-1。荷瘤小鼠随机分为6组（空白对照组和5种浓度rhTRAIL实验组）。空白对照组每天注射一次灭菌生理盐水,实验组每天注射浓度不同的rhTRAIL溶液,各组均连续注射15d。每2d测量小鼠肿瘤长短直径,计算肿瘤体积。取小鼠脾脏细胞培养,测量培养液上清TNF-α浓度。结果:rhTRAIL给药组小鼠肿瘤体积明显低于空白对照组（P<0.05）,随着rhTRAIL浓度的增加,肿瘤体积相应减小;小鼠的Tc-1细胞凋亡率随着rhTRAIL浓度增高,其凋亡率逐渐升高;rhTRAIL给药组小鼠的TNF-α浓度均明显高于空白对照组,组间差异具有显著性（P<0.05）。结论:rhTRAIL能有效增强非小细胞肺癌小鼠体内的细胞因子分泌,诱导荷瘤小鼠的肿瘤细胞凋亡,表明rhTRAIL对非小细胞肺癌小鼠的肿瘤细胞具有一定的抑制作用。     

可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导肝癌细胞凋亡的研究

方法 采用原位杂交方法检测肝癌组织、肝癌细胞株以及正常肝组织中TRAILR的表达。采用不同浓度TRAIL蛋白处理肝癌细胞株Hep2和SMMC7721,应用流式细胞仪和原位末端标记,观察经药物处理前后该细胞株的凋亡发生率。结果 60例肝癌组织及20例正常肝组织均表达死亡受体DR5和DR4,但肝癌组织DR表达量显著强于正常肝组织。54例(90．0％)肝癌组织不表达诱捕受体DcR1,25例(41．7％)肝癌组织不表达DcR2,而20例正常肝组织均表达DcR。肝癌组织中DR的高表达及DcR的低表达,不同于正常肝组织中DR的低表达及DcR的高表达,两者间差异有显著性。两种肝癌细胞株中均可检测到DR5、DR4、DcR2的表达,但DcR1表达缺失。肝癌组织中DR的表达与肿瘤的分化、肿瘤分期有关,低分化的肿瘤DR表达减少(P＜0．01),Ⅲ、Ⅳ期肿瘤DR表达显著低于I、Ⅱ期(P＜0．05)。DR表达与患者的性别、年龄、HBsAg阳性与否、AFP水平、肿瘤大小以及是否转移无关。经TRAIL(100ng/ml)处理24h,肝癌细胞凋亡发生率约10％,而Jurkat细胞凋亡率达70％以上,胆管癌细胞QBC939凋亡发生率约50％。结论 肝细胞肝癌普遍存在TRAILR的表达,并存在受体类型的表达差异。但单一的TRAIL治疗只能有限的诱导肝癌细胞HepG2、SMMC7721发生凋亡,HCC对TRAIL诱导的凋亡存在耐药现象。     

姜黄素联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对前列腺癌细胞的抑制作用

目的:探讨姜黄素(curcumin,Cur)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)对前列腺癌细胞的抑制作用。方法:CCK-8法测定Cur、TRAIL及Cur联合TRAIL作用于PC-3细胞后的细胞生存率,流式细胞技术测定细胞周期及凋亡率,光学显微镜下观察细胞形态,Western blot检测凋亡蛋白caspase-3表达水平的变化。结果:与对照组比较,Cur联合TRAIL组能显著抑制PC-3细胞增殖(P<0.05),呈时间依赖性,且使PC-3细胞阻滞于G2/M期比例明显增多(P<0.05)。镜下可见联合应用Cur和TRAIL处理的PC-3细胞凋亡形态改变明显,凋亡率较对照组高(P<0.05),凋亡蛋白caspase-3表达也增强。结论:Cur与TRAIL联用可明显增强PC-3细胞抑制效果和诱导凋亡作用,其凋亡作用机制可能与其上调caspase-3表达有关。     

乳腺癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体耐受的分子机制

0引言 肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)是淋巴细胞分泌的一种能诱导肿瘤细胞凋亡的细胞因子,但是由于TNF对正常细胞也有同样的细胞毒性,因而限制了TNF的临床应用.1996年Pitti等[1]研究发现另外一种能特异性诱导肿瘤细胞凋亡的TNF家族成员,这个成员就是肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL),由于TRAIL具有很强的诱导肿瘤细胞凋亡能力而对大部分正常细胞毒性非常低,因而使用TRAIL进行肿瘤治疗引起广泛的关注.     

