丁型肝炎病毒RNA中核酶的研究进展

丁型肝炎病毒ＲＮＡ中存在的二个核酶，本文就近几年来ＨＤＶ ＲＮＡ中核酶的发现，位置、所需的碱基、二级结构及其对核酶的作用、体外作用条件、影响因素等研究和ＨＤＶ ＲＮＡ中核酶的意义作一综述。     

丁型肝炎病毒ribozyme

Ribozyme是能够剪切或连接其它RNA的RNA分子。包括:1.四膜虫属Ⅰ组内含子;2.RNaseP;3.锤头状ribozyme;4.发夹状ribozyme;5.HDV ribozyme等类型。本文重点论述了丁型肝炎病毒(HDV)ribozyme及其在抗病毒治疗中的应用。 丁型肝炎病毒ribozyme在HDV基因组和抗基因组的RNA链都发现切割2′—3′环状磷酸产物的自裂RNA基序。这种在动物病毒中唯一已知的ribozyme活性可能与病毒复制环节有关。所以在感染     

反义寡核苷酸抗丁型肝炎病毒基因组RNA中核酶的研究

以质粒ｐＳＶＬＤ３为模板，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增得到１条１３９ｂｐ的片段，它含有丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因组ＲＮＡ中核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ）区的ｃＤＮＡ，该核酶具有自身裂解功能，将此片段插入到ｐＧＥＭ－３Ｚ中，经筛选，鉴定得到重组质粒ｐＨＤＶ１０８，经测序发现有２个碱基变异。以该质粒为模板，通过Ｔ７ＲＮＡ聚合酶，转录出核酶的前体，并观察到其自身裂解产物，自裂率达７１％，针对核酶唯一的自裂位     

检测丁型肝炎病毒RNA打点杂交法的建立及其应用

经缺口平移法以ａ－３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记１．０ｋｂ的丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）ｃＤＮＡ片段为探针，采用蛋白酶Ｋ直接从血清中提取ＨＤＶＲＮＡ，建立了检测血清中ＨＤＶＲＮＡ的打点杂交法，其灵敏性可达１ｐｇ水平，与乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ无交叉杂交反应；并应用于检测我国５９４９份ＨＢｓＡｇ阳性血清中的ＨＤＶＲＮＡ，共检出１７６份ＨＤＶＲＮＡ阳性，检出率为２．９５％。     

丁型肝炎病毒基因组RNA中核酶区的cDNA的体外转录

以质粒ｐＳＶＬＤ３为模板，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增得到１条１３９ｂｐ的ｃＤＮＡ片段，它含有丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因组ＲＮＡ中核酶区的ｃＤＮＡ，将此片段克隆到ｐＧＥＭ－３２中，经筛选、鉴定，得到克隆株ｐＨＤＮＡ１０８，提取质粒后经双脱氧末端终止法测序，发现有２个碱基变异。以该质粒为模板，通过Ｔ７ ＲＮＡ聚合酶转录出ＨＤＶ基因组ＲＮＡ中核酶区的前体，并观察到其自身裂解产物，自裂率达７１％。     

丁型肝炎病毒基因组RNA包埋锤头状核酶的活性研究

目的　探讨用丁型肝炎病毒 (HDV)基因组来包埋HBV靶向性核酶对核酶体内外活性产生的影响。方法　用和HBV靶基因体外转录产物在不同反应条件下温育对HDV 核酶重组体的体外切割活性定量分析 ;与HBV基因组共转染Huh 7细胞以考察核酶在细胞内对HBV基因表达水平的抑制。结果　体外实验发现 ,温度及核酶和底物的二级结构对包埋于HDV序列的核酶体外切割活性均有较大的影响。提高反应温度或消除二级结构都可使HDV包埋核酶的体外活性达到明显效果 ,与相同条件的裸露核酶活性没有太大差异。而细胞实验则表明 ,活性明显优于裸露核酶 ,可以将靶基因的表达抑制到极低水平。结论　HDVRNA序列对所包埋核酶体外活性有一定的抑制作用 ,在细胞内则使核酶的活性得到显著增强     

聚合酶链反应检测血清丁型肝炎病毒核酸

聚合酶链反应检测血清丁型肝炎病毒核酸重庆第三军医大学西南医院传染科为建立一种特异性强、敏感性高的检测丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）感染的方法，提高丁型肝炎的诊断水平。方法根据ＨＤＶＲＮＡ保守区（６５４～９６３位核苷酸）设计合成两对引物，采用逆转录——套式聚合...     

