三氧化二砷诱导人胃癌MKN45细胞凋亡及其分子机制的初步研究

目的研究三氧化二砷(As2O3)对人胃癌细胞的生物学效应及其作用机制。方法胃癌细胞经As2O3处理后,用台盼蓝方法检测As2O3的IC50,采用流式细胞仪、DAPI荧光染色、原位末端标记(TUNEL)及DNA电泳检测细胞凋亡。结果As2O3在一定浓度范围内以浓度依赖的方式抑制胃癌细胞生长,其IC50为(11.05±0.25)μmol/L。经1～10μmol/LAs2O3处理胃癌细胞后,流式细胞仪检测出凋亡峰,流式细胞光度计下可见明显的凋亡细胞形态特征,琼脂糖凝胶电泳出现DNA梯形条带。结论As2O3在体外可诱导胃癌细胞的凋亡,这是其对胃癌细胞产生生物学效应的基础。     

三氧化二砷诱导肝癌Bel-7402细胞凋亡与线粒体跨膜电位关系的研究

目的研究三氧化二砷（As2O3）诱导人肝癌细胞系Bel-7402细胞凋亡及与线粒体跨膜电位的关系。方法应用不同浓度的As2O3作用于肝癌细胞后，观察As2O3对肝癌细胞生长状态的影响；通过噻唑蓝（MTT）比色法观察其对Bel-7402细胞增殖的影响；利用共聚焦显微镜及流式细胞术观察经Annexin V-FITC／PI双染后的细胞早期凋亡；通过共聚焦显微镜及流式细胞仪检测线粒体跨膜电位（MMP）的改变情况；并通过底物染色法反映Caspase-3的活性。结果不同浓度的As2O3作用于肝癌细胞后有明显的时间和剂量依赖性；经Annexin V-FITC／PI双染后，可观察到Bel-7402细胞的早期凋亡现象，2μmol／L As2O3作用24h细胞凋亡率为9．89％，作用48h细胞凋亡率为48．53％，而4μmol／L As2O3作用24h细胞凋亡率为18．27％，作用48h细胞凋亡率为67．52％；经As2O3药物作用后，细胞线粒体膜电位水平下降，且与药物作用时间和药物浓度有关（P〈0．05）；同时Caspase-3活性被激活。结论As2O3可明显抑制肝癌细胞Bel-7402的生长，并使细胞线粒体膜电位下降，诱导肝癌细胞凋亡。     

三氧化二砷对前列腺癌DU-145细胞周期阻滞及凋亡的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对前列腺癌非雄激素依赖细胞系DU-145细胞的增殖抑制作用及对细胞周期和凋亡的影响.方法应用体外细胞生长抑制试验(MTT比色法)研究As2O3对DU-145细胞生长的影响,流式细胞仪检测细胞周期分布情况及凋亡情况,琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA的变化.结果As2O3对DU-145细胞的增殖有明显的抑制作用,随着药物浓度增加和作用时间延长,凋亡细胞明显增加,出现G2/M期阻滞和DNA的断裂.结论As2O3可明显抑制前列腺癌DU-145细胞的增殖,诱导细胞凋亡,抑制细胞周期.     

熊果酸对MCF-7乳腺癌细胞生长的影响

目的 观察熊果酸对MCF-7乳腺癌细胞增殖、凋亡、细胞侵袭及裸鼠移植瘤生长的影响.方法 将1、10、100 μmol/L的熊果酸分别作用于乳腺癌MCF-7细胞12、24、48 h,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力变化及生长抑制率,流式细胞术及Transwell小室法检测熊果酸作用48h时MCF-7细胞周期、细胞凋亡率及细胞侵袭力.将乳腺癌MCF-7细胞接种于裸鼠,成瘤后分为生理盐水对照组、熊果酸低剂量组(每日1 mg/kg)、中剂量组(每日5 mg/kg)和高剂量组(每日25 mg/kg),检测5、10、15 d裸鼠移植瘤体积、肿瘤生长抑制率及15 d时肝肾功能、血常规变化.结果 随熊果酸浓度增加及作用时间延长,MCF-7细胞生长及凋亡发生受到显著影响,100 μmol/L熊果酸作用48 h时,细胞生长抑制率为46.0%,生长周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率为(16.48±2.46)%,细胞侵袭力显著下降.熊果酸组裸鼠移植瘤体积显著小于对照组,15 d时熊果酸高剂量组肿瘤体积为(323.5±33.5)mm3生长抑制率为50.9%.各组肝肾功能和血常规无明显变化.结论 熊果酸可引起体外乳腺癌McF-7细胞增殖抑制、细胞凋亡率增加及细胞侵袭力下降,可显著抑制裸鼠乳腺癌移植瘤生长.     

人参皂甙Rg3对乳腺癌MCF-7线粒体凋亡途径的影响

目的探讨20（R）–人参皂甙Rg3（SPG-Rg3）对人乳腺癌MCF-7细胞的诱导凋亡作用及其可能机制。方法人乳腺癌细胞MCF-7细胞株分为空白对照组、实验对照组及SPG-Rg3多个浓度组。利用MTT法观察人参皂甙Rg3对MCF-7细胞生长的抑制作用,并计算出IC-50,进一步确定其有效浓度;流式细胞术检测人参皂甙Rg3作用后MCF-7细胞周期的变化;利用AnnexinV-EGFP/PI双染法,检测人参皂甙Rg3诱导MCF-7细胞凋亡情况;免疫细胞化学染色检测MCF-7细胞凋亡与Fas、FasL蛋白表达的关系。结果 SPG-Rg3作用48h的IC-50为244.54μg/mL。流式细胞仪检测Rg3使MCF-7的S期细胞比率明显增加（P〈0.01）,凋亡率明显增加（P〈0.01）。免疫细胞化学显示Rg3能使MCF-7细胞胞浆内细胞色素C增加（P〈0.01）。结论 SPG-Rg3能诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡,其机制可能与诱导线粒体释放细胞色素C有关。     