TNF相关的凋亡诱导配体和受体在不同胸腺组织中的差异表达及对细胞凋亡的影响

目的:研究肿瘤坏死因子（TNF）相关的凋亡诱导配体(TRAIL)和受体在不同胸腺组织中的差异表达,为TRAIL在胸腺生物学及疾病治疗中的作用提供参考依据。方法:选择6例伴有胸腺增生和14例伴有胸腺瘤的重症肌无力患者以及10名正常受试者作为研究对象,分别分析正常胸腺、胸腺增生和胸腺瘤组织中的TRAIL及其跨膜受体的差异表达谱、NFκB活化状态和凋亡细胞指数。结果:所有胸腺组织均可表达TRAIL及其受体,胸腺增生组织的死亡受体DR4和DR5的表达水平最高。所有胸腺组织中NFκB的活性形式均未检测到。与正常胸腺相比,胸腺增生和胸腺瘤组织中的凋亡细胞指数更高。结论:TRAIL死亡受体（DR4/DR5）在正常胸腺、胸腺增生和胸腺瘤组织中的表达水平呈现显著差异,TRAIL在选择性诱导胸腺肿瘤细胞凋亡方面具有重要的潜在价值。     

蒽贝素协同增强肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体诱导乳腺癌细胞凋亡性死亡的实验北大核心CSCD

目的研究小分子化合物蒽贝素(Embelin)是否能协同增强肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡性死亡。方法应用Embelin、TRAIL或者联合应用分别处理MDA-MB-231细胞。MTT法测定药物处理的细胞毒性,APOP-BRDU试剂盒及流式细胞仪测定细胞凋亡率,Western blot观察Caspase3,9和PARP的表达水平。半定量PCR和Western blot分别观察Embelin处理以后X连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)mRNA、蛋白表达水平的变化。结果 MDA-MB-231细胞呈TRAIL部分耐药,Embelin的细胞毒性在MDA-MB-231细胞呈浓度依赖性。亚毒性浓度的Embelin能显著增强TRAIL诱导的细胞毒性、凋亡率、Caspase 3,9的活化和PARP的切割。但是,亚毒性浓度的Embelin未直接改变XIAP的蛋白和mRNA表达水平。结论 Embelin能显著增强TRAIL诱导的乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡性死亡。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肿瘤细胞PRDXs表达影响的观察

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对肿瘤细胞中过氧化氧化还原蛋白(PRDXs)表达的影响及其机制。方法:选取肿瘤细胞,设立对照组和TRAIL处理组;用实时定量PCR法和蛋白质印迹法检测PRDXs在各种肿瘤细胞中的表达;用PCR法克隆PRDX4启动子,用萤光素酶含量测定其含量。结果:与对照组相比,TRAIL处理组中PRDX1、PRDX2、PRDX3、PRDX5和PRDX6mRNA及蛋白表达差异无统计学意义,P>0.05;PRDX4mRNA和蛋白的表达显著降低,P<0.01;放线菌素D处理8h时,TRAIL处理组与对照组中PRDX4mRNA降解近50%,差异无统计学意义,P>0.05;TRAIL显著降低pPRDX4/-979的活性呈剂量依赖方式。结论:TRAIL在转录水平上下调肿瘤细胞中PRDX4基因的表达,对PRDX4mRNA的稳定性没有影响。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对人骨肉瘤的作用