丁型肝炎的分子生物学特征及研究进展

HDV是已知的最小动物病毒,具有很多独特的生物学特征.了解其生物学特性是进行诊断,防控和治疗的基础.HDV的研究也为其他病毒的研究提供了材料和支持.本研究就HDV的生物学特征和研究进展进行论述. 1 病毒学特征 HDV颗粒呈球形,直径在35 ～ 37 nm,在氯化铯中的浮力密度为1.25g/cm3.外面被HBV的表面抗原包被,L、M、S三种蛋白的比约为95:4:1,与乙肝病毒的Dana颗粒不同,与22 nm的杆状颗粒相似.[1]     

广东地区肝炎患者血清中庚型肝炎病毒RNA的检测

目的了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染在不同临床类型肝炎患者中的存在状况。方法用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术对７２１例肝炎患者血清进行了ＨＧＶＲＮＡ检测。结果发现８０例ＨＧＶＲＮＡ阳性，以非甲、乙、丙、丁或戊型肝炎中阳性率为高；慢性丙型肝炎（ＨＣＶ）和慢性乙型混合丙型肝炎（ＨＢＶ＋ＨＣＶ）次之；在慢性重型肝炎和肝硬化时较低。结论庚型肝炎病毒在广东地区现症肝炎患者中有一定程度的流行     

核酶抑制乙型肝炎病毒的研究进展

核酶是一种有自动切割作用的RNA分子,不仅能够与双链DNA或者是RNA分子结合从而抑制他们的转录或翻译,而且由于它的自动切割作用能够在相应的位点切割核酸序列,具有酶的活性,因而其在HBV的基因治疗中的前景比较看好。本文针对乙型病毒性肝炎核酶的设计、构建、靶向性导入和稳定表达等问题进行了综述。     

抗丁型肝炎病毒mAb的制备及其初步应用

目的 :以基因工程表达丁型肝炎病毒抗原蛋白 (HDAg)为抗原 ,建立分泌单克隆抗体 (mAb)的杂交瘤细胞系 ,并对其分泌的mAb进行鉴定。方法 :用Ni NTA技术纯化HDAg免疫BALB/c小鼠 ,取脾细胞及骨髓瘤细胞按常规方法融合、筛选、克隆化及腹水注射制备mAb。采用ELISA及免疫组化技术进行鉴定。结果 :筛选出 2株能稳定分泌特异性抗 HD的mAb杂交瘤细胞株 (HD1,HD2 ) ,经多次复苏传代仍能稳定分泌抗体 ,特异性强 ,效价高。应用于ELISA测定患者血清HDAg均呈特异性阳性反应。免疫组化检测肝组织显示 ,针对该mAb的抗原主要分布于细胞核或浆内。结论 :此两株丁肝杂交瘤细胞株分泌的抗体对丁肝抗原具有特异亲和性 ,为丁型肝炎病毒的临床诊断及病理检测提供技术基础     

186例病毒性肝炎患者血清中庚型肝炎病毒RNA的检测

１８６例病毒性肝炎患者血清中庚型肝炎病毒ＲＮＡ的检测王瑞烈谢建媚秦小超曹赋应用逆转录－聚合酶链反应法（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了１８６例住院的病毒性肝炎患者血清中庚型肝炎病毒ＲＮＡ。１材料和方法１．１检测对象为１９９６年５月～１９９７年２月住玉林地区红十字...     

