Fas/FasL途径介导的人肺癌细胞免疫逃逸

目的：观察在3种人肺癌细胞（A549、EBC-1、LCSC）和人T细胞(Jurkat) Fas/FasL表达情况，探讨人肺癌细胞免疫逃逸及反杀伤作用与Fas/FasL途径的关系。 方法： 用FACScan、RT-PCR方法检测Fas/FasL蛋白及mRNA表达；以荧光染色法观察细胞调亡；用台盼蓝拒染法检测细胞存活。 结果： 3种人肺癌细胞及T-细胞系(Jurkat)均表达 Fas及 FasL；肺癌细胞与Jurkat细胞共培养时，肺癌细胞可导致Jurkat细胞生长抑制(P<0.05)及凋亡；在共培养体系中加入FasL中和性抗体NOK1，可封闭肺癌细胞对Jurkat细胞的生长抑制作用(P>0.05)。 结论： Fas/FasL途径可介导上述3种人肺癌细胞对Jurkat细胞的生长抑制及致凋亡作用；中和性抗体可有效阻断Fas信号转导途径，抑制肿瘤细胞的反杀伤作用，有效保护免疫系统。     

ICA、PJA逆转人高转移肺癌细胞Fas/FasL途径免疫逃逸机制的研究

目的：研究ICA、PJA对人高转移肺癌细胞PG细胞免疫逃逸的逆转作用。方法：MTT法检测ICA、PJh对PG细胞增殖的影响以及对CD3AK杀伤敏感性的影响。流式细胞仪检测细胞表面分子Fas、FasL表达水平和细胞凋亡。应用PG细胞与Jurkat T细胞其培养的方法体外研究FasL诱导T淋巴细胞凋亡的作用。结果：PG细胞高表达FasL，低表达Fas，对CD3AK细胞杀伤敏感性较低，并在与Jurkat T细胞共培养中诱导高表达Fas的Jurkat T细胞凋亡。：ICA、PJA对PG细胞有明显的增殖抑制作用。ICA可明显提高PG细胞Fas的表达率。ICA、PJA可明显降低PG细胞FasL的表达率。ICA、PJA可使PG细胞与Jurkat T细胞共培养中，降低Jurkat T细胞的凋亡率。ICA、PJA可提高CD3AK细胞对PG细胞的杀伤活性。结论：ICA、PJA可逆转人高转移肺癌细胞PG通过Fas／FasL途径逃避机体免疫活性细胞的攻击。     

特异性ASODN抑制Fas表达降低FasL介导细胞凋亡的研究

为了研究特异性Fas反义寡核苷酸(ASODN)对T细胞Fas表达及肝癌细胞诱导其凋亡的抑制作用,用脂质体介导法将Fas ASODN导入Jurkat T细胞,并通过用流式细胞术、RT-PCR及与肝癌细胞共培养方法研究Fas ASODN对T细胞Fas表达、Fas mRNA水平及凋亡的影响。结果显示:①Hep G2.2.15细胞表达有功能的FasL,可诱导Jurkat细胞凋亡;②Jurkat细胞转染Fas ASODN后,Fas mRNA降低;细胞表面Fas表达下降;与Hep G2.2.15细胞共培养后的凋亡率下降。表明Fas ASODN转染可以部分逆转肝癌细胞对T细胞的凋亡诱导作用。     

IFN-γ与肿瘤免疫逃避的研究进展

干扰素 (IFN γ)由T细胞产生 ,具有直接抑制肿瘤细胞增殖 ,增加表面MHC抗原和肿瘤坏死因子表达 ,抗肿瘤血管生成等多种抗肿瘤作用。近年来研究发现 ,IFN γ可以通过调控肿瘤细胞的Fas/FasL表达以及增强肿瘤细胞对Fas所介导凋亡途径的敏感性 ,使肿瘤细胞逃避免疫系统攻击的能力降低 ,从而抑制肿瘤细胞的恶性增殖。     