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对人骨肉瘤的作用,以及此作用与TRAIL受体（TRAILR）在人骨肉瘤中表达的相关性。方法应用原位杂交、Western blot方法检测人骨肉瘤细胞系MG-63及新鲜骨肉瘤组织块中TRAILR的表达;将在大肠杆菌中表达的TRAIL纯化后用于MG-63及新鲜骨肉瘤组织块,同法处理人白血病细胞株Jurkat作为阳性对照。MTT法检测细胞毒作用;流式细胞术检测凋亡,光镜下观察形态学变化,计数细胞,绘制生长曲线,测定细胞倍增时间。结果人骨肉瘤中死亡受体DR4、DR5呈高表达而诱惑受体DcR1、DcR2呈低表达,但TRAIL抑制人骨肉瘤细胞增殖而不能诱导其凋亡,MG-63在TRAIL作用下变肥大且呈编织排列。结论人骨肉瘤细胞对TRAIL耐受与其诱惑受体表达无关,TRAIL能改变体外培养的人骨肉瘤细胞形态及增殖动力学。     

α-干扰素对骨巨细胞瘤细胞凋亡和bFGF及其受体表达的影响

目的:探讨α-干扰素对体外培养的骨巨细胞瘤细胞碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及受体Bek表达与生物学行为的影响,为骨巨细胞瘤术后复发转移的防治探索新途径.方法:采用不同浓度的α-干扰素诱导体外培养的第三代骨巨细胞瘤细胞,观察α-干扰素对瘤细胞生物学行为的影响,流式细胞术与细胞-酶联免疫吸附法分析α-干扰素诱导48h后瘤细胞凋亡情况及Bek/bFGF表达的变化.结果:浓度为1 000IU/ml以上的α-干扰素作用10～12h左右,瘤细胞即出现退缩现象,生长明显受到抑制;至48h,瘤细胞数目明显减少,且出现大量细胞碎片.α-干扰素可诱导第三代骨巨细胞瘤细胞发生凋亡,其凋亡率随α-干扰素作用浓度增加而递增,呈明显的剂量依赖关系.α-干扰素可抑制第三代骨巨细胞瘤细胞bFGF和Bek的表达,其抑制强度也随α-干扰素作用浓度的增加而增加,呈明显的量效关系.当α-干扰素作用浓度达到1 000IU/ml以上时,其诱导凋亡与抑制Bek/bFGF表达的效应均发生显著性变化.结论:α-干扰素对体外培养的第三代骨巨细胞瘤细胞具有明确的抗肿瘤效应,可作为骨巨细胞瘤术后辅助治疗,以防治和减少其复发转移.     

埃克替尼提高胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的敏感性

目的:胃癌细胞大多对TRAIL(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand)不敏感。本研究为探讨胃癌细胞对TRAIL耐药的原因以及如何提高胃癌细胞对TRAIL的敏感性。方法:流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹法检测蛋白的表达。结果:TRAIL(100ng/ml)作用MGC803和SGC7901细胞20小时,TRAIL诱导少量细胞凋亡,同时检测到EGFR和下游Akt、ERK的活化。用新型的EGFR酪氨酸激酶抑制剂埃克替尼(10μmol/L)预处理MGC803和SGC7901细胞2小时,之后加用TRAIL,结果抑制了TRAIL引起的EGFR和下游Akt、ERK的磷酸化,并最终提高了MGC803和SGC7901细胞对TRAIL的敏感性。结论:埃克替尼通过抑制EGFR通路从而增强了TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡。     

T细胞急性淋巴细胞白血病对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体的敏感度研究

目的观察T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）对肿瘤坏死因子（TNF）相关的凋亡诱导配体(TRAIL)所介导的细胞毒的敏感度,并探讨其机制。方法以T-ALL细胞株3株及原代细胞为研究对象,通过测定细胞表面TRAIL受体表达、TRAIL作用后细胞的存活率及凋亡,观察T-ALL对TRAIL的敏感性。结果T-ALL细胞对TRAIL中度至高度耐受,其原因主要是细胞表面凋亡受体表达低下。 结论T-ALL对TRAIL耐受,有可能是T-ALL迅速克隆扩增及GVL效应差的一个重要机制。     

