8—MOP与RA联合用药对粘液表皮样癌高转移细胞的抑制作用

在８－甲氧基补骨脂素（８－ＭＯＰ）与全反式维甲酸（ＲＡ）联合应用对粘液表皮样癌细胞药物抑制作用的研究中发现：较小剂量的ＲＡ与８－ＭＯＰ配伍表现出明显的协同作用，而随着ＲＡ剂量的加大，则表现出相加或拮抗作用，经药物处理后细胞中出现了类似凋亡小体的结构。提示８－ＭＯＰ与ＲＡ合理配伍可能有临床应用前景。     

六亚甲基二乙酰胺对MEC-1细胞体外粘附、移动和侵袭的影响

目的 研究分化诱导剂六亚基二乙酰胺（ＨＭＢＡ）对人粘液表皮样癌细胞系ＭＥＣ－１体外粘附、移动和侵袭的影响。方法 用２ｍｍｏｌ／Ｌ ＨＭＢＡ体外诱导培养ＭＥＣ－１细胞,用ＭＴＴ（ｔｈｉａｚａｌｙｌ ｂｌｕｅ,噻唑蓝）比色法测定细胞在重构基底膜Ｍａｔｒｉｇｅｌ上的粘附,用Ｍｉｌｌｉｃｅｌｌ－ＰＣＦ培养系统测定细胞的移动性和侵袭性。结果 ＨＭＢＡ诱导的ＭＥＣ－１细胞在３０ｍｉｎ和９０ｍｉｎ粘附实验中的粘     

c-myc反义寡核苷酸对粘液表皮样癌细胞生长的抑制作用

目的：探讨ｃ－ｍｙｃ基因的反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）在涎腺粘液表皮样癌基因治疗中的作用。方法：人工合成与ｃ－ｍｙｃ基因第二外显子翻译起始区序列互补的寡核苷酸,处理培养的人涎腺粘液表皮样癌ＭＥＣ－１细胞。应用ＭＴＴ比色法观察其对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测对细胞周期的影响;并采用免疫组化法检测Ｃ－ＭＹＣ蛋白的表达。结果：ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸能抑制粘液表皮样癌ＭＥＣ－１细胞的增殖,抑制作用具有浓度     

HMBA对粘液表皮样癌P53蛋白表达和细胞增殖周期的影响

目的：研究六亚甲基二乙酰胺（ＨＭＢＡ）诱导人粘液表皮样癌（ＭＥＣ－１）细胞分化与细胞Ｐ５３蛋白表达和细胞增殖周期的关系。方法：ＭＴＴ比色法测定ＨＭＢＡ对ＭＥＣ－１细胞体外生长的作用;Ｆｅｕｌｇｅｎ染色测定细胞ＤＮＡ含量;ＡＢＣ免疫酶染色检测Ｐ５３蛋白;ＦＣＭ法测定细胞增殖周期。结果：ＨＭＢＡ对ＭＥＣ－１细胞的生长抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性;ＨＭＢＡ诱导的细胞与对照细胞比较,ＤＮＡ含量减少,Ｐ５３蛋白水平降低,Ｇ１期细胞数增加和Ｓ期细胞数减少。结论：ＨＭＢＡ对ＭＥＣ－１细胞的诱导分化作用与其调节Ｐ５３基因蛋白表达和细胞增殖周期有关。     

全反式维甲酸与8-甲氧基补骨脂素联合应用对口腔鳞癌细胞系的抑制作用

为研究全反式维甲酸（ＲＡ）与８－甲氧基补骨脂素（８－ＭＯＰ）联合应用对２种口腔鳞癌细胞系的抑制作用特点，应用ＭＴＴ法测试并绘制药物抑制曲线，用倒置显微镜观察细胞形态变化。结果表明：３０％细胞生长抑制时，联合用药合并指数（ＣＩ３０）不大于０．８２；５０％细胞生长抑制时，联合用药联合并指数（ＣＩ５０）在０．９到０．９５之间，表明两药联合应用对２种口腔鳞癌细胞系呈现协同效应。单独应用ＲＡ、８－ＭＯＰ或二者联合应用，有类似凋亡小体样结构出现。合适浓度的ＲＡ与８－ＭＯＰ联合应用的临床价值有待进一步研究     