人参总皂苷和小檗碱对肺癌PG细胞"Fas反击"的影响

目的：探讨人参总皂苷（Ginsenosirde，Gs）和小檗碱（Berberine，Ber）对肿瘤“Fas反击”免疫逃逸机制的影响。方法：首先建立肺癌PG细胞与Jurkat细胞的共培养体系；Giemsa染色和流式细胞仪观察和检测共培养后的Jurkat细胞的凋亡；SABC免疫细胞化学法检测Gs和Ber处理后的PG细胞FasL、Fas分子的表达。结果：Jurkat细胞与PG细胞共培养后产生凋亡，Gs和Ber处理的PG细胞诱导的Jurkat细胞凋亡更为显著；Gs和Ber可以上调PG细胞FasL、Fas分子的表达。结论：Gs和Ber可以促进PG细胞诱导Jurkat细胞凋亡的作用，其机制可能与Gs和Ber上调PG细胞FasL分子的表达有关。     

细胞因子对肾癌细胞株786-0、GRC-1 Fas、FasL表达的调节及其意义

目的 :研究细胞因子对肾癌株Fas、FasL表达的影响及其意义。方法 :单独或联合应用IFNγ ,IFNα ,IL 2 ,TNFα刺激肾癌株 786 0、GRC 1细胞并检测Fas、FasL表达 ,以Fas单克隆抗体 (FasAb)诱导其凋亡 ,以JurkatT细胞共培养试验检测其FasL功能。结果 :1 IFNγ、IFNα均能显著上调 786 0、GRC 1细胞的Fas表达 (P <0 0 1,P <0 0 1) ,并促进FasAb诱导的凋亡 (P <0 0 1,P <0 0 1)。 2 TNFα、IFNα能分别上调 786 0、GRC 1细胞的FasL表达。IFNγ能显著上调 786 0、GRC 1细胞的FasL表达(P<0 0 1,P <0 0 1) ,并促进JurkatT细胞凋亡 (P <0 0 1,P <0 0 1)。结论 :IFNγ、IFNα可增强肾癌细胞株的Fas表达 ,并促进FasAb介导的凋亡。但其亦能上调肾癌细胞FasL表达并增强其对淋巴细胞的攻击作用。     

转导反向6A8α—甘露糖苷酶cDNA对抗Fas抗体诱导Jurkat细胞凋亡的影响

用梯形DNA电泳与Gimsa染色研究T细胞瘤细胞株Jurkat在转导编码人6A8α-甘露糖苷酶基因的反向cDNA后,对抗Fas抗体诱导凋亡敏感性的变化,并用间接免疫荧光染色（流式细胞仪）检测细胞表面Fas分子的表达。结果表明,抗Fas抗体诱导细胞24h后,野生型及转导空载载体的Jurkat细胞出现明显的梯形DNA,两者之间无明显差异,但转导反向6A8cDNA的细胞未见明显的梯形DNA。Gimsa染色结果显示转导反向6A8cDNA的Jurkat细胞中凋亡细胞数明显减少,而转导空载载体则无影响。Jurkat细胞为Fas(CD95,Apo-1)全阳性细胞,转导反向6A8cDNA或空载载体对Fas表达阳性率与Fas表达强度无明显影响。以上结果提示,转导编码6A8α-甘露糖苷酶基因的反向cDNA使人T细胞株Jurkat对抗人Fas抗体诱导的凋亡作用产生耐受。     

环孢素A对膀胱癌细胞系FasL表达的调节及免疫学作用

目的 探讨环孢素A（CSA）对膀胱癌BIU－87细胞表达FasL的调节作用。方法 CSA分别与BIU－87和Jurkat T细胞共同培养，以MTT法检测2种细胞的存活数。再将CSA与BIU－87细胞和Jurkat T细胞共同培养，以免疫组化和免疫荧光流式细胞术检测BIU－87细胞FasL的表达；以FCM分析Jurkat T细胞的凋亡。结果 CSA≤50μg/mL时对两细胞系均无毒性作用（P＞0．05）；CSA作用后的BIU－87细胞FasL阳性表达百分率和平均荧光指数及FasL介导Jurkat T细胞凋亡百分率与对照组间有显著性差异（P＜0．01）。结论 CSA≤50μg/mL时对BIU－87和Jurkat T细胞的活性和增殖无影响，但能使BIU－87细胞FasL的表达下调，阻止膀胱癌细胞对机体免疫的逃逸作用。     