顺铂通过促进死亡受体4在脂筏内聚集增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对胃癌MGC803细胞凋亡的作用

目的 探讨顺铂影响胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)敏感性的机制.方法 以顺铂和TRAIL单独及联合作用MGC803细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组细胞的增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-8和caspase-3的蛋白表达,免疫荧光显微技术观察脂筏和死亡受体4(DR4)的分布.以50 mg/L的制霉菌素预处理MGC803细胞1 h,之后加入顺铂和TRAIL,观察细胞凋亡的变化.结果 100 μg/L TRAIL作用MGC803细胞24 h,增殖抑制率为(8.51±3.45)%,细胞凋亡率为(3.26±0.89)%.8.49 mg/L顺铂作用MGC803细胞24 h,增殖抑制率为(52.58±4.57)%,细胞凋亡率为(23.10±3.41)%.100 μg/L TRAIL和8.49 mg/L顺铂联合作用时,细胞增殖抑制率提高至(76.43±5.35)%,细胞凋亡率提高到(42.56±4.11)%,均高于相同浓度顺铂和TRAIL单独作用组(P＜0.05).同时检测到caspase-8和caspase-3的裂解.TRAIL未引起明显的脂筏和DR4聚集,而顺铂明显促进了DR4在聚集脂筏内的定位.50 mg/L制霉菌素处理MGC803细胞24 h,细胞凋亡率为(3.66±0.52)%.经制霉菌素预处理后,顺铂作用下MGC803细胞的凋亡率为(22.76±2.97)%,与未经制霉菌素预处理组[(25.74±3.28)%]差异无统计学意义(P=0.248);而顺铂和TRAIL联合作用下细胞凋亡率为(31.52±3.99)%,与未经制霉菌素预处理组[(43.16±4.26)%]差异有统计学意义(P＜0.001).结论 顺铂通过促进死亡受体在脂筏聚集增强了TRAIL诱导的胃癌MGC803细胞凋亡.

Abstract：

Objective Gastric cancer cells are insensitive to tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL). To sensitize gastric cancer cells to TRAIL, we treated gastric cancer MGC803 cells with TRAIL and cisplatin. Methods Cell proliferation was measured using MTT assay. Cell apoptosis was determined by flow cytometry. Expression of proteins was analyzed by Western blot. The distribution of lipid rafts and death receptors was analyzed by immunofluorescence microscopy. MGC803 cells were pretreated with 50 mg/L nystatin for 1 h, and followed by the treatment of cisplatin and TRAIL. Results 100 μg/L TRAIL resulted in (8.51±3.45)% inhibition of cell proliferation and caused (3.26±0.89)% cell apoptosis in MGC803 cells. Compared with the treatment with cisplatin alone, treatment with TRAIL (100 μg/L) and cisplatin (8.49 mg/L, IC50 dose of 24 h) led to a dramatic increase in both inhibition of cell proliferation [(52.58±4.57)% vs. (76.43±5.35)%, P＜0.05]and cell apoptosis [(23. 10±3. 41)% vs. (42.56±4.11)%, P＜0.05]. Moreover, cleavage of caspase-8 and caspase-3 was detected. TRAIL (100 μg/L) did not induce obvious lipid rafts aggregation and death receptor 4 (DR4) clustering, while cisplatin (8.49 mg/L) significantly promoted the localization of DR4 in aggregated lipid rafts. Pretreatment with 50 mg/L nystatin, a cholesterol-sequestering agent, triggered (3.66±0.52)% cell apoptosis after 24 h. Pretreatment with nystatin for 1 h before the addition of 8.49 mg/L cisplatin for 24 h caused a decreased tendency to cell apoptosis [(25.74±3.28)% vs. (22.76±2.97)%]. While, pretreatment with nystatin before the addition of cisplatin and TRAIL, the proportion of apoptotic cells decreased from (43. 16±4.26)% to (31.52 ± 3.99)% (P＜0.05). Conclusion Cisplatin enhances TRAIL-induced apoptosis in gastric cancer MGC803 cells through clustering death receptors into lipid rafts.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因转染骨髓间充质干细胞后基因表达情况及其对C6胶质瘤细胞作用的体外研究