加温联合六亚甲基二乙酰胺对MEC—1细胞的作用

目的：研究加温联合六亚甲基二乙酰胺（ＨＭＢＡ）对人粘液表皮样癌ＭＥＣ－１细胞的作用。方法：采用ＭＴＴ法及软琼脂克隆形成法观察加温联合ＨＭＢＡ对ＭＥＣ－１细胞的作用；并用免疫组化法检测加温及联合ＨＭＢＡ对多药耐药（ＭＤＲ）表达蛋白（Ｐ－ｇｐ）的影响。结果：加温联合ＨＭＢＡ对ＭＥＣ－１细胞有协同抑制作用。免疫组化染色显示，对照组及单用药组细胞Ｐ－ｇｐ中度表达；加温组细胞Ｐ－ｇｐ不表达；联合组为低度表达。结论：加温联合ＨＭＢＡ对粘液表皮样癌的治疗可能有一定价值。     

8—甲氧基补骨脂素对MEC—1细胞癌基因／抑癌基因表达的影响

目的：研究８－甲氧基补骨脂素对ＭＥＣ－１细胞部分基因表达的影响。方法：细胞贴壁后用３０％细胞生长抑制浓度的药物处理１２０ｈ，常规制备标本，ＡＢＣ法免疫组织化学染色。结果；药物处理后细胞Ｐ１６和ｎｍ２３－Ｈ１蛋白表达强度增强，而ＣＤＫ４和Ｈ－ｒａｓ蛋白表达强度减弱。结论：８－ＭＯＰ可以调节ＭＥＣ－１细胞部分基因的表达，从而可能影响细胞相关的生物学特性。     

人粘液表皮样癌MEC—1细胞HMBA诱导分化的研究

粘液表皮样癌是最多发的涎腺恶性肿瘤。本实验以六亚甲基二乙酰胺（Ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌｅｎｅｂｉｓａｃｅｔａｍｉｄｅ，ＨＭＢＡ）作分化诱导剂，对人粘液表皮样癌细胞系ＭＥＣ－１细胞进行诱导。经对细胞生长动力学、细胞形态学、ＤＮＡ含量等指标观察，结果显示，在ＨＭＢＡ作用下ＭＥＣ－１细胞有向成熟细胞分化的趋势，表明ＨＭＢＡ具有体外诱导ＭＥＣ－１细胞分化的作用。     

人粘液表皮样癌高转移细胞株对足叶乙甙的敏感性

目的：观察足叶乙甙（ＶＰ１６）对人粘液表皮样癌高转移细胞株（Ｍｃ３）抑制作用。方法：采用ＭＴＴ及软琼脂克隆形成法观察ＶＰ１６对Ｍｃ３的药敏性。结果：ＶＰ１６对Ｍｃ３细胞的生长及克隆形成有明显的抑制作用，且呈显著的剂量依赖性。ＭＴＴ药物敏感性试验ＶＰ１６对Ｍｃ３细胞作用ＩＣ５０值为１４１２μｇ／Ｌ，ＲＡＡ值为５．９；克隆形成法ＩＣ５０值为１２６μｇ／Ｌ，ＲＡＡ值为９３．４。结论：Ｍｃ３细胞对ＶＰ１６有较高的敏感性。ＶＰ１６在人粘液表皮样癌的治疗，特别是肿瘤转移的防治方面可能有一定意义。     

人粘液表皮样癌MEC—1细胞放射敏感性的研究

用克隆形成法测定了人粘液表皮样癌ＭＥＣ－１细胞的放射存活曲线。Ｘ线和γ线照射的平均致死剂量（Ｄ０）分别为１．５４Ｇｙ和１．３７Ｇｙ；用ＭＴＴ比色法测定Ｘ线照射后人粘液表皮样癌ＭＥＣ－１细胞、人舌癌Ｔｃａ８１１３细胞和人腺样囊性癌ＳＡＣＣ－８３细胞的存活曲线，３种细胞的（Ｄ３７）值分别为４．５６、９．４４和７．８６Ｇｙ。结果表明，ＭＥＣ－１细胞与其它两种细胞比较具有较高的放射敏感性。     