乙型肝炎病毒表面抗原和丁型肝炎病毒抗原在丁型肝炎传染中的作用

乙型肝炎病毒表面抗原和丁型肝炎病毒抗原在丁型肝炎传染中的作用居春光，邹翔乙型和丁型肝炎病毒在丁型肝炎传播上有着很密切的联系。丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）的传播首先要有乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的感染作基础。乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢＳＡｇ）与丁型肝炎病毒抗原（...     

病毒反RNA干扰研究进展

RNA 干扰（RNAi）是生物体长期进化发展过程中形成的一种对外源遗传因子的特异性降解机制。RNAi 的机制是通过一段小片段双链RNA的作用序列特异性地使一段目的基因失活。随着病毒分子遗传学的发展,我们对于宿主对于RNAi防御系统研究的愈加深入。令人感兴趣的是很多病毒已经发展了拮抗RNAi作用的机制通路从而得以逃脱RNAi介导的基因抑制。研究发现,无论植物还是动物病毒均可以利用自身原料合成抑制蛋白,干扰RNAi 的进行。迄今为止,RNAi 已被发现在自然届中所有真核生物内广泛分布,并且已经逐步演变为一种研究基因功能的重要手段。最重要的是RNAi 更具有应用于基因治疗的美好前景。因此,对于病毒反RNAi 机制的研究显得格外有意义。     

丁型肝炎病毒基因组和抗原研究进展

丁型肝炎病毒(HDV)属于缺陷性RNA病毒。HDV RNA是由单链基因组RNA和互补的反基因组RNA组成的闭合环状分子,具有酶活性,能自身催化断裂,进行滚环式复制。反基因组上的可读框编码大小两种抗原。HDV的装配需要乙型肝炎病毒(HBV)的帮助,其包膜是HBV表面抗原。HDV感染者可同时有HBV感染,这种双重感染可加重肝脏损害和病情。     

广州地区肝炎患者血清中庚型肝炎病毒核酸检测和病毒核苷酸测序

目的 了解广州地区肝炎患者中庚型肝炎病毒（HGV）的感染情况及基因型特点。方法 采用逆转录－套式聚合酶链反应（RT－nested PCR)方法检测出肝炎患者血清中HGV RNA,引物位于HGV基因组的非编码区,并对扩增产物进行直接测序。结果 251例急慢性肝炎血清中共检出25例HGV RNA阳性,总阳性率为9．96％,其中56例非甲－戊型肝炎中要出4例阳性（7．14％）,77例乙型肝炎（HB）中检出8例阳性（10．39％）,118例丙型肝炎（HC）中检出13例阳性（11．17％）;2株HGV广州核苷酸之间的同源性为98．0％,与非洲洲的同源性分别为81．7％和84．2％,与美国株的同源性均为91．1％。结论 广州地区肝炎患者中存在HGV感染,2株HGV广州株可能为同一基因型,且与HGV美国株具有较高的同源性。     

重型病毒性肝炎中丁型肝炎病毒的检测

为了探讨丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）感染在重型病毒性肝炎中的作用，对北京佑安医院１９８０年至１９８９年收治的５４例急性和亚急性重型肝炎和３８例急性乙肝患者血清，应用国产ＨＤＶＥＬＩＳＡ试剂测定抗－ＨＤ、抗－ＨＤＩｇＭ和ＨＤＡｇ，应用斑点杂交技术测定ＨＤＶＲＮＡ。结果发现重型肝炎组ＨＯＶ－Ｍ检出率明显高于急性乙肝组（２７．８％比５．３％．Ｐ＜０．０５）。单独ＨＢＶ感染和ＨＤＶ／ＨＢＶ混合感染的重型肝炎患者均有较高的病死率。提示ＨＤＶ感染是重型肝炎中重要的病原学因素之一，ＨＤＶ与ＨＢＶ具有协同作用加重肝损害，导致肝衰竭。