目的 探讨转染肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因的骨髓间充质干细胞(BMSC)基因表达情况及其功能.方法 实验分三组,即转染TRAIL基因组、转染空载体组及空白对照组.用脂质体法将TRAIL转入绿色荧光蛋白(GFP)-BMSC中,反转录PCR法检测BMSC的TRAILmRNA水平,Western blot、免疫荧光法检测TRAIL蛋白的表达;将携带有TRAIL的GFP-BMSC同大鼠C6胶质瘤细胞共培养,通过四甲基偶氮唑蓝比色法检测其对肿瘤细胞的旁观者效应,Hochest-PI双染色法观察TRAIL转染的BMSC对C6细胞凋亡的影响.结果 免疫荧光检测显示,转染TRAIL 24、48 h的GFP-BMSC细胞质和细胞膜有TRAIL蛋白的表达,24h比48 h荧光强,空白对照组及空载体组细胞未见表达.反转录PCR、Western blot显示转染TRAIL基因组细胞TRAIL mRNA及蛋白高表达,空白对照组及空载体组未见表达.转染TRAIL的GFP-BMSC明显抑制C6细胞存活,抑制率为(62.7±0.1)％,高于空载体组的(16.7±0.1)％(P＜0.05),同时转染TRAIL基因的BMSC可促进C6细胞的凋亡.结论 转染TRAIL的BMSC能够稳定表达目的基因,且能促进大鼠C6胶质瘤细胞凋亡,具有明显的旁观者效应.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对白血病NB4和K562细胞的作用及与其受体表达的关系

 【摘要】　目的　探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 （TRAIL）对白血病NB4和K562细胞的作用及与其受体表达的关系。方法　以Jurkat细胞株为阳性对照,采用不同浓度的TRAIL分别作用于NB4和K562细胞,观察细胞形态;采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞生长情况;用流式细胞术检测细胞表面TRAIL受体的表达情况。结果　TRAIL作用导致NB4细胞株生存率显著下降,但弱于Jurkat细胞株,其变化具有TRAIL作用时间和浓度依赖性;对K562细胞株生存率的影响不明显。NB4细胞表面死亡受体4（DR4）和DR5表达水平较高,同时诱骗受体1（DcR1）表达较高;K562细胞DR5表达水平较高,而DR4及DcR1微量表达;Jurkat细胞表面仅DR5低水平表达;DcR2在三株细胞表面均无表达。结论　NB4细胞对TRAIL中度敏感,K562细胞对TRAIL耐受;NB4细胞敏感性较低可能与DcR1表达有关,K562细胞耐受性与其表面TRAIL受体表达无关。     

藤黄酸联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡的效果和机制

背景与目的：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL）能选择性地杀伤肿瘤细胞,但多种肿瘤对其耐药。该研究旨在探讨藤黄酸（gambognic acid,GA）与TRAIL联合对人结肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长的影响及GA联合TRAIL抗结肠癌的作用机制。方法: 建立人结肠癌HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤模型,测定TRAIL和（或）GA对裸鼠移植瘤的影响,采用H-E染色观察肿瘤组织形态结构改变,TUNEL法检测细胞凋亡状况;HT-29细胞经过siRNA干扰Nrf2表达后,通过AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量,RT-PCR法检测Nrf2、Bcl-2、Bax和DR5 mRNA的表达水平。结果: 联合应用GA显著促进了TRAIL对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制（抑瘤率达67.0%）和诱导凋亡作用,下调了组织中Nrf2、Bcl-2的表达,增强了Bax和DR5的表达;与阴性对照siRNA相比,Nrf2干扰能明显上调TRAIL诱导HT-29细胞的凋亡率,提高ROS含量,下调Nrf2和Bcl-2表达,上调Bax和DR5表达。结论: GA可能是通过下调Nrf2表达,使ROS水平升高而激活线粒体凋亡途径与死亡受体途径,从而逆转人结肠癌HT-29细胞体内外对TRAIL的耐药性。     