高三尖杉酯碱、甲氧沙林对粘液表皮样癌Mc3的抑制作用

目的：研究高三尖杉酯碱(HHT)、甲氧沙林(8-MOP)以及二者联合作用于人涎腺粘液表皮样癌高转移细胞株Mc3，观察其生长抑制作用。方法：应用MTT检测法、细胞计数法、软琼脂克隆形成试验等方法观察Mc3细胞生长曲线、克隆形成率、细胞数与A值关系以及HHT及8-MOP单独或联合应用作用于：Mc3细胞的生长抑制作用。结果：Mc3、：MEC-1生长稳定，群体倍增时间分别为26．4h和30h。克隆形成率分别为14．6％和1．2％。HHT与8-MOP2种药物分别单独作用于Mc3细胞，在小剂量情况下对细胞杀伤作用较轻，随着药物浓度的增加，细胞生长明显抑制，其作用特点表现为明显的浓度依赖性。两种药物对Mc3细胞作用的IC50值分别为79．43和75980ng／ml，RAA值分别为20．14和1．7。浓度为1～320ng／ml的HHT分别与800、4000、20000ng／ml的8-MOP联合应用时HHT的CI50值分别为0．76、0．33和0．15，RAA则分别为25．36、31.92和160，显示了二者具有明显的协同抑制效应作用。结论：HHT及8-MOP联合应用方案，可有效抑制涎腺粘液表皮样癌高转移细胞的增殖。     

8一甲氧基补骨脂素对MEC-1细胞癌基因/抑癌基因表达的影响

目的：研究8-甲氧基补骨脂素（8－MOP）对MEC－1细胞部分基因表达的影响。方法：细胞贴壁后用30％细胞生长抑制浓度的药物处理120h,常规制备标本,ABC法免疫组织化学杂色。结果：药物处理后细胞P16和nm23－H1蛋白表达强度增强,而CDK4和H－ras蛋白表达强度减弱。结论：8－MOP可以调节MEC－1细胞部分基因的表达,从而可能影响细胞相关的生物学特性。     

三氧化二砷对MEC-1细胞抑制作用的初步观察

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对人粘液表皮样癌细胞体外生长的影响,并探讨其作用机制。方法:应用不同浓度的三氧化二砷作用于人粘液表皮样癌细胞后,观察人粘液表皮样癌细胞的存活、形态学改变,采用四甲基偶氮唑蓝法观察其对人粘液表皮样癌细胞增殖的影响,并通过TUNEL检测细胞凋亡的情况。结果:三氧化二砷能显著地抑制人粘液表皮样细胞系MEC-1的生长,并且具有时间和剂量依赖性,发生作用后,细胞生长有明显的凋亡特征性改变:细胞膜完整、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成。结论:三氧化二砷可明显抑制人粘液表皮样癌细胞的生长,其机制主要是诱导人粘液表皮样癌细胞凋亡。     

人涎腺粘液表皮样癌耐药细胞及其亲本细胞的线粒体分布及特点

目的 比较人粘液表皮样癌耐药细胞株(MEC—1／5—FU)及其亲本细胞(MEC—1)的线粒体数量和分布特点。方法 利用免疫荧光细胞化学染色结合激光扫描共聚焦显微镜、透射电镜观察两种细胞的线粒体分布及表达特征；细胞计数法观察细胞生长曲线及群体倍增时间。结果 MEC—1和MEC—1／5—FU细胞增殖活跃，细胞群体倍增时间分别为30h和28．8h；MEC—1／5—FU细胞线粒体的数量与分布较MEC—1细胞数量更多，多集中分布于细胞质内，且集中分布在粗面内质网附近。MEC—1／5—FU细胞线粒体外形较不规则，嵴较发达。结论 MEC—1和MEC—1／5—FU细胞线粒体数量和分布的不同以及线粒体嵴的数量、形态及排列方式、线粒体外形、嵴的发达程度等的差异均提示二者可能在能量消耗、细胞代谢及蛋白质合成功能方面存在差异。     

TSA诱导人粘液表皮样癌细胞MEC-1凋亡机制的初步研究

目的探讨曲古抑菌素A(TSA)对人粘液表皮样癌细胞(MEC-1)的体外生物学作用及其作用机制。方法应用不同浓度的TSA作用于人粘液表皮样癌细胞MEC-1细胞后,观察TSA对MEC-1细胞生长状态的影响;通过噻唑蓝(MTT)比色法检测TSA对MEC-1细胞增殖变化的作用,应用原位末端标记法(TUNEL)、流式细胞术检测经Annexin V-FITC/PI双染后MEC-1细胞的早期凋亡作用。结果TSA可显著地抑制MEC-1细胞的生长,并且具有时间和剂量依赖性,通过倒置显微镜可明显观察到细胞的形态学改变;通过TUNEL法、流式细胞仪检测显示TSA可以诱导MEC-1细胞凋亡。结论TSA对人粘液表皮样癌细胞MEC-1具有显著的体外生长抑制,其主要作用是诱导细胞凋亡。     