CpG-ODN下调HeLa细胞功能性Fas配体的表达

为观察CpG-ODN对宫颈癌细胞系HeLa细胞Fas配体(FasL)表达水平的影响,探讨其对由HeLa细胞Fas-FasL途径诱导的淋巴细胞凋亡作用。采用实时荧光RT-PCR方法检测HeLa细胞、正常宫颈上皮细胞中FasL和Jurkat T淋巴细胞中Fas的表达水平,应用HeLa细胞与Jurkat细胞共培养的方法体外研究HeLa细胞FasL诱导T淋巴细胞凋亡作用。结果显示:①HeLa细胞、正常宫颈上皮细胞中FasL表达阳性,其表达水平分别是(0.99±0.05)、(0.68±0.03),差别具有统计学意义(P=0.0007);Jurkat细胞Fas表达呈阳性;②HeLa细胞与Jurkat细胞共培养后Jurkat细胞的凋亡率为(38.23%±4.98%),应用抗体NOK-2中和HeLa细胞的FasL后,Jurkat细胞凋亡率减少为(3.54%±1.61%),两者相比,差别有显著性意义(P=0.0001);③HeLa细胞用CpG-ODN处理前后FasL的表达水平分别是(0.99±0.05)、(0.79±0.04),差别有统计学意义(P=0.005);CpG-ODN预处理的HeLa细胞与Jurkat细胞共培养后Jurkat细胞凋亡率为(6.41%±2.81%),而没有用CpG-ODN预处理的HeLa细胞与Jurkat细胞共培养Jurkat细胞凋亡率为(29.23±6.85)%,二者的差别有统计学意义(t=13.39,P=0.006)。HeLa细胞可能通过表达FasL主动诱导T淋巴细胞凋亡从而在肿瘤的免疫逃逸中发挥作用,CpG-ODN可通过下调FasL的表达而减少肿瘤细胞主动诱导的T淋巴细胞凋亡。     

放射敏感性启动子调控Apoptin基因表达对肺腺癌细胞的杀伤作用研究

目的构建放射敏感性启动子调控的凋亡素(Apoptin)基因的真核表达质粒pE6-Apoptin-EGFP,探讨其在X线调控下对肺腺癌细胞A549的杀伤作用。方法分别以限制性内切酶EcoRⅠ/NotⅠ双酶切质粒pE6-p53-EGFP及pApoptin-EGFP,电泳分离,回收目的线性DNA片段,T4连接酶连接,构建重组质粒pE6-Apoptin-EGFP,测序、鉴定。脂质体介导瞬时转染肺腺癌细胞A549,RT-PCR、荧光显微镜等检测照射前后融合蛋白表达,流式细胞仪检测放射诱导前后转染细胞的凋亡变化。结果成功构建重组质粒pE6-Apoptin-EGFP,并在被转染A549细胞中检测到Apoptin基因表达;经放射诱导的pE6-Apoptin-EGFP/A549细胞及对照组pE6-EGFP/A549细胞的凋亡率分别为(32.48±3.56)%和(10.67±2.42)%,未经放射诱导的pE6-Apoptin-EGFP/A549细胞及对照pE6-EGFP/A549细胞的凋亡率分别为(6.33±1.21)%、(4.25±0.87)%;与其它3组相比,放射诱导的pE6-Apoptin-EGFP/A549细胞凋亡率明显增高,具有非常显著统计学差异(P<0.01)。结论放射敏感性启动子调控的Apoptin基因表达可在放射线调控下在A549细胞中有效表达并诱导凋亡,为进一步研究非小细胞肺癌的放射-基因联合治疗奠定了基础。