重组变构人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与吉西他滨联合对人非小细胞肺癌细胞株NCI-H460的体内外抑制作用

目的 观察重组变构人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rmhTRAIL)与吉两他滨(GEM)联合应用对人非小细胞肺癌细胞株NCI-H460在体内外的抑制作用.方法 采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法,检测系列浓度的rmhTRAIL和GEM单独或联合应用时对人肺癌NCI-H460细胞生长的抑制作用.将NCI-H460细胞裸鼠移植瘤模型分为6组:对照组(腹腔注射生理盐水)、rmhTRAIL组、GEM组、rmhTRAIL+GEM组、GEM+顺铂(DDP)组和rmhTRAIL+GEM+DDP组,分别给药.每3～4 d测量1次裸鼠移植瘤大小,用药后21 d,处死裸鼠,剥取肿瘤称重.结果 rmhTRAIL和GEM单独或联合应用时对NCI-H460细胞的生长抑制作用呈剂量依赖性,且系列浓度的rmhTRAIL和GEM的联合具有协同抑制作用.rmhTRAIL组、rmhTRAIL+GEM组、GEM+DDP组和rmhTRAIL+GEM+DDP组的相对肿瘤体积分别为4.75±3.04、2.53±1.25、4.52±2.87和1.69±0.97,均显著低于对照组(8.82±5.62,均P＜0.05);肿瘤重量分别为(2.23±0.29)g、(1.12±0.77)g、(2.51±0.87)g和(0.60±0.18)g,均显著低于对照组[(4.71±0.97)g,均P＜0.01].rmhTRAIL+GEM组的相对肿瘤体积和肿瘤苇量均显著低于rmhTRAIL组和GEM组(P＜0.05和P＜0.01).rmhTRAIL+GEM+DDP组的相对肿瘤体积和肿瘤重量均显著低于rmhTRAIL组和GEM+DDP组(P＜0.05和P＜0.01).结论 在体内外实验中,rmhTRAIL与吉西他滨联合对人肺癌细胞株NCI-H460的生长均显示出协同抑制作用.     

阿霉素对结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤SNK-6细胞株肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体耐受及其受体表达的影响

目的 探讨阿霉素对结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤SNK-6细胞株肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)耐受及其受体表达的影响.方法 以不同浓度的阿霉素单独或与TRAIL联合作用于SNK-6细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的生长情况.采用流式细胞术检测SNK-6细胞的凋亡情况和TRAIL受体的表达情况.结果 100和1000 ng/ml阿霉素单独处理SNK-6细胞24h时,SNK-6细胞的存活率分别为(80.9±7.2)％和(53.7±2.8)％,与联合TRAIL组的差异有统计学意义[分别为(64.9±1.1)％和(34.0±3.9)％,P＜0.05].100和1000 ng/ml阿霉素单独处理SNK-6细胞48 h时,SNK-6细胞的存活率分别为(69.9±6.1)％和(31.1±1.9)％,与联合TRAIL组的差异亦有统计学意义[分别为(37.5±6.4)％和(15.0±1.8)％,P＜0.05].经100和1000 ng/ml阿霉素单独处理48 h后,SNK-6细胞的早期凋亡率分别为(14.8±0.6)％和(30.8±1.5)％,与联合TRAIL组的差异有统计学意义[分别为(28.7±0.6)％和(46.6±2.8)％,P＜0.05].经100 ng/ml阿霉素处理24h后,SHK-6细胞表面TRAIL死亡受体和欺骗受体的表达明显增加.结论 阿霉素在一定程度上可以克服SNK6细胞对TRAIL的耐受,但需要较大剂量的TRAIL才能起作用,这可能与阿霉素同时诱导了TRAIL死亡受体和欺骗受体表达上调有关.