六亚甲基二乙酰胺对MEC—1细胞凋亡及bcl—2基因表达的影响

目的：研究分化诱导剂六亚甲基二乙酰胺（hexamethylene bisacetamide,HMBA)诱导人粘液表皮样癌细胞系MEC－1细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2表达的影响。方法：用2mmol/LHMBA和1mg/L5-FU对培养的MEC－1细胞进行体外诱导72h后,分别采用光镜。TUNEL染色、免疫组化,原位杂交、图像分析等方法进行凋亡指数、bcl-2蛋白及mRNA表达水平的检测。结果：HMBA诱导的MEC－1细胞凋亡指数为68．5％,明显高于对照组和5－FU组（P＜0．01）;bcl-2蛋白及mRNA的表 度均显著高于其它组（P＜0．01）。结论：HMBA对人粘液表皮样癌MEC－1细胞具有明显的诱导凋亡作用,其作用机制可能与减弱了凋亡相关基因bcl-2的负调控作用有关。     

粘液表皮样癌细胞中脆性组氨酸三聚体基因异常表达的研究

目的：检测粘液表皮样癌细胞中FHIT基因的异常表达。方法：应用逆转录巢式聚合酶链反应（RT－PCR）及DNA测序技术检测粘液表皮样癌和粘液表皮样癌细胞中FHIT基因表达情况。结果：粘液表皮样癌细胞系细胞中存在FHIT基因部分缺失，产生异常转录本，大小约247bp.FHIT基因mRNA异常转录本为多个外显子缺失所致，E1－E8全部缺失。结论：FHIT基因在粘液表皮样癌细胞中的异常表达可能在粘液表皮样癌的发生和发展中起作用。     

8—MOP,ATRA以及二者联合应用对Mc3细胞周期的影响

研究8－MOP与ATRA单独及联合应用时Mc3细胞周期的影响。方法：流式细胞仪测定细胞DNA含量，Multicycle软件分析细胞周期分布情况。结果：Mc3细胞经IC30的8－MOP与ATRA单色及联合处理5天以后，实验组均表现为G1／G0期细胞增加，G2＋M或细胞减少，S期细胞变化不规律。结论：8－MOP与ATRA单独及联合作用可抑制Mc3细胞有丝分裂。     

足叶乙甙与8-甲氧基补骨脂素对人粘液表皮样癌高转移细胞株抑制作用

目的:观察足叶乙甙(VP16)与8-甲氧基补骨脂素(8-MOP)联合用药对人粘液表皮样癌高转移细胞株(Mc3)的抑制作用。方法:采用MTT法及克隆形成法观察VP16与8-MOP联合用药对粘液表皮样癌的抑制作用。结果:Mc3细胞对VP16有较高的敏感性,且呈显著的剂量依赖性,其IC50值为1625.67ng/ml;小剂量的8-MOP可刺激Mc3细胞增殖,高浓度的8-MOP则明显抑制Mc3细胞生长,其IC50为75500ng/ml;VP16与8-MOP联合应用时,采用分别低于VP16IC50的100、320和1000ng/ml药物浓度,联合用药的合并指数(CI)均小于0.95,分别为0.350、0.599和0.880;VP16对Mc3细胞的生长及克隆形成有明显的抑制作用,IC50为126ng/ml。结论:8-MOP与抗癌药物VP16联合应用,显示明显协同抑制效应,VP16对Mc3细胞克隆形成有抑制作用     

紫杉醇对人粘液表皮样癌细胞系的细胞毒研究

目的：研究紫杉醇为人粘液表皮样癌细胞系MEC－1的细胞毒作用,为临床应用选择最佳给药方案提供依据。方法：应用细胞计数法研究不同药物浓度及不同作用时间细胞毒作用的特点。结果：紫杉醇对MEC1的最大抑制率为50－90％,当药物浓度为10nmol/L时抑制率已接近最大,增加药物浓度10－100倍并不能增加抑制效应。但延长药物暴露时间大于12h能明显增强抑制效应,即使作用72h时,10－1000nmol/L的抑制率分别为64％,56％,44％和49％,结论：紫杉醇对人粘液表皮样癌细胞系MEC－1有明显的细胞毒作用,能明显抑制其,但抑制作用并不完全,此细胞毒作用的时间依赖性明显大于剂量依赖性,提示临床应用应以延长药物作用时间为目的,以期最大程度上发挥紫杉醇的抗肿瘤效应。