三氧化二砷对原发性肝癌的作用及其机理研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞系BEL-7402的影响及其作用机理,并观察不同应用途径对原发性肝癌患者的治疗效果。方法 观察As2O3作用后肝癌细胞的形态学改变、并通过流式细胞仪和DNA梯状电泳观察细胞凋亡的情况,应用逆转录聚合酶链式反应和荧光分光光度计检测半胱氨酸蛋白酶-3的变化情况。观察其对裸鼠移植瘤生长抑制的效果。并分别通过静脉滴注和动脉持续灌注观察其对原发性肝癌患者的治疗效果。结果 不同浓度的As2O3作用于肝癌细胞有明显的时间和剂量依赖性,发生作用后细胞生长明显受抑制,有明显的凋亡特征性改变;流式细胞仪分析存在G2／M期阻滞,在G1峰前出现明显的凋亡峰;琼脂糖凝胶电泳出现明显的凋亡特征性梯状条带。随着As2O3作用时间的延长,半胱氨酸蛋白酶-3的mRNA无明显变化,而半胱氨酸蛋白酶-3蛋白质的活性逐渐增高。不同浓度的As2O3对于裸鼠肝癌移植模型有明显的抑制生长作用。对28例患者的静脉输注治疗可明显改善患者的生存质量,并且具有毒副作用小的特点。43例动脉灌注治疗患者中,30例肿瘤体积缩小或不变,有效率为69．8％,19例甲胎蛋白下降或降至正常。结论 As2O3可明显抑制肝癌细胞的生长,其机理主要是诱导肝癌细胞凋亡;凋亡的可能机理是通过半胱氨酸蛋白酶-3起作用,作用位点是在酶的前体水平;应用As2O3连续区域化疗对原发性肝癌有很好的治疗效果。     

三氧化二砷诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡P_(38)信号通路的研究

目的:探讨P38信号通路在三氧化二砷(As2O3)诱导雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡中的作用。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度(0.312 5、0.625、1.25、2.5、5、10、20μmol/L)As2O3作用PC-3细胞24、48、72 h后的细胞生长抑制情况。Western印迹检测As2O3作用PC-3细胞后P38信号转导通路的表达。Annexin V/PI双染色法检测As2O3作用PC-3细胞后细胞凋亡,同时检测应用P38通路高选择抑制剂SB203580干扰P38信号通路后As2O3诱导PC-3细胞凋亡的变化。结果:As2O3诱导PC-3细胞凋亡呈现时间、剂量依赖性。As2O3可以使P38信号通路蛋白快速磷酸化,激活P38信号通路。2、10、20μmol/L As2O3作用PC-3细胞24 h后,PC-3细胞凋亡率分别为(18.9±0.43)%、(24.7±0.29)%和(49.7±1.79)%。应用P38信号通路高选择抑制剂SB203580干扰P38信号通路后,PC-3细胞凋亡率分别降低为(14.8±0.81)%、(22.1±0.51)%和(39.6±1.74)%,抑制P38信号通路可以显著降低As2O3诱导PC-3细胞的凋亡(P<0.05)。结论:P38信号通路在As2O3诱导雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡中有表达,干扰P38信号通路可影响As2O3诱导PC-3细胞凋亡,提示P38信号通路参与了As2O3诱导的PC-3细胞凋亡。     

氧化砷诱导胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的: 观察不同浓度As2O3对胰腺癌细胞生长的影响. 方法: 0.1~2μmol/LAs2O3与胰腺癌细胞株SW-1990、SW-8902共同孵育,观察不同浓度As2O3作用、不同时间对胰腺癌细胞的生长抑制情况. 结果: 经1~2μmol/LAs2O3处理的胰腺癌细胞呈典型的凋亡特征性改变:用HE染色光镜观察可见凋亡小体形成,流式细胞仪检测在G1期前出现亚二倍体凋亡峰,细胞DNA抽提电泳后发现凋亡特征性Ladder. 结论: As2O3可诱导胰腺癌细胞凋亡.     

维生素K3诱导乳腺癌细胞凋亡作用及调控因素的观察

目的：观察维生素K3（VitK3）对乳腺癌MCF-7细胞的凋亡诱导作用,探讨其可能机制.方法：采用噻唑蓝比色实验（MTT法）检测不同浓度VitK3对MCF-7细胞增殖的影响,观察过氧化氢酶（Catalase）对VitK3作用的影响;采用流式细胞技术（FCM）检测细胞的凋亡;应用RT-PCR检测VitK3作用前后核转录因子RelA、凋亡相关基因Bcl-2、Bax和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物p21 CIP1/WAF1、p27KIP1 mRNA表达的变化.结果：（1）VitK3对MCF-7细胞的生长有明显的抑制作用,Catalase能降低VitK3的生长抑制作用;（2）VitK3能够诱导MCF-7细胞发生凋亡并随浓度的增加而增强;（3）VitK3作用后,Rcla、Bax、p21 CIP1/WAF1在mRNA水平表达增强.结论：VitK3能够诱导MCF-7细胞发生调亡,细胞周期停滞和Bax表达增加是其可能的作用机制.